专利名称：：弹性纳米囊泡载体及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于医药
技术领域：
，特别涉及能转运药物活性成分透过天然渗透屏障或孔隙(如皮肤、黏膜、器官等)的弹性纳米囊泡载体及其制备方法和用途。
背景技术：
：完整皮肤历来被认为是非常有效的保护身体的屏障，但是同时也是药物透皮进入体内的最大屏障。常规药物剂型如水凝胶、油膏或乳膏，以及现代剂型如脂质体都是具有药用安全性的，但是却不能有效地克服皮肤屏障。脂质体的研究具有很长的历史，脂质体的基本组成为磷脂/胆固醇/水，胆固醇具有稳定脂质体的作用，但是却使脂质体显示刚性特征，脂质体应用于皮肤的研究显示，脂质体只能融合在皮肤角质层而不能进入皮肤深处，因此脂质体很难透过屏障进入组织深处或血液中。而德国G.Cevc(ElasticvesiclesasInternationalJournalofCosmeticScience,2005，27，211221)研究开发的传递体(Transfersome)透皮给药系统取得了很大的进展，有一些药物己经进入临床研究阶段。另外以色列ElkaTouitou研究的乙醇脂质体(Ethosomes)已显示具有良好的透皮能力。弹性脂质囊泡作为有效的透皮载体具有独一无二多样性的功能，能转运不同的药物，而不需要考虑其大小、结构、分子量或极性。传递体的组成成分一般是磷脂/表面活性剂/水，乙醇脂质体的成分为磷脂/醇/水。他们具有相同的特性，就是脂质双分子层流动性较高，易于变形穿透皮肤屏障。传递体在使用时通常是在非封闭体系，以乳液(lotion)的形式使用，因为其透皮机制主要是依赖于水化梯度，使得囊泡在透皮水化力的作用下，能自身挤压通过角质层间区域。而在封闭体系中水化梯度不明显，所以传递体很难透过皮肤。乙醇脂质体中通常含有2050%乙醇，由于存在高含量乙醇，可以使双分子层具有变形能力。同时乙醇脂质体能够使角质层膜流动性增加，从而增加了经皮渗透性。乙醇脂质体通常制作成贴片在封闭体系应用，在封闭体系应用的效果优于非封闭体系。在本发明中，我们制备了一种含有磷脂/膜软化剂/醇/水的新型弹性纳米囊泡载体，结合了传递体和乙醇脂质体的特点，该弹性纳米囊泡载体在封闭体系和非封闭体系都具有极好的经皮穿透力，能够与物理辅助促渗方法如离子电渗促透方法、电致孔、激光致孔、射频促渗、热促渗以及微针致孔合用，进一步提高经皮渗透性。、
发明内容本发明的目的之一在于提供能转运药物活性成分的弹性纳米囊泡载体，该弹性纳米囊泡的直径在30500nm，特别优选直径在50200nm。本发明的目的之二在于提供含有药物活性成分的弹性纳米囊泡制剂，该弹性纳米囊泡的直径在30500nm，特别优选直径在50200nm。本发明的目的之三在于提供弹性纳米囊泡载体的制备方法。本发明的目的之四在于提供含有药物活性成分的弹性纳米囊泡制剂的制备方法。本发明的目的之五在于提供弹性纳米囊泡载体的用途。本发明的弹性纳米囊泡载体能转运药物活性成分，该弹性纳米囊泡载体的组成至少含有磷脂、膜软化剂、醇三种物理化学性质上不同的敷料成分及悬浮介质；其中，磷脂的含量为5wt%15wt%，膜软化剂的含量为0.5wt%3wt%，醇含量为5wt%40wt%，其余是磷脂、膜软化剂、醇和水或磷酸盐缓冲液(pH57.5)混合形成弹性纳米囊泡后剩余的各种成分的悬浮介质混合溶液。本发明提供的弹性纳米囊泡载体能够转运药物活性成分，可以转运一种或多种药物活性成分，药物活性成分总含量为0.01wt%10wt%，优选药物活性成分的总含量为0.05wt%2wt%。本发明的弹性纳米囊泡具有脂质双分子层，既一层或儿层磷脂双分子层组成的膜。(单层或多层脂质双分子层是根据组分含量的不同而形成的不同层的膜，通常颗粒大的是多层膜，小于100nm的是单层膜，脂质双分子层是因为磷脂具有双亲性，自身在水溶液中形成不同形状的双分子层结构)。所述的弹性纳米囊泡的直径在30500nm，特别优选直径在50200nm。生产的弹性纳米囊泡载体可以通过过滤的方法除去细菌，并可以利用过滤的方法测定囊泡的弹性。细菌的过滤器的孔径为小于220nm，测定囊泡弹性的过滤器的孔径优选30100nm。如果弹性纳米囊泡载体的系统对空气或氧气比较敏感，可以将此囊泡载体冷藏储存，例如4度，同时也可以在惰性气体的环境下(如氮气)制备和储存。为了增加弹性纳米囊泡载体的稳定性，可以在制备方法中加入抗氧化剂和/或稳定剂(有部分抗氧化剂和/或稳定剂被包裹在弹性纳米囊泡中)，其中抗氧化剂和/或稳定剂在载体中的含量小于3wt9L抗氧化剂如维生素E、抗坏血酸、酯化抗坏血酸或它们的任意混合物等；稳定剂如苯酚、苯甲酚或它们的混合物等。还可以将弹性纳米囊泡载体分散在医用水凝胶、乳膏中、乳液中增强稳定性，还可以制作成贴片使用。本发明提供的弹性纳米囊泡载体和含有药物活性成分弹性纳米囊泡的制备方法中不含有毒有害的有机溶剂，如氯仿、甲醇等。在制备过程中，磷脂和难溶于水的药物活性成分利用醇溶解，膜软化剂和其它易溶于水的成分(包括易溶于水的药物活性成分)利用水或磷酸盐缓冲液溶解。将两种不同组分混合，生产弹性纳米囊泡。混合可以是机械搅拌、剪切、粉碎、超声、注入、高压挤压等制备方法。通常制备在室温下进行，制备温度在060度均可，对于温度不稳定的活性成分最好在室温以下进行。易溶于水的成分溶解度大于配方中该成分的重量百分比浓度。本发明的弹性纳米囊泡载体的制备方法包括以下歩骤(1).称取磷脂，用适量的乙醇溶解，用旋转蒸发仪或通氮气除去乙醇;(2).将膜软化剂用水或磷酸盐缓冲液(pH57.5)溶解；(3).将步骤(2)得到的产物与步骤(1)除去乙醇的磷脂混合，加入醇，搅拌混合，进一步均浆(乳匀机)或超声，得到悬浮在悬浮介质中的弹性囊泡，其中，悬浮介质是磷脂、膜软化剂、醇和水或磷酸盐缓冲液(pH57.5)混合形成弹性纳米囊泡后剩余的各种成分的混合溶液，磷脂的含量为5wt%15wt%，膜软化剂的含量为0.5wt%3wt%，醇含量为5wt%40wt%。囊泡直径为30500nm;(4).将步骤(3)得到的弹性纳米囊泡载体过滤除去杂质和细菌，装罐。可以先使用450nm滤膜除去杂质，再使用小于220nm滤膜除菌，也可以直接使用220nm滤膜除杂质和细菌。在上述操作过程中温度不超过60度。在上述的制备过程中，在步骤(1)溶解磷脂时，或在歩骤(2)溶解膜软化剂时，可以加入占弹性纳米囊泡载体0.01wty。10wt9()的药物活性成分。在上述的制备过程中，在步骤(1)溶解磷脂时可以加入抗氧化剂和/或稳定剂，其中抗氧化剂和/或稳定剂在载体中的含量小于3wt。/。，优选占弹性纳米囊泡载体0.013wt%。对于易溶于水的药物活性成分(溶解度大于配方中重量百分浓度)也可以不用乙醇溶解，而是和膜软化剂一起用水或磷酸盐缓冲液溶解后再与磷脂混合。在上述制备中，最终过滤得到的囊泡载体能进一步分散在医用水凝胶、乳膏或乳液中或制作成贴片使用。本发明制备了一种含有磷脂/膜软化剂/醇/水的新型弹性纳米囊泡载体，结合了传递体和乙醇脂质体的特点，该弹性纳米囊泡载体在封闭体系和非封闭体系都具有极好的经皮穿透力，能够与物理辅助促渗透皮方法如离子电渗促透方法、电致孔、超声以及微针致孔合用，进一步提高经皮渗透性。含有药物活性成分的囊泡载体可以应用于注射剂、喷雾剂以及透皮制剂。定义磷脂，phospholipid.含磷的类脂物质，种类甚多，在活细胞的结构和代谢方面起重要作用。在本发明中使用的磷脂可以是天然的，也可以是合成的，可以是饱和系列、不饱和系列、对称型、非对称型、PEG结合磷脂，结合癌细胞靶向官能团转铁蛋白(transferrin)的磷脂，结合叶酸靶向给药基团的磷脂，结合多糖的磷脂等，其基本分子结构中含有极性部分和非极性部分。分子的非极性部含有两个脂肪酸的长烃链(R1和R2)，所述的Rl和R2的长烃链可以是对称的，非对称的，饱和的，非饱和的，链长在do至C20。极性部分由磷脂酰和终端单元X组成，磷脂可根据极性头的不同来分类。如下式表示。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>Y为H、Na或N仏。例如，X=H，构成最简单的磷脂酸；X为2-三甲胺基乙基(胆碱基)，叫做磷脂酰胆碱(卵磷脂的主要成分)。其他如磷脂酰甘油、磷脂酰油、磷脂酰乙醇胺(脑磷脂主要成分)、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸，多烯磷脂酰胆碱，磷脂酰PEG衍生物，磷脂酰叶酸衍生物，磷脂酰转铁蛋白衍生物，磷脂酰抗体衍生物，磷脂酰多糖衍生物或磷脂酰多肽衍生物等。膜软化剂如胆酸钠、去氧胆酸钠、油酸、棕榈酸、甘草酸二钾或土温80。醇乙醇、乙二醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、丁二醇、二丙烯乙二醇或它们的任意混合物。药物活性成分大部分不同活性的成分适合于该弹性纳米囊泡载体，药物活性成分可以是水溶性的和/或水难溶性的成分。可以是天然萃取物、化学合成成分、生物制剂，而且不受分子量的限制。该药物活性成分选自含有治疗肿瘤疾病成分如紫杉醇及其衍生物、阿霉素、顺铂、博莱霉素、5-氟尿嘧啶、干扰素系列药物中的一种或一种以上的混合物；或选自含有长春花碱酰胺、白介素-2、长春花碱、长春新碱、更生霉素、福莫司汀、异环磷酰胺、洛莫司汀、卡莫司汀、氮烯咪胺或卡铂针药物；或可以选自含有麻醉剂、止痛剂、抗心血管疾病、抗糖尿病药物、抗凝剂、抗高血压、抗低血压、抗眩晕或抗呕吐、抗炎症、哮喘、妇科疾病或节育等成分的药物。图1.本发明实施例34中样品2的透射电镜照片。平均粒径为76nm。图2.本发明实施例13中长春新碱囊泡贴片制剂体外经皮渗透率曲线(鼠皮)。具体实施方式下面结合实施例来进一步说明本
发明内容，但是不局限于此。除非另有说明，比例是指重量比，百分数是指重量百分数，百分比是指占总体积的比例，粒径测定是在室温下进行。实施例1弹性纳米囊泡载体将大豆卵磷脂、维生素E用适量乙醇溶解，混合均匀后，通氮气使乙醇挥发，然后加入胆酸钠和一定量5mM磷酸缓冲液pH6.5，并加入己二醇，室温搅拌1小时，然后水浴超声30分钟，得到弹性纳米囊泡。该弹性纳米囊泡悬浮在上述成分混合形成囊泡后剩余的各种成分的混合溶液中。其中，大豆卵磷脂的含量为5.6%，胆酸钠的含量为1%，维生素E的含量为0.1%，已二醇的含量为15%。用激光粒度光散射仪测定粒径为61nm。实施例2弹性纳米囊泡载体将大豆卵磷脂、苯酚用适量乙醇溶解，混合均匀后，通氮气使乙醇挥发，然后加入甘草酸二钾和一定量5mM磷酸缓冲液pH6.5，并加入异丙醇和乙醇的混合液，其中异丙醇与乙醇的重量比为6:4，室温搅拌l小时，均浆，得到弹性纳米囊泡。该弹性纳米囊泡悬浮在上述成分混合形成囊泡后剩余的各种成分的混合溶液中。其中，大豆卵磷脂的含量为10%，苯酚的含量为0.1%，甘草酸二钾的含量为2%，异丙醇和乙醇的总含量为15%。用激光粒度光散射仪测定粒径为230nm。实施例34将大豆卵磷脂、紫杉醇、维生素E用适量乙醇溶解，混合均匀后，旋转蒸发除乙醇，然后加入胆酸钠和一定量5mM磷酸缓冲液pH6.5，并加入定量的乙醇，室温搅拌l小时，然后水浴超声30分钟，得到弹性纳米囊泡。该弹性纳米囊泡悬浮在上述成分混合形成囊泡后剩余的各种成分的混合溶液中。其中，大豆卵磷脂的含量为5%，胆酸钠含量如表1所示，紫杉醇的含量为1%，维生素E的含量为0.2%，乙醇的含量为10%。用SephadexG-50凝胶分离游离药物与囊泡，使用HPLC检测包封率(检测波长230nm，流速lml/min，流动相是乙氰超纯水=65:35[V:V])，用激光粒度光散射仪测定粒径。样品2的透射电镜照片如图1所示。平均粒径为76nm。表1大豆卵磷脂与胆酸钠含量大豆卵磷脂/胆酸钠(wt/wt)8.5:1.59:1样品1样品2表2样品12的包封率与囊泡粒径样品序号包封率囊泡粒径nm173.3%72267.0%76实施例5将大豆卵磷脂(磷脂酰胆碱>92%)、雌二醇(雌激素，治疗妇科疾病)用适量乙醇溶解，混合均匀后，通氮气使乙醇挥发，然后加入胆酸钠和一定量5mM磷酸缓冲液pH6.5，并加入丁二醇，室温搅拌1小时，均浆3次，得到弹性纳米囊泡。该弹性纳米囊泡悬浮在上述成分混合形成囊泡后剩余的各种成分的混合溶液中。其中，大豆卵磷脂的含量为5%，雌二醇含量为0.2%，胆酸钠的含量为1%，丁二醇的含量为15%。用SephadexG-50凝胶分离游离药物与囊泡，使用HPLC检测包封率，用激光粒度光散射仪测定粒径。包封率83%，囊泡粒径为92nm。实施例68将大豆卵磷脂、甘草次酸用适量乙醇溶解，混合均匀后旋转蒸发除掉乙醇，然后加入膜软化剂(如表5)和一定量5mM磷酸缓冲液pH6.5，并加入乙醇，室温搅拌l小时，然后水浴超声30分钟，得到弹性纳米囊泡。该弹性纳米囊泡悬浮在上述成分混合形成囊泡后剩余的各种成分的混合溶液中。其中，大豆卵磷脂的含量为8%，膜软化剂的含量为1.5%，甘草次酸的含量为0.1%，乙醇的含量为10%。用SephadexG-50凝胶分离游离药物与囊泡，使用HPLC检测包封率，用激光粒度光散射仪测定粒径。表5膜软化剂种类<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>实施例912将氢化大豆卵磷脂、去氧胆酸钠、紫杉醇用适量乙醇溶解，加入乙醇搅拌超声溶解，旋转蒸发除掉乙醇，然后加入乙醇和一定量5mM磷酸缓冲液pH6.5，室温搅拌水化30分钟，水浴超声一定时间，超声温度控制在1218"C。得到弹性纳米囊泡。该弹性纳米囊泡悬浮在上述成分混合形成囊泡后剩余的各种成分的混合溶液中。其中，氢化大豆卵磷脂的含量为8.5%，紫杉醇含量为0.2%，去氧胆酸钠的含量为1.5%，乙醇的含量为10%。所获得悬浮液的显微镜观察样品2:超声20分钟，轻微浑浊；样品3:超声30分钟，半透明悬浊液;样品4:超声60分钟，半透明悬浊液。实施例13将磷脂酰PEG(2000)、去氧胆酸钠、长春新碱用适量乙醇溶解，加入乙醇搅拌超声溶解，旋转蒸发除掉乙醇，然后加入U-丁二醇和一定量5mM磷酸缓冲液pH6.5，超声混合30分钟，用高压乳匀机乳匀3次，用200nm滤膜过滤除菌和杂质，得到弹性纳米囊泡。该弹性纳米囊泡悬浮在上述成分混合形成囊泡后剩余的各种成分的混合溶液中。其中，磷脂酰PEG(2000)的含量为8%，长春新碱含量为0.2%，去氧胆酸钠的含量为1.5%，1，3-丁二醇的含量为10%。将聚乙烯吡咯烷酮-醋酸乙烯共聚物(PVP-VA)、松香树脂，2.5%卵磷脂、15%1,3-丁二醇混合均匀，加上囊泡均匀混合均匀涂在背衬(Backing)上，制得贴片。如图2所示，长春新碱囊泡贴片制剂体外经皮渗透率曲线(鼠皮)，显示该贴片与微针透皮贴片联合使用，进一步提高了经皮渗透性。有针处理皮肤表面用微针透皮贴片处理过，微针个数121根，高度150微米。无针处理没有经过特殊处理的完整的鼠皮。权利要求1.一种弹性纳米囊泡载体，其特征是该弹性纳米囊泡载体能转运药物活性成分；该弹性纳米囊泡载体的组成至少含有磷脂、膜软化剂、醇三种敷料成分及悬浮介质；其中，磷脂的含量为5wt％～15wt％，膜软化剂的含量为0.5wt％～3wt％，醇的含量为5wt％～40wt％，其余是磷脂、膜软化剂、醇和水或磷酸盐缓冲液混合形成弹性纳米囊泡后剩余的各种成分的悬浮介质混合溶液。2.根据权利要求1所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的弹性纳米囊泡载体中含有药物活性成分，其中药物活性成分在载体中的总含量为0.01wt%10wt%。3.根据权利要求1或2所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的弹性纳米囊泡载体中含有抗氧化剂和/或稳定剂，其中抗氧化剂和/或稳定剂在载体中的含量小于3wt96;所述的抗氧化剂是维生素E、抗坏血酸、酯化抗坏血酸或它们的任意混合物；所述的稳定剂是苯酚、苯甲酚或它们的混合物。4.根据权利要求1或2所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的弹性纳米囊泡具有一层或几层磷脂双分子层组成的膜。5.根据权利要求3所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的弹性纳米囊泡具有一层或几层磷脂双分子层组成的膜。6.根据权利要求1、2或5所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的弹性纳米囊泡的直径在30500nm。7.根据权利要求4所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的弹性纳米囊泡的直径在30500nm。8.根据权利要求1或5所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的磷脂的基本分子结构中含有极性部分和非极性部分，分子的非极性部含有两个脂肪酸的长烃链，该长烃链是对称的，非对称的，饱和的，非饱和的，链长在do至C2o;极性部分由磷脂酰和终端单元组成。9.根据权利要求8所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的磷脂是磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰油、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、多烯磷脂酰胆碱、磷脂酰PEG衍生物、磷脂酰叶酸衍生物、磷脂酰转铁蛋白衍生物、磷脂酰抗体衍生物、磷脂酰多糖衍生物或磷脂酰多肽衍生物。10.根据权利要求1所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的膜软化剂是胆酸钠、去氧胆酸钠、油酸、棕榈酸、甘草酸二钾或土温80。11.根据权利要求l所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的醇是乙醇、乙二醇、丙醇、丙二醇、丙三醇、异丙醇、丁二醇、二丙烯乙二醇或它们的任意混合物。12.根据权利要求1或2所述的弹性纳米囊泡载体，其特征是所述的药物活性成分选自含有治疗肿瘤疾病成分的紫杉醇及其衍生物、阿霉素、顺铂、博莱霉素、5-氟尿嘧啶、干扰素系列药物中的一种或一种以上的混合物；或选自含有长春花碱酰胺、白介素-2、长春花碱、长春新碱、更生霉素、福莫司汀、异环磷酰胺、洛莫司汀、卡莫司汀、氮烯咪胺或卡铂针药物；或选自含有麻醉剂、止痛剂、抗心血管疾病、抗糖尿病药物、抗凝剂、抗高血压、抗低血压或抗呕吐、哮喘、妇科疾病或抗生育成分的药物。13.—种根据权利要求112任一项所述的弹性纳米囊泡载体的制备方法，其特征是，该方法包括以下步骤(1).称取磷脂，用乙醇溶解，用旋转蒸发仪或通氮气除去乙醇；(2).将膜软化剂用水或磷酸盐缓冲液溶解；(3).将步骤(2)得到的产物与步骤(1)除去乙醇的磷脂混合，加入醇，搅拌混合，进一步均浆或超声，得到悬浮在悬浮介质中的弹性囊泡，其中，悬浮介质是磷脂、膜软化剂、醇和水溶液或磷酸盐缓冲液混合形成弹性纳米囊泡后剩余的各种成分的混合溶液，磷脂的含量为5wt。/。15wty。，膜软化剂的含量为0.5wt%3wt%，醇含量为5wt%40wt%。14.根据权利要求13所述的方法，其特征是在步骤(1)溶解磷脂时，或在步骤(2)溶解膜软化剂时，加入占弹性纳米囊泡载体0.01wt%10wt%的药物活性成分。15.根据权利要求13或14所述的方法，其特征是在步骤(1)溶解磷脂时加入抗氧化剂和/或稳定剂，其中抗氧化剂和/或稳定剂在载体中的含量小于3wt%。16.—种根据权利要求112任一项所述的弹性纳米囊泡载体的用途，其特征是在弹性纳米囊泡载体中加入药物活性成分，得到含有药物活性成分的弹性纳米囊泡载体制剂与物理辅助促渗透皮的方法联合使用，以提高经皮渗透性；所述的物理辅助促渗透皮的方法包括离子电渗促透方法、电致孔、激光致孔、射频促渗、热促渗、微针致孔以及超声导入法。全文摘要本发明属于医药
技术领域：
，特别涉及一种能转运药物活性成分透过天然渗透屏障或孔隙(如皮肤、黏膜、器官等)的弹性纳米囊泡载体及其制备方法和用途。该囊泡具有脂质双分子层，用于转运一种或一种以上活性成分通过天然屏障。该囊泡至少含有磷脂、膜软化剂、醇三种具有不同物理化学性质的敷料成分。典型的纳米囊泡直径小于200nm。含有药物活性成分的囊泡载体可以应用于注射剂、喷雾剂以及透皮制剂。文档编号A61K47/24GK101209348SQ20061016976公开日2008年7月2日申请日期2006年12月28日优先权日2006年12月28日发明者百徐,高云华申请人:中国科学院理化技术研究所