抗cd5抗体的制作方法

专利名称：抗cd5抗体的制作方法
技术领域：
本发明系关于包含抗⑶5抗体之组合物的领域。
背景技术：
抗体为当受到诸如细菌及病毒之外来侵染病原体激发时由免疫系统产生之分子。 抗体分子由两个重链(HC)及两个轻链(LC)组成，其经双硫桥连接以与各臂尖端上存在之 可变结合结构域形成V形分子。该等分子由高可变性及与外来物质(典型地蛋白质)，即所 谓的抗原之极强结合特性化。抗体藉由结合抗原上之特异性表位发挥功能。结合后，不同 效应功能可经由抗体之恒定部分Fc区介导。取决于抗体同型，可实现诸如补体溶解、细胞 杀死、吞噬作用等之效应功能。除抗体结构以外，抗体生物学之不同方面影响天然存在内源 性抗体及抗体基药物治疗之作用。此等方面包括抗体亲和力以及反应速率(亦即，抗体结 合表位之快慢)，所结合表位在抗原上的位置，靶向组合物中所表示的不同表位之抗体之数 目及其是否结合免疫原性表位。抗体作为治疗药物之用涂源自血浆之多克隆抗体制剂-所谓的高免疫免疫球蛋白产物-传统上已成功用于 治疗特性在于高复杂性目标之疾病，诸如巨细胞病毒或B型肝炎病毒感染。然而，源自血液 之产物具有许多固有缺点，包括供应短缺、高批次间变化以及与传染媒介物自血液可能转 移至患者相关的安全风险。在过去的10-15年中，很多焦点集中于研究重组抗体之治疗潜 力，且已表明此焦点为高回报投资。目前，全世界临床开发之超过20%的药物源自抗体，相 当于今后世界市场上总计会有约400种潜在药物。目前批准销售之约20种重组抗体治疗 剂全部为单克隆抗体。迄今为止仍缺乏产生且工业生产重组多克隆抗体之技术。然而，已 观察到靶向一种以上抗原-表位之多克隆抗体治疗剂之优点及需求。目标系藉由在未来以 重组抗体为主之药物中再引入先前已藉由使用高免疫免疫球蛋白产物证明的多克隆性之 概念增加以抗体为主之药物之质量。慢件淋巴细胞件白血病及CD5CLL为西方世界中最常见形式之白血病。CLL细胞在细胞膜上表达⑶19及⑶20与 ⑶5及⑶23。因此，此表型可不同于另一⑶5阳性B细胞疾病套细胞淋巴瘤(MCL)，其缺乏 CD23表达，但表达称为FMC7之另一表面分子。两种疾病以常规化学疗法均无法治愈。目 前，以氟达拉滨(Fludarabine)为主之方案代表用于控制CLL之最有效疗法。与其它无痛 B细胞淋巴瘤/白血病之结果相比，使用抗⑶20抗体利妥昔单抗(Rituximab)作为单一疗 法之标准剂量方案对CLL具有极有限作用。在CLL中经证明具有单一剂功效的唯一抗体为 注册用于化学难治性CLL之抗CD52抗体阿仑单抗(Campath-IH)。然而，与阿仑单抗相关的 严重免疫缺陷限制其在CLL中之普遍应用。当前用于改善CLL中之结果的策略集中在抗体化学疗法组合及开发靶向不为⑶20及⑶52的例如⑶23、⑶40、⑶40-配体及HLA-DR之其 它抗原之抗体。提出尚未加以利用之CLL细胞所特有的CD5抗原为CLL中以抗体为主之被 动免疫疗法之具有吸引力的目标。⑶5为第I型糖蛋白且为清除剂受体家族之成员。⑶5由胸腺细胞、成熟T细胞 及成熟B细胞之子集表达且已经展示其与调节淋巴细胞活化及与分化过程有关。⑶72、 gp80-40及Ig构架结构为⑶5之目的配体，且其与⑶5之相互作用已展示于小鼠中，此等相 互作用之确切作用及结构特性仍待澄清。⑶5与B细胞受体(BCR)附近之表面IgM的⑶79a 及⑶79b转导搭配物相缔合，且⑶5信号转导由与BCR及⑶79a及⑶79b共沈淀于脂筏中 介导。⑶79a及⑶79b由Lyn及其它诸如Syk之酪氨酸激酶磷酸化，且已报导Zap70以及酪 氨酸磷酸酯酶SHP-I亦为此信号转导之介体。已在CLL细胞中观察到CD79b之截断形式， 因此已表明异常胞内信号转导对于CLL细胞存活而言可能较为重要。CD5与单克隆抗CD5 抗体之交联可诱导CLL细胞细胞凋亡，然而除非⑶5与BCR及BCR相关之分子一起移位于 脂筏中，否则此信号之诱导不会发生。由于表位之位置对于抗体经由受体传递信号之能力 而言关键，因此相信对CD5具有许多特异性之一系列抗体将揭开关于CD5在CLL细胞及正 常细胞中的信号转导作用之知识，且该知识将促进针对CLL之有效抗体疗法的开发。针对CD5之多克降抗体由于多克隆抗体组合物含有数种抗体特异性且从而靶向数种表位，因此主张与 mAb相比，可使用多克隆抗体组合物更有效阻断经⑶72及⑶5之其它潜在配体活化的信号 途径。靶向特异性表位对于mAb影响经由受体传递之信号之能力而言可为关键的。由于已 展示抗⑶20抗体(利妥昔单抗)之特异性直接影响活体内诱导之效应功能之类型且由于 已展示针对Her-2之具有不同表位特异性的抗体诱导不同抗肿瘤活性，因此推测含有多种 特异性之抗体的多克隆抗体组合物将更有效介导肿瘤细胞之杀死。另外，藉由靶向多种抗 原-表位之多克隆抗体组合物在表面上产生的抗体之高密度可能会增加诸如补体介导之 溶解及ADCC的效应功能之活化，ADCC类似于细胞凋亡已经展示在治疗CLL中具有重要作 用。因此，很可能使用多克隆抗体组合物实现总体更有效疗法。如上所述，已展示单克隆抗⑶52抗体阿仑单抗在重度预先治疗患者中可有效针 对CLL，但治疗伴随有显著免疫抑制及发生机会性感染。此系由于⑶52表达在除浆细胞外 的所有白血球上，且因此阿仑单抗靶向CLL及健康细胞。CD5相反并不表达在NK细胞及健 康B细胞上，且靶向CD5之抗CLL抗体疗法将因此优先靶向癌细胞，由于健康细胞往往较少 被消除且患者体验最小免疫抑制，因此此将对患者有益。TlOl为针对⑶5之单克隆小鼠IgGh，其经开发用于治疗罹患皮肤T-细胞淋巴瘤 (CTCL)及类风湿性关节炎之患者。由于在第II阶段研究中缺乏治疗作用，已停止临床开发 T101。尚不清楚TlOl不具有临床作用之原因，且有可能与以下事实相关其为将不可避免 地产生HAMA(人类抗小鼠抗体)中和反应之完全鼠类抗体。然而，可设想与诸如TlOl之单 克隆抗体相比，使用多克隆抗体组合物靶向数种CD5表位可例如藉由增加受体内化作用引 起⑶5功能抑制之显著增加，因此产生临床抗肿瘤作用。另外，由于意欲产生含有小鼠可变 区及人类恒定区之CD5特异性嵌合抗体，因此由完全鼠类TlOl抗体所观察到之HAMA反应 的主要部分将不可见。若针对嵌合抗体之可变区的抗体存在，则利用活体外针对单克隆及 多克隆抗体的中和抗体之先前研究已指示多克隆抗体组合物对中和抗体之易感性比单克
7隆抗体低。因此，若中和抗体之诱导存在，则多克隆抗CD5抗体组合物很可能将保留药理学 活性。效应机制对结合细胞表面上抗原之抗体的细胞水平之作用视所结合特异性抗体而不同。重 要效应机制包括抗体依赖细胞毒性(ADCC)及补体依赖细胞毒性(CDC)。由主动溶解由特异 性抗体结合之目标细胞的免疫系统之效应细胞特性化ADCC效应机制。其为作为体液性免 疫反应之部分的抗体可起作用以限制且含有感染之机制之一。典型ADCC由天然杀手(NK) 细胞介导。然而，单核细胞及多形核颗粒球(PMN)亦可介导ADCC。ADCC由于对预先抗体反 应之依赖性而成为适应性免疫反应之部分。典型ADCC包括活化NK细胞且取决于藉由NK细 胞表面上之Fc受体对经抗体涂布之感染细胞的识别。Fc受体识别诸如IgG之结合病原体 感染之目标细胞表面之抗体之Fc (晶体)部分。NK细胞表面上存在之最常见Fc受体称作 ⑶16或Fc γ RIII。结合IgG之Fc受体后，天然杀手细胞释放诸如IFN-γ之细胞激素，及 含有穿孔素及颗粒酶之进入目标细胞且藉由触发细胞凋亡促进细胞死亡之细胞毒性颗粒。 此点类似于(但独立于)细胞毒性T细胞(CTL)之反应。ADCC之程度取决于数种因素，包 括IgG亚型(IgM > IgGl > IgG^、目标细胞上之抗体密度、抗体糖基化模式以及目标本身 之特性。CDC为替代效应机制，结合细胞抗原之抗体可藉由其引起所结合细胞之中和。抗体 能够活化所谓的典型补体途径。在典型补体途径中，结合抗体募集补体系统之蛋白质，其经 由一系列相互作用杀死结合细胞。补体系统由血液中所见之通常以无活性酶原形式循环的 许多小蛋白质组成。当藉由数种触发之一刺激时，系统中之蛋白酶裂解特异性蛋白以释放 细胞激素且启始进一步裂解之放大级联。此活化级联之最终结果为杀死细胞之膜攻击复合 物之反应及活化的大规模放大。超过20种蛋白质及蛋白质片段构成补体系统，包括血清蛋 白、浆液性蛋白及细胞膜受体。包含针对癌抗原之治疗抗体的不同研究展示抗肿瘤活性要求活化诸如ADCC及 CDC之经由结合抗体Fc区而活化的效应机制。因此，关于抗体治疗剂之作用之另一问题为 抗体Fc区与所募集效应分子的相互作用。IgG抗体之Fc区与诸如巨噬细胞、NK细胞及补 体蛋白之效应分子上Fc受体的结合受到抗体CH2结构域糖基化之影响。尤其，已展示天 冬酰氨酸297处N-连接之寡醣上海藻糖的程度影响IgG Fc区与NK细胞上Fc γ III受体 (CD16)之结合。糖基化对补体活化之作用仍待阐明。抗体糖基化具有物种特异性且因此生 产细胞系之性质对抗体结合且介导效应功能之能力具有重大影响。归因于上述抗体糖基化 差异，主张表达于CHO细胞及人类Per. C6细胞中之抗体将不同程度地影响以抗体为主之药 物之治疗作用。发明概述在一个方面，本发明系关于包含至少两种结合不同CD5表位的抗CD5抗体之抗体 组合物。在本发明之另一个方面，该组合物包含选自由如表1中所示的抗体1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、 33、34、35、36、及37中之任一者所组成之群组的抗⑶5抗体分子。较佳地，该组合物包括包含如表1中所示的抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37
中之任一者的VL及VH序列之抗体。各抗体(以名称列举)之VL及VH序列提供于表2及 3中。较佳地，该组合物包括包含如表1中所示的抗体1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及37 中之任一者的 CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2 及 CDRL3 序列之抗体。较佳地，该组合物包含与表1中所示的抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、
14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及37 中 之任一者结合相同表位之抗体。较佳地，该组合物包含能够抑制如表1中所示的抗体1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、
36、及37中之任一者与人类⑶5结合之抗体。以下为本发明之具体实例根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体1、包含抗体1之VL及VH序列之抗体、包含抗体1之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体1结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 1与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体2、包含抗体2之VL及VH序列之抗体、包含抗体2之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体2结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 2与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体3、包含抗体3之VL及VH序列之抗体、包含抗体3之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体3结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 3与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体4、包含抗体4之VL及VH序列之抗体、包含抗体4之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体4结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 4与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体5、包含抗体5之VL及VH序列之抗体、包含抗体5之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体5结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 5与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体6、包含抗体6之VL及VH序列之抗体、包含抗体6之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体6结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 6与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体7、包含抗体7之VL及VH序列之抗体、包含抗体7之⑶RH1、⑶RH2、⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体7结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 7与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体8、包含抗体8之VL及VH序列之抗体、包含抗体8之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体8结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 8与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体9、包含抗体9之VL及VH序列之抗体、包含抗体9之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RLl、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体9结合相同表位之抗体、及能够抑制抗体 9与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体10、包含抗体10之VL及VH序列之抗体、包含抗体10之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体10结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体10与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体11、包含抗体11之VL及VH序列之抗体、包含抗体11之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体11结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体11与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体12、包含抗体12之VL及VH序列之抗体、包含抗体12之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体12结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体12与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体13、包含抗体13之VL及VH序列之抗体、包含抗体13之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体13结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体13与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体14、包含抗体14之VL及VH序列之抗体、包含抗体14之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体14结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体14与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体15、包含抗体15之VL及VH序列之抗体、包含抗体15之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体15结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体15与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体16、包含抗体16之VL及VH序列之抗体、包含抗体16之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体16结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体16与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的抗⑶5抗体分子抗体17、包含抗体17之VL及VH序列之抗体、包含抗体17之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体17结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体17与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体18、包含抗体18之VL及VH序列之抗体、包含抗体18之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体18结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体18与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体19、包含抗体19之VL及VH序列之抗体、包含抗体19之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体19结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体19与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体20、包含抗体20之VL及VH序列之抗体、包含抗体20之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体20结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体20与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体21、包含抗体21之VL及VH序列之抗体、包含抗体21之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体21结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体21与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体22、包含抗体22之VL及VH序列之抗体、包含抗体22之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体22结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体22与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体23、包含抗体23之VL及VH序列之抗体、包含抗体23之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体23结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体23与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体M、包含抗体M之VL及VH序列之抗体、包含抗体M之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体M结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体对与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体25、包含抗体25之VL及VH序列之抗体、包含抗体25之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体25结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体25与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体沈、包含抗体沈之VL及VH序列之抗体、包含抗体沈之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体沈结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体26与人类⑶5结合之抗体。
根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体27、包含抗体27之VL及VH序列之抗体、包含抗体27之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体27结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体27与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体观、包含抗体观之VL及VH序列之抗体、包含抗体观之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体28结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体观与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体四、包含抗体四之VL及VH序列之抗体、包含抗体四之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体四结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体四与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体30、包含抗体30之VL及VH序列之抗体、包含抗体30之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体30结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体30与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体31、包含抗体31之VL及VH序列之抗体、包含抗体31之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体31结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体31与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体32、包含抗体32之VL及VH序列之抗体、包含抗体32之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体32结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体32与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体33、包含抗体33之VL及VH序列之抗体、包含抗体33之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体33结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体33与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体34、包含抗体34之VL及VH序列之抗体、包含抗体34之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体34结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体34与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体35、包含抗体35之VL及VH序列之抗体、包含抗体35之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体35结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体35与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体36、包含抗体36之VL及VH序列之抗体、包含抗体36之⑶RHl、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体36结合相同表位之抗体、及能够抑制抗
12体36与人类⑶5结合之抗体。根据本发明之抗体组合物，其中该抗体组合物包含选自由以下者所组成之群组的 抗⑶5抗体分子抗体37、包含抗体37之VL及VH序列之抗体、包含抗体37之⑶RH1、⑶RH2、 ⑶RH3、⑶RL1、⑶RL2、及⑶RL3序列之抗体、与抗体37结合相同表位之抗体、及能够抑制抗 体37与人类⑶5结合之抗体。在另一个方面，本发明系关于一种具有本发明之抗体组合物中之任一者的结合特 异性之双特异性结合分子。在另一个方面，本发明系关于一种包含本发明之抗体组合物或本发明之双特异性 结合分子作为活性成份之医药组合物。在另一个方面，本发明系关于一种本发明之抗体组合物或本发明之双特异性结合 分子，其用作药剂。在另一个方面，本发明系关于一种本发明之抗体组合物或本发明之双特异性结合 分子的用途，其用于制备药剂。在另一个方面，本发明系关于一种治疗方法，其包含向有需要之患者投予本发明 之医药组合物。在另一个方面，本发明系关于一种制备抗体组合物之方法，该方法包含以下步 骤-以编码包含VH及VL链之第一同源对且能够结合第一明显(distinct)⑶5表位 的第一抗体之第一表达构建体转染第一真核细胞群体；-以编码包含VH及VL链之第二同源对且能够结合第二明显⑶5表位的第二抗体 之第二表达构建体转染第二真核细胞群体；-视情况对第三或进一步的群体、表达构建体、同源对、及⑶5表位重复步骤b)；-选择所转染的第一、第二及可选地进一步的细胞群体；-将所转染的群体组合在一个容器(pot)中，以获得细胞库；-在允许表达抗体之条件下培养细胞库的细胞；及-自上清液回收且纯化抗体组合物。在另一个方面，本发明系关于一种包含真核细胞之至少两个子群之细胞库，其中 各子群经一个编码包含VH及VL链之同源对且能够结合明显⑶5表位的抗体之表达构建体 转染或转导。在另一个方面，本发明系关于一种杀死表达⑶5的细胞之方法，其包含向表达⑶5 的细胞投予本发明之抗体组合物或本发明之双特异性结合分子，从而杀死表达CD5的细 胞。在附属申请专利范围中阐明本发明之较佳具体实例。定义抗体术语”抗体”描述血清之功能组份且其通常称作分子(抗体或免疫球蛋白) 之集合或一个分子(抗体分子或免疫球蛋白分子)。抗体分子能够与特异性抗原决定子 (抗原或抗原表位)结合或反应，其接着可诱导免疫学效应机制。各个抗体分子通常视为具 有单特异性，且抗体分子之组合物可为单克隆(亦即，由相同抗体分子组成)或多克隆(亦 即，由两种或两种以上与同一抗原或甚至不同抗原上之相同或不同表位反应的不同抗体分子组成)的。各抗体分子具有使得其能够特异性结合对应抗原之独特结构，且所有天然抗 体分子均具有具两个相同轻链及两个相同重链之相同总体基本结构。抗体亦统称为免疫球 蛋白。如本文中所用之术语抗体亦意欲包括嵌合及单链抗体，以及抗体之结合片段，诸如 Fab.Fv片段或scFv片段，以及多聚形式，诸如二聚IgA分子或五价IgM。抗体可为人类、鼠 类、嵌合、人源化或改形抗体。CDR 术语” CDR"-互补决定区系如 Lefranc 等人 Q003) IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-Iike domains. Dev. Comp Immunol 27,55-77 所定义。术语”重组多克隆蛋白之不同成员(a distinct member of a recombinant polyclonal protein) ”表示一种包含不同但同源蛋白质分子的蛋白质组合物之蛋白质分 子，其中各蛋白质分子与组合物之其它分子同源，而亦含有可变多肽序列之一或多段，其特 性在于多克隆蛋白质之具体成员之间的氨基酸序列差异。同源VH及VL编码对术语”同源VH及VL编码对(cognate VH and VL coding pair)”描述相同抗体生产细胞内含有的或源自相同抗体生产细胞的VH及VL编码序列之原 始对。因此，同源VH及VL对表示最初存在于获得该细胞之供体中的VH及VL配对。术语” 自 VH 及 VL 编码对表达之抗体(an antibody expressed from a VH and VL coding pair)，， 指示抗体或抗体片段由载体、质粒或含有VH及VL编码序列之类似物产生。当以完整抗体 或其稳定片段形式表达同源VH及VL编码对时，其保留最初自获得其之细胞所表达的抗体 之结合亲和力及特异性。同源对之文库亦称为同源对之库或集合且可单独地保留或汇集。不同表位术语”不同表位(distinct印itope)”意谓构成表位之氨基酸序列不 同。由于两个不同表位可共有部分氨基酸序列，因此不同表位可为重迭表位。表位使用术语”表位(epitope) ”描述在动物、较佳地哺乳动物且最佳人类中具有 抗原活性或免疫原活性的较大分子(例如抗原或抗原位点)之一部分。具有免疫原活性之 表位为引发动物抗体反应的较大分子之一部分。具有抗原活性之表位为藉由在此项技术中 熟知之任何方法，例如藉由本文所述之免疫检定所测定，抗体免疫特异性结合的较大分子 之一部分。抗原表位不必具有免疫原性。抗原为抗体或抗体片段免疫特异性结合之物质， 例如毒素、病毒、细菌、蛋白质或DNA。除非抗原或抗原位点极小，否则其通常具有一个以上 表位且通常能够刺激免疫反应。表位可为线性或构形表位。线性表位由经抗体识别的蛋白 质分子上之约6至10个相邻氨基酸组成。相反，构形表位由并非依次排列之氨基酸组成。 此处，抗体仅识别3维结构。当蛋白质分子折迭成三维结构时，形成表位之氨基酸并置，使 得抗体能够识别序列。在变性蛋白质中，仅可识别线性表位。根据定义，构形表位必须在折 迭蛋白质外部。识别构形表位之抗体仅可在轻度、非变性程序下结合。视表位之位置而定， 结合相同抗原上之不同表位的抗体可对其所结合的抗原之活性具有不同影响。结合抗原活 性位点中的表位之抗体可完全阻断抗原之功能，而在不同表位处结合的另一抗体可对抗原 之活性不具有影响或仅具有轻微影响。然而，该等抗体仍可活化补体，从而使得抗原消除， 且当将在相同抗原上之不同表位处结合的一或多个抗体组合时可产生协同作用。在本发明 中，表位较佳为CD5之胞外结构域的一部分。本发明之抗原较佳为抗体或抗体片段免疫特 异性结合之胞外结构域CD5蛋白、多肽或其片段。CD5相关抗原亦可为抗体或抗体片段免疫 特异性结合之CD5多肽或其片段之胞外结构域的类似物或衍生物。能够彼此竞争结合相同抗原之抗体可结合同一或重迭表位，或可具有彼此密切接近之结合位点，以便主要由位阻 引起竞争。免疫球蛋白术语”免疫球蛋白”通常用作血液或血清中所见的抗体之混合物的集 合名称，但其亦可用以表示源自其它来源之抗体的混合物。免疫球蛋白分子术语”免疫球蛋白分子”表示各个抗体分子，例如其为免疫球蛋 白之一部分或任何多克隆或单克隆抗体组合物之一部分。重迭表位如本文中所用，术语”重迭表位(overlapping epitopes) ”意谓表位之 氨基酸序列重迭，亦即表位共有至少一个存在于两个表位中之氨基酸残基。结合重迭表位 之抗体彼此抑制与抗原之结合。举例而言，第一抗体与同第二表位重迭之第一表位之结合 (其中第二表位已由第二抗体结合)可抑制至少10 %，诸如至少20 %，例如至少30 %，诸如 至少40%，例如至少50%，诸如至少60%，例如至少70%，诸如至少80%，例如至少90%, 诸如100%。典型地，如实施例所述，藉由结合实验在饱和抗体条件下，以表达CD5的细胞及 单独荧光标记抗体之FACS分析，或表面等离子共振使用捕获或结合至流动细胞表面的CD5 抗原，确定抗体对之”重迭表位”的分析。多克隆抗体术语”多克隆抗体”描述能够与同一或不同抗原上的数种不同特异性 抗原决定子结合或反应之不同抗体分子之组合物。通常，认为多克隆抗体之变异性位于多 克隆抗体之所谓的可变区。然而，在本发明之情况下，例如，如在含有两种或两种以上抗体 同型的抗体混合物情况下，多克隆性亦可理解为描述存在于所谓的恒定区中之各个抗体分 子之间的差异，该等抗体同型诸如人类IgGl同种型、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl及IgA2，或鼠 类IgGl同种型、IgGh、IgG2b、IgG3及IgA。为达成本发明之目的，该多克隆抗体亦可称为” 抗体组合物(an antibody composition) ”。多克隆蛋白/多克隆性如本文中所用术语”多克隆蛋白(polyclonal protein)，， 或”多克隆性(polyclonality) ”系指包含不同但同源且较佳地选自免疫球蛋白超家族的蛋 白质分子之蛋白质组合物。因此，各蛋白质分子与组合物之其它分子同源，而亦含有可变多 肽序列之一或多段，其特性在于多克隆蛋白之具体成员之间的氨基酸序列差异。该等多克 隆蛋白之已知实例包括抗体或免疫球蛋白分子、T细胞受体及B细胞受体。多克隆蛋白可 由蛋白质分子之定义子集组成，该子集已藉由普遍特征定义，例如在针对所需目标抗原之 多克隆抗体情况下，诸如共有对所需目标的结合活性。蛋白质/多肽”蛋白质”或”多肽”意谓不考虑长度或转译后修饰的任何氨基酸 链。蛋白质可以单体或多聚体形式存在，包含两个或两个以上装配多肽链、蛋白质之片段、 多肽、寡肽或肽。重组抗体使用术语”重组抗体”描述自细胞或细胞系表达之抗体分子或数种分 子，该细胞或细胞系经包含不与细胞天然相关联的抗体之编码序列的表达载体转染。转染本文中术语”转染(transfection)”用作用于将外源DNA引入细胞中的广 义术语。该术语亦意欲涵盖用于将外源DNA引入细胞中的其它功能等效方法，诸如转化、感 染、转导或融合供体细胞与受体细胞。可变多肽序列/可变区术语”可变多肽序列(variable polypeptide sequence)，，及，，可变区(variable region)，，可互换使用。


图1 分选脾细胞(细节参见实施例1)。设定(描述)以下分选门·门1 活细胞(FSC/碘化丙锭图)(左下图)；·门2 浆细胞作为⑶43阳性/⑶138阳性被选出(右下图)；·门3:成对辨别(右上图)；图2 鼠类-mSympleXTMPCR。用于扩增且同源连接来自单细胞的重链及轻链抗体基 因之多路重迭延伸RT-PCR。细节参照实施例1。图3:鼠类库克隆。藉由重迭延伸藉由剪接将来自单浆细胞之编码VH/VL基因对 的mSymplex PCR产物池剪接成编码人类κ恒定轻链之基因。将编码完全人类-小鼠嵌合 抗体之基因池插入表达载体中，接着插入双向启动子盒OXCMV)。图4 哺乳动物全长抗体表达载体00-VP-002之图示。Amp及Amp pro，氨苄青霉素 抗性基因及其启动子；PUC起点，PUC复制起点；CMV，驱动轻链及重链表达之哺乳动物启动 子；IGHV前导序列，基因组人类重链前导序列；H填充片段，交换重链可变区编码序列之插 入物；IGHG1，编码基因组免疫球蛋白同型Gl重链恒定区之序列(序列展示于附录2中)； 兔B-球蛋白A，兔β-球蛋白多聚A序列；IGKV前导序列，鼠类κ前导序列；L填充片段， 交换轻链编码序列之插入物；SV40终止子，猿猴病毒40终止子序列；FRT，Flp识别目标位 点；Neo，新霉素抗性基因；SV40多聚A，猿猴病毒40多聚A信号序列。图5 =ELISA中表位定位。由在竞争ELISA中所测定，抗⑶5抗体与针对⑶5之胞 外结构域的所列参考抗体之抑制程度。抑制评分如下25-49%:适度竞争⑴；50-74%:强 竞争(++) ；75-100% 极强竞争(+++)。*指示未进行竞争实验。图6 藉由Biacore分析所测定，针对⑶5之胞外结构域的抗⑶5抗体之表位图。 所产生的抗CD5抗体及四种参考抗体的结合位点之平面图。图中之编号为对应于本申请案 之其它处所示的抗体编号之抗体编号。图7 展示藉由Biacore分析所测定针对⑶5之胞外结构域上的不重迭表位之四 种抗体的同时结合之传感图。A)展示整个实验之传感图。B)集中于抗CD5抗体与CD5之 胞外结构域同时结合的来自A之传感图。图中之编号为对应于本申请案之其它处所示的抗 体编号之抗体编号。图8:展示藉由流动式细胞计数所测定针对CD5之胞外结构域上的不重迭表位 之四种抗体的同时结合之直方迭图。CEM细胞经染色如下(抗⑶5抗体、线、平均荧光强 度)无抗体、实线、7. 29 ；克隆12、虚线、479. 33 ；克隆14、点线、636. 65 ；克隆17、划点线、 396. 29 ；克隆34、划点点线、181. 14 ；克隆12、14、17与34之混合物，具有灰色填充之实线、 1292. 72。图9 以所示抗体混合物在4°C或37°C处理隔夜的细胞之平均荧光强度(MFI)。与 4°C相比，37°C MFI下降指示CD5内化。图10 以所示抗体及抗体混合物处理指示时间段的CLL细胞(患者31)中⑶5含 量之西方印迹分析。纳入α-微管蛋白作为装载对照组。发明详述抗体混合物在一具体实例中，本发明系关于包含能够结合至少两个不同⑶5表位、较佳地两个不重迭⑶5表位的抗体分子之抗体组合物。可在表达⑶5的细胞之FACS分析中使用不 同标记抗体或藉由使用表面等离子共振使用捕获或结合至流动细胞表面之CD5抗原确定 抗体之不重迭性质。亦可使用基于ELISA之方法。由于与单克隆抗体相比，结合两个不重 迭CD5表位之组合物对CD5构形差异可能较不敏感且对突变较不敏感，因此可使用其针对 较宽范围之表达CD5的细胞。此外，与靶向单一表位之组合物相比，结合两个不重迭CD5表 位之抗体组合物可提供优良功效。对于单克隆抗⑶5抗体疗法，一定比例之患者对抗体治疗未作出有效反应。对于 一些患者而言，此点可归因于抗体之快速清除或由于抗体在患者中产生针对抗体之免疫反 应。对于一些患者而言，缺乏反应可能由于其特定表达⑶5的细胞表达某一构形之⑶5，其 中单克隆抗体不能结合其表位。此可由于糖基化差异，由于结构域缺失或由于突变及/或 SNP。抗体能够结合CD5上的至少两个不同表位之抗体组合物将更广泛适用，此系由于 与抗体所识别之表位相比，两个表位均改变的可能性降低。此外，所有抗体均由患者清除之 可能性更小。对于改善之临床功效及针对较宽范围之表达CD5的细胞型的较宽效用而言，可增 加组合物中各自结合明显CD5表位之抗体的数目。因此，组合物可包含能够结合三个不重 迭表位之抗体。该组合物可包含能够结合四个不重迭表位之抗体。本申请案之实施例展示 至少四种不同抗体可同时结合CD5。此并不排除有可能或甚至有利地藉由谨慎选择抗体设 计包含能够结合四个以上、诸如五个、六个、七个或八个不重迭表位的抗体之组合物。在另一具体实例中，该组合物包含结合一种表位之一种以上抗体分子，诸如结合 不同但重迭表位之两种抗体。包括用于重迭表位之抗体可能存在优势，由于此举会增加结 合表位之可能性。其中的一个基本原理为归因于构形变化或突变或SNP，一些患者及/或一 些癌细胞中之表位可改变。尽管此点可影响一种抗体结合，但其不可能影响结合重迭表位 之另一抗体的结合。此外，由于被视为抗原，一种抗体存在由患者清除之风险。藉由包括结 合不同但重迭表位之两种抗体，两种抗体之一的清除之后果及表位之突变之后果削弱。因此，在一具体实例中，该组合物包含结合不同但重迭表位之两种抗体。在另一具 体实例中，组合物包含结合相同表位之两种不同抗体分子。结合相同或重迭表位之抗体可 具有相同或不同同型。因此，包含针对两个不重迭表位的抗体之抗体组合物可包含三种、四种、五种或六 种不同抗体分子，以便两种抗体结合两个重迭表位或相同第一表位，且另一抗体结合第二 表位。当然，组合物可包含能够结合重迭表位或能够结合相同表位之两种以上，诸如三种或 四种抗体分子。因此，藉由具有一种以上抗体用于各表位或藉由具有数种抗体用于重迭表 位，组合物中所包括的抗体之总数可大于6。保持抗体之总剂量恒定，对于组合物中所包括 的各其它抗体而言，各抗体浓度降低。因此，预期在维持可接受之功效的同时，组合物中可 包括的抗体之数目有限。基于表面等离子共振结合研究及增殖检定之观测结果且考虑到生 产中的困难，预期可藉由将抗体数目自6增加至7、8、9、10或10种以上获得有限(若存在) 其它优势。当然，此并不排除组合物包含10种以上抗体，诸如11、12、13、14、15、16、17、18、 19或20种或20种以上抗体，诸如25种或25种以上抗体，例如30种或30种以上抗体，诸 如40种或40种以上抗体，诸如50种或50种以上抗体。
较佳地，该组合物包含至少一种结合结构域I表位之抗体，且其可包含至少两种 结合结构域I表位之抗体。较佳地，该组合物包含至少一种结合结构域II表位之抗体，且其可包含至少两种 结合结构域II表位之抗体。在一具体实例中，组合物中之至少一种抗体结合结构域III表位，组合物更佳包 含至少两种结合结构域III表位之抗体，且组合物亦可包含三种结合结构域III表位之抗 体。受体结合研究已展示一些抗体实际上可刺激其它抗体之结合，使得在以一或数种 抗体饱和受体后，特定抗体以较高量结合受体。当设计针对CD5之抗体组合物的组合物时， 由于用于不重迭表位之抗体提供较高协同作用，所以较佳地使用此等抗体。组合物之抗体可为具有非人类可变链及人类恒定链之嵌合抗体。非人类可变链可 来自小鼠、大鼠、绵羊、猪、鸡、非人类灵长类或其它适当动物。为获得全人类抗体，可使用人 类抗体基因在转基因动物中产生抗体。抗体亦可为所谓的人源化抗体，其中非人类CDR序 列已接枝于人类构架序列中。较佳地，人类恒定链为IgGl或IgG2同型。更佳地，组合物中之所有抗体具有相同 同型以便于制备。然而，在组合物中可有利包括不同同型之抗体。较佳地，本发明之抗体组合物包含能够结合选自由人类CD5、突变人类CD5及人类 CD5之缺失变异体所组成之群组的CD5之抗体。较佳地，抗体能够结合人类与非人类灵长 类CD5，以便其可在临床实验之前在相关毒物学研究中加以测试。较佳地，非人类灵长类为 食蟹猴(Macaca fascicularis) 0食蟹猴为相对较小动物，且极其适于毒物学研究。因此， 其它灵长类CD5较佳为食蟹猴CD5。较佳地，抗体以约相同亲和力结合人类及非人类灵长类 CD5。当在一种组合物中组合2、3、4、5、6、7及8种抗体时，本发明已展示在一或多个功 能检定中之优良结果。尽管此等数据提供选择组合物中抗体数目的指导，但其决不应以限 制方式进行解释。即便实验数据仅展示同时结合4种抗体，然该组合物可包含8种以上抗 体。在组合物中包括6种以上抗体可能存在其它原因，诸如抗体成员之清除速率差异。组合物中抗体之另一较佳特征为蛋白质同质性，使得抗体可易于纯化。对于各个 抗体成员而言，具有一个明显峰之离子交换层析谱较佳以易于特性化。清晰离子交换层析 谱亦较佳以易于特性化最终抗体组合物。亦较佳组合可使用离子交换层析法区分以便具有 所有抗体之组合物可一次性特性化之抗体。抗体可为或来自任何来源，诸如人类、鼠类、兔、鸡、猪、羊驼、绵羊。如实施例中所 述，抗体亦可为嵌合抗体或可使用在此项技术中所述之熟知方法经人源化、高人源化或为 其改形形式。本发明之抗体分子可系选自具有如表1所示之抗体编号1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、 35、36、及37之CDR的抗体分子。此等抗体分子之CDR的氨基酸序列与核苷酸序列指示于 表1中。此外，本发明之抗体组合物可较佳地包含一种、两种、三种、四种、五种、六种或排 他地选自具有如表1所示之抗体编号:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体分子
之抗体。表1 抗体1-37之⑶R区的氨基酸及DNA序列
seqseqseq蛋白质序列idididnononovh编号名称cdrhlcdrh2cdrh311d8sgysftgytm24linpynggtt49c ardyygs spdfdyw6923121sgysftdytm25linpynggtm50c ardnygs spdfdyw7034h10sgysftgytm24linpynggtm50c ardnygs spyfdyw7148j23sgysftgytm24linpynggtm50c ardnygs spyfdyw715504sgysftgytm24linpynggtt49c ardyygs spdfdyw6964h2sgftfsnyam26sissggntf51cvryyygvtywyfdvw7275g2sgftfs 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 sggsyty64cvrhgyfdvw90281a20sgytftsyrm41ridpydsgth65cafydgayw91298e15sgfnikdtym31ridpangntk56casydpdyw92308c10sgysftdytm25linpynggtr60cardttatyyfdyw93313p16sgymftnhgm42wintytgept61carrvatyfdvw94324f3sgymftnygm43wintytgept61ctrrshitldyw95335m24sgyiftnygm44wintytgept61carrrttafdyw96345024sgfnikdyyi45widpengrte66cnngnyvrhyyfdyw97357b16sgytfinygm46wintytgept61ctrrreitfdyw98
361e8sgytftdyfi47eiypgssnty67carsgispftyw99372h16sgyiftgyni48avypgngdts68cakydrgfasw100蛋白质序列 _VL
抗体
离号名称CDRLl11D8SQGISNHL23121SQGIRNYL34H10SQGISNHL48J23SQGINNYL5504SQGISNHL64H2SQSVDHDGDSYM75G2SQSVD YDGDSYM88G8SQDISNYL96M4SQDISTYL102E3TSSISSSYL114E24NSSVSSSYL124F10TSSISSSYL137J9TSSISSSYL147P9SEN1YYNL158E24SENIYGYF166L18SQDINNYI177H7SQDINKYI181E7SENIYSYL198J21SQGIRNYL207111SQDVRTDV218M9SQDVITAV221P21SQ SIGTSI232H11SSQSLLNQKNYL243M22SSSVSSSYL255M6SENTYYNL265H8SQBGra277119SQSLLYSSDQKNYL281A20NSSVSYM298E15SENIYYNL308C10SSSLSYM313P16SQRIGTSM324F3SQ SIGTSI335M24SQNIGTSI345024ISSVSYM357B16SQTIAra361E8SQSLVHSNGNTYL372H16NESVEYSGTSLM
SEQSEQSEQIDIDIDNONONOCDRL2CDRL3101YFTSS128CQQYSNLPYTF151102YFTSS128CQQYSNLPYTF151101YFTSS128CQQYSNLPYTF151103YYTSS129CQQYSKIPYTC152101YFTSS128CQQYSNLPYTF151104YAASN130CQQNYEDPTF153105YAASN130CQQSNEDPTF154106YYTSR131CQQGDALPWTF155107FYTSR132CQQGNSLPFTF156108YGTSN133CQQWSSRPPTF157109YGTSN134CQQYSGYPLTF158108YGTSN134CQQYSDYPLTF159108YGTSN134CQQRSYFPFTF160109YNANS135CKQVYDVPFTF161110YNAKT136CQHHYGTPFTF162111HYTST137CLQ YDNLWTF163112HYTST137CLQ YDNLWTF163113YNAKT136CQHHYGYPYTF164102YHTST138CQQYSNLPLTF165114YSASF139CQQHYTSPWTF166115YSASY140CQQHYSTPWTF167116KSASE141CQQSNRWPLTF168117YWAST142CQNDYDYPYTF169118YSTSN143CHQYHRSPLTF170109YNANS135CQQTFD VPWTF171118KNASE144CQQSNSWPLTY172119YWAST142CQQYYNYPLTF173120YDTSK135CQQWSSNPFTF174109YNANS135CKQAYD VPWTF175121YDTSN146CQQWSSFPPTF176122KSASE141CQQSNSWPLTF177116KSASE141CQQSNSWPLTF177123KDASE147CQQSDSWPLTF178124YATSN148CQQWSSNPRTF179125KNASE144CQQSNSWPLTF177126YKVSN149CWQNTHFPQTF180127SAASN150CQQSRQVPLTF18权利要求
1.一种抗体组合物，其包含至少两种能够结合不同⑶5表位之抗⑶5抗体。
2.权利要求1的抗体组合物，其中该等表位不重迭。
3.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该等抗体结合CD5之选自由结构域I、结构域 II及结构域III所组成之群组的至少一个胞外结构域。
4.在先权利要求之一的抗体组合物，其中至少一种结合明显CD5表位之抗体能够增强 至少一种其它抗体与不同的明显CD5表位的结合。
5.在先权利要求之一的抗体组合物，其中至少一种结合明显CD5表位之抗体能够增加 至少一种其它抗体对CD5之最大结合能力。
6.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该等抗体为重组抗体。
7.在先权利要求之一的抗体组合物，该等抗体为具有鼠类可变区与人类恒定域之嵌合 抗体。
8.权利要求7之抗体组合物，其中该人类恒定域为IgGl或IgG2。
9.在先权利要求之一的抗体组合物，该等抗体为人源化抗体。
10.权利要求1至6中任一项的抗体组合物，该等抗体为人类抗体。
11.在先权利要求之一的抗体组合物，其中至少一种该等抗⑶5抗体具有ΙΟΛ 或以下 之Kd值。
12.权利要求1至10中任一项的抗体组合物，其中至少一种该等抗⑶5抗体具有10_9M 或以下之Kd值。
13.权利要求1至10中任一项的抗体组合物，其中至少一种该等抗⑶5抗体具有IO-ltlM 或以下之Kd值。
14.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该⑶5为人类⑶5。
15.权利要求14之抗体组合物，其中该人类CD5具有表7所示序列。
16.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该等抗体能够结合非人类的哺乳动物CD5。
17.权利要求16之抗体组合物，其中该等抗体能够以实质上等于该等抗体与人类CD5 结合之亲和力结合该非人类哺乳动物CD5。
18.权利要求16或17之抗体组合物，其中该哺乳动物为灵长类。
19.权利要求18之抗体组合物，其中该灵长类为食蟹猴(Macacafascicularis) 0
20.在先权利要求之一的抗体组合物，其中至少一种抗体分子包含表6所示恒定域κ 轻链序列。
21.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该组合物之所有抗体分子包含表6所示恒 定域κ轻链序列。
22.在先权利要求之一的抗体组合物，其中至少一种抗体分子包含表6所示恒定域重 链序列。
23.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该组合物之所有抗体分子包含表6所示恒 定域重链序列。
24.一种双特异性结合分子，其具有在先权利要求之一的抗体组合物之结合特异性。
25.权利要求M之双特异性结合分子，其为双可变域型抗体。
26.权利要求M之双特异性结合分子，其为双特异性Fab片段或双特异性scFV。
27.在先权利要求之一的抗体组合物，其包含至少一种抗⑶5抗体分子，所述抗体分子选自具有表 1 所示抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体。
28.在先权利要求之一的抗体组合物，其包含至少两种抗CD5抗体分子，所述抗体分 子选自具有表 1 所示抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体。
29.在先权利要求之一的抗体组合物，其包含至少三种抗⑶5抗体分子，所述抗体分 子选自具有表 1 所示抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体。
30.在先权利要求之一的抗体组合物，其包含至少四种抗⑶5抗体分子，所述抗体分 子选自具有表 1 所示抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体。
31.在先权利要求之一的抗体组合物，其包含至少五种抗⑶5抗体分子，所述抗体分 子选自具有表 1 所示抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体。
32.在先权利要求之一的抗体组合物，其包含至少六种抗CD5抗体分子，所述抗体分 子选自具有表 1 所示抗体:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体。
33.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该组合物之所有抗CD5抗体分子皆选自由 具有抗体1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、对、25、 26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、及 37 之 CDR 的抗体。
34.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该组合物包含至少一种另外的抗⑶5抗体 分子，其中该另外的抗体分子结合第三明显表位。
35.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该组合物包含至少一种另外的抗⑶5抗体 分子，其中该另外的抗体分子结合第四明显表位。
36.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该组合物包含至少一种另外的抗⑶5抗体 分子，其中该另外的抗体分子结合第五明显表位。
37.在先权利要求之一的抗体组合物，其中该组合物包含至少一种另外的抗⑶5抗体 分子，其中该另外的抗体分子结合第六明显表位。
38.权利要求34至37中任一项的抗体组合物，其中包含在该组合物中之至少3种抗 CD5抗体分子并不彼此抑制与CD5之结合。
39.权利要求35至37中任一项的抗体组合物，其中包含在该组合物中之至少4种抗 CD5抗体分子并不彼此抑制与CD5之结合。
40.权利要求36至37中任一项的抗体组合物，其中包含在该组合物中之至少5种抗 CD5抗体分子并不彼此抑制与CD5之结合。
41.权利要求37之抗体组合物，其中包含在该组合物中之至少6种抗⑶5抗体分子并 不彼此抑制与CD5之结合。
42.权利要求1的抗体组合物，该组合物包含两种抗体的组合，所述组合选自 Ab9+Abl8、Ab9+Abl5、Ab9+Ab31、Ab9+Abl4、Ab9+Abl7、Abl8+Abl5、Abl8+Ab31、Abl8+Abl4、 Abl8+Abl7、Abl5+Ab31、Abl5+Abl4、Abl5+Abl7、Ab31+Abl4、Ab31+Abl7、及 Abl4+Abl7。
43.权利要求1的抗体组合物，该组合物包含三种抗体的组合，所述组合选自 Ab9+Abl8+Abl5、Ab9+Abl8+Ab31、Ab9+Abl8+Abl4、Ab9+Abl8+Abl7、Ab9+Abl5+Ab31、 Ab9+Abl5+Abl4、Ab9+Abl5+Abl7、Ab9+Ab31+Abl4、Ab9+Ab31+Abl7、Ab9+Abl4+Abl7、 Abl8+Abl5+Ab31、Abl8+Abl5+Abl4、Abl8+Abl5+Abl7、Abl8+Ab31+Abl4、Abl8+Ab31+Abl7、 Abl8+Abl4+Abl7、Abl5+Ab31+Abl4、Abl5+Ab31+Abl7、Abl5+Abl4+Abl7、及 Ab31+Abl4+Abl7。
44.权利要求1的抗体组合物，该组合物包含四种抗体的组合，所述组 合选 自Ab9+Abl8+Abl5+Ab31、Ab9+Abl8+Abl5+Abl4、Ab9+Abl8+Abl5+Abl7、 Ab9+Abl8+Ab31+Abl4、Ab9+Abl8+Ab31+Abl7、Ab9+Abl8+Abl4+Abl7、Ab9+Abl5+Ab31+Abl4、 Ab9+Abl5+Ab31+Abl7、Ab9+Abl5+Abl4+Abl7、Ab9+Ab31+Abl4+Abl7、Abl8+Abl5+Ab31+Abl4、 Abl8+Abl5+Ab31+Abl7、Ab18+Ab15+Ab14+Ab17、Ab18+Ab31+Ab14+Ab17、及 Abl5+Ab31+Abl4+Abl7。
45.权利要求1的抗体组合物，该组合物包含五种抗体的组合，所述组合选自 Ab9 +Ab 18 +Ab 15 +Ab31 +Ab 14, Ab9+Abl8+Abl5+Ab31+Abl7、Ab9+Ab 18+Ab 15+Ab 14+Ab 17, Ab9+Ab 18+Ab31 +Ab 14+Ab 17、Ab9+Ab 15+Ab31 +Ab 14+Ab 17、及 Ab 18+Ab 15+Ab31 +Ab 14+Ab 17。
46.权利要求1的抗体组合物，该组合物包含抗体Ab9+Abl8+Abl5+Ab31+Abl4+Abl7。
47.权利要求1的抗体组合物，该组合物包含多种抗体的组合，所述组合选自 9+14+15+17+18+31、9+14+15+17+18、9+15+18+31、及 9+15+18 ；其中该组合物能够引起CD5内化。
48.权利要求1的抗体组合物，该组合物包含多种抗体的组合，所述组合选自14+17、 17+18 ；其中该组合物不能够引起CD5内化。
49.一种医药组合物，其包含权利要求1-48中任一项的抗体组合物或权利要求M-26 中任一项的双特异性结合分子作为活性成份。
50.权利要求1-48中任一项的抗体组合物，或权利要求M-26中任一项的双特异性结 合分子，其用作药剂。
51.权利要求50之组合物或双特异性结合分子，其用于治疗或预防癌症。
52.权利要求50之组合物或双特异性结合分子，其用于治疗或预防慢性淋巴细胞性白 血病。
53.权利要求50之组合物或双特异性结合分子，其用于治疗或预防类风湿性关节炎。
54.权利要求1-48中任一项的抗体组合物或权利要求2446中任一项的双特异性结合 分子之用途，其用于制备药剂。
55.治疗方法，包括向有需要之患者投予权利要求49之医药组合物。
56.制备抗体组合物之方法，其包含a.用第一表达构建体转染第一真核细胞群体，所述表达构建体编码含VH及VL链之第 一同源对、且能够结合第一明显⑶5表位的第一抗体；b.用第二表达构建体转染第二真核细胞群体，所述表达构建体编码含VH及VL链之第 二同源对、且能够结合第二明显⑶5表位的第二抗体；c.视情况对第三或更进一步的群体、表达构建体、同源对、及CD5表位重复步骤b)；d.选择所转染的第一、第二和可选地进一步的细胞群体；e.将多个所转染的群体组合在一起，获得细胞库；f.在允许表达该等抗体之条件下培养细胞库的细胞；及g.自上清液回收且纯化抗体组合物。
57.权利要求56的方法，其中该抗体组合物为权利要求1-48中任一项的抗体组合物。
58.权利要求56的方法，其中该等细胞经位点特异性整合而转染。
59.权利要求56的方法，所述抗体中，VH及VL区为鼠的，恒定区为人的。
60.权利要求59的方法，其中所有抗体包含相同的重链恒定区。
61.一种细胞库，其包含真核细胞之至少两个子群，其中每一子群被一个编码抗体的表 达构建体转染或转导，所述抗体包含VH及VL链之同源对、且能够结合明显⑶5表位。
62.权利要求61之细胞库，其中该细胞库编码权利要求1-48中任一项的抗体组合物。
63.权利要求61之细胞库，其中该等细胞系用位点特异性整合进行转染。
64.一种杀死表达⑶5之细胞之方法，其包含向表达⑶5之细胞投予权利要求1-48中 任一项的抗体组合物或权利要求M-26中任一项的双特异性结合分子，从而杀死表达CD5 之细胞。
全文摘要
本发明系关于包含抗CD5抗体之组合物的领域。详言之，本发明系关于包含至少两种能够结合不同CD5表位的抗CD5抗体之抗体组合物。本发明进一步关于具有该等抗体组合物之结合特异性的双特异性分子。本发明亦关于医药组合物、抗体组合物之用途及用于制备抗体组合物之方法。本发明进一步关于细胞库及用于杀死细胞之方法。
文档编号A61P19/02GK102137873SQ200980133686
公开日2011年7月27日 申请日期2009年8月28日 优先权日2008年8月29日
发明者克劳斯·凯福德, 查尔斯·派克, 米克尔·W·佩德森, 约瑟芬·L·K·克利特加德 申请人:西福根有限公司