专利名称：一种巴豆生物碱注射制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种巴豆生物碱注射制剂及其制备方法。
背景技术：
巴豆为大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果实，主要含有巴豆油和生物碱。巴豆外用适量，研末涂患处，或捣烂以纱布包擦患处，具有蚀疮作用，可用于恶疮疥藓、疣痔；巴豆霜具有峻下积滞、逐水消肿、豁痰利咽功效，用于寒积便秘、乳食停滞、下腹水肿、二便不通、喉风、喉痹。文献[徐立生，等。抗癌药物巴豆生物碱、顺铂对红细胞膜的作用。中华肿瘤杂志，1995，17(2)115]报道，巴豆碱通过对膜系统分子动力学的影响而降低了肿瘤细胞的恶性程度及其转移活性，多膜流动性的影响，先使肿瘤细胞的恶性程度降低，再进一步促使癌细胞逆转。文献[刘秀德，等。巴豆总生物碱对癌细胞质膜流动性及胞浆基质的影响。山东中医学院学报，1995，19(3)192]报道，给小鼠灌胃巴豆总生物碱，可使小鼠腹水型肝癌细胞质膜ConA受体的测向扩散速度明显增加，而胞浆基质结构程度有所改变。由此看来，巴豆生物碱有很好的治疗癌症的作用。
虽然以上文献提到了以巴豆生物碱为活性成分的中药针剂，但是在资料检索中未发现公开任何有关巴豆生物碱的提取、纯化过程以及注射制剂的制备方法。
发明内容
基于以上原因，本发明研究人员经过反复实验，找到一种从巴豆中提取、纯化巴豆总生物碱的方法，并制备成注射制剂；药效学试验表明，本发明巴豆生物碱注射制剂具有很好的治疗癌症的作用；安全性评价试验表明，本发明具有很好的注射给药安全性。
本发明的一个目的是公开一种巴豆生物碱注射制剂。
本发明的另一个目的是公开上述巴豆生物碱注射制剂的制备方法。
本发明通过以下技术方案实现。
一、制备方法(1)巴豆生物碱有效部位的制备取巴豆药材，干燥，粉碎，过20目筛，加入10-20倍量的酸性水溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，放冷至室温，静置24小时，除去上层油脂，下层清液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，在0℃-4℃静置12小时，除去上层油脂，下层清液过滤，滤液以4000转/分的速度离心30分钟，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的大孔吸附树脂，先用水洗至无色，再换用3-6倍柱体积的30％-80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到巴豆生物碱有效部位。
(2)制剂制备水针制剂的制备称取巴豆生物碱有效部位2-4重量份用注射用水溶解，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支2ml的水针制剂。
输液制剂的制备称取巴豆生物碱有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂。
粉针制剂的制备称取巴豆生物碱有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入水溶性注射用赋形剂，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。
上述的酸性水溶液为盐酸、硫酸或醋酸的水溶液，pH值为3-5。
巴豆生物碱与酸成盐，增大其在水中的溶解度；从巴豆中提取的巴豆油在低温冷藏，可以很容易的除去；经过离心、超滤、大孔吸附树脂纯化，最终得到以巴豆生物碱为主的有效部位。
二、含量测定巴豆生物碱含量测定采用紫外分光光度法；5批巴豆生物碱有效部位样品均由广东天之骄药物开发有限公司提供。含量测定结果见表1。
表1巴豆生物碱含量测定结果
由以上含量测定结果可以看出，巴豆生物碱在巴豆生物碱有效部位中的含量为70％-80％。
三、药理实施例为了证实本发明巴豆生物碱注射制剂的治疗效果，本发明研究人员对本发明巴豆生物碱注射制剂进行了如下的药效学试验。样品均由广东天之骄药物开发有限公司提供。
1、对小鼠移植S180的抑制作用在无菌条件下，取荷瘤动物，处死固定，用碘酊及酒精消毒操作部位皮肤，然后切开，选择生长良好的瘤块组织置组织匀浆器中，按1∶2的比例加入无菌生理盐水制成细胞悬液，于实验小鼠腋窝皮下接种0.2ml，每批接种30只，接种后次日随机分组，为模型对照组、本发明巴豆生物碱注射制剂组，每组10只，腹腔注射给药，剂量为100mg/kg。每日1次，连续10天，末次给药后处死小鼠，称体重，摘瘤称重，计算抑制率。肿瘤生长抑制率(％)＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。结果见表2。
表2对小鼠移植S180的抑制作用(X±S)
注与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表实验结果可以看出，本发明巴豆生物碱注射制剂对小鼠移植肿瘤S180有明显的抑制作用。
2、对小鼠移植胃癌的抑制作用在无菌条件下，取荷瘤传代鼠，消毒腹部皮肤，用无菌空注射器抽吸腹水，以无菌生理盐水作1∶2倍的稀释，取雌性小鼠30只，每只鼠接种0.2ml，接种后次日随机分组，为模型对照组、本发明巴豆生物碱注射制剂组，每组10只，腹腔注射给药，剂量为100mg/kg。每日1次，连续10天，记录小鼠存活时间，计算生命延长率。结果见表3。
表3对小鼠移植胃癌的抑制作用(X±S)
注与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表实验结果可以看出，本发明巴豆生物碱注射制剂对小鼠移植胃癌有明显的抑制作用。
3、对小鼠移植P388的抑制作用取雌性小鼠30只，接种P388方法同上，接种后次日随机分组，为模型对照组、本发明巴豆生物碱注射制剂组，每组10只，腹腔注射给药，剂量为100mg/kg。每日1次，连续10天，记录小鼠存活时间，计算生命延长率。结果见表4。
表4对小鼠移植P388的抑制作用(X±S)
注与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
由上表实验结果可以看出，本发明巴豆生物碱注射制剂对小鼠移植P388有显著的抑制作用。
以上药效学实验表明，本发明巴豆生物碱注射制剂具有很好的治疗癌症疾病的作用。
四、安全性评价1、血管刺激性考察取健康大耳家兔5只，将动物固定于兔箱内，用酒精将皮肤消毒后，于右侧耳缘静脉处注射本发明巴豆生物碱注射制剂，于另一侧对应部位注射同一体积的等渗葡萄糖水作为对照。每日注射1次，连续3次，观察兔耳缘静脉反应。于末次给药24h后将兔放血处死，取下两耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm处，解剖取出静脉，做组织切片检查，观察注射部位的反应。
结果试验过程中，肉眼观察两耳静脉注射部位处，未见红肿、热等刺激表现。表明给药组切片部位组织形态无明显差异，未见本品毒性所致的病理形态学改变(血管结构正常，无内皮细胞损伤，无血栓形成及其他病理性变化)。
2、溶血毒性考察2％红细胞混悬液的制备取兔耳缘静脉取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的锥形瓶中，振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血。加10倍量的生理盐水溶液，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水溶液洗涤2-3次，至上清液不呈红色时为止。将所得的红细胞用用生理盐水配成浓度为2％的混悬液，即得。
试验方法取试管6支，按下表中的配比量依次加入2％红细胞混悬液和生理盐水溶液，混匀，于37℃恒温箱中放置30分钟，分别加入不同量的药液(以第6管为空白对照)，摇匀后，置37℃恒温箱中，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，共观察2小时。
表5溶血试验设计
结果以第3试管为准，各管均未染有红色，显微镜下观察未见有红细胞破裂，说明本品不溶血，安全性好。
五、制备实施例实施例1取巴豆药材，干燥，粉碎，过20目筛，加入20倍量的pH3的盐酸水溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，放冷至室温，静置24小时，除去上层油脂，下层清液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，在0℃静置12小时，除去上层油脂，下层清液过滤，滤液以4000转/分的速度离心30分钟，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的D101大孔吸附树脂，先用水洗至无色，再换用6倍柱体积的30％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到巴豆生物碱有效部位。
实施例2取巴豆药材，干燥，粉碎，过20目筛，加入10倍量的pH5的硫酸水溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，放冷至室温，静置24小时，除去上层油脂，下层清液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，在4℃静置12小时，除去上层油脂，下层清液过滤，滤液以4000转/分的速度离心30分钟，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的AB-8大孔吸附树脂，先用水洗至无色，再换用3倍柱体积的80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到巴豆生物碱有效部位。
实施例3取巴豆药材，干燥，粉碎，过20目筛，加入15倍量的pH4的醋酸水溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，放冷至室温，静置24小时，除去上层油脂，下层清液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，在2℃静置12小时，除去上层油脂，下层清液过滤，滤液以4000转/分的速度离心30分钟，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的NKA大孔吸附树脂，先用水洗至无色，再换用5倍柱体积的45％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到巴豆生物碱有效部位。
实施例4取巴豆药材，干燥，粉碎，过20目筛，加入12倍量的pH3.5的盐酸水溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，放冷至室温，静置24小时，除去上层油脂，下层清液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，在1℃静置12小时，除去上层油脂，下层清液过滤，滤液以4000转/分的速度离心30分钟，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的D101大孔吸附树脂，先用水洗至无色，再换用4倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到巴豆生物碱有效部位。
实施例5取巴豆药材，干燥，粉碎，过20目筛，加入18倍量的pH4.5的硫酸水溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，放冷至室温，静置24小时，除去上层油脂，下层清液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，在3℃静置12小时，除去上层油脂，下层清液过滤，滤液以4000转/分的速度离心30分钟，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的D101大孔吸附树脂，先用水洗至无色，再换用5倍柱体积的70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到巴豆生物碱有效部位。
实施例6称取上述巴豆生物碱有效部位400g用注射用水溶解，调pH值为5.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支2ml的水针制剂10000支。
实施例7称取上述巴豆生物碱有效部位200g用注射用水溶解，加入葡萄糖调等渗，调pH值为6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂10000瓶。
实施例8称取上述巴豆生物碱有效部位300g用注射用水溶解，加入甘露醇，调pH值为5.5，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂10000支。
实施例9称取上述巴豆生物碱有效部位250g用注射用水溶解，加入果糖，调pH值为5.3，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂10000支。
实施例10称取上述巴豆生物碱有效部位350g用注射用水溶解，加入葡聚糖和果糖，调pH值为5.8，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成冻干粉针制剂10000支。
实施例11称取上述巴豆生物碱有效部位220g用注射用水溶解，加入氯化钠调等渗，调pH值为5.6，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂10000瓶。
实施例12称取上述巴豆生物碱有效部位270g用注射用水溶解，加入聚乙烯吡咯烷酮，调pH值为5.8，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂10000支。
实施例13称取上述巴豆生物碱有效部位380g用注射用水溶解，加入右旋糖苷，调pH值为5.8，用0.22μm微孔滤膜过滤，冷冻干燥，制备成冻干粉针制剂10000支。
权利要求
1.一种巴豆生物碱注射制剂，其特征在于它是以巴豆生物碱重量百分含量为70％-80％的有效部位为活性成分制备成的注射制剂。
2.一种巴豆生物碱注射制剂的制备方法，其特征在于，其步骤为(1)巴豆生物碱有效部位的制备取巴豆药材，干燥，粉碎，过20目筛，加入10-20倍量的酸性水溶液回流提取2次，每次2小时，合并提取液，放冷至室温，静置24小时，除去上层油脂，下层清液减压浓缩至溶液∶药材为1∶1，在0℃-4℃静置12小时，除去上层油脂，下层清液过滤，滤液以4000转/分的速度离心30分钟，离心液用截留分子量为10000的超滤膜超滤，滤液过已处理好的大孔吸附树脂，先用水洗至无色，再换用3-6倍柱体积的30％-80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到巴豆生物碱有效部位。(2)制剂制备水针制剂的制备称取巴豆生物碱有效部位2-4重量份用注射用水溶解，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每支2ml的水针制剂。输液制剂的制备称取巴豆生物碱有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入氯化钠或葡萄糖调等渗，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，灭菌，制备成每瓶100ml的输液制剂。粉针制剂的制备称取巴豆生物碱有效部位2-4重量份用注射用水溶解，加入水溶性注射用赋形剂，调pH值为5.0-6.0，用0.22μm微孔滤膜过滤，干燥，制备成粉针制剂。
3.根据权利要求2的一种巴豆生物碱注射制剂的制备方法，所述的酸性水溶液为盐酸、硫酸或醋酸的水溶液，pH值为3-5。
4.根据权利要求2的一种巴豆生物碱注射制剂的制备方法，所述的水溶性注射用赋形剂为甘露醇、右旋糖苷、果糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。
5.权利要求1的巴豆生物碱注射制剂具有抗癌作用。
全文摘要
本发明公开了一种巴豆生物碱注射制剂，它是以巴豆生物碱重量百分含量为70％－80％有效部位为活性成分的注射制剂；本发明还公开了其制备方法。药效学试验表明，本发明注射制剂具有很好的治疗癌症的作用；安全性评价试验表明，本发明注射制剂具有很好的注射给药安全性。
文档编号A61K131/00GK1899358SQ20051008702
公开日2007年1月24日 申请日期2005年7月22日 优先权日2005年7月22日
发明者张晴龙 申请人:张晴龙