含有山奈酚和槲皮素的透明质酸生成促进用组合物的制作方法

专利名称：含有山奈酚和槲皮素的透明质酸生成促进用组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及含有山奈酚(kaempferol，也称为莰非醇)和槲皮素(quercetin，也称为五羟黄酮)中的任何一种以上的透明质酸生成促进用组合物。

背景技术：
透明质酸是非硫酸化葡萄糖胺聚糖的一种，是葡糖醛酸与N-乙酰基葡萄糖胺残基反复连接成链状的线状的分子量为20万～40万的高分子物质。有报道指出，透明质酸是细胞外基质的主要构成成分，不仅与保持水分、保持细胞之间的间隔、细胞生长因子和营养成分的保存及扩散有关，还与细胞的分裂与分化、移动等有关。
有报道指出存在于哺乳类体内的透明质酸的50％以上分布在皮肤、特别是表皮细胞之间的间隔和真皮结缔组织中，已知这种透明质酸主要是通过角质形成细胞和纤维芽细胞而合成的。据报道人皮肤中的透明质酸的量会随着老化而减少，但认为皮肤中的透明质酸量的减少是伴随老化的肌肤弹性降低和水分含量减少的直接原因之一(Fleischmajer R.etal.，Biochem Biophys Acta.，279、pp265-275，1972；Longas MO.et al.，Carbohydr Res.，159，pp127-136，1987；Ghersetich I.et al.，Int.J.Dermatol.，33，pp119-122，1994)。
另一方面，人体的关节囊由外侧的纤维层和内侧的滑膜层构成，由滑膜构成的滑液含有透明质酸和糖蛋白质，这两种成分起到润滑关节的作用。有报道指出，如果发生退行性关节炎，则起到关节内润滑作用的透明质酸的生成会减少，由蛋白酶导致的破坏会增加，关节内的透明质酸减少。即，随着关节内透明质酸的减少，由于无法在关节中吸收或分散外部冲击，因此只能恶化关节的损伤。因而，1997年美国FDA确认了将透明质酸注入到关节内以缓解关节炎的方法，直到现在这种方法还在实施，但终究还是增大体内透明质酸的合成的方法可以取得更好的效果。
有报道指出在皮肤细胞培养状态下的透明质酸的合成由于各种生长因子、反式视黄酸(transretinoic acid)、N-甲基丝氨酸等而增加(HeldinP.et al.，Biochem.J.，258，pp919-922，1989；Heldin P.et al.，Biochem.J.，283，pp165-170，1992；Suzuki M.et al.，Biochem.J.，307，pp817-821，1995；Tirone E.et al.，J.Biol.Chem.，272，pp4787-4794，1997；Tammi R.et al.，J.Invest.Dermatol.，92，pp326-332，1989；Akiyama H.et al.，Biol.Pharm.Bull.，17，pp361-364，1994；Sakai S.et al.，Skin Pharmacol.Appl.SkinPhysiol.，12，pp276-283，1999)，还有报道指出涂抹在皮肤上的女性激素(雌二醇)及其类似物会增加透明质酸的合成(Sobel H.et al.，Steroids，16，pp1-3，1970；Bentley JP.et al.，J.Invest.Dermatol.，87，pp668-673，1986；Miyazaki K.et al.，Skin Pharmacol.Appl.Skin Physiol.，15，pp175-183，2002)，但关于透明质酸代谢的详细机理目前还是未知的。仅了解透明质酸的合成在细胞膜内侧表面上被透明质酸合成酶促进，在合成期间穿过细胞膜后蓄积在细胞外的基质上(Weigel PH.et al.，J.Biol.Chem.，272，pp13997-14000，1997)。
哺乳动物中透明质酸合成酶的基因报道有序列上相似性高的透明质酸合成酶1(HAS1)、透明质酸合成酶2(HAS2)、以及透明质酸合成酶3(HAS3)这3种形态。与此相关，有报道指出当在表皮细胞培养液中添加表皮生长因子(EGF)时，透明质酸合成酶(HAS)的基因表达增大(Pienimaki JP.et al.，J.Biol.Chem.，276，pp20428-20435，2001)。但是，实际情况是关于透明质酸在细胞和组织中的分布、涉及透明质酸的各种因子和酶、例如透明质酸合成酶(HAS)或调控透明质酸活性的因子的研究还非常地不充分。
因此，着眼于透明质酸的上述适用可能性，正在火热进行可以高效地生产和注入透明质酸、或可以使体内透明质酸的合成增加的方法的相关研究，但实际情况是还没有特别有价值的研究结果。
另一方面，已知作为黄酮类的黄酮醇的一种的以下式I所示的山奈酚和以下式II所示的槲皮素是普通的食用多酚化合物，它们大量地存在于食用植物中，对健康起着重要的作用。一般来说，具有这种二苯基丙烷骨架的黄酮类还具有抗癌、抗氧化及抗炎、抗过敏的功能。
化学式I

化学式II



发明内容
本发明人等对于能够更加有效地将透明质酸供给至体内的方法进行了深入研究，结果发现，已知具有抗癌效果、抗氧化效果及抗炎、抗过敏效果等的作为黄酮类的山奈酚和槲皮素不仅具有上述公知的功能，还可以增大对人细胞内的透明质酸合成酶进行编码的基因的表达，结果发挥促进体内透明质酸生成的效果。
即，如果将山奈酚和槲皮素对人表皮的皮肤细胞株进行处理，则促进利用细胞的透明质酸的生成，体内的透明质酸的量增加，因此可以用作利用透明质酸有用性的各种用途、例如增加皮肤弹性、防止皮肤干燥或防止皮肤老化之类的皮肤改善用途，或者治疗或预防退行性关节炎之类的药物用途，进而完成了本发明。
因此，本发明的目的在于提供含有山奈酚和槲皮素作为有效成分的透明质酸生成促进用组合物。
本发明的另一目的在于提供山奈酚和槲皮素在利用上述透明质酸生成促进用组合物的透明质酸合成酶的功能的各种用途、例如增加皮肤弹性、防止皮肤干燥或防止皮肤老化之类的皮肤改善用途，或者治疗或预防退行性关节炎等用途中的利用可能性。
本发明提供含有山奈酚和槲皮素中的任何一种以上的透明质酸生成促进用组合物。
上述透明质酸生成促进用组合物的特征在于，使透明质酸合成酶(HAS)基因的表达增大，并促进透明质酸生成。
另外，上述透明质酸生成促进用组合物的特征在于，其为用于增加皮肤弹性的化妆品组合物。
另外，上述透明质酸生成促进用组合物的特征在于，其为用于防止皮肤干燥的化妆品组合物。
另外，上述透明质酸生成促进用组合物的特征在于，其为用于防止皮肤老化的化妆品组合物。
另外，上述透明质酸生成促进用组合物的特征在于，其为用于治疗或预防退行性关节炎的药物组合物。
本发明的上述透明质酸生成促进用组合物优选以相对于该组合物的总重量为0.001～99.9重量％的浓度含有山奈酚和槲皮素中的任何一种以上。这是由于，若上述成分为小于0.001重量％的浓度，则难以获得其效果，若为超过99.9重量％的浓度，则在剂型稳定性方面有可能产生问题，而且由于存在杂质，不可能超过99.9重量％。
作为黄酮类的山奈酚和槲皮素由于具有增大存在于人表皮的皮肤细胞株中的透明质酸合成酶(HAS)基因的表达、促进人细胞的透明质酸生成的功能，因此本发明的含有山奈酚和槲皮素中任何一种以上的组合物为透明质酸生成促进用组合物，可以用作用于增加皮肤弹性、防止皮肤干燥或防止皮肤老化的化妆品组合物、或者用于治疗或预防退行性关节炎的药物组合物。



图1和图2是为了以mRNA水平尝试确认山奈酚和槲皮素导致的透明质酸合成酶的表达，在人表皮的皮肤细胞株、即角质形成细胞株HaCaT细胞中分别用各个浓度处理山奈酚和槲皮素后，将透明质酸合成酶(HAS)的基因进行定量逆转录PCR所得到的结果，图1为山奈酚导致的结果图，图2为槲皮素导致的结果图。
图3是为了研究山奈酚和槲皮素对透明质酸的生成促进，将山奈酚和槲皮素分别以0.1μM、1μM、10μM的浓度对人表皮的皮肤细胞株、即角质形成细胞株HaCaT细胞进行处理后，利用ELISA(酶联免疫吸附分析)确认透明质酸生成的增加，并将其结果定量化所得到的图。
图4是为了研究山奈酚和槲皮素的细胞毒性，将山奈酚和槲皮素分别以0.1μM、1μM、10μM的浓度对人表皮的皮肤细胞株、即角质形成细胞株HaCaT细胞进行处理后，利用MTT{3，(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑}分析，研究该浓度下对细胞毒性产生的影响，并将其结果定量化所得到的图。

具体实施例方式 本发明中，为了研究作为黄酮类的山奈酚和槲皮素的透明质酸生成促进效果，将山奈酚和槲皮素分别对人表皮的皮肤细胞株、即角质形成细胞株HaCaT细胞进行处理时，确认了透明质酸合成酶(HAS)基因的表达增大且透明质酸生成增加。即，确认了经过24小时山奈酚和槲皮素处理的人表皮的皮肤细胞株HaCaT细胞与未经山奈酚和槲皮素处理的细胞相比，透明质酸合成酶基因的表达增大。换而言之，山奈酚和槲皮素具有促进人表皮的皮肤细胞内的透明质酸合成酶基因的表达的效果。而且确认了人表皮的皮肤细胞株中的透明质酸的量由于山奈酚和槲皮素的处理而增加。
因此，具有增大透明质酸合成酶基因的表达、并促进透明质酸生成的功能的山奈酚和槲皮素可以作为利用透明质酸有用性的各种皮肤外用剂的有效成分使用。例如，可以添加到增加皮肤弹性、防止皮肤干燥或防止皮肤老化之类的化妆品组合物中。
另外，还可以添加到用于通过投与透明质酸来治疗或预防疾病、例如退行性关节炎之类的疾病的药物组合物中。但是，并不局限于此。
含有本发明的山奈酚和槲皮素中的任何一种以上的化妆品组合物除了上述成分之外，还可以在不损害本发明目的的主要效果的范围内、优选含有可以对主要效果赋予协同效果的其它成分等。
另外，上述化妆品组合物还可以具有溶液、乳液、粘性混合物等形状。
本发明的化妆品组合物的剂型没有特别限定，例如可以是乳液、化妆水、面霜、洗液、精华、面膜、凝胶之类的皮肤粘附型化妆品，具有粉、唇膏、底妆、粉底之类剂型的化妆品，可以具有洗发水、冲洗剂、沐浴露、美容液、洁面泡沫、洁面霜、洁面水、香皂之类洗涤化妆品的剂型。
对于各剂型的化妆品组合物，上述山奈酚和槲皮素中的任何一种以上以外的成分可以根据其它化妆品的剂型或使用目的，只要是本领域技术人员就不会特别困难地适当选择后进行混合。
另外，本发明的化妆品组合物还可以含有选自水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖、神经鞘脂质和海藻提取物中的组合物。
本发明的化妆品组合物中还可以根据需要与上述必须成分一起混合通常在化妆品中混合的其它成分。
作为还可以另外添加的混合成分，可以列举出油脂成分、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机和无机颜料、有机粉体、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调整剂、醇、色素、香料、血液循环促进剂、冷感剂、制汗剂、精制水等。
另外，还可以另外添加的混合成分并不局限于这些，而且，上述任何成分可以在不损害本发明目的和效果的范围内混合，但相对于总重量优选混合0.01～5重量％、更优选混合0.01～3重量％。
含有本发明的山奈酚和槲皮素中的任何1种以上的药物组合物还可以进一步含有在药物组合物的制造中通常使用的适当载体、赋形剂和稀释剂。
本发明的山奈酚和槲皮素中的任何1种以上的药学给药形态可以以它们的药学可容许的盐的形态使用，也可以单独使用，或以与其他药学活性化合物的结合或适当集合的形式使用。
含有本发明的山奈酚和槲皮素中的任何1种以上的药物组合物可以分别通过通常的方法以包括散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、气雾剂之类的口服剂型，洗剂、软膏、凝胶、霜、贴剂(patch)、喷雾剂之类的经皮给药剂型的相应于药剂学制剂的任何形态制成剂型后使用。
本发明的药物组合物的优选给药量虽然根据对象者的年龄、性别、体重、症状、疾病程度、药物形态、给药途径和期间而不同，但只要是本领域技术人员即可适当选择。但是，为了得到所需效果，优选以0.01～1000mg/天的量投与本发明的药物组合物。给药可以是每天1次，也可以每天分为数次。另外，其给药量可以根据年龄、性别、体重、疾病的程度、给药途径等增减。因此，上述给药量无论从哪个方面出发均非限定本发明的范围。
本发明的山奈酚和槲皮素中的任何1种以上可以由非口服、口服等各种途径对大白鼠、小鼠、家畜、人等哺乳动物给药，给药的所有方式是可以预想的方式，例如可以通过口服、直肠或静脉、肌肉、皮下、子宫内硬膜或脑血管内注射来给药。
实施例 以下通过试验例更加详细地说明本发明，但本发明并不仅局限于这些试验例。
<试验例1>人表皮的皮肤细胞株HaCaT中的透明质酸合成酶(HAS)基因表达增大效果 为了研究山奈酚和槲皮素对人表皮的皮肤细胞株HaCaT中的透明质酸合成酶(HAS)基因表达增大的效果，将山奈酚和槲皮素分别以各种浓度对HaCaT细胞进行处理后，为了以mRNA水平确认透明质酸合成酶的基因表达，对透明质酸合成酶(HAS)基因进行定量逆转录PCR，如下调查了山奈酚和槲皮素导致的透明质酸合成酶(HAS)基因的变化。
1-1.细胞培养 使用自然产生的永生化的人角化细胞细胞株HaCaT，上述细胞株从Fusenig博士(Dr.N.E.Fusenig，Deutsches Krebsforschungszentrum(DKFZ)，Heidelberg，Germany)获得。首先，在含有10％胎牛血清(HyClone)、碳酸氢钠3.6g/l和抗体(链霉素100μg和青霉素100IU/l)(Life Technologies，Inc.)的DMEM培养基(Dulbecco′s modified Eagle′smedia)中，在适当的培养条件(37℃、5％CO2、95％空气)下培养上述细胞。细胞每3天更换1次新鲜的培养基，当密度达到最大时，以1∶5的分割比进行传代培养(secondary cultured)。在处理山奈酚或槲皮素的72小时前，在每75cm2组织培养瓶中分注1×105个细胞，在含有10％胎牛血清的培养基中培养48小时。之后，在无血清培养基中培养24小时，分别以0.1μM、1μM、10μM的浓度处理山奈酚和槲皮素，培养24小时。对照组是在以1∶1000稀释并补充有介质(二甲基亚砜，DMSO)的培养基中培养。在这种对照组的培养中，未观察到DMSO对成长和分化有任何影响。
1-2.RNA制造 在上述试验例1-1中培养的HaCaT细胞用磷酸缓冲溶液(LifeTechnologies，Inc.)洗涤2次，所有细胞的RNA根据制造商的指示使用Trizol试剂(GibcoBRL Life Technologies，Grand Island，NY)进行分离。RNA浓度使用光度测定法测定，RNA质利用琼脂糖凝胶电泳确认。
1-3.通过PCR测定对透明质酸合成酶的mRNA合成的影响 通过定量的逆转录PCR如下所述地测定了山奈酚和槲皮素对作为3种透明质酸合成酶的亚型同工酶(isoform)的透明质酸合成酶1(以下称为HAS1)、透明质酸合成酶2(以下称为HAS2)、和透明质酸合成酶3(以下称为HAS3)的mRNA合成的影响。
首先，将通过上述试验例1-2制造的经过定量的RNA逆转录，接着，在3种透明质酸合成酶的亚型同工酶的HAS1、HAS2、HAS3的特异性引物的存在下分别实施定量的PCR。更详细地说，将4μg的RNA在含有1μL的M-MuLV逆转录聚合酶(20U/μl、MBI Fermentas)、1μL的RNAse抑制剂(20U/μl)L、4μL的5×反应缓冲溶液、2μL的10mM dNTPmix、1μL的oligo(dT)引物(0.5μg/μL)的反应混合物2μl中进行逆转录(MBIFermentas的第一链cDNA合成试剂盒、#K1612，按照生产商说明进行)。首先，将RNA、oligo(dT)引物及DEPC-H2O混合，达到总量为11μL，使其在70℃下反应5分钟后放入冰中。之后加入5×反应缓冲溶液、RNAse抑制剂、Dntp，在37℃下反应5分钟后，加入M-MuLV，再在37℃下反应60分钟以进行逆转录。之后，在70℃下加热10分钟以除去逆转录酶的活性。接着，取出3μl的上述反应混合物，供于PCR反应。各PCR是在20μl的含有TaKaRa Ex Tag DNA聚合酶(5U/μl、TaKaRa)、10×EX Tag缓冲溶液、MgCl2、dNTP混合物和25pM的适当正义或反义PCR引物(参照下述表1)的反应混合物中使用Perkin-Elmer Cycler 9600(Perkin-ElmerApplied Biosystems、Foster、CA)实施的。
表1 另一方面，PCR反应条件如下所示。在94℃下经过5分钟1次的改性循环后，反复30次在94℃下1分钟、55℃下1分钟和72℃下1分钟30秒的循环。将PCR结果进行琼脂糖凝胶电泳，并用溴化乙锭(ethidiumbromide)染色后观察，结果示于图1和图2中。此时，将扩增GAPDH的结果作为用于标准化的基准。
结果如图1和图2所示，在为透明质酸合成酶基因中亚型同工酶2基因(HAS2)时，在对照组和山奈酚或槲皮素处理组均有表达。当为亚型同工酶3基因(HAS3)时，虽然对照组中检测出少量，但在经过了1μM和10μM浓度的山奈酚或槲皮素处理的HaCaT细胞中，与对照组相比多少有些增加。
<试验例2>人表皮的皮肤细胞株HaCaT培养培养基中透明质酸的增加 为了研究通过山奈酚和槲皮素实际上是否会促进透明质酸的生成，对人表皮的皮肤细胞株HaCaT培养培养基处理各浓度的山奈酚和槲皮素后，使用HA-ELISA试剂盒确认并定量透明质酸合成被促进后排出到培养基中的量。
更具体地说，在使用上述试验例1-1的细胞培养方法培养人表皮的皮肤细胞株HaCaT后，为了研究通过山奈酚和槲皮素、合成被促进后分泌到培养基中的透明质酸的量，回收培养基实施ELISA(酶联免疫吸附分析)。为了实施ELISA，购入Echelon公司的透明质酸酶-结合免疫吸附剂分析试剂盒(HA-ELISA、产品号K-1200)。利用HA-ELISA试剂盒，根据生产商的指示对通过上述细胞培养回收的培养基实施，并对通过山奈酚和槲皮素在HaCaT细胞中合成后排出到培养基中的透明质酸的合成量进行定量。对照组在1∶1000稀释并补充有介质(二甲基亚砜、DMSO)的培养基中培养，在这种对照组的培养中，未观察到DMSO对成长和分化有任何影响。其结果示于图3中。
结果如图3所示可知，为山奈酚时，在1μM和10μM下，与对照组相比，分别以95％的可靠性增大了统计学上显著的7％和8％的合成能。当为槲皮素时，在1μM和10μM下，与对照组相比，分别以95％的可靠性增大了统计学上显著的11％和24％的合成能。
<试验例3>确认人表皮的皮肤细胞株HaCaT中山奈酚和槲皮素的各浓度的细胞毒性 为了研究人表皮的皮肤细胞株HaCaT中山奈酚和槲皮素的各浓度的细胞毒性，用各浓度山奈酚和槲皮素对HaCaT细胞进行处理后，利用MTT分析定量细胞毒性程度来进行确认。
3-1.细胞培养 使用自然产生的永生化的人角化细胞细胞株HaCaT，上述细胞株由Fusenig博士(Dr.N.E.Fusenig，Deutsches Krebsforschungszentrum(DKFZ)，Heidelberg，Germany)获得。首先，在含有10％胎牛血清(HyClone)、碳酸氢钠3.6g/l和抗体(链霉素100μg和青霉素100IU/l)(Life Technologies，Inc.)的DMEM培养基(Dulbecco′s modified Eagle′smedia)中，在适当的培养条件(37℃、5％CO2、95％空气)下培养上述细胞。细胞每3天更换1次新鲜的培养基，当密度达到最大时则以1∶5的分割比进行传代培养。在处理山奈酚或槲皮素的72小时前，在组织培养瓶96孔板的每个孔中分注1×104个细胞，在含有10％胎牛血清的培养基中培养48小时。之后，在无血清培养基中培养24小时，分别以0.1μM、1μM、10μM的浓度处理山奈酚和槲皮素，培养24小时。对照组在以1∶1000稀释并补充有介质(二甲基亚砜、DMSO)的培养基中进行培养。
3-2.MTT分析 用磷酸缓冲溶液洗涤在上述试验例3-1中培养的细胞，根据生产商的指示实施MTT(3，(4，5-二甲基-2-噻唑)2，5二苯基溴化四氮唑、Sigma)分析，其结果示于图4中。
结果如图4所示，由对照组的培养中未观察到DMSO对成长和分化有任何影响。在为山奈酚和槲皮素的情况下，在作为与对照组相比以95％的可靠性在统计学上显著的透明质酸合成评价浓度的0.1μM、1μM和10μM下也均无细胞毒性。
<参考例1>统计分析 在上述试验例1～3的数据分析中使用的对应标本t检验是使用SigmaStat(SPSS，Inc.，Chicago，IL)实施的。显著性以p＝0.05基准来考虑，数据以平均±标准误差表示。
由上述结果可知，当将山奈酚和槲皮素对人表皮的皮肤细胞株进行处理时，透明质酸合成酶基因的表达增大，结果可以确认透明质酸的生成有所促进。
以下说明上述组合物的制剂例，但本发明并不局限于此，仅是用于进行具体说明而举例。
制剂例1.调制香皂 山奈酚1.00(％) 油脂 适量 氢氧化钠 适量 氯化钠适量 香料 少量 通过添加精制水使总量达到100，以上述配合比调制香皂。
制剂例2.调制洗剂 槲皮素 3.00(％) L-抗坏血酸-2-磷酸镁盐1.00 水溶性胶原(1％水溶液)1.00 柠檬酸钠 0.10 柠檬酸 0.05 甘草提取物 0.20 1，3-丁二醇 3.00 添加精制水使总量达到100，以上述配合比(％)调制洗剂。
制剂例3.调制面霜 山奈酚和槲皮素 1.00(％) 聚乙二醇单硬脂酸酯 2.00 自乳化型单硬脂酸甘油酯 5.00 鲸蜡醇 4.00 角鲨烯 6.00 三-(2-乙基己酸)甘油酯6.00 神经鞘糖脂質 1.00 1，3-丁二醇 7.00 添加精制水使总量达到100，以上述配合比(％)调制面霜。
制剂例4.调制面膜 山奈酚 2.00(％) 聚乙烯醇 13.00 L-抗坏血酸-2-磷酸镁盐1.00 月桂酰基羟基脯氨酸 1.00 水溶性胶原(1％水溶液)2.00 1，3-丁二醇 3.00 乙醇 5.00 添加精制水使总量达到100，以上述配合比(％)调制面膜。
制剂例5.调制美容液 槲皮素 2.00(％) 羟乙基纤维素(2％水溶液) 12.00 黄原胶(2％水溶液)2.00 1，3-丁二醇 6.00 浓甘油 4.00 透明质酸钠(1％水溶液)5.00 添加精制水使总量达到100，以上述配合比(％)调制美容液。
制剂例6.调制散剂 山奈酚 100mg 乳糖 100mg 滑石 10mg 混合上述成分，填充到气密袋中调制散剂。
制剂例7.调制片剂 槲皮素 50mg 玉米淀粉 100mg 乳糖 100mg 硬脂酸镁 2mg 混合上述成分后，根据通常的片剂调制方法压片，调制片剂。
制剂例8.调制胶囊剂 山奈酚和槲皮素 50mg 玉米淀粉100mg 乳糖100mg 硬脂酸镁2mg 根据通常的胶囊剂调制方法混合上述成分，填充到明胶胶囊中调制胶囊剂。
制剂例9.调制注射剂 山奈酚和槲皮素50mg 注射用灭菌蒸馏水 适量 pH调节剂 适量 根据通常的注射剂调制方法按照在每安瓿(2ml)中以上述成分含量进行调制。
制剂例10.调制液体制剂 槲皮素100mg 异构糖10g 甘露醇5g 精制水适量 根据通常的液体制剂的调制方法在精制水中添加各个成分并使其溶解，添加适量的柠檬香料后混合上述成分。之后，添加精制水调节至总量100ml，然后填充到褐色瓶中灭菌，调制液体制剂。
作为黄酮类的山奈酚和槲皮素由于具有增大存在于人表皮的皮肤细胞株中的透明质酸合成酶(HAS)基因的表达、并促进人细胞中透明质酸的生成的功能，因此本发明的含有山奈酚和槲皮素中的任何1种以上的组合物是透明质酸生成促进用组合物，可以用作用于增加皮肤弹性、防止皮肤干燥或防止皮肤老化的化妆品组合物、或者用于治疗或预防退行性关节炎的药物组合物。
权利要求
1.一种透明质酸生成促进用组合物，其含有山奈酚和槲皮素中的任何1种以上。
2.权利要求1所述的透明质酸生成促进用组合物，其特征在于，所述透明质酸生成促进用组合物使透明质酸合成酶(HAS)基因的表达增大，并促进透明质酸生成。
3.权利要求1所述的透明质酸生成促进用组合物，其特征在于，所述透明质酸生成促进用组合物为用于增加皮肤弹性的化妆品组合物。
4.权利要求1所述的透明质酸生成促进用组合物，其特征在于，所述透明质酸生成促进用组合物为用于防止皮肤干燥的化妆品组合物。
5.权利要求1所述的透明质酸生成促进用组合物，其特征在于，所述透明质酸生成促进用组合物为用于防止皮肤老化的化妆品组合物。
6.权利要求1所述的透明质酸生成促进用组合物，其特征在于，所述透明质酸生成促进用组合物为用于治疗或预防退行性关节炎的药物组合物。
7.权利要求1所述的透明质酸生成促进用组合物，其特征在于，所述透明质酸生成促进用组合物以相对于该组合物的总重量为0.001～99.9重量％的量含有山奈酚和槲皮素中的任何1种以上。
全文摘要
本发明涉及含有山奈酚和槲皮素中的任何1种以上的透明质酸生成促进用组合物。本发明的山奈酚或槲皮素由于具有增大存在于人表皮的皮肤细胞株中的透明质酸合成酶(HAS)基因的表达、并促进人细胞中透明质酸的生成的功能，因此本发明的含有山奈酚和槲皮素中的任何1种以上的组合物是透明质酸生成促进用组合物，可以用作用于增加皮肤弹性、防止皮肤干燥或防止皮肤老化的化妆品组合物、或者用于治疗或预防退行性关节炎的药物组合物。
文档编号A61P19/02GK101111244SQ200580047457
公开日2008年1月23日 申请日期2005年5月30日 优先权日2004年12月31日
发明者金昇壎, 姜炳永, 南凯元, 李海光, 文圣濬, 张利燮 申请人:株式会社太平洋