专利名称：雌黄纳米粒的制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗肿瘤的传统药物雌黄新剂型，尤其是涉及雌黄纳米粒的制备工艺。
背景技术：
雌黄是重要的含砷矿物中药，也是重要的工业用砷原料，其主要成分为As2S3，不溶于水，也不溶于稀盐酸。目前，人们都是采用浮选法从含砷矿石中提取较高纯度的雌黄，用这种方法制取的雌黄粒径均较大，无论是在医学上还是在化工上，应用起来，均有较大的缺陷。有学者报道雌黄在抑制急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocytic leukemia，APL)、乳腺癌、卵巢癌细胞株生长和诱导凋亡过程中发挥重要作用，临床用于治疗-APL患者已取得血液学、遗传学与分子生物学意义上的完全缓解，但雌黄的临床应用和基础研究目前仅局限于颗粒较大的传统剂型，临床上存在用药量大、生物利用度较低、毒副作用强等问题，而且长期或者大剂量使用还会引发多种疾病，因此若能通过改进传统制剂工艺、采用现代技术制备新剂型含砷中药来提高其生物利用度、增强疗效、减少用药量、降低其毒副作用将具有重要的临床意义。
纳米技术是近年来迅速发展起来的前沿科技领域，并已逐步应用于医药领域，从而诞生了纳米药物这一新概念，为中药的现代化开辟了新途径。纳米药物是指粒径小于500nm的颗粒状药物，这种小粒径的性状使它具有特殊的表面效应和小尺寸效应。与常规药物相比，纳米药物颗粒小、表面反应活性高、活性中心多、催化效率高、吸附能力强，因此它具有许多常规药物不具备的优点。近年来研究表明，运用纳米技术所制备的纳米粒径的药物可有效提高药物的生物利用度，利于服用吸收，增强疗效，在抗肿瘤研究中显示了充分的优越性。如纳米砒霜，纳米雄黄，纳米石决明等抗肿瘤作用明显优于传统剂型。
发明内容
本发明提供一种纳米级雌黄的制备工艺，由本发明制得的雌黄纳米粒药物可有效提高药物的生物利用度，利于服用吸收，用药量减少，从而有效降低其毒副作用。
本发明采用如下技术方案配制As2O3盐酸溶液和硫代乙酰胺(TAA)溶液将As2O3和盐酸按每毫克质量与每毫升体积之比为33∶1的比例混合，60℃恒温水浴中加热使其完全溶解，得A液；将硫代乙酰胺和H2O按每毫克质量与每毫升体积之比为37.5∶1的比例充分混合溶解，得B液，在磁力搅拌下，按乙醇与A液体积之比为(19-79)∶1的比例将A液逐滴加入到乙醇中，混合均匀得C液，滴完后继续搅拌5-10分钟；在磁力搅拌下，按B液与C液体积之比为1∶(20-80)的比例将B液逐滴加入到C液中，滴完后继续搅拌5-10分钟，50℃-60℃水浴至溶液变浑浊，即溶液呈柠檬色，得粒径为60nm-140nm的雌黄纳米粒。
本发明的制备原理方程式为
与现有技术相比，本发明具有如下优点雌黄属于矿物类中药，不溶于水，传统剂型呈方形、多边形或不规则颗粒状，平均直径大于1μm(图1中A所示)，临床上存在生物利用度低、用药量大、毒副作用强等局限性，而由本发明所述工艺制备的雌黄纳米粒电镜下呈圆形或椭圆形颗粒状，大小较一致，分散性较好，平均直径分别为60nm、80nm、140nm。电镜能谱分析，制备的纳米粒中只有As、S两种元素，S、As质量百分含量分别为36.72％、63.28％，接近于As2S3理论值(As60.97％；S39.03％)，原子数百分含量为57.56％、42.44％，摩尔比接近于3∶2，说明所制备的纳米粒确为As2S3纳米粒。
当物质加工到纳米尺寸时，由于量子尺寸效应和表面效应，纳米粒子会呈现出新奇的物理、化学和生物学特性。表面效应是指纳米粒子表面原子数之比随粒径变小而急剧增大后所引起的性质上的变化。粒子的尺寸越小，比表面积越大，表面原子数就越多，表面能亦迅速提高，当物质的粒径达到纳米尺寸时，其表面能很高，所以雌黄纳米粒具有很强的化学活性。另外，药物的吸收度常常受到药物在吸收部位的溶出速度所支配，纳米粒径的药物由于尺寸小，比表面积增大，增加了其暴露于介质中的表面积，促进了药物的溶解，同时也扩大了药物与吸收部位的有效接触面积，从而提高了药物的吸收利用度。
纳米药物还具有特殊的药理效应研究表明，纳米粒对肿瘤细胞具有特殊的亲合力，易吸附于瘤细胞表面；无机纳米粒子的强大离子交换能力和强极化力可与肿瘤细胞表面发生作用，或进入癌细胞内，与其中某些组分发生作用，从而产生抑制癌细胞作用；同时，由于纳米粒的尺寸非常小，所以很容易被癌细胞通过胞饮和吞噬所摄取，甚至可直接进入癌细胞内发挥药效，从而增强As2S3的药效。
本实验室用本发明提供的方案制备的雌黄纳米粒对慢性粒细胞白血病(CML)急性期K562细胞和人肝癌SMMC-7721细胞进行了体外干预实验，结果显示雌黄纳米粒对这两种恶性肿瘤细胞均产生明显的细胞毒性作用，其效果明显优于相同浓度传统剂型的雌黄，等效剂量远远低于传统剂型的雌黄。8μmol/LAs2S3作用于K562细胞72小时，细胞存活率为52.3％，而同浓度的As2S3纳米粒组同条件下细胞存活率仅为3.2％(P＜0.01)。As2S3处理K562细胞48小时的IC50为13.0μmol/L，而As2S3纳米粒处理48小时的IC50只有1.27μmol/L。8μmol/LAs2S3作用于SMMC-7721细胞72小时细胞存活率为67.3％，而同浓度的As2S3纳米粒组同条件下细胞存活率仅为26.9％(P＜0.001)。As2S3处理SMMC-7721细胞72小时的IC50为17.1μmol/L，而As2S3纳米粒处理72小时的IC50仅为3.25μmol/L。因此，雌黄纳米粒有望成为砷类中药治疗肿瘤的新剂型，为临床应用开辟了新途径，同时，本发明也为传统中药在抗肿瘤纳米医药的发展上提供了新的思路和方法。
图1是传统剂型的雌黄电镜照片。
图2是雌黄纳米粒电镜照片2，纳米粒直径约为60nm。
图3是雌黄纳米粒电镜照片3，纳米粒直径约为80nm。
图4是雌黄纳米粒电镜照片4，纳米粒直径约为140nm。
图5是雌黄纳米粒在扫描电镜图谱分析。
图6是雌黄和雌黄纳米粒处理后K562细胞存活率比较(A为4μmol/l；B为8μmol/l；C为16μmol/l)。
图7是雌黄和雌黄纳米粒处理后SMMC-7721细胞存活率比较(A为4μmol/l；B为8μmol/l；C为16μmol/l)。
具体实施例方式
配制As2O3盐酸溶液和硫代乙酰胺(TAA)溶液将As2O3和盐酸按每毫克质量与每毫升体积之比为33∶1的比例混合，60℃恒温水浴中加热使其完全溶解，得A液；将硫代乙酰胺和H2O按每毫克质量与每毫升体积之比为37.5∶1的比例充分混合溶解，得B液，在磁力搅拌下，按乙醇与A液体积之比为(19-79)∶1的比例将A液逐滴加入到乙醇中，混合均匀得C液，滴完后继续搅拌5-10分钟；在磁力搅拌下，按B液与C液体积之比为1∶(20-80)的比例将B液逐滴加入到C液中，滴完后继续搅拌5-10分钟，50℃-60℃水浴至溶液变浑浊，即溶液呈柠檬黄色，得粒径为60nm-140nm的雌黄纳米粒。在本实施例中，乙醇与A液体积之比可选择为20∶1，40∶1，60∶1，80∶1；B液与C液体积之比可选择为1∶20，1∶40，1∶60，1∶80。在本实施例中，整个过程是在无菌条件下进行的，当溶液变混浊呈柠檬色后，将溶液放置12小时，待其溶液稳定后，将溶液滴至带膜的铜网上，过滤出的粒子在电镜下观察，可以确定由本发明制得的雌黄纳米粒的粒径为60nm-140nm。
权利要求
1.一种作为治疗肿瘤药物的雌黄纳米粒的制备工艺，其特征在于配制As2O3盐酸溶液和硫代乙酰胺(TAA)溶液将As2O3和盐酸按每毫克质量与每毫升体积之比为33∶1的比例混合，60℃恒温水浴中加热使其完全溶解，得A液；将硫代乙酰胺和H2O按每毫克质量与每毫升体积之比为37.5∶1的比例充分混合溶解，得B液，在磁力搅拌下，按乙醇与A液体积之比为(19-79)∶1的比例将A液逐滴加入到乙醇中，混合均匀得C液，滴完后继续搅拌5-10分钟；在磁力搅拌下，按B液与C液体积之比为1∶(20-80)的比例将B液逐滴加入到C液中，滴完后继续搅拌5-10分钟，50℃-60℃水浴至溶液变浑浊，即溶液呈柠檬色，得粒径为60nm-140nm的雌黄纳米粒。
全文摘要
本发明提供了一种作为治疗肿瘤药物的雌黄纳米粒的制备工艺，即以As
文档编号A61K9/14GK1823841SQ20061003762
公开日2006年8月30日 申请日期2006年1月6日 优先权日2006年1月6日
发明者张东生, 林梅, 王子妤 申请人:东南大学