包含vx-950的剂型及其给药方案的制作方法

专利名称：包含vx-950的剂型及其给药方案的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗丙型肝炎病毒感染的方法。
背景技术：
由丙型肝炎病毒(“HCV”)引起的感染是非常急迫的人类医学难题。HCV公 认是大部分非甲型、非乙型肝炎的致病因子，估计全球人类血清阳性率为3% (参见例 如 A.Alberti 等，“Natural History ofHepatitis C,” .T. Hepatology, 31 (附录 1)， 17-24(1999))。仅在美国就可能有近四百万的个体受感染(参见例如M. J.Alter等， “TheEpidemio1ogy of Viral Hepatitis in the United States, Gastroenterol. Clin. North Am. ,23,437-455(1994) ；M. J. Alter,"Hepatitis C Viruslnfection in the United States, ” .T. Hepatology, 31 (附录 1)，88-91 (1999))。在感染了 HCV的人群中，有20-25 %可在急性感染后能清除病毒，但有75-80 % 将发展成慢性丙型肝炎感染。(参见例如前言，Frontiers in Viral Hepatitis,编辑RF Schinazi、J-P Sommadossi 和 CM Rice，第 xi 页，Elsevier (2003))。通常这会导致肝炎 复发和日渐恶化，而往往导致更为严重的疾病状态(例如肝硬化和肝细胞癌)(参见例如 M. C. Kew, "Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma，，，FEMS MicrobioloRY Reviews, 14,211-220(1994) ；I.Saito "Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development ofHepatocellular Carcinoma(丙型肝炎病毒感染与肝细胞癌的发展相 关)，” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87,6547-6549 (1990))。不幸的是，没有广泛有效使慢性 HCV的病程减弱的疗法。HCV基因组编码3010-3033个氨基酸的多蛋白(参见例如Q. L. Choo等，‘‘Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus (丙型肝炎的遗传组织及 多样性),” Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88,2451-2455 (1991) ；N. Kato 等，"Molecular Cloning of the HumanHepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-BH印atitis (患非甲型、非乙型肝炎的日本患者的人丙型肝炎基因组的分子克 降),”Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87,9524-9528 (1990) ；A. Takamizawa 等，‘‘Structure and Organization of the Hepatitis C VirusGenome Isolated From Human Carriers (从人 携带者分离的丙型肝炎病毒的结构与组织)，M-Virol.，65，1105-1113(1991))。据推测， HCV的非结构(NS)蛋白为病毒的复制提供了必需的催化结构(catalyticmachinery^NS蛋 白通过对多蛋白的蛋白酶切割衍生而来(参见例如R. Bartenschlager等，‘‘Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis CVirus Encodes a Serine—Type Proteinase Required for Cleavage at theNS3/4 and NS4/5 Junctions (丙型病毒肝炎的非结构蛋白3编码在 NS3/4和NS4/5接点处切割所需的丝氨酸型蛋白酶)，” .T.Virol. ,67,3835-3844(1993)； A.Grakoui 等，"Characterization of the Hepatitis CVirus-Encoded SerineProteinase -Determination ofProteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites(X^t 丙型肝炎病毒编码的丝氨酸蛋白酶的表征确定蛋白酶依赖性多蛋白切割位点)，”1 Virol. ,67,2832-2843(1993) ；A.Grakoui 等，"Expression andldentification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products (丙型肝炎多蛋白切割产物的表 达和鉴定)，” T. Virol.，67，1385-1395(1993) ；L. Tomei 等，“NS3 is a serine protease required forprocessing of hepatitis C virus polyprotein(NS3 为力口工丙型月干炎病毒 多蛋白所需的丝氨酸蛋白酶)，，，.!■ Virol.，67，4017-4026 (1993))。HCV NS蛋白3(NS3)具有丝氨酸蛋白酶活性，而这种活性有助于加工大部 分病毒酶，因此该蛋白被认为是对病毒的复制和感染性极其重要。已知黄热病病毒 的NS3蛋白酶的突变使病毒的感染性降低(参见例如Chambers，T.J.等，“Evidence that the N—terminalDomain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is aSerine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the ViralPolyprotein(来自黄热病病毒的非结构蛋白NS3的N末端结构域是负责位点 特异性切割病毒多蛋白的丝氨酸蛋白酶的证据)”，Proc. Natl. Acad. Sci. USA,87, 8898-8902(1990))。业已显示，NS3的前181个氨基酸(病毒多蛋白的第1027-1207个残 基)含有NS3的丝氨酸蛋白酶结构域，其加工HCV多蛋白的所有四个下游位点(参见例如 C.Lin 等,"Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics (丙型肝炎病毒NS3丝氨酸蛋白酶反向切割需要和加工动力 学)”，J. Virol.，68，8147-8157 (1994))。HCV NS3丝氨酸蛋白酶及其相关的辅因子NS4A，有助于加工所有的病毒酶，因此其 被认为对病毒的复制极其重要。这一加工过程表现出与人类免疫缺陷病毒天冬氨酰蛋白酶 进行的加工相类似，后者也与病毒酶的加工相关。抑制病毒蛋白加工的HIV蛋白酶抑制剂 是对人有效的抗病毒药物，提示破坏病毒生活周期的这一阶段会导致产生治疗上有效的药 物。因此对于药物开发发现而言，这是引人关注的靶标。目前还没有任何令人满意的抗HCV的药物或疗法。直至最近，唯一用于HCV疾 病的已确定的疗法是干扰素治疗。第一个获批准的针对HCV感染的疗法是标准的(非聚 乙二醇化的)干扰素a治疗。但是，干扰素有严重的副作用(参见例如，M.A.Wlaker等， "HepatitisC Virus :An Overview of Current Approaches and Progress (丙型月干炎病毒 当前方法及进展的概述)，，DDT，4，518-29 (1999) ；D. Moradpour 等，"Current and Evolving Therapies for Hepatitis C(丙肝疗法的现况与进展)，”Eur. J. Gastroenterol. Hepatol.，11，1199-1202(1999) ；H.L.A. Janssen 等."Suicide Associated with Alfa-InterferonTherapy for Chronic Viral H印atitis (用于慢性肝炎病毒的与 a 干扰素相关的自发失活性治疗)，”丄Hepatol.，21，241-243 (1994) ；P. F. Renault等， "Side Effects of Alpha Interferon ( a 干扰素的畐lj 作用),，，Seminars in Liver Disease, 9, 273-277, (1989))，而且干扰素a单一疗法仅在小部分(约25 % )病例中 引起长期的缓解(参见例如 O.Weiland，“Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection (慢性丙肝病毒感染中的干扰素疗法)”，FEMS Microbiol. Rev.，14， 279-288(1994))。在治疗方案中加入利巴韦林(ribavirin)略微地提高应答率。近来采用 与利巴韦林联合的聚乙二醇化形式的干扰素(PEG-intrqn 和PEGASYS :)也仅能导致缓解率些许提高并且仅部分减轻了副作用。根据预后因素(例如HCV的基因型和对治 疗的初始应答的表现)，当前的护理标准(standard of care)为持续24_48周的治疗方案。 此外，有效的抗HCV疫苗的前景仍不确定。因此，存在对抗HCV疗法和用于抗HCV化合物的合适给药方案的需要。HCV及其它疾病和病症与肝损伤有关。还存在对用于治疗肝损伤的疗法和合适的 给药方案的需要。发明概述本发明提供了针对丙型肝炎病毒感染的疗法。本发明进而提供了针对丙型肝炎病 毒感染的临床后遗症的预防。本发明还提供了针对肝损伤和肝炎的疗法。附图简述

图1A和图1B描述了根据剂量水平作出的平均浓度_时间的曲线图(实施例3)。图2A-图2D描述了推导出的药物动力学参数。竖框中的线表示中值，而竖框表示 数据的中间值的界限(实施例3)。图3描述了在持续14天的研究中，HCV RNA在血浆中的浓度(IU/mL)(实施例5)。图4描述了在持续14天的研究中，HCV RNA相对于基线的浓度(IU/mL)的变化 (实施例5)。图5描述了在持续14天的研究中，750mg q8h剂量组的各别的受试者中HCV RNA 浓度(IU/mL)相对于基线的变化(实施例5)。图6描述了所有剂量组中新蝶呤、ALT(丙氨酸转氨酶)和HCVRNA的平均值 +/-SEM。以下显示了图6中全部3个剂量组和安慰剂中所用的符号ALT平均水平士SEM 与基线相比的变化情况(含空心符号的最上面4条线)、新蝶呤的平均血浆水平士SEM与 基线相比的变化情况(含空心符号的中间4条线)以及HCV RNA的平均血浆负载量士SEM 与基线相比的变化情况(下面的4条线，实心符号)。用VX-950治疗患者14天。*450mg q8h组在第12天中ALT平均水平的瞬间增大是人为造成的(10个样本中丢失了 5个，中值 为38U/1，范围为25-125U/1)(实施例5)。图7描述了所有组中新蝶呤的平均值+/-SEM。所有的3个剂量组和安慰剂在治疗 前、第7天和第14天时新蝶呤的平均血浆水平士SEM。应注意到750mg q8h剂量组中新蝶 呤的平均值减少最大，它在治疗前值最大而在第14天平均值最低。与基线和安慰剂相比， 750mg q8h剂量组在第14天新蝶呤显著减少(*不成对的双-尾检验，**曼-惠特尼检验 (Mann Whitney test))。Y = 7. 7nmol/l 处的水平虚线表示 ULN(实施例 5)。图8、9和10描述了 HCV NS3/4A蛋白酶对TRIF(TLR3衔接蛋白)的体外切割被 VX-950 抑制。图8(含有诱导IFN-0 TRIF或TICAM-1的衔接子toll-ILl受体域)描述了 TRIF 的简图说明，显示了 TRIF的各个蛋白结合域。HCVNS3蛋白酶在Cys 372处切割TRIF， 形成两个片段A C340 和 AN372(修改自 Li 等，2005，Proc.Nat，1. Acad. Sci. USA, 102, 2992-2997)。图9描述了 HCV NS3蛋白酶对TRIF切割的动力学性质。用35S甲硫氨酸标记偶 联的TRIF蛋白的体外转录/翻译产物(作为底物)，与6 y M的tNS3蛋白酶温育不同时间点(范围在0-240分针)，随后进行SDS-PAGE。用感光成像仪将胶曝光以定量测定切割产 物。作为时间的函数的AN372切割产物的定量在附图中示出。图10描述了 NS3蛋白酶依赖性的TRIF切割以及VX-950对TRIF切割的抑制作 用。在存在(圆形)或不存在(正方形)10yM的VX-950下，将用35S甲硫氨酸标记偶联 的TRIF蛋白的体外转录/翻译产物(作为底物)与在0-4PM范围浓度不断增加的tNS3蛋 白酶温育，随后进行SDS-PAGE并用感光成像仪曝光。AN372切割产物的定量在图中示出。图11描述了体外VX-950抗性突变体的表型特征。在体外的酶反应测定(Ki)或 两天复制子测定(IC5(1)中，与野生型蛋白酶相比，A156V/T突变赋予了对VX-950提高的抗 性。突变体相对于野生型酶的Kcat/Km之比在表中示出(修改自Li等，J. Biol. Chem.，280， 36784-36791，2005)。图12显示了 A156V/T突变体相对于野生型(WT)NS3蛋白酶对HCV 4A/B底物的切 割情况将与SEAP蛋白融合(在两者之间为4A/B连接物)的用35S甲硫氨酸标记偶联的 失活HCV突变蛋白酶的体外转录/翻译产物(作为底物)与范围在0. 008 u M-6 u M的不同 量的野生型(WT)(正方形)tNS3蛋白酶或A156V/T (三角形或圆形)tNS3蛋白酶温育，随后 进行SDS-PAGE并用感光成像仪曝光。AN372切割产物的定量在附图中示出。图13描述了 A156V/T突变体相对于野生型(WT)NS3蛋白酶，对TRIF底物的切割 情况。将用35S甲硫氨酸标记偶联的TRIF的体外转录/翻译产物(作为底物)与范围在 0. 008 u M-6 u M的不同量的野生型(WT)(正方形)tNS3蛋白酶或A156V/T (三角形和圆形) tNS3蛋白酶温育，随后进行SDS-PAGE并用感光成像仪曝光。AN372切割产物的定量在附 图中示出。图14描述了在基线、第7天和第14天时，HCV RNA、新蝶呤和ALT的平均值(实施 例5)。图15显示了在用仙台病毒刺激的Huh7细胞中，HCV蛋白酶对IFN-0启动子活性 的抑制情况。用表达受IFN-0启动子控制的荧光素酶基因质粒与野生型(WT)或失活突变 型(MT)的蛋白酶质粒共转染Huh7细胞，随后用仙台病毒(SeV)刺激。与未用仙台病毒诱 导的对照相比荧光素酶基因的激活倍数显示于附图中。图16显示了用VX-950处理能克服HCV蛋白酶对仙台病毒刺激的IFN-0启动子 活性的抑制作用。用表达受IFN-0启动子控制的荧光素酶基因质粒与野生型(WT)或失活 突变型(MT)的蛋白酶质粒共转染Huh7细胞。用DMS0 (对照)或10 y M VX-950处理这些 细胞。用仙台病毒(SeV)刺激细胞，并在感染后16小时检测荧光素酶活性。与未用仙台病 毒诱导的对照相比荧光素酶基因的激活倍数显示于附图中。图17显示了 VX-950治疗导致之前对HCV治疗无应答的患者(图17A)中和初次 治疗患者(图17B)中的HCV RNA减少。附图中显示了每个治疗方案中患者的HCV RNA中 值水平。利用RocheCOBAS TaqMan HCV/HPS测定法检测血浆中HCV RNA的浓度。图18描述了 VX-950-抗性突变体对本文所述的各种治疗方案的表型特征。图19显示了在图90的野生型和抗性突变体存在下对治疗持续时间的评估。图20显示了在高效的Peg-IFN/RBV下评估的治疗持续时间的图。图21显示了在低效的Peg-IFN/RBV下评估的治疗持续时间的图。图22显示了治疗8-12周后病毒的复发情况。
图23显示了评估的SVR的治疗持续时间。图24显示了研究的时间线，其包括每天给予安慰剂和Peg-IFN;VX-950 ；或 VX-950和Peg-IFN持续14天；接着是评估Peg-IFN和RBV的给药时间的为期48周的随访。图25显示了在用VX-950治疗的14天给药期中，受试者的快速抗病毒应答情况。 通常在给药方案完成时，这些经治疗的受试者中HCV RNA水平降低了至少21og1(l，并在某些 情况下降低了至少41og1Q。图26显示了在用HCV/Peg-IFN-2 a治疗的14天给药期中，受试者的各别HCV RNA 的水平。通常在给药方案完成时，这些经治疗的受试者中HCV RNA水平降低了至少31og1(l， 并在某些情况下降低了至少41og1Q。发明详述本发明涉及用于给予VX-950的具体剂量和给药方案。VX_950(也称作替拉瑞韦 (Telaprevir))是一种竞争性可逆拟肽类NS3/4A蛋白酶抑制剂，其稳态结合常数(ki*)为 7nM。参见例如 W0 02/018369。 对于本发明的目的，本文涉及的化合物“VX-950”包含其可药用盐、前药及其溶剂 合物。本文所用短语，VX-950的“一种或多种可药用盐”是指对治疗HCV感染而言安全 且有效的VX-950的盐。可药用盐包括存在于VX-950中的酸性基团或碱性基团的盐。可药 用的酸加成盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸 盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、醋酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、泛酸盐、酒石酸 氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、 蔗糖盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸 盐。VX-950还可与各种氨基酸形成可药用盐，而且这些氨基酸盐的应用也在本发明的范围 之内。合适的碱式盐包括但不限于铝盐、钙盐、锂盐、镁盐、钾盐、钠盐、锌盐和二乙醇胺盐。 关于可药用盐的综述参见Berge等，J. Pharm. Sci.，66，1_19 (1977)，其内容在此引作参考。本文所用短语，VX-950的“可药用前药”是指在治疗HCV感染中表现出其药理学 效应之前，可在生理条件下或通过溶剂分解作用转换为VX-950或VX-950的可药用盐的化 合物。典型地，配制前药的目的是提高化学稳定性、提高患者的接受度和顺应性、提高生 物利用度、延长作用的持续时间、提高器官选择性、改善配制性(例如提高水溶性)或减少 副作用(例如毒性)。使用本领域已知的方法可易于从VX-950制备其可药用的前药，例如 参见以下文献中的方法Burger’ s Medicinal Chemistry and Drug Chemistry,第 1 卷， 172-178 和 949-982，John Wiley & Sons (1995)。还参见 Bertolini 等，J. Med. Chem.，40， 2011-2016(1997) ；Shan 等，J. Pharm. Sci. , 86 (7), 765-767 (1997) ；Bagshawe, Drug Dev.Res.，34，220-230(1995) ；Bodor,Advances in Drug Res.，13，224-331(1984) ；Bundgaard, Designof Prodrugs, Elsevier Press (1985)以 及 Larsen, Design andApplication of Prodrugs, Drug Design and Development(Krogsgaard-Larsen 等编辑)，Harwood Academic Publishers(1991)。本文所用短语，VX-950的“可药用溶剂合物”是指可药用溶剂合物形式的VX-950， 其包含一种或多种溶剂分子并保留了 VX-950的生物学有效性。溶剂合物的实施例包括与 水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMS0、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺结合的VX-950。在VX-950的盐、前药或溶剂合物是固体的情况下，本领域人员应理解这些盐、前 药和溶剂合物可以不同的晶型或非晶型存在，所有这些盐、前药和溶剂合物的应用也在本 发明的范围之内。VX-950可含有一个或多个不对称碳原子，因此可作为外消旋体和外消旋混合物、 单独的对映体、非对映体混合物和单独的非对映体存在。所有此类异构体形式的这些化合 物明确包括在本发明之内。立体碳各自可为R或S构型。VX-950的N-丙基侧链处的D-和 L-异构体明确包括在本发明的范围之内。已在人体中测试单剂量的VX-950，并发现其耐受性好(实施例3)。不良事件的发 生率或严重性并不随VX-950的剂量而增加。没有不良事件被认为是严重的(3级或4级)。 更为常见且严重的不良事件是皮肤的不良事件(例如皮疹和瘙痒)，其次是胃肠不良事件 和贫血。不存在血液学参数或临床化学参数的基线实验值的临床显著变化。所有检查的受 试者中，物理检查、生命体征或心电图均没有临床显著变化。申请人:发现，野生型HCV可被VX-950在10周内清除。而对于HCV的VX-950抗性 变异体(IC5(I增大了 7-20倍)，可通过为期10-24周的Peg-IFN/RBV治疗方案随访来清除。进行分析以检测VX-950的药物动力学概况。该数据在图1和图2中示出。基于整合的临床前数据和临床数据预测肝脏与VX-950的接触情况(liver exposure to VX-950)。将预测的人肝脏接触情况与VX-950复制子试验(r印licon assay) 和感染性病毒试验的结果结合，以确定预期上耐受性良好并产生治疗益处的剂量。在研究 的剂量范围内，所预测的平均肝脏浓度值为复制子试验IC9(I的高达57倍和复制子试验IC5(I 的高达113倍。这些结果表明，本申请人发明中的剂量方案将使VX-950的肝脏浓度远高于非临 床试验中检测的IC5(1和IC9Q。因此，本发明的一个实施方案提供了各自包含VX-950和可药用载体的药物组合 物。这些药物组合物中VX-950的量可为约100mg-约1500mg、约300mg-约1500mg、约 300mg-约1250mg、约450mg、约750mg或约1250mg。这些药物组合物各自可例如每天给药一 次、两次或三次。这些组合物各自可为一种或多种剂型(例如安瓿剂、胶囊剂、霜剂、乳剂、 液剂、颗粒剂、滴剂、注射剂、混悬剂、片剂、散剂)。可根据本领域技术人员所认为的合适程 度和根据剂型，通过一种或多种途径(例如口服、输注、注射、局部或胃肠外)给予这些药物 组合物中的每一种。本发明的另一个方面提供了用于治疗或预防患者中HCV感染的方法，其包括向该 患者给予VX-950。 在一些实施方案中，VX-950的量为至少约300mg(例如至少约450mg、至少约500mg、至少约750mg、至少约1250mg或至少约1500mg)。在一些实施方案中，VX-950的量 不超过约1500mg (例如不超过约1250mg、不超过约750mg、不超过约450mg、不超过约500mg 或不超过约300mg)。应理解的是上面提及的下限量和上限量可结合用于提供VX-950给药的剂量范 围。例如，在一些实施方案中，给予VX-950的量为约300mg-约1250mg或约300mg-约 1500mg。在一些实施方案中，给予VX-950的量为约450mg、约500mg、约600mg、约750mg、约 lOOOmg 或约 1250mg。在本发明的方法中，可例如一天一次、一天两次(例如BID ；ql2h)或一天三次(例 如TID ；q8h)给予特定量的VX-950。此外，可在进食或不进食的情况下给予VX-950。VX-950已经过人体试验并发现其有效地抑制HCV的复制、显著降低了 HCV RNA水 平，并抑制病毒使该病毒的RNA低至检测不到。在接受了每8小时(q8h) 750mg的VX-950的8名受试者中，有4名的HCV RNA水平 低于检出限(LLQ 30 IU/mL)，而这4名受试者中又有2名的HCV RNA水平低于检测限(LLD 10 IU/mL)oHCV RNA的检测可通过例如使用Roche COBAS TaqManHCV/HPS测定法(可购自 Roche molecular Diagnostics)来进行。接受为期14天每8小时750mg的VX-950的受试 者(或患者)在治疗结束时HCV-RNA的中值减少了超过41og1Q(即减少了 10000倍)。在14 天的治疗结束时，其它的两个VX-950剂量组各自可观察到HCV-RNA中值减少了超过21og1Q。 接受了 VX-950的每位受试者在治疗的头三天内HCV-RNA减少了超过21og1(1，而28名接受 了 VX-950治疗的受试者中有26名在治疗头三天内HCV-RNA减少了 31og1(1。参见实施例5 和图3-5。已证实用VX-950治疗的患者中血浆的病毒载量迅速下降，并在给药结束后缓慢 返回至基线HCV RNA水平。具体而言，治疗结束后返回至HCV RNA基线水平的速度比治疗时 HCV RNA的下降速度要慢。这些结果连同实现检测不到的HCV RNA水平一起，表明VX-950 作为单一疗法的有效性。因此，本发明提供了用于治疗受HCV感染的患者的方法，该方法包括按以下方式 将VX-950给予患者(a)每天3次，每8小时一次，每次给予约450mg ； (b)每天3次，每8 小时一次，每次给予约750mg ； (c)每天2次，每12小时一次，每次给予约1250mg ；或(d)每 天3次，每8小时一次，每次约1250mg。本发明的另一个方面提供了治疗受HCV感染的患者的方法，即通过给予VX-950， 致使给药后患者的HCV RNA水平比治疗前的水平低至少约21og1(1 (例如至少约41og1Q)。本发明的又一个方面提供了给药治疗受HCV感染的患者的方法，即通过给予 VX-950，致使患者的病毒RNA水平减少至检测不到的水平并维持在该检测不到的水平，直 至实现“持续病毒应答”。本文所用术语“持续病毒应答”是指在给药完成(或VX-950给药 结束)后24周，仍然检测不到病毒RNA的水平。采取每8小时750mg VX 950的本发明方法有效地导致更高的谷值水平。本文所 用术语“谷值水平”是指刚好在下一个剂量前的血药浓度，或两个剂量之间的最小药物浓 度。将药物水平维持在某个浓度之上，以维持对病毒复制的适当抑制是重要的，特别是在病
11毒病中。有利的是，发现每天三次，每8小时一次，每次约750mg VX950的给药方案会导致 VX 950最高的谷值水平。因此在优选的实施方案中，本发明提供了用于向有需要的患者给予VX-950的方 法，其包括每天三次，每8小时一次，每次给予约750mg的所述化合物。应认识到的是，灵活的给药计划是有利的。因此，在本发明的另一个实施方案中， 每天3次但并非每8小时任选连同食物给药。在某些实施方案中，连同食物给予VX-950。本发明还提供了用于向有需要的患者提供VX-950的方法，其包括向患者给予口 服剂量的含VX-950的组合物，其中在给药后该剂量为患者提供至少约750ng/mL的VX-950 的平均血药浓度(C平均)。在一些实施方案中，VX_950的C平均为约1000ng/mL或约l250ng/ mL。在一些实施方案中，所述剂量主要含有约750mg的VX-950。在一些实施方案中，在给予 VX-950后3小时(例如2小时或1小时)内得到或达到C〒均。在一些实施方案中，VX-950 的(^肖维持约24小时以上(例如约5周或12周)。本发明的另一个方面提供了用于治疗患者中HCV感染的方法，该方法通过在24小 时内给予含VX-950的至少一个剂型，以使在24小时内维持约750ng/mL的最小VX-950血 浆谷值水平。在一些实施方案中，给予所述剂型以使在24小时内维持约800ng/mL (例如约 900ng/mL或约1000ng/mL)的最小VX-950血浆谷值水平。在某些优选的实施方案中，获得治疗上有效的血药浓度并维持在某个谷值水平。 这些方法尤其适用于治疗患有HCV感染的人，该方法通过给予VX-950的制剂，以使在24 小时内维持约750、800、900或1000ng/mL的最小VX-950血浆谷值水平。在不受理论的 束缚下，大于约1500ng/mL的谷值水平被认为是本发明不需要的。因此，约750、800、900、 lOOOng/mL至约1500ng/mL(特别是1000-约1500)的谷值水平在本发明范围之内。还提供了用于向人递送VX-950的剂型，其中所述剂型包含VX-950，当在24小 时内给予至少一次所述剂型时，该剂型在24小时内维持以下VX-950血浆谷值水平至少 约 750ng/mL、800ng/mL、900ng/mL 或 1000ng/mL 至约 1500ng/mL(特别是 1000ng/mL-约 1500ng/mL)。理想地，当本发明的方法涉及治疗受HCV感染的患者时，该方法涉及相对快速地 达到治疗上有效的VX-950血药浓度，随后维持该谷值水平以达到有效的治疗应答。有效的 治疗应答优选为以下中的一项或两项a)实现持续的病毒学应答；和b)达到至少12周(12 周或更长时间)的检测不到的血浆HCV RNA。本文所用“检测不到的”HCV RNA意指通过目 前市售的测定法(优选Roche COBASTaqMan HCV/HPS测定法)检测到的HCV RNA存在量 少于 10IU/mL。通过向患者给予负荷剂量，可使血药浓度相对快速地下降。在一个实施方案中，所 述负荷剂量为约1250mg的VX-950。在本发明的某些剂型中，该剂型(除用于给予负荷剂量的剂型外)含有约750mg 的VX-950，并且该剂型每8小时给予一次(即q8h)。在某些实施方案中，每8小时给予一次VX-950剂型。在某些实施方案中，VX-950的治疗持续时间比当前的护理标准更短。在某些实施方案中，给予VX-950为期少于约12周(或少于12周)。
在某些实施方案中，给予VX-950为期约8-12周(或8_12周)。在某些实施方案中，给予VX-950为期约10周(或10周)。如图90-93所示，建模数据表明用VX-950给药可在约10周内清除野生型病毒。在某些实施方案中，给予VX-950为期少于约10周。在某些实施方案中，给予VX-950为期约2周。申请人:已证实，接受了 2周VX-950治疗的患者达到SVR。在其它的实施方案中，给予VX-950为期少于约8周(或约8周或8周)、少于约6 周(或约6周或6周)或少于约4周(或约4周或4周)。在某些实施方案中，本发明的方法涉及治疗受基因1型丙型肝炎病毒感染的患 者。基因1型HCV感染是最难治疗的HCV毒株，并且是美国最流行的毒株。申请人:还证实给予VX-950降低了体内新蝶呤和ALT的水平(参见图6、图7和图 14)。在给予VX-950时还降低了 AST (天冬氨酸氨基转移酶)的水平。ALT是存在于肝细胞 中的酶；当肝细胞受到损伤或发炎时，ALT会从细胞渗入血液。血液ALT水平可用作肝炎或 月干损伤的标志 ° Si^Tatyana Yashina & J.Sanders Sevall," Hepatitis C Virus，，in Use and Interpretation of Laboratory Tests inGastroenteroloRY,James B.Peter编辑，第 127 页，(1998)禾口 Andres T. Blei,"Liver and Biliary Tract，，in Laboratory Medicine, D. A. Noe 和 Robert C. Rock 编辑，第 19 章，第 363 页(1994)。新蝶呤(6-d-赤藓糖基_三羟基丙基蝶啶)是鸟苷三磷酸(GTP)代谢中产生的蝶 啶衍生物。新蝶呤是炎症的标志，主要通过干扰素、或干扰素a活化单核细胞和巨噬细 胞产生。在慢性HCV感染中新蝶呤的水平往往会升高(Quiroga等，Dig Dis Sci.，39 (11) 2485-2496，1994)。健康个体中新蝶呤的期需血浆水平为3. 1-7. 7nmol/L。因此，申请人检测了在给予(HCV)NS3 4A蛋白酶抑制剂时血清中新蝶呤(作为 单核细胞/巨噬细胞活性的标志)的浓度变化情况。如本文所述，在随机、双盲、安慰剂对 照的多剂量研究中，向34名受基因1型HCV感染的患者给予VX-950，为期14天(表1)。 患者接受 VX-950 450mg q8h (人数=10)、750mg q8h (人数=8)、1250mg ql2h (人数= 10)或安慰剂(人数=6)。可在治疗前、随访第7天、第14天和第10天，通过定量竞争性 ELISA(ELItest Neopterin，Brahms，Hennigsdorf，Germany)检测血清中新蝶呤的浓度。检 测下限(LLD)为2nmol/L。研究过程中通过实时PCR(COBAS TaqManHCV Test ；线性动态 范围为 3. OXIO1-〗. 0X108HCV RNA IU/mL ；HCV RNA 的 LLD 为 lOIU/mL ;Roche Diagnostics, Branchburg, NJ)以频繁的间隔估计HCV RNA。在VX-950给药过程中，证实所有剂量组中每名患者的病毒载量至少下降2-log1Q。 在750mg q8h剂量组中，HCV RNA平均值在第3天下降3. 61og1(1，在第14天下降4. 31og1(1。 在450mg q8h和1250mg ql2h剂量组中，第3_7天可观察到最大效果，随后在第7_14天可观 察到平均病毒载量的增大。随访中所有剂量组的平均病毒载量均有增大。有利的是，HCV的 初次治疗患者和曾接受过治疗的患者均从本发明的方法中受益。如图17A和图17B所述，曾 接受过治疗的患者和初次治疗患者均对VX-950有反应。为避免疑义，可依照本发明的方法 治疗的患者包括那些未尝试过HCV治疗或治疗失败的患者，包括无反应、恢复(rebound)、 复发和反弹(breakthrough)的患者。34名患者中有23名的基线新蝶呤升高(平均9. 33nmol/L ；正规上限(ULN)7.7nmol/l)。在750mg剂量组中，与基线和安慰剂相比，新蝶呤在第14天下降显著 (750mg q8h 剂量组基线对比第 14 天 10. 48士0. 84nmol/L 对比 7. 32士0. 48nmol/L P = 0. 0104，曼-惠特尼检验；750mg q8h剂量组第14天对比安慰剂7. 32士0. 48nmol/l对比 9. 81 士 1. 36nmol/l P = 0. 0036，不成对双尾T检验)。只有在750mg剂量组中第14天新蝶 呤的平均水平是在正规值内(图7和图14)。在450mg q8h剂量组和1250mg ql2h剂量组 中，平均新蝶呤水平的降低程度较小(图6、7和图14)。安慰剂组中的平均新蝶呤水平并未 变化(图6和图7)。在随访中，所有剂量组平均新蝶呤水平均升高。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平可用市售的方法检测。在所有组中给药时， 高于基线的平均ALT水平降低(图6)。在随访中，所有剂量组的平均ALT水平升高，并返回 至基线水平。尽管在450mg剂量组和1250mg剂量组中第7天后HCV RNA升高，但新蝶呤、特别是 ALT继续降低。给予VX-950过程中，新蝶呤平均浓度的变化与HCV RNA及ALT水平的下降 相关。平均新蝶呤浓度在750mg q8h剂量组的第14天下降最大。该组也是第14天时HCV RNA减少程度最大的剂量组。在450mg剂量组和1250mg剂量组中，第7天后ALT和新蝶呤 的水平随着HCV RNA水平的增大而减少。这些数据提示VX-950对HCV复制的抑制会导致 病毒感染相关的系统性炎症活性显著降低。在动物模型中，VX-950还改善了升高的ALT水平(参见W02005/025517)。具体而 言，SCID小鼠中WT-HCV蛋白酶-SEAP的表达导致了 ALT水平升高，其可通过用VX-950治 疗来改善。SCID小鼠中单独WT-HCV蛋白酶的表达还会导致ALT水平的时间依赖性和剂量 依赖性的升高。因此，本发明提供了用于减少(包括正常化)患者ALT水平的方法。该方法包括 向有需要的患者给予治疗有效量的VX-950(例如每天约1350mg、每天约2250mg或每天约 2500mg)。上述患者可感染了 HCV或未感染HCV。在一些实施方案中，每天给予约450mg、或每8小时给予约750mg或每12小时给予 约 1250mg 的 VX-950。本发明的另一个方面提供了用于治疗或预防HCV阳性或HCV阴性的患者中一种或 多种以下疾病的方法肝损伤、肝炎、脂肪变性、脂肪肝、NAFLD、NASH、酒精性脂肪变性或雷 亥综合征(Reye/ ssyndrome)。用于保护HCV阳性或HCV阴性患者肝脏的方法也在本发明范围之内。申请人:还证实VX-950阻断体外的免疫逃避。在用仙台病毒感染的Huh7细胞中，VX-950恢复了 IFN0依赖性基因的表达。在 WT HCV蛋白存在下，IFN0启动子活性因响应仙台病毒刺激而减少。VX-950克服了 WT HCV 蛋白介导的对IFN3启动子激活的抑制作用。参见图15和图16。此外，已知NS3/4A涉及先天防御的逃避(通过例如TRIF-依赖性机制(以及病毒 多蛋白的加工))。该免疫逃避导致了病毒的持续感染。因此，能同时抑制病毒多蛋白加工 和先天防御逃避两者的化合物是符合需要的。有利的是，VX-950已显示出对以上两者的抑 制作用。特别地，VX-950抑制了 TRIF的体外切割，而TRIF为TLR3衔接蛋白。图8-10。在不受理论束缚下，建模提示了 VX-950抑制NS3蛋白酶对TRIF的切割作用。TRIF 结合于NS3蛋白酶活性位点的非主要侧。VX-950与TRIF—样，结合于该活性位点的非主要侧，从而阻断了对TRIF的切割。业已显示两种VX-950病毒变异体，A156T和A156V，表现出切割TRIF或4A/4B的 能力减弱(参见C. Lin等，J. Biol. Chem.，(2005年8月8日))。由于这些病毒变异体适应 性较差，因而它们对两种病毒多蛋白加工和病毒持续感染是无效的。在不受理论束缚下，这 与A156V的空间位阻影响了与4A/4B和TRIF底物的结合有关。参见图11_13。这表明VX-950是同时作为直接的抗病毒药物和免疫逃避抑制剂两者起作用。因 此，本发明还提供了抑制HCV蛋白酶介导的逃避宿主防御的方法。这些结果连同本文公开的体内数据表明了 VX-950作为单一疗法的有效性。以单个剂型或多个剂型给予本发明的VX-950量。若以单独的剂型给药，则每个剂 型接近同时给药。为避免疑义，对于需要每天多于一次的给药方案而言，可每天每次给予一 片或多片或者一个剂量或多个剂量(例如每天三次，每次1片，或每天三次，每次3片)。本 发明的大多数实施方案将采用至少2片/剂量。技术人员应了解，若本发明的方法用于预防性治疗患者，而当该患者受丙型肝炎 病毒感染时，该方法则可治疗感染。因此，本发明的一个实施方案提供了用于治疗或预防患 者中丙型肝炎的方法。除治疗受丙型肝炎感染的患者之外，本发明的方法可用于预防患者免受丙型肝炎 感染。因此，本发明的一个实施方案提供了用于预防患者受丙型肝炎病毒感染的方法，其包 括向患者给予本发明的组合物或剂型。本发明的方法还可涉及给予另外的组分，所述组分包含选自以下的另外的药物 免疫调节剂；抗病毒药物；HCV蛋白酶抑制剂(VX950除外)；HCV生命周期中另外靶标 (NS3/4蛋白酶除外)的抑制剂；内部核糖体进入抑制剂、广谱的病毒抑制剂；或细胞色素 P-450抑制剂；或其组合。所述另外的药物还选自病毒进入细胞的抑制剂。因此，在另一个实施方案中，本发明提供了一种方法，其包括给予VX-950和另外 的抗病毒药物(优选抗HCV药)。这样的抗病毒药物包括但不限于免疫调节剂(例如a、 3和Y干扰素或胸腺素、聚乙二醇衍生化的干扰素a化合物和胸腺素)；其它的抗病毒药 物(例如利巴韦林、金刚烷胺和替比夫定)；丙型肝炎蛋白酶的其它抑制剂(NS2-NS3抑制 剂和NS3-NS4A抑制剂)；HCV生活周期中其它靶标的抑制剂(包括解旋酶、聚合酶和金属蛋 白酶抑制剂)；内部核糖体进入抑制剂；广谱的病毒抑制剂如IMPDH抑制剂(例如美国专利 第5，807，876号、第6，498，178号、第6，344，465号和第6，054，472号中所述的化合物；以 及PCT公开W0 97/40028、W0 98/40381和W0 00/56331中所述的化合物；麦考酚酸及其衍 生物；并包括但不限于VX-497、VX-148和VX-944)；或者它们的任何组合。其它药物(例如非免疫调节化合物或免疫调节化合物)可与本发明的化合物联 用，包括但不限于W0 02/18369中详述的那些，其在此作为参考(参见例如第273页，第 9-22行以及第274页第4页至第276页第11行，此公开内容在此特别地引作参考)。其它的药物还包括各种公布的美国专利申请中描述的那些。这些公布的申请提 供了可与本发明的方法中VX-950联用(特别是用于治疗肝炎)的化合物和方法的另外 的教导。应考虑到任何这样的方法和组合物可与本发明的方法和组合物联用。为了简短 起见，这些申请的公开内容指的是对公开号的提及，但应注意尤其是化合物的公开特别 地在此引作参考。这样的出版物的实例包括以下的美国专利申请号US 20040058982、
15US 20050192212、 US 20050080005、 US 20050062522、 US 20050020503、 US 20040229818、 US20040229817、 US 20040224900、 US 20040186125、 US 20040171626、 US 20040110747、 US 20040072788, US 20040067901, US20030191067, US 20030187018, US 20030186895、 US 20030181363、US 20020147160、US 20040082574、US 20050192212、US20050187192、US 20050187165、US 20050049220 和 US20050222236。 其它的药物还包括但不限于AlbuferonTM(白蛋白_干扰素a)，可购自 Human Genome Sciences ；PEG- INTRON (聚乙二醇干扰素 a ~2b,可购自 Schering Corporation, Kenilworth, NJ) ；INTRON-八 (VIRAFERON ,干扰素 a -2b,可购 自 Schering Corporation, Kenilworth, NJ)；利巴韦林(1_3 _D_ 呋喃核糖基-1H-1，2， 4-三唑-3-甲酰胺，可购自 ICN Pharmaceuticals, Inc.，Costa Mesa, CA ；参见默克索 弓| (Merck Index), entry 8365, H + 二片反)；REBETROL (ScheringCorporation, Kenilworth, NJ) ； COPEGUS (Hoffmann-La Roche, Nut ley, NJ) ； PEGASYS (聚 乙二醇干扰素 a _2a，可购自 Hoffmann-LaRoche，Nut ley, NJ) ； ROFERON (重组干 扰素 a-2a，可购自 Hoffmann-La Roche, Nut ley, NJ) ； BEREFOR (干扰素 a 2，可购 自 Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc. , Ridgefield, CT) ； SUMIFERON㊣ (纯化的天然a干扰素(例如Sumiferon)的混合物，可购自Sumitomo，Japan)； WELLFERON (干扰素 anl，可购自 GlaxoWellcome Ltd.，Great Britain)； ALFERON (Interferon Sciences制备的天然a干扰素的混合物，可购自Purdue Frederick Co.，CT) ； a干扰素；天然的a干扰素2a;天然的a干扰素2b;聚乙二醇 化 a 干扰素 2a 或 2b;复合 a 干扰素(consensus alpha interferon) (Amgen, Inc., Newbury Park,CA) ；REBETRON (Schering Plough，干扰素 a2B+利巴韦林)；聚乙二 醇化干扰素 a (Reddy, K. R.等，"Efficacy and Safetyof Pegylated (40-kd) Interferon alpha_2a Compared with Interferonalpha_2a in Noncirrhotic Patients with Chronic Hepatitis C(非肝硬化慢性丙型肝炎患者中聚乙二醇化(40_kd)干扰素a-2a 与干扰素a ~2a的功效与安全性比较)，，，HepatoloRY, 33,433-438 (2001)；复合干扰素 (INFERGEN ) (Kao ,J. H.等，〃 Efficacy of Consensus Interferon inthe Treatment of Chronic H印atitis (复合干扰素在治疗慢性肝炎中的功效)，“J. Gastroenterol. Hepatol.，15，1418-1423 (2000)；淋巴母细胞样或“天然的”干扰素；干扰素t (Clayette, P.等，“IFN-tau, A Newlnterferon Type I with Antiretroviral activity(IFN x 具有抗逆转录病毒活性的新型I型干扰素)"Pathol. Biol. (Paris) 47，553-559 (1999)； 白介素 ~2 (Davis, G. L.等， "Future Options for the Management ofHepatitis C.(治疗丙型肝炎的未来选择)〃 Seminars in Liver Disease，19，103-112 (1999)；白介 素-6 (Davis 等，"Future Options for theManagement of Hepatitis C,，，Seminars in Liver Disease, 19，103-112 (1999)；白介素-12 (Davis, G. L.等，“Future Options for theManagement of Hepatitis C. " Seminars in Liver Disease, 19,103-112(1999)；以及 增强1型辅助T细胞应答发生的化合物(Davis等，"Future Options for the Management of Hepatitis C,，，Seminars inLiver Disease, 19，103-112 (1999))。还包括的是刺激干扰素在细胞中合成的化合物(Tazulakhova，E. B.等，“Russian Experience inScreening, analysis, and Clinical Application of Novel Interferonlnducers (新型干扰素诱导 物的筛选、分析和临床应用的俄罗斯人经验)"T. Interferon Cytokine Res. ,21 65-73)， 其包括但不限于单独的或与妥布霉素(tobramycin)联用的双链RNA以及咪喹莫德 (Imiquimod)(3M Pharmaceuticals ；Sauder,D. N. “Immunomodulatoryand Pharmacologic Properties of Imiauimod (咪喹莫德的免疫调节和药理学件质)，”T. Am. Acad. Dermatol., 43 S6-ll(2000)。还参见W002/18369，特别是第272页第15行至第273页第8行，该公开 内容在此具体引作参考。技术人员认识的是，VX-950优选口服给药。虽然口服给药形式正在开发中，但典型 地干扰素并不口服给药。尽管如此，本文没有将本发明方法或组合限制在任何特定的剂型 或方案中。因此，本发明组合的各组分可分别给药、共同给药或以其任何组合给药。技术人 员认识到的是，干扰素的剂量通常以IU度量(例如约4百万IU-约2百万IU)。干扰素还 可以微克为单位来给药。例如，Peg-Intron的标准剂量为1. 0-1.5ug/kg/每周，Pegasys 为180 u g/每周。在某些方面，该方法包括分两个阶段(初始阶段和第二阶段)给药。举例而言，初 始阶段可为少于约12周或24周的时间，而第二阶段可大于或等于约12周，例如第二阶段 可为12-36周。在某些实施方案中，第二阶段为12周。在另外的实施方案中，第二阶段为 36周。在某些实施方案中，初始阶段和第二阶段总计为约24-48周(例如24、36或48周)。 在某些实施方案中，初始阶段和第二阶段的持续时间可相同。可在初始阶段、第二阶段或同时在这两个阶段给予VX-950。在一些实施方案中，仅 在初始阶段给予VX-950。当仅在初始阶段给予VX-950时，VX-950可单独给药或与其它药 物联合给药，并且在第二阶段给予一种或多种药物。所述其它的药物可为本文所述的一种 或多种抗病毒药物、一种或多种其它的药物或其组合。在一些实施方案中，初始阶段和第二 阶段给予的特定药物是相同的。在一些实施方案中，该方法包括给予VX-950两周(初始阶段)，随后给予聚乙二醇 干扰素a-2a(Peg-IFN)和利巴韦林(RBV)的组合22周(第二阶段)。在其它的实施方案 中，该方法包括给予VX-950两周(初始阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合46周(第 二阶段)。在另外的实施方案中，该方法包括给予与Peg-IFN联合的VX-950两周(初始阶 段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合22周(第二阶段)。在其它的实施方案中，该方法包 括给予与Peg-IFN联合的VX-950两周(初始阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合46周 (第二阶段)。在另外的实施方案中，该方法包括给予与Peg-IFN和RBV的联合的VX-950两周 (初始阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合22周(第二阶段)。在其它的实施方案中， 该方法包括给予与Peg-IFN和RBV联合的VX-950两周(初始阶段)，随后给予Peg-IFN和 RBV的组合46周(第二阶段)。在一些实施方案中，该方法包括给予VX-950四周(初始阶段)，随后给予Peg-IFN 和RBV的组合20周(第二阶段)。在其它的实施方案中，该方法包括给予VX-950四周(初 始阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合44周(第二阶段)。
在又进一步的实施方案中，该方法包括给予与Peg-IFN联合的VX-950四周(初始 阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合20周(第二阶段)。在其它的实施方案中，该方法 包括给予与Peg-IFN联合的VX-950四周(初始阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合44 周(第二阶段)。在另外的实施方案中，该方法包括给予与Peg-IFN和RBV联合的VX-950四周(初 始阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的组合20周(第二阶段)。在其它实施方案中，该方法 包括给予与Peg-IFN和RBV联合的VX-950四周(初始阶段)，随后给予Peg-IFN和RBV的 组合44周(第二阶段)。在一些实施方案中，前述的任何初始阶段可进行约12周而第二阶段可进行约12 周。或者，初始阶段可进行约12周而第二阶段可进行约24周。在另外的方面，初始阶段可 进行约12周而第二阶段可进行约36周。在一些实施方案中，前述任何的初始阶段可进行约8周而第二阶段可进行约16 周。或者，初始阶段可进行约8周而第二阶段可进行约28周。在另外的方面，初始阶段可 进行约8周而第二阶段可进行约40周。在一些实施方案中，该方法包括给予与Peg-IFN联合的VX-950少于48周。例如， 该方法包括给予与Peg-IFN联合的VX-950少于24周。在一些实施方案中，该方法包括给予与Peg-IFN和RBV联合的VX-950少于48周。 例如，该方法包括给予与Peg-IFN和RBV联合的VX-950少于24周。在一些实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950约2周(或2周)，随后给予 Peg-IFN和利巴韦林约22周(或22周)或约46周(或46周)。建模数据还表明，VX-950抗性突变体(例如 V36A/M、T54A、R155K/T、A156SA156V/ T、V36A/M-R155K/T和V36A/M-A156V/T)可主要通过VX-950治疗后给予PEG-IFN和利巴韦 林约10-24周(或8-26周)来清除(参见图18-21)。与持续24-48周的当前护理标准治 疗方案相比，这些方案中的某些表现出了治疗时间的缩短。在一些实施方案中，本发明的方法能在第4周达到RVR并实现在第12周仍为检测 不到的状态。如图22所示，VX-950治疗8_12周后的病毒复发与VX-950抗性突变体相关，并且 治疗24周或48周的复发率基本相同，特别是在表现出对治疗良好的初始应答的受试者中。如图23所示，用VX-950、PEG-IFN和RBV治疗12周(并且可能低至8周)表现出 足以消除野生型病毒。因此，本发明还提供了用于给予与干扰素联合的VX-950的方法。在某些实施方案 中，给予干扰素约10周(或10周)、约12周(或12周)、约14周(或14周)。还任选在 整个或部分方案(包括但不限于完整的方案)给予利巴韦林。在一些实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和Peg-IFN的组合约12周(或 12周)。在一些实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和Peg-IFN的组合约12士4周 (例如8、12或16周)。在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和Peg-IFN的组合约24周(或 24 周)。
在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950和Peg-IFN的组合约24 士 4周 (例如20、24或28周)。为避免疑义，应理解的是本发明包括但不限于以下方案包括给予VX-950和干扰 素约8周(或8周)，随后给予干扰素约16周(或16周)，总治疗方案为约24周(或24 周)。还提供了以下方案包括给予VX-950和干扰素约12周(或12周)，随后给予干扰素 约12周(或12周)，总治疗方案为约24周(或24周)。所述方案任选在整个或部分方案 中给予利巴韦林，包括但不限于在约24周(或24周)的完整的方案中给予利巴韦林。在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、Peg-IFN和利巴韦林的组合 约12周(或12周)。在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、Peg-IFN和利巴韦林的组合 约12周(或12周)，随后给予Peg-IFN和利巴韦林约12周(或12周)。在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、Peg-IFN和利巴韦林的组合 约12周(或12周)，随后给予Peg-IFN和利巴韦林约36周(或36周)。在一个实施方案中，本发明的方法包括给予VX-950、Peg-IFN和利巴韦林的组合 约24周(或24周)，随后给予PEGIFN和利巴韦林约24周(或24周)。在一些实施方案中，所述方法包括提供负荷剂量的VX_950(1250mg)，然后给予 750mg q8h VX-950加上Peg-IFN和利巴韦林的组合。与本发明联用的细胞色素P450单加氧酶(“CYP”)抑制剂有望抑制对VX-950 的代谢作用。因此，细胞色素P450单加氧酶抑制剂应为有效抑制对VX-950的代谢作用 的量。因此，以一定的量给予CYP，从而使VX-950的生物利用度或与VX-950的接触相对 于不存在CYP抑制剂的VX-950增大。CYP抑制剂包括但不限于利托那韦(ritonavir) (W0 94/14436)、酮康唑(ketoconazole)、醋竹桃霉素(troleandomycin)、4-甲基吡 唑、环孢素(cyclosporin)、氯美噻唑(clomethiazole)、西咪替丁 (cimetidine)、伊 曲康唑(itraconazole)、氟康唑(fluconazole)、咪康唑(miconazole)、氟伏沙明 (fluvoxamine)、氟西汀(fluoxetine)、奈法唑酮(nefazodone)、舍曲林(sertraline)、 茚地那韦(indinavir)、奈非那韦(nelfinavir)、氨普那韦(amprenavir)、呋山那 韦(fosamprenavir)、沙奎那韦(saquinavir)、洛匹那韦(lopinavir)、地位韦啶 (delavirdine)、红霉素(erythromycin)、VX-944 和 VX-497。优选的 CYP 抑制剂为利托那 韦、酮康唑、醋竹桃霉素、4-甲基吡唑、环孢素和氯美噻唑。用于检测化合物抑制细胞色素P50单加氧酶活性的能力的方法是已知的(参见美 国专利第 6，037，157 号和 Yun 等，DrugMetabolism & Disposition, 21，403-407 (1993))。用 于评价VX-950和CYP抑制剂联合给药对受试者影响的方法也是已知的(US2004/0028755)。 任何这样的方法均可与本发明联用，以检测组合的药物动力学影响。本发明的一个实施方案提供了用于给予CYP3A4的抑制剂以及VX-950的方法。本文的方法可包括给予或联合给予以下药物a)VX-950和另外的药物的组合；或 b)超过一个剂型的VX-950。联合给药包括给予相同剂型或不同剂型的每种抑制剂。当以 不同剂型给药时，可在不同时间(包括接近同时或接近给予其它剂型的任何时间段)给予 抑制剂。单独的剂型可按任何次序给药。即任何剂型可在给予其它剂型之前、同时或之后 给药。
19
VX-950和任何另外的药物可以以单独的剂型配制。或者，为减少给予患者的剂型 数目，可将VX-950和任何另外的药物以任何的组合一起配制。任何单独的剂型可同时或在 不同时间给药。应理解的是，剂型应在某一时间段内给予，以使其生物学作用是有利的。依照本发明的方案和剂型，VX-950以有效使样品或患者中的病毒载量减少的量存 在，其中所述病毒编码对病毒的生活周期必需的NS3/4A丝氨酸蛋白酶(或以有效进行本发 明方法的量存在)，以及可药用载体。或者，本发明的组合物包含本文所述的另外的药物。 每种组分可以以各别的组合物、组合的组合物或单独的组合物存在。若在这些组合物使用化合物的可药用盐，则这些盐优选衍生自无机或有机酸和 碱。这样的酸式盐中包括以下醋酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸 盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二 烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐 酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟 酸盐、草酸盐、扑酸盐、胶质酸盐、过硫酸盐、3-苯基-丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、 琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。碱式盐包括胺盐、碱金属盐(例如 钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)、与有机碱形成的盐(例如二环己基胺盐、 N-甲基-D-葡糖胺)以及与氨基酸(例如精氨酸、赖氨酸等)形成的盐。此外，含氮的碱性基团可用以下试剂季铵化例如低级卤代烃(例如氯、溴和碘代 甲烷、乙烷、丙烷和丁烷)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫 酸二戊酯)、长链卤化物(例如氯、溴和碘代癸烷、十二烷、十四烷和十八烷)、卤代芳烷(例 如苄基溴和苯乙基溴)等。由此得到水溶性、脂溶性或可分散产物。本发明的组合物和方法中采用的化合物还可通过连接合适的官能团来改性，以提 高选择性生物学性质。这样的改性为本领域所已知并包括以下的改性提高进入既定生物 系统(例如血液、淋巴系统、中枢神经系统)的生物渗透性、提高口服利用度、增加溶解度以 允许注射给药、改变代谢作用和改变排泄速度。可用于这些组合物的可药用载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、 卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸 钾)、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质例如鱼精蛋白硫酸盐、磷酸氢二 钠、磷酸氢二钾、氯化钠、锌盐、胶态氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物 质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚合物、聚乙二 醇和羊毛脂。依据优选的实施方案，本发明的组合物经配制以药物形式给予哺乳动物、特别是 人。这样的本发明药物组合物(以及本发明的方法、组合、药盒和包装中所用的组合 物)可口服给药、胃肠外给药、舌下给药、通过吸入喷雾给药、局部给药、直肠给药、鼻内给 药、含化给药、阴道给药或经由埋植贮器给药。本文所用术语“胃肠外”包括皮下、静脉内、 肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内(intralesional)或颅内的注射或输注 技术。优选组合物为口服或静脉内给药。更优选组合物为口服给药。无菌可注射形式的本发明组合物可为水性或油性的混悬剂。这些混悬剂可按照本 领域中已知技术，使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂配制。所述无菌的可注射制剂还可
20为在胃肠外可接受的无毒稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬液，例如1，3_ 丁二醇 的溶液。可采用的可接受溶媒和溶剂为水、林格氏液(Ringer' s solution)和等渗的氯化 钠溶液。此外，无菌的非挥发性油常规用作溶剂或悬浮介质。为了此目的，可采用任何温和 的非挥发性油，包括单或二甘油酯。脂肪酸(例如油酸及其甘油酯衍生物)可用于制备注 射剂，如天然的可药用油(例如橄榄油或蓖麻油)，尤其是其聚氧乙烯化形式。这些油性溶 液剂或混悬剂还可含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的分散剂，它们 通常用于配制包括乳剂和混悬剂在内的可药用剂型。为了配制的目的，还可用其它常用的 表面活性剂(例如吐温类、司盘类)和其它的乳化剂或生物利用度促进剂，它们普遍用于制 备可药用固体剂型、液体剂型或其它剂型。在含VX-950和另外的药物的本发明组合物中，存在的VX-950和所述另外的药物 的剂量水平应为单一疗法方案中通常给予的剂量的约10-100%，更优选在约10-80%。本发明的药物组合物可以以任何可口服的剂型进行口服给药，所述剂型包括但不 限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、水性混悬剂或溶液剂。在用于口服的片剂情况下， 通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂(例如硬脂酸镁)。对于胶囊剂 形式的口服给药，可用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当口服使用需要水性混悬剂 时，使有效成分与乳化剂和助悬剂结合。若有需要，还可加入某些甜味剂、矫味剂或着色剂。 可接受的液态剂型包括乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。或者，本发明的药物组合物可以以直肠给药的栓剂形式给予。这些栓剂可通过将 药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，该赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液 体，因此将会在直肠内溶化并释放药物。这样的材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。本发明的药物组合物还可为局部给药，尤其是当治疗靶标包括通过局部用药易到 达的区域或器官(包括眼部、皮肤或下肠道的疾病)时。合适的局部制剂易于经过制备用 于各种所述区域或器官。如本领域所公认的，药物组合物还可以以脂质体的形式给药。申请人:证实口服的VX-950是可生物利用的。因此，将本发明优选的药物组合物配 制用以口服给药。对于CYP抑制剂，每天约0. 001-约200mg/kg体重的剂量水平将是典型的。更典 型的是每天约0. 1-约50mg/kg体重或每天约1. 1-约25mg/kg体重的剂量水平。利托那韦的优选剂量参见美国专利第6，037，157号和以下本文所引用的文献 美国专利第5，484，801号、美国专利第08/402，690号和PCT公开W0 95/07696和W0 95/09614。与本发明有关的给药可用作慢性治疗或急性治疗。可与载体材料结合以制备单个 剂型的活性成分的量将根据被治疗的对象和具体给药模式而变化。典型的制剂将含有约 5%-约95%的活性化合物(重量比)。优选这样的制剂含有约20%-约80%的活性化合 物。若有需要，可在改善患者病况时，给予维持剂量的本发明的化合物、组合物或组 合。因此，可根据症状将给药的剂量或频率或这两者降至使该改善的病况得以维持的水平， 而当症状已减轻至理想水平时，应停止治疗。然而，在疾病症状有任何复发时，患者可能需 要长期的间歇治疗。
还应理解的是，对于任何特定的患者而言，特定的剂量和治疗方案将取决于多种 因素，其包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、综合健康状况、性别、饮食、给药时间、排 泄速率、药物组合、治疗医师的判断和待治疗的具体疾病的严重性、治疗前病史、共患病或 合并用药、基线的病毒载量、种族、疾病持续时间、肝功能状态、肝纤维化/肝硬化的程度和 治疗目的(消除每次移植的循环中的病毒或清除病毒)。活性成分的量还取决于具体的所 述化合物、组合物中是否存在另外的抗病毒药物以及所述另外的抗病毒药物的性质。依照另一个实施方案，本发明提供了用于通过向受病毒感染的患者给予本发明的 可药用组合物来治疗所述患者的方法，该病毒的特征在于病毒本身编码NS3/4A丝氨酸蛋 白酶，该蛋白酶对于病毒的生活周期是必需的。优选本发明的方法用于治疗患有HCV感染 的患者。这样的治疗可完全清除病毒感染或减少其严重性。优选患者为哺乳动物，更优选 患者为人。优选本文的剂量用于体内。尽管如此，这并不意味着以任何目的限制所述量的 VX-950的应用。在本发明的另一个实施方案中，提供了预处理意欲给予患者的生物学物 质的方法，所述方法包括将所述生物学物质与含有本发明化合物的可药用组合物接触的步 骤。这样的生物学物质包括但不限于血液及其组分(例如血浆、血小板、血细胞亚群等)； 器官(例如肾、肝、心脏、肺等)；精子和卵子；骨髓及其组分；以及向患者输注的其它液体 (例如盐水、葡萄糖等)。本发明还提供了用于制备包含VX-950或其可药用盐和可药用载体、辅料或溶媒 的组合物的方法，其包括将VX-950或其可药用盐与可药用载体、辅料或溶媒结合的步骤， 其中所述组合物中VX-950的剂量与本发明的任一实施方案一致。本发明的备选实施方案 提供了一种方法，该方法中的组合物包含本文所述的一种或多种另外的药物。本发明还提供了一种治疗方案，其包含本文公开剂量的VX-950或其可药用盐。在 本发明备选的实施方案中，该治疗方案进一步包含本文所述的一种或多种另外的药物。还可以以“个人用袋(patient pack) ”的形式将药物组合物开给患者，所述“个人 用袋”含有单独包装(通常是泡罩包装)的整个疗程。个人用袋具有优于传统处方的优点， 其中药剂师将药物从批量包装分成个人包装，使患者总是能够取阅放在个人具袋中的包装 说明书，而传统处方中通常缺少这点。业已显示，放入包装说明书提高了患者对医生指示的 顺应性。应理解的是，借助单独的患个人用袋或每种制剂的个人具袋(包含指导患者正确 使用本发明的包装说明书)来给予本发明的组合是本发明所需的另外的特征。本发明的另一个方面是一种包装，其包含VX_950(按本发明的剂量)和记载着本 发明组合的使用说明的信息说明书。本发明的任何组合物、剂型、治疗方案或其它的实施方 案可以药物包装的形式存在。在本发明的备选实施方案中，所述药物包装进一步包含本文 所述的一种或多种另外的药物。可在同一个包装或在单独的包装中提供所述一种或多种另 外的药物。本发明的另一个方面涉及一种包装药盒，用于供患者在治疗或预防HCV感染中使 用(或在本发明的另外的方法中使用)，该包装药盒包含每种药物组分的单个或多个药物 制剂；用于在储存过程中和给药前存放一种或多种药物制剂的容器以及用于以有效治疗或 预防HCV感染的方式实行给药的说明书。
因此，本发明提供了用于同时给予或贯序给予一定剂量的VX_950(和任选的另外 的药物)的药盒。典型地，这样的药盒应包含，例如每种化合物和任选的一种或多种另外的 药物在可药用载体(以及一种或多种药物制剂)中的组合物以及用于同时给药或贯序给药 的书面说明书。在另一个实施方案中，提供了一种包装药盒，其包含用于自身给药的一种或多种 剂型；用于在储存和使用前存放剂型(优选密封)的容器(container mean)；以及让患者 实行给药的说明书。所述说明书通常应为包装说明书、标签、和/或药盒的其它组分上的书 写说明书，并且所述一种或多种剂型如本文所述。每种剂型可单独存放，如在金属锡纸-塑 料的分层片中且每个剂型在单独的隔室或泡罩中与其它的剂型分离，或者可将各剂型存放 于单个容器中(如塑料瓶中)。本发明的药盒通常还包含用于包装各别的药盒组分(即剂 型、容器及供使用的书面说明书)的手段。这样的包装手段可采取纸片或纸盒、塑料袋或箔 袋等的形式。本发明的药盒可涵盖本发明的任何方面，例如任何组分、剂型、治疗方案或药物包装。本发明的包装和药盒任选包含多种组合物或剂型。因此，本发明应包含含有一种 组合物或不止一种组合物的包装和药盒。尽管在下面阐述和描述了某些示例性实施方案，但应理解的是，本发明的化合物 可依照前述的常规方法使用本领域的技术人员普遍可用的合适的原料来制备。所有引用的文献在此弓丨作参考。为了更透彻地理解本发明，以下给出了制备实施例和试验实施例。这些实施例仅 是为了阐述的目的，而不应理解为以任何方式限制本发明的范围。实施例1 :HCV复制子细胞测定方案将含有丙型肝炎病毒(HCV)复制子的细胞维持在含有10%胎牛血清(FBS)、 0. 25mg/mL G418并含有合适补充物的DMEM( “培养基A”)中。在第一天，用胰酶EDTA的混合液处理单层复制子细胞，移出后，用培养基A将细 胞稀释至终浓度为100000个细胞/mL。将含10000个细胞的100 u L培养基接种于96孔组 织培养板的各孔中，然后在37°C下于组织培养箱中培养过夜。在第2天，将含化合物VX-950的100% DMS0系列稀释到含有2% FBS、0. 5% DMS0 并含有合适的补充物的DMEM (“培养基B”)中，得到含不同浓度VX-950的溶液。DMS0的终 浓度在各个系列稀释中保持在0. 5%。移除单层复制子细胞中的培养基A，然后加入含各种浓度VX950的培养基B。向其 它孔加入不含任何化合物的培养基B作为对照。在37°C下于组织培养箱中，将细胞与含VX-950溶液的培养基B或对照孵育48小 时。在48小时培养期结束时，移除培养基B，用PBS洗涤单层复制子细胞一次并在提取RNA 前贮存于-80°C。解冻含经处理的单层复制子细胞的培养板，并将定量的另一种RNA病毒-牛病毒 性腹泻病毒(BVDV)加入各孔的细胞中。立即向细胞中加入RNA提取试剂(例如来自RNeasy 试剂盒的试剂)以避免RNA的降解。依照生产商的说明书并作出提高提取的效率和一致性 的修改来提取总RNA。最后将含HCV复制子RNA的总胞内RNA洗脱，并贮存于_80°C待进一步的处理。用两套特异性引物和探针建立Taqman实时RT-PCR定量测定。一套引物和探针用 于HCV而另一套则用于BVDV。将来自处理后的HCV复制子细胞的总RNA提取物加入PCR反 应中，以定量测定同一 PCR孔中HCV RNA和BVDB RNA两者。基于各孔中BVDV RNA的水平 标示并淘汰失败的实验。根据相同PCR板运行的标准曲线计算各孔中HCV RNA的水平。用 DMS0或无VX-950的对照作为抑制率0 %，计算VX-950处理所导致的HCV RNA水平的抑制 百分比或减少百分比。根据任意VX-950浓度的滴定曲线计算IC5(I (观察到抑制HCV RNA水 平的50%时VX-950的浓度)。复制子测定的结果显示VX-950具有显著的抑制活性，其IC5(1为约240ng/mL而IC9Q 为约 476ng/mL。实施例2 :HCV Ki测定方案用于分离5AB的底物和产物的HPLC微孔法该研究所用的底物为NH2-Glu-Asp-Val-Val_(a)Abu-Cys-Ser-Met-Ser-Tyr_COOH。SEQ ID NO 1用0. 2M DTT制备20mM 5AB的DMSO贮存液，并分装贮存于_20°C中。制备pH 7. 8， 含50mM HEPESUOOmM NaCl和20%甘油的缓冲液。依照下表制备100 U L的测定液 将缓冲液、KK4A、DTT和tNS3合并，按每份78 y L分至96孔板的孔中，然后在30°C 下温育5-10分钟。将2. 5 ii L合适浓度的VX-950溶解于DMS0 (单独的DMS0用作对照)并加入各孔 中，然后在室温下温育15分钟。通过加入20 ii L的250 u M 5AB底物(25 u M的浓度相当于或略低于5AB的Km)开 始反应。将反应混合物在30°C下温育20分钟，加入25 ii L的10% TFA来终止反应并将混 合物(按120 y L等份)转移至HPLC小管中用于分析。通过以下方法将SMSY产物与底物和KK4A分离仪器Agilent1100
脱气仪G1322A二元泵 G1312A自动采样仪G1313A柱恒温箱G1316A二极管阵列检测器G1315A柱Phenomenex Jupiter ；5 微米 C18 ；300 ±矣(angstrom) ； 150 X 2mm ；P/0 00F-4053-B0柱温40C进样体积100iiL溶剂A = HPLC 梯度的水 +0. 1 % TFA溶剂B = HPLC梯度的乙腈+0. 1 % TFA 终止时间17分运行后时间10分。实施例3 耐警件和药物动力学研究在随机、双盲、安慰剂对照的单剂量递增研究中检测VX-950。登记了 25名健康的 男性志愿者并每人接受多个单剂量的VX-950 (相隔至少7天，以不断递增剂量的水平服用 3剂VX-950)和一剂安慰剂。评价了 25mg-1250mg的剂量。使用剂量递增的计划，该计划使剂量倍增与修改的 斐波纳契(Fibonacci)结合，以使在低剂量范围中递增比例较大而在高剂量范围中递增比 例较小。结果显示，VX-950在所有的剂量水平上耐受性良好。在研究中未报告严重的不良 事件，而且随着剂量水平增加并未观察到不良事件增多。用统计动差方法进行药物动力学分析。图1A和图1B阐述了平均浓度-时间概况。 所选的推导的药物动力学参数参见图2A-2D。药物动力学的分析显示，VX-950吸收的t_ 中值为3小时。尿液中排泄的未改变的VX-950不足2%，提示该药物主要是经由代谢途径清除。实施例4 感染件病毒测定感染性病毒测定证明了 VX-950的IC5(1为196ng/mL。实施例5 :VX-950的治疗效果
在随机、安慰剂对照、多剂量、单盲(blinded)的剂量递增研究中检验了 VX-950， 该递增研究在24名健康的受试者和36名丙型肝炎阳性的受试者中进行。将24名健康的受试者分为3组，每组8名受试者。各组中有6名受试者接受 VX-950，2名受试者接受安慰剂。向健康的受试者连续5天给予450mg、750mg或1250mg q8h 的VX-950。健康受试者的年龄在18-65岁之间(包含18岁和65岁)并且健康受试者为乙 型肝炎、丙型肝炎和HIV阴性。男性的体重指数为18. 5-29. Okg/m2 (包含18. 5和29. Okg/ m2)。女性的体重指数为 18. 5-32. 5kg/m2 (包含 18. 5 和 32. 5kg/m2)。将丙型肝炎(基因1型)阳性的受试者分为3组，每组12名受试者，每人连续14 天接受450mg q8h、750mg q8h或1250mg ql2h的VX-950。每组中有10名受试者接受VX-950 而2名受试者接受安慰剂。750mg组中有2名受试者在给药前撤出。所有其它的34名受试 者完成了该研究。研究显示，VX-950在所有的剂量水平上耐受性良好并且研究中没有报告严重的不 良反应事件；报告了轻度和中度的不良事件。在接受了安慰剂、450mg q8h、750mg q8h和 1250mg ql2h组的HCV阳性受试者中，分别有33. 2%、10%、12. 5%和30%为初次治疗。治疗后检测HCV阳性的受试者，以监测HCV RNA水平向基线的回复情况。表1.受试者的基线特征 *因为本测定无法确定他们为基因la型还是基因lb型，故4名患者的样本均归类 为基因1型。缩写BMI (体重指数)；HCV(丙型肝炎病毒)；q8h(每8小时)；ql2h(每12小 时)；SD (标准偏差)。
相对于基线的HCV RNA变化，研究VX04-950-101表2.各类HCV RNA的最大变化 值为人数(% ) :q8h,每8小时；ql2h,每12小时实施例6 :VX-950制剂口服剂量的制剂如下制备。将VX-950和聚维酮K29/32溶解于二氯甲烷中，然后 将十二烷基硫酸钠加入到并分散于VX-950溶液中，形成均勻的混悬液。使用90°C的入口温 度和56°C的出口温度将混悬液喷雾干燥，从旋风分离器中收集产物。将喷雾干燥的混悬液 在75°C下液化床中干燥8小时。在玻璃小管中将所得粉末预先测量，悬浮于水(30mL)中后 马上给予受试者。在给药过程中用3等份单独的水洗涤每个小管，水的总体积为90mL。
VX-950固体分散剂% (重量比)成分49.5VX-950从CH2C12中喷雾干燥49.5聚维酮K29/321十二烷基箱。酸钠实施例7 验证人血浆中的VX-950通过本领域熟知的方法，进行用于检测人血浆中VX-950浓度的测定，参见例如 Was ley, A.等，Semin Liver Dis. ,20 :1_16,2000 ；Alter, H.J.等，Semin. Liver Dis., 20 17-35, 2000 ；Brown, R. S. Jr.等，Liver Transpl.，9 第 10—13 章，2003 ；DeFrancesco, R.等，Nature，436 (7053) 953-960, 2005 ；Bowen, D. G.等，J. Hepatol.，42 :408_417， 2005 ；Hoofnagle, J. H.，Hepatology, 36 第 21-29 章，2002，Brown, R. S. Jr.等，Nature, 436(7053) 973-978,2005 ；和 Chisari，F. V. , Nature, 436 (7053) :930_932，2005。具体而言，制备以下的VX-950溶液并在封口的硼硅管(11. 5mL)中于_20°C贮存贮存液含961 u g/mL VX-950 的 2_ 丙醇(10. OmL)稀释贮存液1 含 96. 1 u g/ml VX-950 的 2_ 丙醇(5. 00mL)稀释贮存液2 含 9. 61 u g/ml VX-950 的 2_ 丙醇(10. OmL)稀释贮存液3 含 0. 961 u g/ml VX-950 的 2_ 丙醇(10. OmL)制备内部标准贮存液，该贮存液包含5. 00mL 2_丙醇中的1. 00mg/mL化合物1 (与 VX-950结构接近的类似物)，并在封口的硼硅管(11.5mL)中于_20°C贮存。制备含相同 化合物1的工作液，该工作液包含100mL乙腈中的300ng/mL化合物1，并在封口的硼硅管
27(lOOmL)中于-20°C贮存。样品制备将100 y L血浆和100 y L内部标准工作液(或乙腈作为空白样品)加 入提取管中。漩涡震荡混合30秒后，加入500 u L甲苯，通过漩涡震荡混合30秒进行提取。 在4°C下3000rpm离心5分钟后，将水层冰冻于丙酮和干冰的混合物中，转移有机层至另一 个提取管中。在大约30°C下加入50yL 2，2_二甲氧基丙烷并在氮气下将样品蒸发至干燥。 通过漩涡震荡混合60秒，将残留物再溶解于300 yL庚烷和丙酮(90 10，体积比)的混合 物中[或庚烷和THF的混合物(80 20，体积比)]。将样品转移至注射小管中并将60 yL 等份的样品注入色谱系统中，用以下的色谱条件进行分析流动相(等度洗脱)庚烷/丙酮/甲醇(80 19 1，体积比)组成溶剂乙腈/丙酮/甲醇/甲酸(40 60 1 1，体积比)柱温-l°C流速1. OOmL/分钟(包括0. 750mL/分钟的流动相和0. 250mL/分钟的组成溶剂， 全部转移至检测器中)进样体积60iiL自动采样器温度3°C实施例8 :VX-950的联合治疗开展VX-950的联合治疗是为了检测VX-950的安全性及其抗病毒应答。具体而 言，该研究包括了 12名受基因1型HCV感染的初次治疗患者。所有患者接受VX-950(750mg q8h)、Peg-IFNa -2a( “PEG-IFN”，每周 180 u g)和 RBV (每天 1000 或 1200mg)，持续 28 天 的时间。28天的研究完成时，患者在其医师的临床护理下开始接受Peg-IFNa _2a和RBV的 后续治疗。在Peg-IFN-2a/RBV治疗中，根据主治医师的判断进行另外的HCV RNA评价。以 上评价包括在研究后治疗的第4周、第8周和第14周及更后的时间点的评价。结果显示，在28天的研究中，VX-950/Peg-IFN/RBV组合耐受性良好并且无严重的 不良事件。所观察到的不良事件概况与用Peg-IFN/RBV联合治疗常见的概况一致。所有患 者证实均对该研究得药物方案有应答，提示VX-950具有快速而显著的抗病毒作用。具体而 言，在给药开始后8天内有2名患者血浆中的HCV RNA达到检测不到的水平(< 10IU/mL， Roche Taqman 测定)，而在28天研究的给药期结束时，所有患者的HCV RNA均检测不 到。在完成28天的研究给药后的后续治疗(用Peg-IFN/RBV)的12周中，有11名患者的 HCV RNA水平仍检测不到。所有患者继续接受Peg-IFN/RBV治疗并依照标准实践对其进行 应答情况的随访。7名患者接受了总计48周的治疗并达到了持续病毒学应答(SVR)。一名 仅接受了 18周Peg_IFN/RBV(总治疗22周)的患者随后中止了治疗，但也达到了 SVR。两 名患者在治疗的12周和24周发生了病毒反弹，这两名患者没有接受随访。总体而言，10名 患者中有8名的结果是有效的，达到了 SVR。研究后给药过程中所观察到的副作用概况与 Peg-IFN/RBV治疗的预期概况一致。观察到有八名患者达到了 SVR，包括1名仅完成了 22周治疗的患者，这提示与当前 疗法相比，基于VX-950的方案可提高SVR比率。对比当前疗法对于患有基因1型的慢性HCV患者，当前疗法通常由仅用聚乙二醇化的干扰素 a -2a/2b (Peg-IFN-2a)和RBV的48周治疗组成，其中仅有约50%患有基因1型HCV的患者实现SVR，而且患者通常显示出对治疗的耐受性差。实施例9 :1b期的研究VX-950作为单一药物或与Peg-IFN-2a联合具有快速而强大的抗病毒活性，并持 续14天耐受性良好。设计了本研究以提供在用VX-950和Peg-IFN-2a治疗14天后的HCV 动力学信息。本研究将二十名患有慢性基因1型丙型肝炎感染的初次治疗患者随机分为三组 (表1)。在完成14天的研究时，20名患者中有19名选择Peg-IFN-2a/RBV，在完成14天的 给药期后的5天内开始；而另外一名患者决定采用Peg-IRN-2a和RBV的组合。在完成第1 周和第12周研究指定的随访后，根据研究者的判断开展复诊(clinicvisit)。在完成研究 给药后的24周内有十九名患者接受了随访。在与主治医师讨论后，有十名(4名用VX-950， 6名用VX-950/Peg-IFN-2a)患者在24周时停止了 Peg-IFN-2a/RBV治疗。患者的进程安排 在以下的表1中示出。表1:患者的安排 在研究后随访的最后一天(研究中最后一次随访后的12周)，最初随机分在单用 VX-950组和VX-950/Peg-IFN-2a组中并且继续用Peg_IFN_2a/RBV治疗的患者的HCV RNA 水平均检测不到。数据提供在下面的表2中。表2 研究后-治疗期间各组中HCV RNA不可检出的情况 aC0BAS Taqman HCV RNA 测定法。Roche Molecular DiagnosticsbTaqman HCV RNA 测定法(15IU/mL)和 5IU/mL)研究后如下面的表3所示，在24周总治疗后停止了研究后的Peg-IFN-2a/RBV治疗的10 名患者中，在4名最初接受了单独VX-950的患者中有2名在停用Peg-IFN-2a后的12周随 访证实血浆中HCV RNA的水平不可检出；在6名最初接受了 VX-950/Peg-IFN-2a的患者中 有5名在停用Peg-IFN-2a后的12周随访证实血浆中HCV RNA水平不可检出。表3 :Peg-IFN-2a/RBV停药后各组中HCV RNA不可检出的情况一名患者选择了 Peg-IFN_2a/RBV。在24周的研究后随访中，最初随机分在VX-950组并继续用Peg-IFN-2a/RBV治疗 的所有患者均保持了 HCV RNA不可检出。早期(12周)治疗后(Peg-IFN-2a/RBV)随访的 病毒载量数据与模型一致，提示达到SVR的所需时间与早期病毒清除的动力学相关。15名 接受了 14天VX-950和任选联合Peg-INF治疗且随后用Peg-INF/RBV再治疗22或46周的 患者中，有10名达到了 SVR。在第12周，接受了最初VX-950与PEG-IFN联用的所有8名患者，以及接受了单独 VX-950的7名患者中的5名，其HCV RNA不可检出。在第24周，接受了 VX-950的全部15 名患者的HCV RNA不可检出。10名患者(8名用PEG-IFN和VX-950中有6名，7名接受单 独VX-950中有4名)选择在第24周停用PEG-IFN/RBV，而5名患者持续用PEG-IFN/RBV治 疗总达48周。所有组再随访24周。在接受了至少14天的VX-950(单独或与PEG-IFN联 用)并随后开始含RBV的PEG-IFN的患者中，10名治疗了 24周的患者中有7名，5名治疗 了 48周的患者中有3名达到了 SVR。本文引用的所有文献，在此处引为参考。其它的实施方案尽管本文描述了大量的本发明的实施方案和实施例，但显而易见的是，可改变这 些实施方案和实施例以提供利用本发明药学制剂和药物方案的另外的实施方案和实施例。 因此，应理解的是本发明的范围是由附加权利要求而非以上的实施例表示的特定的实施方 案来限定的。
权利要求
一种治疗方案，其包括给予约100mg-约1500mg的VX-950，其中每天一次、两次或三次给予所述量的VX-950。
2.权利要求1的治疗方案，其中VX-950的量为约300mg-约1500mg。
3.权利要求1的治疗方案，其中VX-950的量为约300mg-约1250mg。
4.权利要求1的治疗方案，其中VX-950的量为约450mg。
5.权利要求1的治疗方案，其中VX-950的量为约750mg。
6.权利要求1的治疗方案，其中VX-950的量为约1250mg。
7.一种用于治疗或预防患者的丙型肝炎感染的方法，其包括向有需要的患者给予约 IOOmg-约 1500mg 的 VX-950。
8.权利要求7的方法，其中VX-950的量为约300mg-约1500mg。
9.权利要求7的方法，其中VX-950的量为约300mg-约1250mg。
10.权利要求7的方法，其中VX-950的量为约450mg。
11.权利要求 的方法，其中VX-950的量为约750mg。
12.权利要求7的方法，其中VX-950的量为约1250mg。
13.权利要求7-12中任一项的方法，其中每天一次给予所述量的VX-950。
14.权利要求7-12中任一项的方法，其中每天两次给予所述量的VX-950。
15.权利要求7-12中任一项的方法，其中每天三次给予所述量的VX-950。
16.权利要求7-12中任一项的方法，其进一步包括向患者给予免疫调节剂、抗病毒药 物、HCV NS3/4A蛋白酶的另外的抑制剂、HCV生活周期中除NS3/4A蛋白酶之外的靶标的抑 制剂、内部核糖体进入的抑制剂、广谱的病毒抑制剂、细胞色素P-450的另外的抑制剂、病 毒进入细胞的抑制剂或其组合。
17.权利要求16的方法，其中所述免疫调节剂为α、β或Y干扰素或胸腺素；所述抗 病毒药物为利巴韦林、金刚烷胺或替比夫定；而HCV生活周期中另外的靶标的抑制剂为HCV 的解旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。
18.一种用于治疗受丙型肝炎病毒感染的患者的方法，其包括向有需要的患者每天三 次，每8小时一次给予约750mg的VX-950。
19.一种用于治疗受丙型肝炎病毒感染的患者的方法，其包括向有需要的患者给予能 有效使血浆中丙型肝炎病毒RNA减少至少约21og1(1的量的VX-950。
20.权利要求19的方法，其中VX-950的量能有效使血浆中丙型肝炎病毒RNA减少至少 约 41og10。
21.权利要求19的方法，其中VX-950的量能有效使血浆中丙型肝炎病毒RNA降低至检 测不到的水平。
22.一种用于治疗受丙型肝炎病毒感染的患者的方法，其包括向有需要的患者给予能 有效达到持续病毒学应答的量的VX-950。
23.权利要求22的方法，其中所述患者感染了基因1型丙型肝炎病毒。
24.一种用于治疗患者的肝损伤、肝炎、脂肪变性、脂肪肝、NAFLD、NASH、酒精性脂肪变 性或雷亥综合征的方法，其包括向有需要的患者每天给予约1350mg、约2250mg或约2500mg 的 VX-950。
25.权利要求24的方法，其中每天每8小时给予约450mg或约750mg的VX-950，或每天每12小时给予约1250mg的VX-950。
26.一种用于保护患者肝脏的方法，其包括向有需要的患者每天给予约1350mg、约 2250mg 或约 2500mg 的 VX-950。
27.权利要求26的方法，其中每天每8小时给予约450mg或约750mg的VX-950，或每 天每12小时给予约1250mg的VX-950。
28.一种用于降低患者的ALT水平的方法，其包括向有需要的患者给予治疗有效量的 VX-950。
29.权利要求28的方法，其中向患者每天给予约1350mg、约2250mg或约2500mg的 VX-950。
30.权利要求29的方法，其中每天每8小时给予约450mg或约750mg的VX-950，或每 天每12小时给予约1250mg的VX-950。
31.权利要求28-30中任一项的方法，其中患者感染了HCV。
32.权利要求28-30中任一项的方法，其中患者未感染HCV。
33.一种用于向有需要的患者提供VX-950的方法，其包括向患者给予含有VX-950的剂 型，其中在给药后，所述剂型向患者提供的VX-950的平均血药浓度为至少约750ng/mL。
34.权利要求33的方法，其中在给药后，VX-950的平均血药浓度为约750ng/mL-约 1250ng/mL。
35.权利要求34的方法，其中在给药后，VX-950的平均血药浓度为约lOOOng/mL。
36.权利要求33-35中任一项的方法，其中VX-950在给药后3小时内获得或达到了其 平均血药浓度。
37.权利要求36的方法，其中VX-950在给药后2小时内获得或达到了其平均血药浓度。
38.权利要求37的方法，其中VX-950在给药后1小时内获得或达到了其平均血药浓度。
39.权利要求33-38中任一项的方法，其进一步包括在24小时内维持VX-950的血浆谷 值水平为约 750ng/mL-约 1500ng/mL。
40.一种治疗受HCV感染的患者的方法，其包括向有需要的患者给予包含在24小时内 有效的VX-950的剂型，其中给予所述剂型以在24小时内维持VX-950的血浆谷值水平为约 750ng/mL-约 1500ng/mL。
41.权利要求40的方法，其中给予所述剂型以在24小时内维持VX-950的血浆谷值水 平为约 1000ng/mL-约 1500ng/mL。
42.权利要求40-41中任一项的方法，其中所述剂型包含约750mg的VX-950。
43.权利要求40的方法，其中该剂型每天三次给药。
44.权利要求33-43中任一项的方法，其中在约12周内维持VX-950的平均血药浓度或 谷值水平。
45.权利要求7-44中任一项的方法，其进一步包括给予干扰素或利巴韦林的步骤。
46.权利要求45的方法，其中所述干扰素为聚乙二醇化干扰素。
47.权利要求45或46的方法，其中以约180u g/mL的量给予干扰素。
48.一种药物制剂，其包含VX-950、聚乙烯吡咯酮烷和十二烷基硫酸钠。
49.权利要求48的药物制剂，其中所述聚乙烯吡咯酮烷为聚维酮K29/32。
50.一种治疗方案，其包括在持续少于约12周时间的初始阶段内给予VX-950。
51.权利要求50的治疗方案，其进一步包括在第二阶段内给予聚乙二醇化干扰素，其 中所述第二阶段发生在初始阶段之后并持续少于36周时间。
52.权利要求50的治疗方案，其进一步包括在初始阶段给予连同VX-950的聚乙二醇化 干扰素。
53.权利要求50的治疗方案，其进一步包括在初始阶段给予连同VX-950和聚乙二醇化 干扰素的利巴韦林。
54.权利要求50的治疗方案，其进一步包括在第二阶段给予利巴韦林与聚乙二醇化干扰素。
全文摘要
本发明涉及用于治疗或预防患者的丙型肝炎感染的抗病毒疗法和组合物，并且涉及本文公开的其它方法。本发明还涉及包含该组合物和剂型的药盒和药物包装。本发明还涉及制备这些组合物、剂型、药盒和包装的方法。
文档编号A61P31/14GK101854936SQ200880025665
公开日2010年10月6日 申请日期2008年5月21日 优先权日2007年5月21日
发明者A·D·邝, B·S·艾迪威贾亚, J·J·阿拉姆, L·麦奈尔, R·S·考夫曼, T·L·基弗, V·加格 申请人:弗特克斯药品有限公司