专利名称：：喹唑啉类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种新的喹唑啉类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为蛋白质激酶抑制剂的用途。
背景技术：
：细胞的信号传导是一种基础的作用机制，在信号传导过程中，来自细胞外的剌激被传递到细胞内部，进而调节不同细胞的进程。这些信号可调节多种生理响应，包括细胞增殖、分化、凋亡和运动等，它们以不同种类溶解因子形式存在，包括以旁分泌因子、自分泌因子和内分泌因子为主的生长因子。通过与特定跨膜受体结合，生长因子配体将细胞外信号传递到细胞内信号途径，从而引起个体细胞对细胞外信号的反应。很多信号传递过程是利用蛋白磷酸化的可逆过程，涉及到特定蛋白激酶和磷酰化酶。蛋白激酶(PKs)是对蛋白质的酪氨酸、丝氨酸、苏氨酸残基上的羟基的磷酸化起催化作用的酶。在信号传导过程中，蛋白激酶和磷酰化酶的反向机制能够平衡和调节信号流。一个蛋白质磷酸化状态能影响其构象、酶的活性、细胞定位，蛋白激酶和磷酸酶的相应作用被修改，磷酰化在信号传导中是一个重要的调节机制，在信号传导过程中的异常会导致细胞的非正常分化、转化和生长。例如，细胞可通过将其一部分DNA转化为致癌基因而成为癌细胞，酪氨酸激酶就是这样的致癌基因所编码的生长因子受体蛋白；酪氨酸激酶还可以突变为活化形式而导致多种人类细胞的变异，也可以说，过度表达的正常酪氨酸激酶可以引起不正常细胞增殖。酪氨酸激酶(PKs)可以方便地分成两类蛋白酪氨酸激酶(PTKs)和丝氨酸-苏氨酸激酶(STKs)。PTKs使蛋白质上的酪氨酸残基磷酸化，STKs使蛋白质上的丝氨酸、苏氨酸残基磷酸化。酪氨酸激酶不仅可以是受体型(包括细胞外域、细胞内域和跨膜细胞域)还可以是非受体型(包括全部细胞内域)。PTK活性的一个主要方面是它们涉及到作为细胞表面蛋白生长因子受体。具有PTK活性的生长因子受体被称为受体酪氨酸激酶("RTKs")，在人类基因中90种酪氨酸激酶被识别，其中约60种是受体型，约30种是非受体型，这些生长因子受体家族可进一步分为20种受体酪氨酸激酶亚族和10种非受体酪氨酸激酶亚族(Robinson等，Oncogene,2000，19，5548-5557)。RTKs亚族包括以下几种:(l)EGF族，如EGF，TGFa，Neu和erbB等;(2)胰岛素家族，包括胰岛素受体、胰岛素样生长因子I受体(IGF1)和胰岛素受体相关性受体(IRR));(3)11I型家族，如血小板衍生生长因子受体(PDGF，包括PDGFa和PDGFP受体)、干细胞因子RTKs(SCFRTK，通常称作c-Kit)、fms-相关酪氨酸激酶3(Flt3)受体酪氨酸激酶和集落剌激因子1受体(CSF-1R)酪氨酸激酶等。它们在控制细胞生长及分化方面起着关键的作用，也是导致产生生长因子和细胞因子的细胞信号的关键传递者(参见SchlessingerandUllrich,Neuron1992，9，383)。一部分非限制性激酶包括Abl，ARaf，ATK，ATM,bcr-abl，Blk，服af，Brk，Btk，CDK1，CDK2，CDK3，CDK4，CDK5，CDK6，CDK7，CDK8，CDK9，CHK，AuroraA，AuroraB，AuroraC，cfms，c—fms，c—Kit，c—Met，cRafl，CSF1R，CSK，c—Src，EGFR，ErbB2，ErbB3，ErbB4，ERK，ERK1，ERK2，Fak，fes，FGFR1，FGFR2，FGFR3，FGFR4，FGFR5，Fgr，FLK-4，Fps，Frk，Fyn，GSK，gsk3a，gsk3b，Hck，Chk，Axl，Pim-l，Plh-l，IGF—1R，IKK，IKK1，IKK2，IKK3，INS-R，Integrin-linkedkinase,Jak，JAK1，JAK2，JAK3，JNK，JNK，Lck，Lyn，MEK，MEK1，MEK2，p38，PDGFR，PIK，PKB1，PKB2，PKB3，PKC，PKCa，PKCb，PKCd，PKCe，PKCg，PKC1，PKCm，PKCz，PLK1，Polo-likekinase,PYK2，tiel，tie2，TrkA，TrkB，TrkC，UL13，UL97，VEGF-R1，VEGF-R2，Yes和Zap70等。人们认为PKs与中枢神经系统疾病如老年痴呆症(参见Mandelkow，E.M.等FEBSLett.1992,314,315;Sengupta，A.等Mol.Cell.Biochem.1997，167,99)、痛感(参见Yashpal，K.J.Neurosci.1995，15，3263-72)、炎症例如关节炎(参见Badger,J.PharmnExp.Ther.1996，279，1453)、牛皮癣(参见Dvir，等，J.CellBiol.1991，113,857)、骨骼疾病例如骨质疏松(参见Tanaka等，Nature，1996，383，528)、癌症(参见HunterandPines，Cell1994，79，573)、动脉硬化症(参见HajjarandPomerantz，FASEBJ.1992，6，2933)、血栓症(参见Salari，FEBS1990，263，104)、代谢紊乱如糖尿病(参见Borthwick，A.C.等Biochem.Biophys.Res.Co匪n.1995,210,738)、血管增生性疾病如血管生成(参见Strawn等CancerRes.1996,56,3540;Jackson等J.Pharm.Exp.Ther.1998,284,687)、自身免疫疾病和移植排斥反应(参见BolenandBrugge，Ann.Rev.Immunol.1997，15，371)、传染病如病毒(参见Littler,E.Nature1992,358,160)和真菌感染(参见Lum，R.T.PCTIntAppl.，W09805335A1980212)等疾病的靶点有密切的联系。PTKs信号传导过程中，特定生长因子(配体)之间在细胞外相互作用，随后受体二聚，瞬间内激活蛋白激酶的内在活性，并进行磷酰化。内部信号传导分子的结合位点产生，生成了与细胞质信号分子的复合物，促进各种细胞应答例如细胞分裂(增殖)，对胞外微环境代谢作用的表达等。受体酪氨酸激酶磷酰化的结合位点也是与信号传导分子SH2(与src同源)域具有高度亲和力的结合位点。很多与受体酪氨酸激酶相关的细胞内底物蛋白已被确定，可分为两类(l)有催化区底物(2)无催化区底物，但可作为结合体，且与某些有催化活性的分子相关。受体或蛋白与底物SH2域相互作用的特异性是通过靠近磷酰化酪氨酸残基的氨基酸序列来确定的，SH2域与磷酰化酪氨酸序列周围的氨基酸序列与特定受体结合的差异性与底物磷酰化的差异性是一致的。蛋白酪氨酸激酶机能可通过表达模式和配体可用性来确定，也可由特定受体激活的下游区信号传导路径来确定。因此，磷酰化提供了一个重要可调节的步骤，此步骤可确定由特定受体激活的信号传导的选择性和分化因子受体。受体酪氨酸激酶的非正常表达或突变可能导致不可控制的细胞增殖(如恶性肿瘤生长)或关键发展过程的缺失等。酪氨酸激酶，在大部分人类肿瘤，如白血病、乳腺癌、前列腺癌、非小细胞肺癌(包括腺癌、肺鳞状上皮细胞癌)、胃肠癌(包括结肠癌、直肠癌和胃癌)、膀胱癌、食管癌、卵巢癌、胰腺癌等癌症中，都会出现突变或过度表达。通过对人类肿瘤细胞进行检测，酪氨酸激酶广泛性与关联性进一步得到了确认。例如在人类癌症包括肺癌、脑癌、颈癌、胃肠癌、乳腺癌、食管癌、卵巢癌、子宫癌、膀胱癌和甲状腺癌中，EGFR酪氨酸激酶会发生突变和过度表达。〃HER"或"Erb"受体酪氨酸激酶亚族包括EGFR，HER2，HER3和HER4。这些亚族由胞外糖基化配体结合域、跨膜域及可将蛋白质上的酪氨酸序列进行磷酰化的胞内细胞质催化域所组成。受体酪氨酸激酶催化活性可通过受体过度表达或配体介导二聚合被激活。HER2家族聚合体有同型二聚体和异型二聚体两种形式。同型二聚化的一个例子是HER1(EGFR)与EGF家族配体(包括EGF，转化生长因子a，betacellulin，与肝磷脂结合的EGF，印iregulin)的聚合，四种HER酪氨酸激酶之间的异型二聚合可通过与heregulin(也叫neuregulin)家族配体的结合被加速。虽然HER3的受体之一没有酶活性，但HER2与HER3，或HER3与HER4的异型二聚也可显著地剌激酪氨酸激酶受体二聚合。在各种类型细胞中，受体过度表达可激活HER2激酶的活性。受体同型二聚体和异型二聚体的激活可将受体和其他细胞内蛋白质酪氨酸序列进行磷酰化，随后细胞内信号途径如微管相关蛋白激酶(MAP激酶)和磷脂酰肌醇(_3)激酶(PI3激酶)也被激活，这些信号途径的激活促使细胞增殖，抑制细胞调亡。RTK另一个亚族包括胰岛素受体(IR)，胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)，胰岛素受体相关受体(IRR)。IR，IGF-1R与胰岛素，IGF-I和IGF-II相互作用，生成了由两种完全胞外糖基化a亚基和两个穿过细胞膜且含有酪氨酸激酶域13亚基构成的异四聚体。RTK第三个亚族是指血小板源生长因子受体(PDGFR)族，其中包括PDGFRa，PDGFRP，CSFIR，c-Kit和c-fms。这些受体由含有各种免疫球蛋白样环糖基化胞外域和一个胞外域所组成，其中胞内域中酪氨酸激酶区被不相关的氨基酸序列阻断。血小板源生长因子受体，如PDGFRa和PDGFRP等也是跨膜酪氨酸激酶受体。当它们与配体相结合时，或形成同型二聚物(PDGF-AA，PDGF-BB)，或异型二聚物(PDGF-AB)。随后受体二聚，酪氨酸激酶被活化，向下游区发信号来促进肿瘤生长。基因突变是受体不依赖于与配体结合而被激活的原因，也是肿瘤生成的驱动力。在多种不同的肿瘤细胞株内，特别是乳房癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、肉瘤和胶质瘤的细胞中，都发现能够激活PDGFR生长因子-PDGF的表达，其中脑瘤，前列腺癌(包括腺癌和骨转移癌)恶性神经胶质过多症有研究价值。c-Kit是PDGF受体家族的成员，当其与配体SCF(干细胞因子)相结合时，活性被激活。在各种不同的实体瘤中对c-Kit表达模式进行了研究，在肉瘤，胃肠道胶质瘤(GIST)，精原细胞瘤和类癌瘤中，c-Kit有过量表达。[参见Weber等，J.Clin.Oncol.22(14S)，9642(2004)]。GIST是一种非上皮细胞瘤，大多数存在于胃部，少数分布于小肠，在食道中存在很少，也有分布在肝、腹膜腔等部位。GIST源于Caial间质细胞(ICC)，ICC可部分形成肠自主神经系统，参与控制胃动力。大多数(5080%)GIST产生是由于c-Kit基因发生突变，在消化道内，c-Kit/CD117染色阳性的一般都为GIST，c-Kit突变能够使其不依赖于SCF激活便具有c-Kit机能，从而使细胞分裂率增加，导致基因组的不稳定。在畸变肥大细胞瘤、肥大细胞增生病、骨髓增生综合征、荨麻疹等疾病中，也可检测到c-Kit的表达，在急性AML和恶性淋巴瘤中也有c-Kit的表达，在小细胞支气管癌、精原细胞瘤、无性细胞瘤、睾丸、上皮内瘤样变、黑素瘤、乳房癌、成神经细胞瘤、尤因肉瘤都有c-Kit表达(参见Schtitteetal.，i翻vartis3/2001)。众所周知，RET(rearrangedduringtransfection)。原癌基因点遗传突变是致瘤的，患有多发性内分泌腺瘤病2(MEN2)病人可能会导致患有嗜铬细胞瘤、甲状腺髓样癌和甲状旁腺腺瘤和增生等病症(见Huangetal.，CancerRes.60，6223-6(2000))。因胎肝激酶(Flk)受体亚族与PDGFR亚族很相似，有时被归于该族。此亚族由含6激酶插入域_受体胎肝激酶-I(KDR/FLK-1，VEGFR2)、Flk-1R，Flk-4和fms样酪氨酸激酶l(Flt-l)所组成。酪氨酸激酶生长因子受体家族的另外一个成员是成纤维细胞生长因子(FGF)受体亚族。此亚族由四个受体，FGFRl-4、七个配体和FGFl-7组成。虽然目前尚未确定，但这些受体是由包含各种免疫球蛋白样环糖基化的一个胞外域和一个其中酪氨酸激酶序列被不相关的氨基酸序列所阻断的细胞内域组成。酪氨酸激酶生长因子受体家族的另外一个成员是血管内皮生长因子(VEGF)受体亚族。与PDGF相似，VEGF是二聚糖蛋白，但生物学功能和体内靶细胞特异性不同。特别是，VEGFR与血管生成有关，通过抑制VEGFRs来抑制血管生成，正应用于临床治疗肿瘤，且取得了较好疗效。VEGF在各种恶性实体肿瘤中，如肺癌、乳腺癌、非霍奇金恶性淋巴瘤、卵巢癌、胰腺癌、恶性胸膜间皮瘤和黑素瘤有强烈表达，且与癌变进程相关，在白血球过多症和淋巴瘤中也有表达。除了其血管生成活性，VEGFR，VEGF配体也可以通过在肿瘤细胞内直接通过pro-survival性质促进肿瘤生长，PDGF也具有血管生成作用。新生血管生成的过程对于肿瘤持续生长起着关键作用，正常情况下，新生血管的生成在人的生理过程如胚胎生长、伤口愈合和女性生殖的各个过程都是非常重要的。然而，非预料或者病理学上的血管生成却与疾病的一系列状态相关，如糖尿病视网膜病、牛皮癣、癌症、类风湿性关节炎、动脉粥样化、卡波济(氏)肉瘤和血管瘤等。血管内皮细胞的生成激活血管生成，具有剌激体内血管内皮细胞的生成活性的一些多肽已经被确认，包括酸性、碱性的成纤维细胞生长因子(aFGFandbFGF)和血管内皮生长因子。由于VEGF受体的限制表达，其生长因子的活性与aFGFandbFGF活性相比，对内皮细胞相对来讲具有特异性。最近的证据表明，VEGF在正常情况和病理学情况下的血管生成和血管渗透过程中，都是非常重要的剌激剂。VEGF能够诱导血管萌芽表型，它诱导内皮细胞增殖、蛋白酶的表达和迁移来促进毛细血管生成，从而形成超渗透、不成熟的血管网络，这是典型的病理学血管生成的典型特征。人们期望拮抗VEGF活性在治疗与血管生成作用或者血管渗透性相关的疾病如肿瘤特别是抑制肿瘤生长能够有应用的价值。FLT3(Fms样酪氨酸激酶)是酪氨酸激酶(PTK)Ill型家族成员，在成人和幼儿急性髓细胞样白血病(AML)、急性髓细胞样白血病、骨髓增生异常综合征等白血球过多症中，FLT3基因非正常表达。35%的急性髓细胞样白血病病人的FLT3突变被激活且预后不良，大多数的突变都有在近膜域的结构内复制的现象，5-10%的病人天冬酰氨835发生点突变，FLT3的酪氨酸激酶活性被激活，致使在配体缺失的情况下也有信号存在且发生增殖。据研究，有突变形式受体表达的患者治愈的几率降低。总之，在人白血球过多症和骨髓增生异常综合征中，FLT3突变都与肿瘤的发生相关。经证实肝细胞生长因子(HGF)受体(c-MET或HGFR)酪氨酸激酶与肿瘤生成、增强细胞运动性、侵袭和转移密切相关(参见Ma，P.C等(2003b).CancerMetastasisRev，22，309-25;Maulik，G.等(2002b)CytokineGrowthFactorRev，13，41-59)。各种肿瘤包括小细胞肺癌(SCLC)中的过度表达或突变可激活c-MET(HGFR)(参见Ma，P.C.等(2003a).CancerRes，63，6272-6281)。原癌基因c-Met编码肝细胞生长因子受体，是具有酪氨酸激酶活性的细胞膜糖蛋白，对多种细胞增殖、分化具有重要的生理调节作用.c-met基因在许多恶性肿瘤中过表达，是甲状腺滤泡上皮细胞癌变的重要因素，并与甲状腺癌的病理分期、侵袭及转移密切相关。关于PKT亚族，Plowman等在DN&P7(6):334-339(1994)中有更为详细描述，该文献作为一整体通过引用结合到本文中。除了PTKs以外，还存在另外的细胞酶家族，称作受体酪氨酸激酶抑制剂，并在此使用后一名称，縮写为"CTK"。CTKs本身缺少细胞外域和跨膜域。目前，已经在ll个亚族(Src，Frk，Btk，Csk，Abl，Z即70，Fes/Fps，Fak，Jak，Ack禾口L皿)中已经鉴定超过24种CTKs。在目前为止，Src亚族CTKs数目似乎最多，包括Src，Yes，Fyn，Lyn，Lck，Blk，Hck，Fgr和Yrk，且Src亚族酶与肿瘤生成有关。关于CTKs更为详尽的描述，可参见iBolen，1993，Oncogen8:2025-2031，其全文包括任何附图作为一整体提出，通过引用结合到本文中。与CTKs相类似，丝氨酸-苏氨酸激酶或STKs，在细胞内占据主导地位，虽然仅有几种STK型受体激酶。STKs是最普遍的细胞溶质激酶，即它发挥其功能在部分细胞质中，而不是在胞质细胞器中。胞质溶胶是细胞内一个区域，在此大多数细胞中间代谢和生物合成活性发生；如蛋白质是在胞质溶胶核糖体上进行合成的。与过度增殖相关疾病如癌症等的特征之一是对细胞传导途径进行破坏，细胞传导途径通过细胞周期来控制进程。在真核细胞中，细胞周期与蛋白质的磷酰化有序的级联反应密切相关，在信号传导的机制中，PKs很多家族似乎在细胞分裂周期级联中都起着关键的作用。关于癌症，提出两个主要的假设解释过度细胞增殖，该增殖驱动是与已知由PK调节的功能相关的肿瘤发展。即，人们觉得恶性肿瘤生长是由于控制细胞分裂或增殖的机制被破坏引起的。原癌基因蛋白质产物能够干扰调节细胞生长和增殖的信号传导途径，这些原癌基因的蛋白质产物包括上面讨论的细胞外生长因子，跨膜生长因子PTK受体(RTKs)，细胞质PTKs(CTKs)和细胞溶质STKs。人们期待着能够合成具有抗肿瘤细胞增殖活性的抑制剂，希望能够抑制PTKs、CTKs或者STKs中的一种或者多种，有效地治疗和改善由PTKs、CTKs或者STKs以及血管生成作用介导的超增殖生理紊乱。
发明内容为了克服现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的新的喹唑啉类化合物，以及它们的互变异构体、对映体、非对映体、消旋体和药学上可接受的盐，以及代谢产物和代谢前体或前药。其中!^选自氢原子和烷基，其中烷基任选地进一步被一个或多个选自羟基、_S02R:8或_NR3R4的取代基所取代；&选自烷基；&和14各自选自烷基，或者13和14可以进一步形成56元杂环，其中5或S原子。本发明的优选化合物包括，但不限于6元杂环内含有一个或多个N、0序号结构名称1[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-[6-(lH-吡咯-3-基)-喹唑啉-4-基]-胺20J^lfO"^^[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基H6-[l-(2-甲磺酰基-乙基)-lH-吡咯-3-基]-喹唑啉-4-基}-胺-喹唑啉-4-基}-胺4[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基H6-[l-(2-二乙氨基乙基)-lH-吡咯-3-基]-喹唑啉-4-基}-胺9、^^ojO1-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯氨基]-喹唑啉-6-基}-吡咯-1-基)-3-吗啉-4-基-丙-2-醇6"X01-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯氨基]-喹唑啉-6-基}-吡咯小基)-3-二乙氨基-丙-2-醇其中，所述的盐为上述化合物与选自以下的酸形成的盐苹果酸、乳酸、马来酸、盐9酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸或三氟乙酸。本发明的一个方面是提供一种药物组合物，含有通式(I)所示的化合物、其药学上可接受的盐或其前药和药学上可接受的载体或赋形剂。所述药物组合物在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途。本发明的另一个方面是提供一种蛋白激酶催化活性的调节方法，包括使蛋白激酶与通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐相接触。所述蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶和丝氨酸_苏氨酸激酶。本发明的另一个方面是提供一种制备通式(I)的化合物或其药学上可接受盐的方法，所述方法包括以下步骤碘代喹唑啉化合物与l-(三异丙基硅烷基)-lH-吡咯-3-基硼酸进行Suzuki偶联，得到的化合物1在碱性条件下与卤代化合物RJ进行取代反应，或在氢化钠条件下，与消旋环氧氯丙烷反应再进一步与NHiy^进行开环反应，得到通式(I)化合物。得到通式(I)化合物。本发明的另一个方面是提供一种制备通式(I)的化合物或盐的方法，所述方法包括以下步骤吡咯硼酸酯与卤代化合物RJ或与甲磺酰基乙烯反应，得到的1位取代的吡咯硼酸酯与碘代喹唑啉化合物进行Suzuki偶联得到通式(I)化合物。本发明的另一个方面是提供通式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途。所述蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶或丝氨酸_苏氨酸激酶。本发明的另一个方面是提供含有通式(I)化合物或其药学上可接受盐的组合物在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途。所述蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶或丝氨酸_苏氨酸激酶。发明的详细说,明除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。"烷基"指饱和的脂族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有l至10个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。更优选的是含有l至4个碳原子的低级烷基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是被取代基取代的或未取代的，当被取代基取代时，取代基优选为一个或多个，独立地选自羟基、_S02R2或_NR3R4。"任选"或"任选地"意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，"任选被烷基取代的杂环基团"意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。"药物组合物"表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/药学上可接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。輛日月仆洽麵始成方fe为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案本发明通式(I)化合物或其盐的制备方法，包括以下步骤<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>方案I吡咯la与三异丙基氯硅烷反应，得到的1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯lb经溴代反应，得到lc再与硼酸三甲酯反应得到l-(三异丙基硅烷基)-lH-吡咯-3-基硼酸ld;6-碘-3H-喹唑啉-4-酮le与三氯氧磷反应后，再与3-氯_4_(吡啶-2-甲氧基)_苯胺lf反应得到的化合物lg与l-(三异丙基硅烷基)-lH-吡咯-3-基硼酸ld进行Suzuki偶联得到化合物1;化合物1与卤代化合物IV(在碱性条件下进行取代，或在氢化钠条件下与消旋环氧氯丙烷反应再进一步与NHiy^进行开环反应，得到通式(I)化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>方案II3-吡咯硼酸酯与卤代化合物或与甲磺酰基乙烯反应，得到的1-位取代吡咯硼酸酯与化合物lg进行Suzuki偶联得到通式(I)化合物。具体实施方式实施例化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或质谱(MS)来确定的。NMR位移(S)以百万分之一(卯m)的单位给出。NMR的测定是用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氖代氯仿(CDC1》、氖代甲醇(CD30D-d4)和氖代二甲基亚砜(DMSO-De)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10—e(卯m)作为单位给出。MS的测定用FINNIGANLCQAd(ESI)质谱仪。激酶VEGFR平均抑制率的测定使用HTScan酶标仪(CellSignaling公司)。激酶EGFR/HER-2平均抑制率的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。薄层硅胶使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200300目硅胶为载体。实施例中无特殊说明，反应均在氮气氛下进行。氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。制备实施例实施例1「3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基1-「6-(lH-吡咯-3-基)-喹唑啉-4-基1-胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯在2L三口烧瓶中加入60X氢化钠与矿物油混合物(33.6g，0.84mol)，少量正己烷洗涤后抽取正己烷，向其中加入500mL新蒸的四氢呋喃和500mL干燥的乙腈，冷却至低于0°C，恒压漏斗缓慢滴加吡咯la(46.96g，0.7mol)，有大量气体放出。滴加完毕后，在室温下反应0.5小时基本无气体生成。在Ot:下向三口瓶中加入三异丙基氯硅烷(134.97g，0.7mol)，生成少量黄褐色烟雾，室温过夜。反应液中加入50mL水淬灭反应，悬蒸出大部分溶剂后用乙酸乙酯萃取(200mLX4)，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓縮得到的红棕色油状物放置于冰箱结晶，将得到的粗品用减压柱层析(洗脱剂正己烷)提纯，得到1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯lb(125g，无色透明油状液体)，产率79.9%第二步3-溴-1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯在1L三口瓶中将l-三异丙基硅烷基-lH-吡咯lb(60g，0.268mol)溶于新蒸的四氢呋喃中，氩气置换空气，在干冰_丙酮浴冷却至_78°C，分批加入N-溴代琥珀酰亚胺(47.8g，0.268mol)，保持该温度继续反应1小时，然后在室温下反应1小时。在反应液中加入100mL水淬灭反应。减压下浓縮溶剂，得到的残留物用正己烷萃取，合并的有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓縮，将得到的粗品用减压柱层析(洗脱剂正己烷)提纯，得到3-溴1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯lc(63g，无色油状液体)，产率77.8%。第三步1-(三异丙基硅烷基)-1H-吡咯-3-基硼酸在100mL三口烧瓶中将3-溴-l-三异丙基硅烷基-lH-吡咯lc(2.32g，7.67mmol)溶于40mL干燥的四氢呋喃中，在干冰-丙酮浴冷却下，温度降至-70°C，滴加叔丁基锂(9.2mL，19.18,1)，滴加完毕后，保持-70°C搅拌30分钟，滴加硼酸三甲酯(1.75mL，15.37mmol)，滴加完毕后，于-l(TC下搅拌2小时后，向三口烧瓶中加入2mL甲醇和2mL水的混合液，升至室温，倒入20mL水，分出有机层，水层用乙酸乙酯萃取(20mLX3)，合并的有机相依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓縮，得到的产物1-(三异丙基硅烷基)-lH-吡咯-3-基硼酸ld不经分离直接进行下一步反应。第四步[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-(6-碘喹唑啉_4_基)-胺6-碘-3H-喹唑啉-4-酮le(5g，18.3,1，根据W02002002552制备)溶于50mL二氯亚砜和0.5mLN，N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，加热回流至反应液透明。搅拌6小时后，薄层分析跟踪原料消失，蒸出二氯亚砜，备用。将备用中间体溶于160mL异丙醇中，加入3_氯_4_(吡啶_2_基甲氧基)-苯胺lf(4.25g，18.2mmol，根据W02006127207制备)，加热回流过夜。薄层分析跟踪至原料消失，将反应液冷却至室温，减压抽滤，将所得固体用5mL甲醇溶解稀释后加入氨水(200mL，体积比为l:1)，调节pH值至89，冰水浴冷却后抽滤，干燥，得到[3-氯-4-(吡啶-2-甲氧基)-苯基]-(6-碘喹唑啉-4-基)-胺lg(8g，类白色固体)。产率89.6%。MSm/z(ESI):489[M+1]'匪R(400MHz，DMS0-d6):S9.78(s，1H)，8.60(d，3H)，8.16(d，1H，J=9.2Hz)，8.04(m，1H)，7.89(m，2H)，7.76(d，1H，J=9.2Hz)，7.59(m，3H)，7.38(t，1H)，7.31(d，1H，J=8.8Hz)，6.38(s，2H)，5.31(s，2H)第五步[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-[6-(1H-吡咯_3_基)-喹唑啉_4_基]-胺在50mL茄形瓶中将[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)-苯基]-(6-碘-喹唑啉-4-基)-胺lk(3g，6.14,1)，1-(三异丙基硅)-1H-妣咯-3-硼酸Id(1.64g，6.14,1)，四三苯基膦化钯(710mg，0.614mmo1)和碳酸钾(2.54g，18.42mmo1)溶于55mLN，N-二甲基甲酰胺和8mL水的混合溶剂中，得到的混合物加热到55°C，搅拌过夜。将反应液冷却至室温，倒入200mL冰水中，析出白色固体，搅拌5分钟后，用二氯甲烷萃取反应液(80mLX4)，合并的有机相依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓縮，得到的固体进一步通过柱层析(二氯甲烷甲醇=80:1)分离纯化，得到标题产物[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-[6-(lH-吡咯-3-基)-喹唑啉-4-基]-胺1(1.2g，浅黄色固体)。产率45.7%。MSm/z(ESI):428[M+1]丄匪R(400MHz，DMS0_d6):S11.08(s，1H)，9.68(s，1H)，8.62(s，1H)，8.57(s，1H)，8.50(s，1H)，8.09(d，1H，J=8.8Hz)，8.05(s，1H)，7.90(m，1H)，7.76(d，1H，J=8.8Hz)，7.71(d，1H，J=8.8Hz)，7.61(d，1H，J=7.6Hz)，7.45(s，1H)，7.38(m，1H)，7.31(d，1H，J=8.8Hz)，6.90(s，1H)，6.70(s，1H)，5.31(s，2H)实施例2「3-氯-4-(吡啶-2-某甲氧某)-苯某]-{6-「1-(2-甲磺酰某-乙某)_1H_吡咯-3-某y喹唑啉-4-某卜胺第一步3-(4，4，5，5_四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷_2_基)_1_(三异丙基硅烷基)-1H-吡咯在250mL三口烧瓶中将50%的3-溴1-三异丙基硅烷基-1H-吡咯lc(10g，16.5mmo1)溶于100mL四氢呋喃中，在干冰-丙酮浴中冷却至_78°C，加入正丁基锂(15.8g，39.7mo1)，保持该温度反应0.5小时，加入2-异丙氧基_4，4，5，5-四甲基-[l，3，2]二氧杂环戊硼烷(4mL，19.8mmo1)，继续在-78t:反应2小时，薄层分析跟踪至原料消失，加入10mL甲醇和10mL水的混合溶剂，将反应液倒入200mL冰水中，用乙酸乙酯萃取(100mLX4)，合并的有机相依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓縮，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(正己烷乙酸乙酯=50:1)，得到标题产物3-(4，4，5，5-四甲基-[l，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1-(三异丙基硅烷基)-1H-吡咯2a(1.7g，白色固体)，产率29.5%。MSm/z(ESI):349.3[M+1]第二步3_(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷_2_基)_1H_吡咯在lOOmL茄形瓶中将3-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-l-(三异丙基硅烷基)-lH-吡咯2a(500mg，1.43mmo1)溶于10mL四氢呋喃中，冰浴冷却至Ot:，加入1M四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1.43mL，1.43mmol)，反应液升至室温反应2小时，薄层分析跟踪至原料消失，将反应液倒入50mL冰水中，用乙酸乙酯萃取(50mLX4)，合并的有机相依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓縮，得到的粗品3-(4，4，5，5-四甲基-[l，3，2]二氧杂环戊硼烷_2_基)普吡咯2b(600mg，黑色油状液体)，产率:100%。MSm/z(ESI):193[M+1]第三步l-(2_甲磺酰基乙基)_3-(4，4，5，5-四甲基_[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)_111-妣咯在lOOmL茄形瓶中将3-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-lH-吡咯2b(276mg，1.43mmo1)溶于10mL乙腈中，依次加入碳酸钾(600mg，4.3mmo1)，甲磺酰基乙烯(228mg，2.lmmol)，加热回流搅拌过夜。薄层分析跟踪至原料消失，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗三次，滤液减压浓縮，得到的粗产物1-(2-甲磺酰基-乙基)-3-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷_2-基)-1H-吡咯2c不经分离直接进行下一步反应。MSm/z(ESI):299.18[M+]第四步[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-{6-[1-(2-甲磺酰基-乙基)-1H-吡咯_3-基]-喹唑啉-4-基}-胺将l-(2-甲磺酰基乙基)_3-(4，4，5，5-四甲基_[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡咯2c(299mg，lmmol)，[3-氯-4-(吡啶-2-甲氧基)-苯基]-(6-碘喹唑啉-4-基)-胺lk(500mg，lmmol)，碳酸钾(415mg，3mmo1)和四三苯基膦钯(116mg，0.lmmol)溶于10mLN，N-二甲基甲酰胺和2mL水的混合溶剂中，反应液加热至8(TC搅拌过夜。薄层分析跟踪至原料消失，将反应液倒入75mL冰水中，用二氯甲烷/甲醇(10:l))萃取(50mLX4)，合并有机相依次用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓縮，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化(二氯甲烷甲醇=30:l)，得到标题产物[3-氯-4-(妣啶-2-基甲氧基)-苯基]-{6-[1-(2-甲磺酰基-乙基)-1H-妣咯-3-基]-喹唑啉-4-基卜胺2(400mg，浅黄色固体)。产率74.9%。MSm/z(ESI):534.4[M+1]^NMR(400MHz，DMS0_d6):S9.74(s，1H)，8.65(d，1H)，8.60(s，1H)，8.51(s，1H)，8.05(d，1H，J=6.4Hz)，8.03(s，1H)，7.90(m，1H)，7.65(d，1H，J=7.6Hz)，7.62(d，1H，J=8.8Hz)，7.61(d，1H，J=8.OHz)，7.52(s，1H)，7.39(m，1H)，7.29(d，1H，J=8.8Hz)，7.01(s，1H)，6.70(s，1H)，5.31(s，2H)，4.40(t，2H)，3.72(t，2H)，2.82(s，3H)实施例3「3-氯-4-(吡啶-2-某甲氧某)-苯某V{6-「1-(2-吗啉-4-某-乙某)_1H_吡咯-3-某y喹唑啉-4-某卜胺第一步4-(2-溴乙基)-吗啉氢溴酸盐冰盐浴ot:以下，在带有聚氟乙烯塞子的试管中依次加入40%氢溴酸溶液(3.2mL，23.2,1)，三溴化磷(1.7mL，17.4,1)和2-吗啉+基-乙醇3a(1.4mL，11.6mmol)，加毕密封，慢慢加热至14(TC搅拌过夜。冷却至室温，蒸去大部分溶剂，加入15mL沸腾的乙醇，搅拌冷却至室温，加入25mL乙醚，搅拌30分钟，过滤，烘干得到4-(2-溴乙基)-吗啉氢溴酸盐3b(8.lg，白色固体)，产率84%。MSm/z(ESI):194.2[M+1]第二步[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-{6-[1-(2-吗啉-4-基_乙基)_1H_吡咯_3-基]-喹唑啉-4-基}-胺在10mL茄形瓶中将[3-氯_4_(妣啶_2_基甲氧基)-苯基]-[6_(lH-妣咯-3-基)-喹唑啉-4-基]-胺1(85.6mg，0.2mmo1)溶于2mLN，N-二甲基甲酰胺中，冰浴冷却至0°C，加入60%氢化钠与矿物油混合物(40mg，lmmol)，搅拌30分钟后加入4-(2-溴乙基)_吗啉氢溴酸盐3b(66mg，0.24mmo1)，于(TC反应3_4小时。薄层分析跟踪至原料消失，将反应液倒入20mL冰水中并不断搅拌，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取反应液，合并的有机相依次用饱和食盐水(20mLX2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓縮，得到的残留物通过薄层层析制备板进一步分离纯化(二氯甲烷甲醇=10:l)，得到标题产物[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-{6-[1-(2-吗啉-4-基-乙基)-111-吡咯-3-基]-喹唑啉-4-基卜胺3(53mg，黄色固体)。产率49.0%。MSm/z(ESI):541.6[M+1]^NMR(400MHz，DMS0_d6):S9.74(s，1H)，8.65(d，1H)，8.54(s，1H)，8.49(s，1H)，8.04(m，2H)，7.88(m，1H)，7.77(d，1H，J=2.4Hz)，7.75(d，1H，J=2.4Hz)，7.65(d，1H，J=8.4Hz)，7.45(s，1H)，7.35(m，1H)，7.31(d，1H，J=9.2Hz)，6.93(s，1H)，6.66(s，1H)，5.31(s，2H)，4.08(m，2H)，3.59(m，4H)，2.73(m，2H)，2.48(m，4H)实施例4「3-氯-4-(吡啶-2-某甲氧某)_苯某V化-「l-(2-二乙氨某乙某)-lH-吡咯-3-某y喹唑啉-4-某卜胺在10mL茄形瓶中将[3-氯_4_(妣啶_2_基甲氧基)-苯基]-[6_(lH-妣咯-3-基)-喹唑啉-4-基]-胺1(85.6mg，0.2mmo1)溶于2mLN，N_二甲基甲酰胺中，冰浴冷却至(TC，加入60%氢化钠与矿物油混合物(40mg，lmmol)，搅拌30分钟后加(2-氯乙基)-二乙胺盐酸盐(41.3mg，0.24mmol)，于0。C反应45小时。薄层分析跟踪至原料消失，将反应液倒入20mL冰水中并不断搅拌，用乙酸乙酯(50mLX5)萃取反应液，合并的有机相依次用饱和食盐水(20mLX2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压下浓縮，得到的残留物通过薄层层析制备板进一步分离纯化(二氯甲烷甲醇=10:l)，得到标题产物[3-氯-4-(妣啶-2-基甲氧基)-苯基]-{6-[1-(2-二乙氨基乙基)-1H-妣咯-3-基]-喹唑啉-4-基卜胺4(50mg，黄色固体)。产率47.4%。MSm/z(ESI):527.4[M+1]^NMR(400MHz，DMS0_d6):S9.74(s，1H)，8.62(d，2H)，8.51(s，1H)，8.06(m，2H)，7.92(m，1H)，7.79(d，1H，J=2.8Hz)，7.72(d，1H，J=8.8Hz)，7.61(d，1H，J=7.6Hz)，7.48(s，1H)，7.38(m，1H)，7.31(d，1H，J=8.8Hz)，6.95(s，1H)，6.68(s，1H)，5.31(s，2H)，4.08(m，2H)，2.81(m，2H)，2.56(m，4H)，0.85(s，6H)实施例51-(3-{4-「3_氯-4_(吡啶-2-基甲氧基)_苯氨基1-喹唑啉_6_基卜吡咯-1-基)_3-吗啉-4-基-丙-2-醇[3-氯-4_(吡啶-2-基甲氧基)_苯基]-[6-(1-环氧乙基甲基-1H-吡咯_3-基)_喹唑啉-4-基]-胺在100mL茄形瓶中将[3-氯_4_(妣啶_2_基甲氧基)-苯基]-[6-(lH-妣咯-3-基)-喹唑啉-4-基]-胺Ul.09g，2.34mmo1)溶于15mLN，N-二甲基甲酰胺中，冰浴冷却至(TC，加入60%氢化钠与矿物油的混合物(408mg，9.36mmo1)，搅拌30分钟后，室温下加入环氧氯丙烷(325mg，3.51mmol)，2小时后反应完毕。将反应液倒入100mL冰水中，有固体析出，得到[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-[6-(1-环氧乙基甲基-1H-吡咯_3-基)-喹唑啉-4-基]-胺5a(1.2g，黄色固体)，产物不经分离直接进行下一步反应。MSm/z(ESI):484[M+l]力NMR(400MHz,DMS0_d6):S9.717(s，1H)，8.609(d，1H，J=4.8Hz)，8.555(d，1H，J=1.6Hz)，8.499(s，1H)，8.603(m，2H)，7.910(m，1H)，7.762(m，2H)，7.607(d，1H，J=8.0Hz)，7.442(s，1H)，7.388(m，1H)，7.308(d，1H，J=9.2Hz)，6.932(s，1H)，6.707(s，1H)，5.306(s，2H)，4.320(dd，1H，Jl=3.2Hz，J2=14.8Hz)，3.993(dd，1H，Jl=6.4Hz，J2=14.8Hz)，3.323(m，1H)，2.841(t，1H，J=5.2Hz)，2.595(t，1H，J=5.2Hz)第二步l-(3-{4_[3-氯_4-(吡啶-2-基甲氧基)_苯氨基]_喹唑啉-6-基}_吡咯-1-基)_3-吗啉_4-基-丙-2-醇在100mL茄形瓶中将[3-氯-4-(妣啶-2-基甲氧基)-苯基]-[6-(l-环氧乙基甲基-1H-妣咯-3-基)-喹唑啉-4-基]_胺5a(250mg，0.52mmol)溶于5mL甲醇中，搅拌下加入吗啉(90mg，1.03mmol)，反应液加热回流过夜。将反应液在减压下浓縮，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化，得到本标题产物1-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯氨基]-喹唑啉-6-基}-妣咯-1-基)-3-吗啉-4-基-丙-2-醇5(lOOmg，黄色固体)，产率33%。MSm/z(ESI):571[M+l]丄H画R(400MHz，DMS0-d6):S9.702(s，1H)，8.610(d，1H，J=5.2Hz)，8.531(s，1H)，8.487(s，1H)，8.038(m，2H)，7.906(m，1H)，7.761(dd，1H，J=2.4Hz，8.8Hz)，7.705(d，1H，J=8.4Hz)，7.606(d，1H，J=8.OHz)，7.414(s，1H)，7.388(m，1H)，7.306(d，1H，J=9.2Hz)，6.880(s，1H)，6.648(s，1H)，5.305(s，2H)，4.955(d，1H，J=4.8Hz)，3.956(m，1H)，3.886(m，1H)，3.652(m，1H)，3.607(m，4H)，2.418(m，4H)，2.258(m，2H)实施例6l-(3-{4_「3-氯_4-(吡啶-2-基甲氧基)_苯氨基1-喹唑啉_6_基卜吡咯-1-某)-3-二乙氨某-丙-2-醇<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>在lOOmL茄形瓶中将[3_氯_4_(妣啶_2_基甲氧基)-苯基]-[6_(1_环氧乙基甲基-1H-妣咯-3-基)-喹唑啉-4-基]-胺5a(250mg，0.52mmol)溶于40mL甲醇中，搅拌下加入二乙胺(76mg，1.04mmol)，反应液加热回流过夜。将反应液在减压下浓縮，得到的残留物通过硅胶柱层析进一步分离纯化，得到本标题产物1-(3-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯氨基]-喹唑啉-6-基}-吡咯-1-基)-3-二乙氨基-丙-2-醇6(92.5mg，黄色固体)，产率32%。MSm/z(ESI):557[M+l]"HNMR(400MHz，DMS0-d6):S9.900(s，1H)，8.682(s，1H)，8.606(d，1H，J=4.4Hz)，8.491(s，1H)，8.095(s，1H)，8.040(d，1H，J=7.2Hz)，7.901(m，1H)，7.822(d，1H，J=6.8Hz)，7.708(d，1H，J=8.8Hz)，7.604(d，1H，J=8.0Hz)，7.504(s，1H)，7.382(m，1H)，7.292(d，1H，J=9.2Hz)，6.900(s，1H)，6.726(s，1H)，5.301(s，2H)，4.099(m，2H)，3.938(m，1H)，2.886(m，4H)，2.700(m，2H)，1.091(m，6H)测试例牛物学评价例1EGFR抑制细胞增殖测试下面的体外试验是用来测定本发明化合物对于人类肿瘤细胞A431EGFR高表达的细胞株抑制增殖活性。下面所述的体外细胞试验可确定受试化合物的对高表达EGFR的肿瘤细胞的抗血管生成活性和抑制增殖活性，其活性可用ICs。值来表示。此类试验的一般方案如下首先选择高表达EGFR的人类肿瘤细胞，以适宜细胞浓度下(e邓5000个细胞/mLmedium)接种在96孔培养板上，然后将细胞在二氧化碳恒温箱内进行培养，当它们生长至85%汇合，更换培养基为加有一系列浓度递度(一般6到7个浓度)受试化合物溶液的培养基，将培养板重新放回培养箱，连续培养72个小时。72小时后，可用磺酰罗丹明B(SRB)方法进行测试化合物对于抑制细胞增殖活性。ICs。值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对于细胞的抑制数值进行计算。材料和方法a.二甲基亚砜(Sinophmachemicalreagentcompany,目录T20050806号)b.A431细胞(购于Instituteofbiochemistryandcellbiology)c.Falcon100mm细胞培养板(BatonDickisonLabware，BatonDickisonandcompany，目录18677号)d.康宁96孔培养板(康宁Incorporated,目录3599号)e.Fisher移液管(Fisherscientific,目录03-692-164号)f.DMEM/F12细胞培养基(Gibco，目录12400-024号)g.澳大利亚胎牛血清(Gibco，目录10099-141号)h.磷酸盐缓冲盐水(Gibco，目录10010-072号)i.0.25%胰岛素-EDTA(Gibco，目录25200-056号)j.磺酰罗丹明B(Sig腿，目录3520-42-1号)k.醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目录T20060508号)1.三氯醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目录T20060305号)m.Tris碱(Amresco，目录0826号)n.II级A/B3型生物学安全工作橱(ThermoForma目录.HB0053-03号)0.系列II水套式二氧化碳培养箱(ThermoForma模型3111)P.离心机(FisherScientificMarathon8k，目录0027—02号)q.Novastar板读取器(BMGLabtech，目录700-0081号)r.定轨摇床(Qilinbeier，目录TS-1号)方案下面的方案用来测试本发明受试化合物对于A431细胞的抑制细胞增殖IC5。值。1.将A431细胞殖于100mm康宁培养板在生长基(以DMEM/F12+10X胎牛血清为培养液)中进行培养(37°C，5%C02)，直至细胞充分汇合；2.在100mm培养板中用胎牛血清洗涤A431细胞，以Tyrpsin消化细胞后，再将细胞接种在康宁96孔细胞培养板上，浓度为50000cells/mL，每个板空6L作为对照孔.；3.在37°C，5%C02条件下，将细胞在96孔板中培养，直至达到约85%汇合；4.用匿S0溶解受试化合物，配置20mM母液，后用匿S0稀释母液，得到一系列浓度的受试化合物的溶液，即2mM，lmM，0.2mM，20iiM，2iiM，0.2iiM;5.使用细胞培养基(DMEM/F12+10X胎牛血清为培养液)稀释上面所配置的化合物溶液。每个匿SO系列浓度化合物溶液稀释20倍，每次在细胞培养基中加入5iiL匿SO化合物溶液和95iiL培养液，确保A431细胞暴露在匿SO溶液中的浓度不超过0.5%，用涡旋混合，；6.当A431细胞贴壁，生长达到85X汇合后，将培养基换为加有DMEM/F12+10X胎牛血清培养液的新培养基，每孔中再加入180iiL培养液和20iiL在第五步中所制备的受试化合物溶液。阴性对照细胞组，加入含有0.5%匿SO的20iiL培养液，这样A431细胞暴露在受试化合物溶液中的最终浓度为100iiM，10iiM，5iiM，liiM，0.1yM，0.01yM，and0.OOliiM;7.将培养板放入恒温箱内，在37°C，5%C02条件下，连续培养72小时；8.72小时后，将培养板从恒温箱中转移到无菌工作室；9.将试药级纯水加入到TCA中制备固定剂(50X三氯醋酸-TCA)，将细胞慢慢地分层放在50iiL冷TCA溶液中；10.在4t:下，培养l小时，后用水洗涤数次以除去TCA、血清蛋白等。培养板在空气中干燥，存储待用。空白被景光学密度值的测定是在没有细胞生长的培养基中温育培养所得的数值。11.用10X醋酸溶液制备0.4X磺酰罗丹明B溶液，并向每孔中加入50iiL磺酰罗丹明B溶液；12.细胞着色30分钟;13.制备10%醋酸洗涤溶液。当着色将要完毕时，弃去着色剂，用10%的醋酸溶液快速冲洗细胞。重复上述的操作直至着色剂洗净为止，尽量减少冲洗次数以减少与蛋白结合的着色剂的去吸附。冲洗完毕后，将培养板在空气中干燥；14.混合的着色剂溶解在一定体积的磺酰罗丹明B中，增溶溶液(10mMTris)与培养基原体积相同，将培养板在室温下放置5分钟，用摇床缓慢搅拌加快与染料的混合；15.用分光光度测量，在波长565nm下读取吸光度值。吸光度数值为565nm下吸光度减去690nn下96孔板被景吸光度所得的数值；16.使用如下方法计算抑制率比值IR=100X(对照组吸光度值_用药组吸光度值)/对照组吸光度值％.IC5。值可通过不同浓度下化合物抑制率比值计算得到。本发明化合物的活性本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC5。值见下表:实施例编号IC50(EGFR/A431)(iiM)10.4121.0831.2440.76在每个试验中加入1PL受试化合物、阴性对照和空白对照(不接受任何受试化合物)，只加入1PLDMSO;2.用dH201:1稀释6iiM底物蛋白(Tyr589)，并加15iiL到每个测试；3.将酶从-8(TC直接转移到冰上，EGFR酶解冻在冰上；4.取3iigEGFR酶到每个测试中;5.加入10iiLDTT(l.25M)到2.5mL4xHTScan酪氨酸激酶缓冲液(240mMHEPESpH7.5，20mMMgCI2，20mMMnCI2，12iiMNa3V04)中，制得DTT/激酶缓冲液;6.转移0.75mLDTT/激酶缓冲液到每个测试中，制得4x反应混合液，并在每个测试中加入7.5iiL4x反应液；7.加入2iiLATP(10mM)至496yLdH20中，并在每个测试中加入7.5yL;30iiL反应最终测试条件为60mMHEPESpH7.55mMMgCl25mMMnCl23iiMNa3V041.25mMDTT20iiMATP1.5iiM多肽底物30ngEGFR激酶8.在25°CT，将反应管温育45分钟；9.每个测试中加入30iiL中止反应缓冲液(50mMEDTA，pH8.0)中止反应；10.在96孔str印tavidin包被培养板每孔中加入25iiL反应液禾口75iiLdH20，在室温下，并振摇60分钟；11.每孔用200LPBS-T缓冲液洗涤3次，在纸巾上轻拍以除去剩余的液体；12.用1%牛血清白蛋白PBS-T缓冲液1:1000稀释抗体Phospho-酪氨酸mAb(P-Tyr-100)，在每孔中加入100yL稀释的抗体；13.在室温下，振摇温育60分钟；14.按第11步所述方法洗涤；15.用1%牛血清白蛋白PBS-T缓冲液1:500稀释铕标记抗鼠IgG，并在每孔中加入100iiL稀释抗体；16.在室温下，振摇温育30分钟；17.每孔用PBS-T缓冲液200yL洗涤5次，在纸巾上轻拍以除去剩余的液体；18.每孔中加入100iiDELFIA恋信号倍增液；19.在室温下，振摇温育5分钟；20.在615nm处，用合适的时间分辨板读取器读取荧光强度。计算抑制率比值IR(%)=100-100*(X_B)/(N_B)X=受试化合物荧光值N二阴性对照B二空白抑制率比值计算得到。本发明化合物的活性本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC5。值见下表。实施例编号IC50(EGFR/BI0)(iiM)10.1120.0330.5440.07例3:HER-2激酶抑制剂活性测定本试验用酶联免疫吸附测定法(ELISA)来测定体外HER-2激酶抑制剂活性。材料与试剂a.洗涤缓冲液(PBS-T缓冲液):lxPBS(137mMNaCl，2.7mMKC1，4.3mMNa2HP04，1.4mM,04，调节pH7.2)和0.05%Tween-20b.1%牛血清蛋白(BSA，Calbiochem#136593)PBS-T缓冲液c.封闭缓冲液50mMEDTA，pH8.0d.DELFIA逸铕标记抗鼠IgG(PerkinElmerLifeSciences#AD0124)e.DELFIA⑧信号倍增液(PerkinElmerLifeSciences#1244_105)f.DELHAStreptavidi包96孑L黄板(PerkinElmerLifeSciences#AAAND-0005).g.HER-2/ErbB2激酶(Invitrogencorporation#PV3366)h.10mMATP溶液(Cellsignalingtechnology#9804).i.FLT3(Tyr589)生物素酰化蛋白蛋白(Cellsignalingtechnology#1305)j.Phospho-酪氨酸鼠mAb(P-Tyr-lOO)(Cellsignalingtechnology#9411)k.HTScan酪氨酸激酶缓冲液(4x)lx激酶缓冲液60mMHEPES5mMMgCl25mMMnCl23iiMNa3V04(Cellsignalingtechnology#9805).1.1.25MDTT(lOOOx)(Cellsignalingtechnology).方案使用如下方案进行测试1.用匿SO稀释受试化合物达到最终浓度值；试化合物、阴性对照(不接受任何受试化合物)，和1iiLDMSO;2.用朋20稀释1:16iiM底物蛋白(Tyr87)，并在每个测试中加入15iiL;3.将HER-2酶从-8(TC直接转移到冰上，HER-2酶解冻在冰上；4.取4.5iigHER-2酶到酶管中;5.加入lOiiLDTT(l.25M)到2.5mL4xHTScan酪氨酸激酶缓冲液(240mMHEPESpH7.5，20mMMgCI2，20mMMnCI2，12iiMNa3V04)中，制得DTT/激酶缓冲液；6.转移0.75mLDTT/激酶缓冲液到每个酶管中，制得4x反应混合液，并在每个测试中加入7.5iiL4x反应液；7.加入2iiLATP(10mM)至496iiLdH20中，并在每个测试中加入7.5iiL;30iiL反应最终试验条件为60mMHEPESpH7.55mMMgCl25mMMnCl23iiMNa3V041.25mMDTT20iiMATP1.5iiM底物蛋白45ngHER-2激酶8.在25°CT，将反应管温育60分钟；9.每个测试中加入30iiL封闭缓冲液(50mMEDTA，pH8.0)终止反应；10.在96孔str印tavidin包培养板每孔中加入25iiL反应液禾口75iiLdH20，在室温下，并伴随振摇60分钟；11.每孔用200LPBS-T缓冲液洗涤3次，在纸巾上轻拍以除去过量的液体；12.用1%牛血清白蛋白PBS-T缓冲液1:1000稀释主要抗体Phospho-酪氨酸mAb(P-Tyr-100)，并在每孔中加入100yL稀释的主要抗体；13.室温下，伴随振摇下温育60分钟；14.按第11步所述方法进行洗涤；15.用1%牛血清白蛋白PBS-T缓冲液1:500稀释铕标记的抗鼠IgG，并在每个孔中加入100iiL稀释的抗体；16.室温下，伴随振摇下温育30分钟；17.每孔用PBS-T缓冲液200yL洗涤5次，在纸巾上轻拍以除去过量的液体；18.每孔中加入100iiDELFIA⑧信号倍增液；19.室温下，伴随振摇下温育5分钟；20.在波长615nm下，用合适的时间分辨板读取器读取吸光度。计算抑制率比值IR(%)=100-100*(X-B)/(N-B)X二受试化合物荧光值N二阴性对照B二空白IC5。值可通过受试化合物不同剃度浓度下的抑制率比值计算得到。本发明化合物的活性本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC5。值见下表实施例编号IC50(HER2/BI0)(iiM)10.00220.Oil30.01240.003例4:HER-2抑制细胞增殖测试下面的体外试验是用来测定本发明化合物对于人类肿瘤细胞SK-BR-3HER-2高表达的细胞株抑制增殖活性。下面所述的体外细胞试验可确定受试化合物的对高度表达HER-2的肿瘤细胞的抗血管生成活性和抑制增殖活性，其活性可用IQ。值来表示。此类试验的一般方案如下首先选择高度表达HER-2的人类肿瘤细胞，以适宜细胞浓度下接种在96孔培养板上，然后将细胞在二氧化碳恒温箱内进行培养，当它们生长至60%汇合，更换培养基为加有一系列浓度递度(一般6到7个浓度)受试化合物溶液的培养基，将培养板重新放回培养箱，连续培养96个小时。96小时后，可用磺酰罗丹明B(SRB)方法进行测试化合物对于抑制细胞增殖活性。IC5。值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对于细胞的抑制数值进行计算。材料和方法a二甲基亚砜(Sinophmachemicalreagentcompany,目录T20050806号)b.SK-BR-3细胞(购于Instituteofbiochemistryandcellbiology)c.Falcon100mm细胞培养板(BatonDickisonLabware，BatonDickisonandcompany，目录18677号)d.康宁96孔培养板(康宁Incorporated,目录3599号)e.Fisher移液管(Fisherscientific,目录03-692-164号)[O328]f.RPMIIMO细胞培养基(Gibco，目录l2400-021号)g.澳大利亚胎牛血清(Gibco，目录10099-141号)h.磷酸盐缓冲盐水(Gibco，目录10010-072号)i.0.25%胰岛素-EDTA(Gibco，目录25200-056号)j.磺酰罗丹明B(Sig腿，目录3520-42-1号)k.醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目录T20060508号)1.三氯醋酸(Sinophmachemicalreagentcompany,目录T20060305号)m.Tris碱(Amresco，目录0826号)n.II级A/B3型生物学安全工作橱(ThermoForma目录.HB0053-03号)25o.系列II水套式二氧化碳培养箱(ThermoForma模型3111)p.离心机(FisherScientificMarathon8k，目录0027—02号)q.Novastar板读取器(BMGLabtech，目录700-0081号)r.定轨摇床(Qilinbeier，目录TS-1号)方案下面的方案用来测试本发明受试化合物对于SK-BR-3细胞的抑制细胞增殖IC5。值。1.将SK-BR-3细胞殖于100mm康宁培养板在生长基(以RPMI1640+10%胎牛血清为培养液)中进行培养(37t:，5XC0》，直至细胞充分汇合；2.在100mm培养板中用胎牛血清洗涤SK_BR_3细胞，以Tyrpsin消化细胞后，再将细胞接种在康宁96孔细胞培养板上，浓度为50000cells/mL，每个板空6孔，作为对照孔.；3.在37°C，5%C02条件下，将细胞在96孔板中培养，直至达到约60%汇合；4.用匿S0溶解受试化合物，配置20mM母液，后用匿S0稀释母液，得到一系列浓度的受试化合物的溶液，即2mM，lmM，0.2mM，20iiM，2iiM，0.2iiM;5.使用细胞培养基(RPMI1640+10X胎牛血清为培养液)稀释上面所配置的化合物溶液。每个匿SO系列浓度化合物溶液稀释20倍，每次在细胞培养基中加入5iiL匿SO化合物溶液和95iiL培养液，确保SK-BR-3细胞暴露在匿SO溶液中的浓度不超过0.5%，用涡旋混合；6.当SK-BR-3细胞贴壁，生长达到60X汇合后，将培养基换为加有RPMI1640+10%胎牛血清培养液的新培养基，每孔中再加入180iiL培养液和20iiL在第五步中所制备的受试化合物溶液。阴性对照细胞组，加入含有0.5%匿SO的20iiL培养液，这样SK-BR-3细胞暴露在受试化合物溶液中的最终浓度为100iiM，10iiM，5iiM，1iiM，0.1iiM，0.01iiM，and0.OOliiM;7.将培养板放入恒温箱内，在37°C，5%C02条件下，连续培养96小时；8.96小时后，将培养板从恒温箱中转移到无菌工作室；9.将试药级纯水加入到TCA中制备固定剂(50X三氯醋酸-TCA)，将细胞慢慢地分层放在50iiL冷TCA溶液中；10.在fC下，培养1小时，后用水洗涤数次以除去TCA、血清蛋白等。培养板在空气中干燥，存储待用。空白被景光学密度值的测定是在没有细胞生长的培养基中温育培养所得的数值；11.用10X醋酸溶液制备0.4X磺酰罗丹明B溶液，并向每孔中加入50iiL磺酰罗丹明B溶液；12.细胞着色30分钟；13.制备10%醋酸洗涤溶液。当着色将要完毕时，弃去着色剂，用10%的醋酸溶液快速冲洗细胞。重复上述的操作直至着色剂洗净为止，尽量减少冲洗次数以减少与蛋白结合的着色剂的去吸附。冲洗完毕后，将培养板在空气中干燥；14.混合的着色剂溶解在一定体积的磺酰罗丹明B中，增溶溶液(10mMTris)与培养基原体积相同，将培养板在室温下放置5分钟，用摇床缓慢搅拌加快与染料的混合；15.用分光光度测量，在波长565nm下读取吸光度值。吸光度数值为565nm下吸光度减去690nm下96孔板被景吸光度所得的数值；16.使用如下方法计算抑制率比值IR=100X(对照组吸光度值_用药组吸光度值)/对照组吸光度值％IC5。值可通过不同浓度下化合物抑制率比值计算得到。本发明化合物的活性本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC5。值见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>药代动力学评价测试例1本发明实施例1化合物的药代动力学测试1、摘要以大鼠为受试动物，应用LC/MS/MS法测定了大鼠分别灌胃给予实施例1化合物后不同时刻血浆中的药物浓度。研究本发明化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药动学特征。2、试验方案2.1试验药品实施例1化合物2.2试验动物健康成年SD大鼠16只，雌雄各半，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，动物生产许可证号SCXK(沪)2003-0002。2.3药物配制称取适量药物，加入吐温80研磨均匀，后加入1%羧甲基纤维素钠研磨至样品均匀混悬，吐温80终浓度为1%，样品浓度为2.5mg/mL，临用时配制。2.4给药健康成年SD大鼠16只，雌雄各半，禁食过夜后分别灌胃给药，给药剂量均为25.Omg/kg，给药体积10mL/kg。2.5样品采集SD大鼠16只，雌雄各半，平均分成4组，禁食一夜后灌胃给药，剂量为25mg/kg。于给药前及给药后0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，7.0，9.0，12.0，24.0，30.0小时由眼眶采血0.2mL，置于肝素化试管中，3500rpm离心10分钟分离血浆，于2(TC保存，给药后2小时进食。3.分析方法3.1仪器设备TSQQuantumUltraAM三重四极杆质谱仪，美国ThermoFinnigan公司；Agilent1200高效液相色谱系统，美国Agilent公司。3.2血浆样品预处理取给药后各时刻的大鼠血浆50iiL，加入内标溶液50yL，加入甲醇100yL，混匀后涡旋混合3分钟，离心10分钟(13500r/min)，取5yL进行LC/MS/MS分析。3.3超过定量上限样品的测定对实测浓度高于定量上限的样品进行复检，稀释步骤如下取血浆样品10L，加入90uL大鼠空白血浆，涡流混匀，此样品稀释因子为IO，按"血浆样品预处理"项下操作。3.4标准曲线制备以大鼠空白血浆50iiL，分别加入标准系列溶液50yL，使血药浓度为50.0，100，200,500，1000，2000，5000ng/mL，加入内标溶液50yL，甲醇50yL，按"血浆样品预处理"项下操作。以血药浓度为横坐标，样品与内标色谱峰面积比为纵坐标，以加权最小二乘法(w=1/x2)进行线性回归。[O389]3.5药代动力学参数计算对受试化合物的药代动力学行为进行房室模型拟合，并计算主要药代动力学参数，其中C^、；采用实测值。4、药代动力学参数结果本发明化合物的药代动力学参数如下编号药代实验(25mg/kg)血药浓度曲线面积半衰期滞留时间清除率表观分布容积Cmax((ig/mL)AUC(ng/mL*h)tl/2(h)MRT(h)CL/F(l/h/kg)Vz/F(l/kg)实施例111.48±4.1441.92±12.51.75±1.452.5±0.160.64±0.21.71±1.5928权利要求通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐其中R1选自氢原子和烷基，其中烷基任选地进一步被一个或多个选自羟基、-SO2R2或-NR3R4的取代基所取代；R2选自烷基；R3和R4各自选自烷基，或者R3和R4可以进一步形成5～6元杂环，其中5～6元杂环内含有一个或多个N、O或S原子。F2009100453829C0000011.tif2.根据权利要求l所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物选自3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述的盐为所述化合物与选自以下的酸形成的盐苹果酸、乳酸、马来酸、盐酸、甲磺酸、硫酸、磷酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸或三氟乙酸。4.一种药用组合物，所述药物组合物含有治疗有效剂量的根据权利要求13中任何一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的载体。5.—种制备根据权利要求1所述的通式(I)化合物的方法，所述方法包括以下步骤<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>碘代喹唑啉化合物与1-(三异丙基硅烷基)-1H-吡咯-3-基硼酸进行Suzuki偶联，得到的化合物1在碱性条件下与卤代化合物IV(进行取代反应，或在氢化钠条件下，与消旋环氧氯丙烷反应再进一步与NHiy^进行开环反应，得到通式(I)化合物。6.—种制备根据权利要求1所述的通式(I)化合物的方法，所述方法包括以下步骤<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>吡咯硼酸酯与卤代化合物或与甲磺酰基乙烯反应，得到的1位取代的吡咯硼酸酯与碘代喹唑啉化合物进行Suzuki偶联得到通式(I)化合物。7.—种调节蛋白激酶催化活性的方法，其中包括将所述的蛋白激酶与权利要求13中任何一项所述的化合物或药学上可接受的盐相接触。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶或丝氨酸_苏氨酸激酶。9.根据权利要求13任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途。10.根据权利要求9所述的用途，其中所述蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶或丝氨酸_苏氨酸激酶。11.根据权利要求4所述的组合物在制备治疗与蛋白质激酶有关的疾病的药物中的用途。12.根据权利要求11所述的用途，其中所述蛋白激酶选自受体酪氨酸激酶、非受体酪氨酸激酶或丝氨酸_苏氨酸激酶。全文摘要本发明涉及喹唑啉类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示新的喹唑啉类化合物，以及它们的互变异构体、对映体、非对映体、消旋体和药学上可接受的盐，以及代谢产物和代谢前体或前药，以及它们作为治疗剂特别是作为蛋白激酶抑制剂的用途，其中通式(I)中的各取代基的定义同说明书中的定义相同。文档编号A61K31/517GK101781285SQ20091004538公开日2010年7月21日申请日期2009年1月15日优先权日2009年1月15日发明者李心,王俊,王斌,邓炳初,金池琼申请人:上海恒瑞医药有限公司