专利名称：：海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、保健食品、食品或化妆品的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种海洋生物活性寡肽的新用途，具体来说是从海洋鱼类中提取的海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或化妆品中的用途。属医药、食品保健和化妆品领域。
背景技术：
：现代社会的发展，生存环境的恶化以及社会压力的加大使现代人的健康受到严重的威胁，自由基引起机体损伤变性，是引起机体衰老、肿瘤、心血管疾病、眼病、糖尿病等一系列疾病的根本原因。已经引起人们更多的重视，抗氧化剂的消费量越来越大。但是生产量最大的化学抗氧化剂的毒、副作用正逐歩使其受到限制，因此人们逐步把目光转向天然抗氧化剂的研究。生物活性肽是指具有特殊生理功能的肽类物质。1902年伦敦大学医学院的Bayliss和Startling从动物的胃肠中发现了一种能引起胰腺分泌活动的物质，称为分泌素，这是人类第一次发现生物活性肽类物质。此后，伴随着生物化学和分子生物学技术的飞速发展，肽的研究取得了惊人的进展，已成为目前研究的新热点。肽与蛋白质都是氨基酸以酰胺键互相连接在一起形成的化合物，不同的是肽的氨基酸聚合度小，蛋白质的聚合度大。在结构上，肽处于氨基酸和蛋白质的中间位置，但它具有氨基酸与蛋白质所不能替代的功能。长期以来，人们仅仅把食物蛋白质当作一种营养丰富的成分，认为蛋白质只有水解成游离氨基酸后才能被吸收。但是近年来的研究发现，蛋白质经消化道酶促水解后，主要以10个或10个以下氨基酸组成的寡肽形式被吸收。寡肽比单个氨基酸的吸收更有效，并能直接参与蛋白质的合成，因此提高了机体对蛋白质的利用率。在氨基酸运输系统功能出现障碍的情况下，摄入寡肽却能获得很好的吸收效果。生物体内已发现几百种肽，是机体完成各种复杂的生理活性必不可少的参与者。自然界中存在着大量的生物活性肽，它们在生物活动中起着非常重要的作用，分别具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、保护心血管、免疫调节、抗衰老等作用。应用这些活性肽可以作为药物、疫苗以及保健品等。大量研究证明，当人体内缺乏一些调节生理功能的肽时，会导致人体机能的改变。因此从营养学的角度出发，在食物结构调整以满足人体必需氨基酸需要的同时，适当补充某些生物活性肽对增强防病、抗病能力以及延缓衰老都具有深远意义。海洋是地球上资源最丰富的领域，由于海洋生物物种的生态环境比陆生生物复杂得多，其赋予海洋生物的某些特异的化学结构是陆地生物体内尚未发现的，这使得海洋成为创新药物与功能性保健食品的资源宝库。自20世纪70年代以来，人们已经从海洋生物中分离出数十万种化学结构新颖及特异的高活性、高药效的生物活性物质，包括肽类、蛋白质类、多糖类、生物碱类、萜类、大环聚酯类等。海洋生物活性物质中肽类是数量最庞大的一类化合物，达数万种之多，浙江海氏生物科技有限公司生产的海洋胶原肽(企业标准号为Q/HSBSl-2006，浙江舟山市技术监督局备案号为Q330卯0.X20.1121—2006，卫生许可证是浙卫食证字2006第33090310003号)就是其中之一。海洋胶原肽是以来源广泛的海洋鱼类(大马哈鱼、安康鱼、三文鱼、鲑鱼、罗非鱼等)的鱼皮为原料，通过水解制造出的分子量在1303000的寡肽混合物，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点，目前只作为补充蛋白质的食品营养添加剂。迄今为止，还没有关于海洋胶原肽在抗氧化药品、抗氧化保健食品、抗氧化食品及抗氧化化妆品中应用的任何报导。虽然，中国专利申请号200510000032.2公开的一种"海洋生物抗氧化活性肽及其制备方法"，是从海洋贝类内脏团中提取的海洋生物抗氧化活性多肽，但是，来源与结构均与海洋胶原肽不同。中国专利申请号03129075.2公开了"一种含海洋活性物质的生物制剂及其用途"，该制剂主要原料成分为藻胆蛋白和藻多糖，还包含人参提取物、维生素E及药用辅料，亦与海洋胶原肽不同。
发明内容本发明是为了解决现有技术所存在的化学抗氧化剂毒、副作用大的问题，提供一种易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好且成本低的低分子量海洋胶原肽在制备抗氧化药物、制备抗氧化保健食品、食品或化妆品中的用途，为通过饮食提高机体抗氧化能力提供一种新途径。本发明的技术解决方案是一种海洋胶原肽在制备抗氧化药物、制备抗氧化保健食品、食品或制备抗氧化化妆品中的用途。所述药物或保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂、口服液。所述食品为淀粉制品、乳或乳制品、豆制品、烘焙制品。所述化妆品为乳液、膏霜、油剂、水剂、凝胶、气雾剂或面膜。本发明是发现了现有物质一海洋胶原肽具有抗氧化的功能，发明了海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或抗氧化化妆品的用途，其产品具有易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。动物实验发现，给予大鼠海洋胶原肽可显著增强抗氧化酶的活力，降低过氧化脂质物的含量，具有抗氧化的功效。临床实验也证实，口服海洋胶原肽可提高人体抗氧化酶活性以及降低脂质过氧化物的产生而具有抗氧化功能，可祛除面部黄褐斑等。具体实施例方式下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。实施例以浙江海氏生物科技有限公司生产的海洋胶原肽(企业标准号为Q/HSBS1-2006,浙江舟山市技术监督局备案号为Q330900.X20.1121—2006)为原料，可在制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或抗氧化化妆品中应用。海洋胶原肽与其他药用或食用辅料制成的抗氧化药物和抗氧化保健食品，可为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂、口服液等；普通抗氧化食品是将海洋胶原肽添加在淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品中等。抗氧化化妆品是将海洋胶原肽添加在现有的化妆品中，制成乳液、膏霜、油剂、水剂、凝胶、气雾剂或面膜等。本发明实施例的实验研究如下1.对实验大鼠的抗氧化作用清洁级雄性SD大鼠72只，12月龄，由北京大学医学部实验动物中心提供，批准号为SCXK11-00-0004，清洁级动物房饲养，饲养环境温度25'C，湿度60。/。RH。按体重随机分为6组，分别为13组海洋胶原肽低、中、高剂量组，4组阳性对照维生素E组，5组模型对照组，6组空白对照组。15组大鼠每日腹腔注射125mg/kg的D—半乳糖，连续3个月，造成过氧化损伤模型;6组腹腔注射同体积生理盐水。实验期间，13组大鼠每日经口给予不同浓度的海洋胶原肽，剂量分别为0.225g/kg、0.450g/kg和1.35g/kg，分别相当于人每天用量的5、10和30倍；4组给予阳性对照物维生素E200、mg/kg;5组和6组给予同体积蒸馏水。灌胃量按0.1ml/10g体重计，连续灌胃3个月。实验结束时处死动物，按照卫生部《保健食品功能学评价程序和检验方法》进行血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量、血中超氧化物歧化酶(SOD)活力以及过氧化氢酶(CAT)活力的检测。与模型对照组相比，用本发明制剂灌胃使实验组大鼠抗氧化酶SOD和CAT活力显著增强(p<0.05)，过氧化脂质降解产物MDA含量显著降低(p<0.05)，见表1。结果显示，本发明产品可通过提高抗氧化酶活性、降低脂质过氧化作用而起到抗氧化功效。表l本发明制剂对大鼠抗氧化功能的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>*表示与模型对照组比较差异有显著性，P<0.052.海洋胶原肽抗氧化功能临床观察实验2.1对象和方法(1)受试物海洋胶原肽胶囊，由浙江海氏生物科技有限公司提供。(2)受试者纳入标准按自愿原则选择45-65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿受试保证配合的人群。(3)排除者标准①妊娠或哺乳期妇女，对本保健食品过敏者。②合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病患者。③短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。④不符合纳入标准，未按规定食用受试物，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。(4)分组及对照形式100例受试者按MDA、SOD、GSH-PX水平随机分为试食组和对照组，采用自身及组间两种对照形式。受试期间保持平日的生活和饮食习惯。(5)服用剂量及时间试食组服用海洋胶原肽，每次3粒，每日3次。服用90天。对照组为空白对照，试食期间两组原生活、饮食习惯不变。(6)仪器与试剂MEK-6138K型血球计数仪，MIDIRON尿十项分析仪，RA1000全自动生化分析仪，AMSFT-2型分光光度计，生化试剂盒全部由中生公司提供。2.2观察指标实验前后各检查一次。(1)功效性指标①症状观察详细询问病史，观察主要临床症状疲劳感、烦躁、健忘、睡眠、腰酸膝痛等。按症状轻重(重症3分、中度2分、轻症l分)在试食前后统计积分值，并就其主要症状改善(每一症状改善2分显效，改善l分为有效)，计算改善率。②抗氧化指标检测I.丙二醛含量观察试食前后MDA的变化值及MDA下降百分率。II.超氧化物歧化酶观察试食前后SOD的变化值及SOD升高百分率。III.谷胱苷肽过氧化物酶观察试食前后GSH-PX的变化值及GSH-PX升高百分率。(2)安全性指标①一般状况包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压等。②血液及尿、便常规检査红细胞计数，血红蛋白，白细胞计数，尿十项检测、便常规检测。③生化指标测定血清白蛋白ALB，总蛋白TP，心肝肾功能(谷草转氨酶AST，谷丙转氨酶ALT，尿素UREA，肌酑CRE)，血糖GLU、血脂(总胆固醇TC，甘油三酯TG)。腹部B超，心电图，X线胸部透视，均试食前检查一次。⑤不良反应观察2.3数据处理和结果判定(1)数据处理用统计软件STATE6.0计算分析数据。凡自身对照资料采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐性后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐性要求，改用t'检验或秩和检验；但变异系数太大如(CV>50%)的资料应用秩和检验。功效指标用卡方检验。(2)结果判定有效丙二醛含量，超氧化物歧化酶，谷胱苷肽过氧化物酶三项实验中任一项实验结果阳性，即试验前后自身比较和试验后组间比较有统计学意义。可判定该受试样品具有抗氧化功能作用。无效丙二醛含量，超氧化物歧化酶，谷胱苷肽过氧化物酶三项实验中无一项结果阳性。2.4实验结果(1)一般状况共观察受试者100例，观察组男性ll例，女性39例，年龄最小45岁，最大65岁，平均56.84士5.55岁。对照组男性8例，女性42例，年龄最小47岁，最大65岁，平均55.14士5.00岁。由表2可见，两组试食前各项指标无明显差异，具有可比性。表2观察前一般情况比较(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(2)丙二醛含量变化由表3可见，两组试食前各项指标无明显差异，按要求试食组服用海洋胶原肽90天，试食组过氧化脂质降解产物丙二醛降低2.59士3.67nmol/ml，下降百分率27.38%，自身对照与组间对照均有显著性差异。对照组丙二醛降低0.34士3.27nmol/ml，下降百分率3.58%，试食前后变化无显著性。表3丙二醛含量变化单位(nmol/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>自身前后比较"P<O.Ol，组间比较##P<0.01(3)超氧化物歧化酶变化由表4可见，两组试食前各项指标无明显差异，按要求试食组服用海洋胶原肽90天，试食组超氧化物歧化酶升高2.62土18.48U/ml，升高百分率3.34%，自身对照与组间对照无显著性差异。对照组超氧化物歧化酶升高0.26±8.77U/ml，升高百分率0.53%，试食前后变化无显著性。表4超氧化物歧化酶变化单位(U/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>~~(4)谷胱苷肽过氧化物酶变化:由表5可见，两组试食前各项指标无明显差异，按要求试食组服用海洋胶原肽90天，试食组谷胱苷肽过氧化物酶升高10.93±19.74U/ml，升高百分率13.83%，自身对照及组间对照有显著性差异。对照组谷胱苷肽过氧化物酶升高0.56±13.74U/ml，丙二醛降低0.34±3.27nmol/ml，升高百分率0々9%，试食前后变化无显著性。表5谷胱苷肽过氧化物酶变化单位(U/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>16.5813.97自身前后比较**P〈0.01，组间比较##P<0.01(5)症状改善情况以及症状积分变化由表6可见，海洋胶原肽对受试者的疲劳感、烦躁、健忘、睡眠、腰酸膝软等症状有改善作用。由表7可见，受试者试食中期、试食后期比试食前症状积分显著降低(PO.Ol)。表6主要症状改善情况主<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(8)腹部B超，心电图，X线胸部透视，基本在正常范围。试食前后血压变化不明显。2.5结论志愿者服用海洋胶原肽90天后，试食组过氧化脂质降解产物丙二醛明显减少，自身对照与组间对照均有显著性差异；超氧化物歧化酶有所升高，但自身对照与组间对照无显著性差异；谷胱苷肽过氧化物酶明显升高，自身对照及组间对照有显著性差异。对照组试食前后三项指标变化均不明显。说明海洋胶原肽可通过提高人体抗氧化酶活性以及降低脂质过氧化物的产生而起到抗氧化功能。此外，海洋胶原肽对受试者的疲劳感、烦躁、健忘、睡眠、腰酸膝软等症状有改善作用。海洋胶原肽试食前后，血常规、尿常规、便常规及血生化指标无明显变化，且未见过敏及其它不良反应。说明本品对受试者身体健康无不良影响。3.海洋胶原肽祛黄斑功能临床观察实验3.1对象和方法(1)受试物海洋胶原肽胶囊，由浙江海氏生物科技有限公司提供。(2)受试对象按自愿原则选择18-65岁，有黄褐斑，志愿受试保证配合的人群。①诊断标准面部淡褐色至深褐色，界限清楚的斑片，通常对称性分布，无炎症表现及鳞屑，无痛痒等自觉症状。有一定的季节性，夏重冬轻。②纳入者标准凡生有黄褐斑的自愿受试者，经体检合格均可进行试食观察。③排除者标准I.年龄在18岁以下或65岁以上者，妊娠或哺乳期妇女，过敏体质及对本保健品过敏者。II.合并有心、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病及内分泌疾病，精神病患者。ni.短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者。IV.未按规定食用受试物，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。(3)对照形式IOO例黄褐斑受试者，随机分为试食组和空白对照组，采用自身及组间两种对照形式。受试期间保持平日的生活和饮食习惯。(4)服用剂量及时间试食组服用海洋胶原肽，每次3粒，每日3次。受试者在实验期间停止服用有关祛黄褐斑的药物或其他保健品及化妆品。(5)仪器与试剂MEK-6138K型血球计数仪，MIDIRON尿十项分析仪，RA1000全自动生化分析仪，中国科学院地理研究所设计研制、测绘出版社1992年出版《实用标准色卡》(第一版)，生化试剂盒全部由中生公司提供。3.2观察指标实验前后各检査一次。(1)安全性指标①血液及尿、便常规检查-红细胞计数，血红蛋白，白细胞计数，尿十项检测、便常规检测。②生化指标测定血清白蛋白ALB，总蛋白TP，心肝肾功能(谷草转氨酶AST，谷丙转氨酶ALT，尿素UREA，肌酐CRE)，血糖GLU、血脂(总胆固醇TC，甘油三酯TG)。◎腹部B超，心电图，X线胸部透视。(试食前检査一次)过敏及不良反应观察(2)功效性指标-①一般状况精神、睡眠、饮食、大小便、血压等。②症状观察详细询问病史，了解受试者饮食情况，观察主要临床症状疲劳感、烦躁、12健忘、睡眠、腰酸膝痛等。按症状轻重(重症3分、中度2分、轻症l分)在试食前后统计积分值，并就其主要症状改善(每一症状改善2分显效，改善l分为有效)，计算改善率。③头面部黄褐斑检测I.面积大小改变用标尺测量受试前后同一黄褐斑的长径和宽径，计算面积(cm2)。II.颜色深浅变化按照中国科学院地理研究所设计研制，测绘出版社1992年出版的《实用标准色卡》(第一版)中的棕色(Y+M+BK即黄+品红十黑的叠色)色卡为黄褐斑颜色深浅的判断标准I度(15、20、5)，II度(30、40、10)，III度(40、60、15)3.3数据处理和结果判定(1)数据处理用统计软件STATE6.0计算分析数据。凡自身对照资料采用配对t检验，两组均数比较采用成组t检验，后者需进行方差齐性检验，对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态方差齐性后，用转换的数据进行t检验；若转换数据仍不能满足正态方差齐性要求，改用t，检验或秩和检验；但变异系数太大如(CV>50%)的资料应用秩和检验。功效指标用卡方检验。(2)祛斑功能判定有效黄褐斑颜色下降I度，或面积縮小》10%，不产生新的黄褐斑。试食组自身前后对照与组间对照均有显著性差异。无效黄褐斑面积縮小<10%，颜色无明显变化。3.4实验结果(1)一般状况共观察受试者100例，精神、睡眠、饮食、大小便、血压均属正常。试食组均为女性，年龄最小28岁，最大65岁，平均45.22±10.08岁，平均病程4.62±3.01年。对照组均为女性，年龄最小21岁，最大64岁，平均45.40士12.17岁，平均病程4.66士3.50年。(2)黄褐斑颜色深浅变化由表9可见，试食组服用海洋胶原肽后，黄褐斑颜色变浅，色卡平均降低0.35±0.38度(PO.01)，对照组黄褐斑颜色仅略微变浅，色卡平均降低0.04±0.17度。试食组自身前后对照与组间对照均有显著性差异(PO.Ol)。表9黄褐斑颜色深浅变化<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>自身前后比较^P〈0.01，组间比较##P<0.01(3)黄褐斑面积大小变化由表10可见，试食组服用海洋胶原肽后，黄褐斑面积平均縮小4.75士8.01(PO.Ol)，对照组黄褐斑面积平均縮小0.28士1.46cm2。试食组自身前后对照与组间对照均有显著性差异(PO.Ol)。表10黄褐斑面积大小变化<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>自身前后比较"P〈0.01，组间比较##P<0.01(4)功效评定由表11可见，试食组服用海洋胶原肽后，黄褐斑治疗，有效27例，总有效率54.00%，对照组黄褐斑治疗，有效1例，总有效率2.00%。试食组与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。表11功效判定<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>组间比较##P<0.01(5)症状改善以及症状积分变化情况由表12可见，海洋胶原肽对受试者的疲劳感、烦躁、睡眠等症状有改善作用。由表13可见，受试者试食中期、试食后期比试食前症状积分显著降低(P<0.01)，对照组也显著降低(P<0.05)。表12主要症状改善情况<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>括号内为对照组表13症状积分变化<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>自身前后比较承P〈0.05，**P<0.01(7)安全性指标检测由表14可见，海洋胶原肽试食前后，血常规、尿常规、便常规及血生化指标无明显变化，提示本发明产品对受试者身体健康无不良影响。表14安全性指标检测<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>9.538.626.12RBC(X1012/L)504.33±0.294.34±0.314.34±0.174.34±0.18WBC(X109/L)505.59±0.935.56±0.845.79±1.235.80±U8尿常规50正常正常正常正常便常规50正常正常正常正常(8)腹部B超，心电图，X线胸部透视，基本在正常范围。3.5结论100例黄褐斑受试者随机分为试食组和对照组，试食组黄褐斑面积縮小，颜色变浅，色卡平均度降低，黄斑治疗总有效率等指标，试食组自身前后对照与组间对照均有显著性差异。说明海洋胶原肽有祛黄褐斑的作用。此外，海洋胶原肽对黄褐斑受试者的疲劳感、烦躁、睡眠等症状有改善作用。海洋胶原肽试食前后，血常规、尿常规、便常规及血生化指标基本在正常范围，且未见过敏及其它不良反应，说明本品对受试者身体健康无不良影响。权利要求1.一种海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或抗氧化化妆品的用途。2.根据权利要求1所述的海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或抗氧化化妆品的用途，其特征在于所述药物、保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。3.根据权利要求1所述的海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或抗氧化化妆品的用途，其特征在于所述食品为淀粉制品、乳或乳制品、豆制品或烘焙制品。4.根据权利要求1所述的海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或抗氧化化妆品的用途，其特征在于所述化妆品为乳液、膏霜、油剂、水剂、凝胶、气雾剂或面膜。全文摘要本发明公开一种海洋胶原肽作为制备抗氧化药物、抗氧化保健食品、抗氧化食品或抗氧化化妆品的用途。其产品具有易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。动物实验发现，给予大鼠海洋胶原肽可显著增强抗氧化酶的活力，降低过氧化脂质物的含量，具有抗氧化的功效。临床实验也证实，口服海洋胶原肽可提高人体抗氧化酶活性以及降低脂质过氧化物的产生而具有抗氧化功能，可祛除面部黄褐斑等。文档编号A61K38/39GK101168051SQ20071015764公开日2008年4月30日申请日期2007年10月24日优先权日2007年10月24日发明者勇李,杨睿悦,蔡木易,裴新荣申请人:珍奥集团股份有限公司