专利名称:一种治疗乳腺增生的药物组合物的质量控制方法
技术领域:
本发明涉及一种药物组合物的质量控制方法,特别涉及一种治疗乳腺增生的药物组合物的质量控制方法。
背景技术:
乳腺增生是一种乳腺组织异常增生的疾病,属于中医乳癖的范畴。其特点为乳腺小叶、小管和未植导管高度扩张,呈囊肿样改变。乳腺增生在病理上,一方面表现为乳腺导管的囊性扩张,形成大小不等的囊肿;另一方面表现为导管上皮有不同程度的乳头状增生,小叶内和小叶间纤维组织也有不同程度的增生。由于乳腺增生病的组织形态复杂,所以其组织学分类方法也多种多样,如小叶增生症、慢性乳腺炎、纤维囊性乳腺病、良性上皮增生症、腺病等。
现代研究表明,乳腺增生的发生与体内雌激素含量过高有关。其病因多为患者卵巢功能失调,黄体素分泌下降,雌激素相对增高,出现乳腺组织对卵巢激素反应不协调,导致乳腺组织增生和复旧的周期性过程发生病理性改变,因而也失去了黄体素对雌激素的抑制性影响,如未梢导管的不规则出芽,上皮增生,引起小管扩张和囊肿形成等。祖国医学认为女性由于月经、孕产等大量耗伤气血,生理机能逐步趋于衰退,多易气血两虚。而现代社会的高强度快节奏使妇女遭受来自社会、家庭的各种压力大增,更易导致气滞血瘀、经脉不通。
治疗乳腺增生病常用的西药有激素类、碘制剂及其他对症治疗药物。传统的激素类制剂主要是用雄性激素来对抗雌激素。应用雄性激素治疗可能会出现一些副作用,如有一些男性化表现多毛、嗓音变粗、痤疮等;另外还可能会有不同程度的肝脏损害、头晕、恶心等。以后,人们逐渐认识到,乳腺增生病并非单纯的雌激素分泌增加,而是由于雌、孕激素的比率失衡,特别是月经周期中的黄体期孕激素分泌不足,雌激素相对增高所致,于是主张用黄体酮治疗本病,以纠正雌、孕激素分泌的失衡。服用雌激素亦可出现恶心、呕吐、头痛等副作用,有些患者病情反可加重。
目前治疗乳腺增生病的中药组合物制剂的质量控制方法有很大缺陷,尚不完善。
发明内容
本发明目的在于提供一种药物组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现本发明药物组合物是通过如下重量份的十味原料制成三七60-90重量份,香附60-90重量份,八角莲30-60重量份,鼠妇虫20-40重量份,黑蚂蚁20-40重量份,五香血藤500-700重量份,鸡矢藤500-700重量份,金荞麦500-700重量份,大红袍500-700重量份,柴胡300-500重量份。
上述十味原料药的最佳重量配比如下三七75重量份,香附75重量份,八角莲45重量份,鼠妇虫30重量份,黑蚂蚁30重量份,五香血藤600重量份,鸡矢藤600重量份,金荞麦600重量份,大红袍600重量份,柴胡400重量份。
上述十味原料药的优选重量配比如下三七61重量份,香附89重量份,八角莲31重量份,鼠妇虫39重量份,黑蚂蚁21重量份,五香血藤505重量份,鸡矢藤695重量份,金荞麦525重量份,大红袍675重量份,柴胡305重量份。
上述十味原料药的优选重量配比如下三七89重量份,香附61重量份,八角莲59重量份,鼠妇虫21重量份,黑蚂蚁39重量份,五香血藤695重量份,鸡矢藤505重量份,金荞麦675重量份,大红袍525重量份,柴胡495重量份。
取上述药物组合物原料药,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床可接受的任何剂型,如浓缩丸剂、胶囊剂、滴丸剂、颗粒剂、片剂、口服液体制剂、缓释剂、或注射剂等。
本发明药物组合物的具体制备工艺如下取三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁粉碎成细粉,混匀,灭菌,备用;取五香血藤、鸡矢藤、金荞麦、大红袍、柴胡五味,加水8-12倍量煎煮2-4次,每次1-2小时,合并,煎液,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.1-1.4的稠膏,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床可接受的口服固体制剂,如浓缩水丸,胶囊剂、颗粒剂或片剂等。
本发明药物组合物口服固体制剂的质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定方法鉴别方法包括如下方法中的一种或几种A、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,取粉末2-4g,加乙醇40-60ml,超声处理20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解,作为供试品溶液;取柴胡对照药材药材0.5-1.5g,按供试品处理方法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各4-6ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶乙醇为6-8∶2-4的展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,取粉末2-4g,加无水乙醚40-60ml,超声处理20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解,作为供试品溶液;取α-香附酮对照品0.01ml,加甲醇溶解制成对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各4-6ul,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,称取3-5g,,加60-80%乙醇50-70ml,超声0.5-1.5小时,滤过,滤液挥至无醇味,转移置分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取2-4次,每次20-40ml,合并正丁醇液,加0.5-1.5%氢氧化钠溶液洗涤2-4次,每次20-40ml,再加正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取人参皂苷Rg1,Rb1,三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液;吸取上述2种溶液各4-6ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水为13-17∶38-42∶20-24∶8-12的比例,在10℃以下放置2-4小时的下层溶液为展开剂;展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,在100-110℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点及荧光斑点。
质量控制方法中的含量测定方法如下色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=18-22∶78-82为流动相;检测波长为203nm;室温;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;供试品溶液的制备,取本发明药物组合物口服固体制剂日服用剂量的5/6,研细,精密称定1-3g,置具塞锥形瓶中,加入60-80%的乙醇40-60mL,超声处理50-70分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取2-4次,每次20-40ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取2-4次,每次10-30ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取3-5次,每次20-40ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤2-4次,每次20-40ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本药物组合物口服固体制剂按日服用剂量计,含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)不得少于12mg。
本发明药物组合物制剂包括浓缩水丸、胶囊剂、颗粒剂或片剂等临床可接受的口服固体制剂,每日服用量相当于原生药量4.6-5.0g。
本发明质量控制方法依据试验结果表明其重复性好,仪器精密度和操作精密度较好;本药物组合物口服固体制剂稳定性和溶散性均良好,提取溶剂的提取率高、分离好。
柴胡的薄层鉴别、香附的薄层鉴别和三七的薄层鉴别方法,重现性好,阴性无干扰;药品标准保留了三七薄层色谱鉴别,并增加了柴胡、香附的薄层色谱鉴别;采用高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1的含量,使药品标准能更好地控制产品质量。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1 含量测定方法方法学考察(1)测定波长的选择对人参皂苷Rg1对照品做紫外扫描,从光谱图可以看出人参皂苷Rg1在203nm处有最大吸收值,故选择测定波长为203nm。
(2)提取溶剂的确定精密称取本药物组合物浓缩丸3份,每份1.5g,分别用甲醇、70%乙醇、正丁醇作为溶剂,超声处理后进行HPLC测定,记录人参皂苷Rg1峰面积积分值,计算本药物组合物浓缩丸中的含量,结果见表1表1 提取溶剂考察结果
根据试验结果,用甲醇、70%乙醇、正丁醇都可以将人参皂苷Rg1从本药物组合物浓缩丸中提取出来,但用70%乙醇提取的提取率高、分离好,故选择提取溶剂为70%乙醇。
(3)提取时间的确定试验中考察了提取时间的影响,精密称取本药物组合物浓缩丸1.5g,加入50ml 70%乙醇超声处理,分别取20min、40min、60min、80min时的提取液进行HPLC分析,记录人参皂苷Rg1峰面积积分值。结果见表2表2 提取时间考察结果
由测定数据看出,本药物组合物浓缩丸超声处理60min人参皂苷Rg1含量已经稳定,故选择超声处理60min。
(4)系统适应性试验及专属性考察对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备,取本发明药物组合物浓缩丸4g,研细,精密称定2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇50mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次20ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次30ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次30ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得。
药材溶液的制备,取三七药材,粉碎,精密称取0.2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇50mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次20ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次30ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次30ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得。
阴性对照溶液的制备,取除三七外的其他药材按制剂工艺制备阴性样品,取阴性样品2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇50mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次20ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次30ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次30ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性。将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得。
分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液及药材溶液各10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。
分析色谱图可知对照品、供试品、药材中人参皂苷Rg1峰的保留时间基本一致,阴性对照在人参皂苷Rg1峰位置处无干扰,从而说明供试品中的人参皂苷Rg1峰来自于三七药材,即人参皂苷Rg1专属于三七药材,理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算不低于3000。
(5)线性关系考察分别精密量取0.426mg/mL对照品溶液1μL、4μL、7μL、10μL、13μL进行HPLC测定,记录色谱图,结果见表3
表3 线性关系考察结果
以上结果表明,在进样量0.426~5.538μg范围内成线性关系。
(6)稳定性试验取本药物组合物浓缩丸,按供试品溶液制备方法制备后,分别在0、1、3、5、10、16、24小时进行HPLC测定,记录峰面积积分值,以考察其稳定性,计算相对标准偏差(RSD)值,结果见表4表4 稳定性考察结果
由试验结果知,在24小时之内峰面积基本稳定。
精密度试验取本药物组合物浓缩丸,按供试品溶液制备方法制备后,重复进样六次,进行HPLC测定,记录峰面积积分值,计算相对标准偏差(RSD)值,试验数据见表5表5 精密度试验结果
试验结果表明仪器精密度和操作精密度较好。
(8)重复性试验精密称取本药物组合物浓缩丸5份,按供试品溶液的制备方法制备后,进行HPLC测定,数据见表6
表6 重复性试验结果(n=5)
试验结果表明,重复性良好。
(9)回收率试验采用加样回收法,精密称取本药物组合物浓缩丸5份,分别加入已知浓度的标准溶液1.6mL(即含3.376mg),挥干溶剂,加入70%的乙醇50mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次20ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次30ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次30ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得。
进行HPLC测定,记录峰面积积分值,计算的含量,以下式计算回收率,数据见表7回收率%=(测出总量-本药物组合物浓缩丸中的含量)*100%/加入对照品量表7 回收试验结果
经计算平均回收率为100.21%,RSD=2.20。
(10)样品的测定精密称取10批本药物组合物浓缩丸,每批3份,每份约2g,按供试品溶液的制备方法制备后,进行HPLC测定,记录峰面积积分值,计算的含量,结果见表8
表8 样品测定结果
根据以上测定结果,本药物组合物浓缩丸中平均含量(%)为0.3114,即本药物组合物浓缩丸,每丸含人参皂苷Rg1不得低于0.5mg。
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
实施例1浓缩丸的制备三七75g,香附75g,八角莲45g,鼠妇虫30g,黑蚂蚁30g,五香血藤600g,鸡矢藤600g,金荞麦600g,大红袍600g,柴胡400g。
以上十味,取三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁粉碎成细粉,混匀,灭菌备用;其余五香血藤等五味,加水10倍量煎煮三次,第一次2小时,第二次1.5小时、第三次1小时,合并,煎液,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.25的稠膏,喷雾干燥或浓缩至适量,与上述粉末混合,制成浓缩水丸。
实施例2胶囊剂的制备三七61g,香附89g,八角莲31g,鼠妇虫39g,黑蚂蚁21g,五香血藤505g,鸡矢藤695g,金荞麦525g,大红袍675g,柴胡305g。
以上十味,取三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁粉碎成细粉,混匀,灭菌备用;其余五香血藤等五味,加水9倍量煎煮二次,第一次2小时,第二次1.5小时,合并,煎液,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.13的稠膏,喷雾干燥或浓缩至适量,与上述粉末混合,加常规辅料,装胶囊。
实施例3颗粒剂的制备三七89g,香附61g,八角莲59g,鼠妇虫21g,黑蚂蚁39g,五香血藤695g,鸡矢藤505g,金荞麦675g,大红袍525g,柴胡495g。
以上十味,取三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁粉碎成细粉,混匀,灭菌备用;其余五香血藤等五味,加水11倍量煎煮三次,第一次2小时,第二次1.5小时、第三次1小时,合并,煎液,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.38的稠膏,喷雾干燥或浓缩至适量,与上述粉末混合,加常规辅料,制成颗粒。
实施例4片剂的制备三七75g,香附75g,八角莲45g,鼠妇虫30g,黑蚂蚁30g,五香血藤600g,鸡矢藤600g,金荞麦600g,大红袍600g,柴胡400g。
以上十味,取三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁粉碎成细粉,混匀,灭菌备用;其余五香血藤等五味,加水10倍量煎煮三次,第一次2小时,第二次1.5小时、第三次1小时,合并,煎液,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.25的稠膏,喷雾干燥或浓缩至适量,与上述粉末混合,加常规辅料,制成片剂。
实施例5浓缩丸的质量控制方法鉴别方法A、取实施例1内容物适量,研细,取粉末3g,加乙醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取柴胡对照药材药材1g,按供试品处理方法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶乙醇=7∶3为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B、取实施例1内容物适量,研细,取粉末3g,加无水乙醚50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取α-香附酮对照品0.01ml,加甲醇溶解制成对照溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C、取实施例1内容物适量,研细,称取4g,加70%乙醇60ml,超声1小时,滤过,滤液挥至无醇味,转移置分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次30ml,合并正丁醇液,加1%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次30ml,再加正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取人参皂苷Rg1,Rb1,三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液;吸取上述4种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水为15∶40∶22∶10的比例,在10℃以下放置3小时的下层溶液为展开剂;展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点及荧光斑点。
实施例6浓缩丸的质量控制方法取实施例1的药物组合物制剂进行含量测定。
色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=20∶80为流动相;检测波长为203nm;室温;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;供试品溶液的制备,取本药物组合物的浓缩丸剂的日服用剂量的5/6,研细,精密称定2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇50mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次20ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次30ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次30ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物浓缩丸每丸含三七以人参皂苷Rgl(C42H72O14)计,不得少于0.5mg。
实施例7浓缩丸的质量控制方法鉴别方法
A、取实施例1内容物适量,研细,取粉末3g,加乙醇45ml,超声处理35分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇0.6ml使溶解,作为供试品溶液;取柴胡对照药材药材1g,按供试品处理方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶乙醇=6∶4为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B、取实施例1内容物适量,研细,取粉末4g,加无水乙醚55ml,超声处理25分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取α-香附酮对照品0.01ml,加甲醇溶解制成对照溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C、取实施例1内容物适量,研细,称取4g,加65%乙醇65ml,超声1小时,滤过,滤液挥至无醇味,转移置分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次30ml,合并正丁醇液,加1%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次30ml,再加正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取人参皂苷Rg1,Rb1,三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液;吸取上述4种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水为14∶41∶21∶11的比例,在10℃以下放置3小时的下层溶液为展开剂;展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点及荧光斑点。
取实施例1的药物组合物制剂进行含量测定色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=19∶81为流动相;检测波长为203nm;室温;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;
供试品溶液的制备,取本发明药物组合物的浓缩丸日服用剂量的5/6,研细,精密称定2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇55mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次35ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次25ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次35ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次25ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物浓缩丸每丸含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.5mg。
实施例8胶囊的质量控制方法鉴别方法A、取实施例2内容物适量,研细,取粉末3g,加乙醇50ml,超声处理35分钟,滤过,滤液蒸干。残渣加甲醇0.9ml使溶解,作为供试品溶液;取柴胡对照药材药材1.4g,按供试品处理方法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5.5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶乙醇=8∶2为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C、取实施例2内容物适量,研细,称取3.5g,加68%乙醇58ml,超声1小时,滤过,滤液挥至无醇味,转移置分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次25ml,合并正丁醇液,加1%氢氧化钠溶液洗涤2次,每次25ml,再加正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取人参皂苷Rg1,Rb1,三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液;吸取上述4种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水为16∶39∶23∶9的比例,在10℃以下放置3小时的下层溶液为展开剂;展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点及荧光斑点。
取实施例2的药物组合物制剂进行含量测定色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=21∶79为流动相;检测波长为203nm;室温;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;供试品溶液的制备,取本药物组合物胶囊日服用剂量的5/6,研细,精密称定2g,置具塞锥形瓶中,加入72%的乙醇58mL,超声处理62分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次35ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次15ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次35ml,弃去水层;正丁醇层用1%Na0H溶液洗涤3次,每次25ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物胶囊按日服用剂量计,含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于12mg。
实施例9颗粒的质量控制方法鉴别方法A、取实施例3内容物适量,研细,取粉末2.5g,加乙醇45ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取柴胡对照药材药材1g,按供试品处理方法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶乙醇=8∶2为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B、取实施例3内容物适量,研细,取粉末3.5g,加无水乙醚55ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取α-香附酮对照品0.01ml,加甲醇溶解制成对照溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
取实施例3的药物组合物制剂进行含量测定色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=19∶81为流动相;检测波长为203nm;室温;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;供试品溶液的制备,取本药物组合物的颗粒日服用剂量的5/6,研细,精密称定2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇45mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取4次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次25ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次35ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次35ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物颗粒按日服用剂量计,含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于12mg。
实施例10片剂的质晕控制方法鉴别方法B、取实施例4内容物适量,研细,取粉末3.5g,加无水乙醚45ml,超声处理35分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇0.8ml使溶解,作为供试品溶液;取α-香附酮对照品0.01ml,加甲醇溶解制成对照溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5.5ul,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C、取实施例4内容物适量,研细,称取4.5g,加68%乙醇65ml,超声1小时,滤过,滤液挥至无醇味,转移置分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次25ml,合并正丁醇液,加0.8%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次35ml,再加正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.8ml使溶解,作为供试品溶液;另取人参皂苷Rg1,Rb1,三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液;吸取上述4种溶液各4.5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水为13∶42∶20∶12的比例,在10℃以下放置3小时的下层溶液为展开剂;展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点及荧光斑点。
取实施例4的药物组合物制剂进行含量测定色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=20∶80为流动相;检测波长为203nm;室温;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;供试品溶液的制备,取本药物组合物的片剂的日服用剂量的5/6,研细,精密称定2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇50mL,超声处理62分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次25ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次25ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次35ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本发明药物组合物片剂按日服用剂量计,含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于12mg。
权利要求
1.一种治疗乳腺增生的药物组合物,其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成三七60-90重量份,香附60-90重量份,八角莲30-60重量份,鼠妇虫20-40重量份,黑蚂蚁20-40重量份,五香血藤500-700重量份,鸡矢藤500-700重量份,金荞麦500-700重量份,大红袍500-700重量份,柴胡300-500重量份。
2.如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于该药物组合物是由如下原料药按重量份制成三七75重量份,香附75重量份,八角莲45重量份,鼠妇虫30重量份,黑蚂蚁30重量份,五香血藤600重量份,鸡矢藤600重量份,金荞麦600重量份,大红袍600重量份,柴胡400重量份。
3.如权利要求1或2所述的药物组合物,其特征在于取上述组合物原料药,加入常规辅料,按照常规工艺,制成临床可接受的浓缩丸剂、胶囊剂、颗粒剂、片剂、口服液体制剂、缓释剂或注射剂。
4.如权利要求1或2所述的药物组合物制剂的制备方法,其特征在于该方法包括以下步骤取三七、香附、八角莲、鼠妇、黑蚂蚁粉碎成细粉,混匀,灭菌,备用;取五香血藤、鸡矢藤、金荞麦、大红袍、柴胡五味,加水8-12倍量煎煮2-4次,每次1-2小时,合并,煎液,滤过,滤液浓缩至60℃相对密度为1.1-1.4的稠膏,喷雾干燥或浓缩至适量,与上述粉末混合,加入常规辅料,按照工艺,制成临床可接受的口服固体制剂。
5.如权利要求3所述的药物组合物的质量控制方法,其特征在于该方法包括如下鉴别中的一种或几种A、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,取粉末2-4g,加乙醇40-60ml,超声处理20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解,作为供试品溶液;取柴胡对照药材药材0.5-1.5g,按供试品处理方法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各4-6ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶乙醇=6-8∶2-4为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,取粉末2-4g,加无水乙醚40-60ml,超声处理20-40分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解,作为供试品溶液;取α-香附酮对照品0.01ml,加甲醇溶解制成对照溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各4-6ul,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,称取3-5g,加60-80%乙醇50-70ml,超声0.5-1.5小时,滤过,滤液挥至无醇味,转移置分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取2-4次,每次20-40ml,合并正丁醇液,加0.5-1.5%氢氧化钠溶液洗涤2-4次,每次20-40ml,再加正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解,作为供试品溶液;另取人参皂苷Rg1,Rb1,三七皂苷R1对照品,分别加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液;吸取上述2种溶液各4-6ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水为13-17∶38-42∶20-24∶8-12的比例,在10℃以下放置2-4小时的下层溶液为展开剂;展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,在100-110℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点及荧光斑点。
6.如权利要求5所述的药物组合物口服固体制剂的质量控制方法,其特征在于该方法包括如下鉴别中的一种或几种A、取本药物组合物口服固体制剂适量,研细,取粉末3g,加乙醇50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取柴胡对照药材药材1g,按供试品处理方法制成对照药材溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯∶乙醇为7∶3的展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;B、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,取粉末3g,加无水乙醚50ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取α-香附酮对照品0.01ml,加甲醇溶解制成对照溶液;照薄层色谱法试验,吸取上述2种溶液各5ul,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿为展开剂,展开,取出,晒干,紫外254nm检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;C、取本发明药物组合物口服固体制剂适量,研细,称取4g,加70%乙醇60ml,超声1小时,滤过,滤液挥至无醇味,转移置分液漏斗中,加水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次30ml,合并正丁醇液;加1%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次30ml;再加正丁醇饱和的水洗至中性,弃去水液,取正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取人参皂苷Rg1,Rb1,三七皂苷R1对照品,分别加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液;吸取上述4种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶水为15∶40∶22∶10的比例,在10℃以下放置3小时的下层溶液为展开剂;展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及365nm紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点及荧光斑点。
7.如权利要求5或6所述的药物组合物口服固体制剂的质量控制方法,其特征在于该方法中还包括如下含量测定色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=18-22∶78-82为流动相;室温;检测波长为203nm;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;供试品溶液的制备,取本药物组合物口服固体制剂日服用剂量的5/6,研细,精密称定1-3g,置具塞锥形瓶中,加入60-80%的乙醇40-60mL,超声处理50-70分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取2-4次,每次20-40ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取2-4次,每次10-30ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取3-5次,每次20-40ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤2-4次,每次20-40ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本药物组合物口服固体制剂按日服用剂量计,含三七以化学成分为C42H72O14的人参皂苷Rg1不得少于12mg。
8.如权利要求7所述的药物组合物的质量控制方法,其特征在于该方法中的含量测定为色谱条件与系统适用性试验,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈∶水=20∶80为流动相;检测波长为203nm;室温;理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000;对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg1对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液,即得;供试品溶液的制备取本药物组合物口服固体制剂日服用剂量的5/6,研细,精密称定2g,置具塞锥形瓶中,加入70%的乙醇50mL,超声处理60分钟,过滤,取滤液挥至无醇味,加少量水溶解,用60-90℃石油醚萃取3次,每次30ml,弃去石油醚;水层用氯仿萃取3次,每次20ml,弃去氯仿;水层再用饱和正丁醇萃取4次,每次30ml,弃去水层;正丁醇层用1%NaOH溶液洗涤3次,每次30ml;再用正丁醇饱和的水洗至中性;将正丁醇液挥干,加甲醇定容至25ml容量瓶中,即得;测定法;分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定,即得;本药物组合物口服固体制剂按日服用剂量计,含三七以化学成分为C42H72O14的人参皂苷Rg1不得少于12mg。
9.如权利要求1或2所述的药物组合物在制备治疗乳腺增生的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开一种治疗乳腺增生的中药组合物制剂的质量控制方法,该药物组合物主要由三七、香附、八角莲、鼠妇虫、黑蚂蚁、五香血藤、鸡矢藤、金荞麦、大红袍、柴胡制成。其质量控制方法鉴别中,保留了三七薄层色谱鉴别,并增加了柴胡、香附的薄层色谱鉴别;采用高效液相色谱法测定三七中人参皂苷Rg1的含量。
文档编号A61K35/56GK1814114SQ200510134298
公开日2006年8月9日 申请日期2005年12月16日 优先权日2005年12月16日
发明者谢黎 申请人:谢黎