专利名称：益气复脉制剂在制备防治内毒素引起的休克和肠管损伤的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及益气复脉制剂在制备防治内毒素引起的休克、肠管损伤的药物中的用 途，更具体地说是一种注射用益气复脉冻干粉针剂在制备防治内毒素引起的休克和/或肠 管损伤的药物中的用途，属于中药领域。
背景技术：
益气复脉制剂源于金代《医学启源》中的著名古方生脉散。具有益气生津、敛阴止 汗的功能。临床上主要用于治疗气阴两亏、脉虚欲脱的心悸、气短、四肢很冷、汗出、脉欲绝 及心肌梗塞、心源性休克、感染性休克的气阴两亏证等。中国专利ZL200410021920. 8提供 了一种益气复脉制剂及其制备方法，该制剂构成简单，生产工艺合理、产品质量好。脓毒症是死亡率较高的危重病症，内毒素引起的微循环障碍，休克和多脏器损伤 是脓毒症致死的主要病理基础。关于益气复脉制剂是否可以用于防治内毒素引起的休克和 肠管损伤尚未见报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供益气复脉制剂在制备防治脓毒症休克和肠管损 伤的药物中的用途。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案益气复脉制剂在制备防治脓毒症休克和/或肠管损伤的药物中的用途。所述益气复脉制剂由红参1-50重量份、麦冬3-150重量份、五味子1. 5-75重量份 制备而成，其制备方法为红参采用乙醇提取，回收乙醇，加水沉淀，除去上层油，水溶液过 滤、浓缩，用真空干燥、喷雾干燥或冻干干燥法干燥，得红参提取物；麦冬、五味子用水提取， 提取液浓缩后，醇沉一次或一次以上，第一次醇沉时的含醇量为70-80%，二次及二次以上 的含醇量均为80-99. 9%，回收乙醇，将药液浓缩，再用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥法干 燥，得到麦冬、五味子提取物，再用不同的方法制成粉针剂或注射剂。所述粉针剂的制备方法为，红参用乙醇提取，回收乙醇，加水沉淀，除去上层油，水 溶液过滤、浓缩，用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥法干燥，得红参提取物；麦冬、五味子用 水提取，提取液浓缩后，醇沉一次或一次以上，第一次醇沉时的含醇量为70-80%，二次及二 次以上的含醇量均为80-99.9%，回收乙醇，将药液浓缩，再用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干 燥法干燥，得到麦冬、五味子提取物，所得提取物溶解，过滤，加入葡甲胺及甘露醇，药液过 微孔滤膜后灌装、冻干、加盖、即得益气复脉粉针剂。所述注射剂的制备方法为，红参用乙醇提取，回收乙醇，加水沉淀，除去上层油，水 溶液过滤、浓缩，用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥法干燥，得红参提取物；麦冬、五味子用 水提取，提取液浓缩后，醇沉一次或一次以上，第一次醇沉时的含醇量为70-80%，二次及二 次以上的含醇量均为80-99.9%，回收乙醇，将药液浓缩，再用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥法干燥，得到麦冬、五味子提取物，所得提取物溶解，过滤，药液过微孔滤膜后灌封，即得 益气复脉注射剂。所述防治休克和/或肠管损伤是防治由脓毒症休克和/或肠管损伤。所述防治由脓毒症休克是指，降低由内毒素引起的休克动物(包括人)的死亡数 量、改善休克体征。所述防治由脓毒症肠管损伤是指，减轻由内毒素引起的肠管出血和肠损伤、抑制 肠管血管内皮细胞黏附分子ICMA-1的表达和抑制白细胞的游出。本发明的优点是益气复脉制剂解决了脓毒症引起死亡的关键环节，即改善休克， 减少肠管出血和损伤。益气复脉制剂可以治疗内毒素引起的休克；益气复脉制剂可以降低 内毒素引起的死亡；益气复脉制剂可以减轻内毒素引起的动物肠管损伤，减轻肠管出血； 益气复脉制剂可以抑制内毒素引起的动物肠管血管内皮细胞抑制血管内皮细胞黏附分子 ICMA-1的表达和抑制白细胞的游出。下面结合附图和具体实施方式
对本发明作进一步叙述，以使公众对发明内容有更 深入的了解，并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所进行的任何本领域等同替换， 均属于本发明的保护范围。
图1为益气复脉对内毒素血症大鼠存活率的影响。图2A为益气复脉前对内毒素血症大鼠MAP的影响；图2B为益气复脉前对内毒素 血症大鼠HR的影响。图3A为益气复脉前对内毒素血症大鼠RR的影响；图3B为益气复脉前对内毒素血 症大鼠RT的影响。图4为益气复脉对内毒素血症大鼠肠管出血点的影响。图5为益气复脉对内毒素血症大鼠肠管组织学的影响。图6为72小时后对肠管免疫组化染色的结果。图7为ICAM-1表达的结果。图8为益气复脉对LPS引起的大鼠肠粘膜内MP0阳性细胞的影响。图9为益气复脉对LPS引起的大鼠肠粘膜内MP0阳性细胞数的影响。
具体实施例方式实施例1 一.材料和方法1.实验动物ffistar大鼠，雄性，体重200_250g，购自北京大学医学部动物部，许可证号 SYXK (京)2006-0001。54只大鼠随机分成正常对照组、模型组和益气复脉+LPS组，每组18 只，自由进食饮水，饲养条件为温度24士 1°C，相对湿度50% 士 1%，12小时切换照明。一切 饲养及实验皆依照北京大学医学部实验动物处理规定进行。2.实验药品及生物材料注射用益气复脉冻干粉针剂由天之娇公司提供，20070702.
LPS(Escherchia Coli serotype 055 :B), J^T Sigma Chemical Co (St Louis, MO, USA)乌拉坦购于上海天莲精细化工有限公司，用生理盐水配制成20%溶液。Triton-100 北京中衫金桥生物技术有限公司，ZLI-9329。髓过氧化物酶试剂盒南京建成生物研究所，20060428。ICAM-1 抗体BD 公司，BD554967。ABC试剂盒北京中衫金桥生物技术有限公司，PV-6002。二.方法1. LPS及益气复脉的投入正常对照组(Control组)基础观察10分钟后，经由左颈静脉缓慢(1分钟)推 注生理盐水1ml，10分钟后经左颈静脉连续滴注生理盐水(4ml/hr)至90分钟。模型组(LPS组)基础观察10分钟后，经由左颈静脉缓慢(1分钟)推注生理盐 水1ml，经由左颈静脉连续滴注LPS(5mg/kg/hr)至90分钟。益气复脉+LPS组(N = 6) (yiqifumai+LPS)基础观察10分钟后，经由左颈静脉缓 慢(1分钟)推注益气复脉80mg/kg，滴注10分钟后沿左颈静脉连续滴注LPS (5mg/kg/hr) 至90分钟观察结束。54只大鼠随机分成正常对照组、模型组及益气复脉+LPS组，每组18只，每24小时 评估每组大鼠存活率、平均动脉压(MAP)，心率(HR)，呼吸频率(RR)、肛温(RT)。LPS输注 72小时后，观察存活大鼠的肠管出血情况，取肠管，做HE及免疫组化染色。2.指标测定(1)大鼠存活率和MAP、HR、RR、RT的测定LPS注入24，48及72小时后分别监测各组大鼠生理学指标，应用无创智能血压计 (BP-98A，Softron，China)监测MAP和HR，计数RR率，应用热电偶监测RT。在每个时间点 记录存活动物数并计算生存率。(2)肠管出血点的计数实验动物以乌拉坦肌肉麻醉(1. 25mg/kg. bw, i. m.)。颈静脉插管以输注药物，72 小时存活的动物剪去腹部毛发沿腹部正中作2 3cm的切口，暴露小肠。将大鼠仰位在观 察板上，轻轻提出小肠(回盲部向口侧10 15cm)，并将小肠展开放在观察板上，在表面连 续滴加37°C生理盐水保持温度和湿度，通过体式显微镜(SZ-CTV，OLYMPUS, Japan)进行观 察，连接在显微镜上的CCD彩色摄像机(Jk-TO53H，Toshiba，Japan)将图像传输至在显示屏 上(J2118A，TCL，China)，用CCD录像机(DVR-R25，Malata，China)记录观察五个视野，在每 个视野计数五根并行无弯曲的动静脉周围的出血点，取五个视野平均值为肠管出血点。(3)肠管组织学及组织化学LPS输注72小时后，取2cm回肠组织在10%的福尔马林中固定，组织样品按常规 进一步处理进行HE染色。组化染色按照下列步骤进行肠管组织切片入O.Olmol/L PBS摇 洗3次，每次10分钟，入0.3% Triton-X-100液30min(37°C )，入3%过氧化氢20min(避 光)，血清封闭lh (室温)，分别滴加1 100抗髓过氧化物酶、抗ICAM-1—抗50iU于各组 不同的切片上，置于室温下lh，入4°C冰箱过夜。第二天复温lh后入滴加ABC试剂盒中B、C 液50ul于对应的切片上，室温下各孵育lh，各步骤之间均入0. 01mol/L PBS摇洗3X10min，DAB显色，常规梯度酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察。应用Imaging-Pro Plus软件计算积分光密度来反映ICAM-1表达强度变化。应用相同软件随机计数5个20倍 视野下MP0阳性细胞数。3.统计方法所有数值均用均值士标准差表示，生存率统计采用x2检验。剩余资料采用AN0VA 分析及F-检验，以P < 0. 05为显著差异。在进行MAP，HR，RR，RT监测时，在0，24，48，72h， 正常对照组大鼠数目始终为18只，模型组分别为18只，15只，12只，6只，益气复脉+LPS组 为18只，16只，15只，12只。进行观察肠管出血，HE染色及免疫组化染色时，正常对照组大 鼠数目为18只，模型组为6只，益气复脉+LPS组为12只。二.实验结果1.益气复脉对内毒素血症大鼠存活率和休克的影响益气复脉对内毒素血症大鼠存活率的影响如图1所示。正常对照组在整个72小 时观察过程中均存活，而模型组存活大鼠随时间呈线性下降，72小时仅存活6只，存活率为 33%。益气复脉前投入显著减轻LPS导致的存活率的下降，48小时为89%，72小时为67%。益气复脉前对内毒素血症大鼠MAP的影响如图2A所示。正常对照组大鼠的MAP 在72小时观察期间内无明显变化。模型组大鼠的MAP血压在24小时开始下降，72小时进 一步加剧。益气复脉前投入显著抑制了 LPS引起的大鼠的MAP血压在48小时和72小时的 下降。益气复脉前对内毒素血症大鼠HR的影响如图2B所示。正常对照组大鼠的HR在 72小时观察期间内中无明显变化。LPS组的HR在24和48小时期间导增快，但是，在72小 时显著减慢。而益气复脉前投入可以显著抑制LPS引起的48小时的增快和72小时的减慢。益气复脉前对内毒素血症大鼠RR的影响如图3A所示。正常对照组大鼠的RR在 72小时的观察期间内中无明显变化。LPS组大鼠的RR在24小时显著加快，并持续到72小 时观察结束时。益气复脉前投入可以显著地抑制LPS引起的RR的加快。益气复脉前对内毒素血症大鼠RT的影响如图3B所示。正常对照组大鼠的RT在 72小时的观察期间内没有显化。LPS组大鼠的RT在24小时开始升高，并持续到72小时观 察结束。益气复脉前投入对LPS引起的大鼠RT的增高没有显著的抑制作用。2.益气复脉对内毒素血症大鼠肠管出血点的影响图4表示益气复脉对内毒素血症大鼠肠管出血点的影响。在观察72小时后，正常 对照组大鼠的肠管几乎看不到出血(图4A1)，而LPS组大鼠的肠管微血管周围可以观察到 多个出血点(图4A2)。益气复脉前投入组大鼠肠管微血管周围的出血点显著减少(A3)。比 较每组大鼠肠管微血管周围的出血点，结果如图4B所示，益气复脉可以显著地抑制LPS引 起的大鼠肠管微血管周围出血点的增加。3.益气复脉对内毒素血症大鼠肠管组织学的影响与正常对照组相比(图5A)，LPS输注72小时后的大鼠肠绒毛出现明显的水肿、糜 烂和脱落(图5B)。益气复脉明显减轻了上述改变(图5C)。72小时后对肠管免疫组化染色的结果显示 正常对照组大鼠肠粘膜和黏膜下层几 乎没有观察到血管内皮细胞的ICAM-1表达(图6A和D)，而LPS组大鼠肠粘膜和黏膜下层 的血管内皮有明显的ICAM-1表达(图6B和E)。益气复脉大鼠肠粘膜和黏膜下层的血管内皮有的ICAM-1表达明显减少(图6C和F)。统计ICAM-1表达的结果如图7所示，益气复脉 可以显著地抑制LPS引起的大鼠肠粘膜和黏膜下层的血管内皮ICAM-1表达的增加。
益气复脉对LPS引起的大鼠肠粘膜内MP0阳性细胞的影响如图8所示。在LPS输 注72小时后，大鼠肠粘膜内MP0阳性细胞显著增加(图8B)，表明白细胞已经游出血管外， 浸润在肠粘膜内。益气复脉组的大鼠的肠粘膜内MP0阳性细胞数明显减少(图8C)。统计 结果显示益气复脉可以显著地抑制LPS引起的大鼠肠粘膜内MP0阳性细胞数的增加(图 9)。
权利要求
益气复脉制剂在制备防治脓毒症休克和/或肠管损伤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述益气复脉制剂由红参1-50重量份、 麦冬3-150重量份、五味子1. 5-75重量份制备而成，其制备方法为红参采用乙醇提取，回 收乙醇，加水沉淀，除去上层油，水溶液过滤、浓缩，用真空干燥、喷雾干燥或冻干干燥法干 燥，得红参提取物；麦冬、五味子用水提取，提取液浓缩后，醇沉一次或一次以上，第一次醇 沉时的含醇量为70-80%，二次及二次以上的含醇量均为80-99.9%，回收乙醇，将药液浓 缩，再用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥法干燥，得到麦冬、五味子提取物，再用不同的方法 制成粉针剂或注射剂。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述粉针剂的制备方法为，红参用乙醇提 取，回收乙醇，加水沉淀，除去上层油，水溶液过滤、浓缩，用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥 法干燥，得红参提取物；麦冬、五味子用水提取，提取液浓缩后，醇沉一次或一次以上，第一 次醇沉时的含醇量为70-80%，二次及二次以上的含醇量均为80-99.9%，回收乙醇，将药 液浓缩，再用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥法干燥，得到麦冬、五味子提取物，所得提取物 溶解，过滤，加入葡甲胺及甘露醇，药液过微孔滤膜后灌装、冻干、加盖、即得益气复脉粉针 剂。
4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述注射剂的制备方法为，红参用乙醇提 取，回收乙醇，加水沉淀，除去上层油，水溶液过滤、浓缩，用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥 法干燥，得红参提取物；麦冬、五味子用水提取，提取液浓缩后，醇沉一次或一次以上，第一 次醇沉时的含醇量为70-80%，二次及二次以上的含醇量均为80-99.9%，回收乙醇，将药 液浓缩，再用真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥法干燥，得到麦冬、五味子提取物，所得提取物 溶解，过滤，药液过微孔滤膜后灌封，即得益气复脉注射剂。
5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于所述防治脓毒症休克和/或肠管损伤是 防治由内毒素引起的休克和/或肠管损伤。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述防治由内毒素引起的休克是指，改善 内毒素引起的动物休克体征，降低的死亡数量。
7.根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述防治由内毒素引起的肠管损伤是指， 减轻内毒素引起的肠管出血和肠黏膜损伤、抑制血管内皮细胞黏附分子ICMA-1的表达和 抑制白细胞的游出。
全文摘要
本发明涉及益气复脉制剂在制备防治内毒素引起的休克和肠管损伤的药物中的用途，更具体地说是一种注射用益气复脉冻干粉针剂在制备防治内毒素引起的休克和/或肠管损伤的药物中的用途，属于中药领域。益气复脉制剂在制备防治脓毒症休克和/或肠管损伤的药物中的用途。本发明的优点是益气复脉制剂可以内毒素引起的休克；益气复脉制剂可以降低内毒素引起的死亡；益气复脉制剂可以减轻内毒素引起的动物肠管损伤，减轻肠管出血；益气复脉制剂可以抑制内毒素引起的动物肠管血管内皮细胞抑制血管内皮细胞黏附分子ICMA-1的表达和抑制白细胞的游出。
文档编号A61P7/08GK101926931SQ200910069420
公开日2010年12月29日 申请日期2009年6月24日 优先权日2009年6月24日
发明者原庆, 张淑文, 韩晶岩 申请人:天津天士力制药股份有限公司