专利名称：：猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用的制作方法
技术领域：
：本发明所属医药产品研究开发
技术领域：
。本发明涉及猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用。本发明产品对羟自由基有很强的清除作用，可开发为天然抗氧化药品，代替人工合成的抗氧化剂治疗因人体内自由基过多而产生的疾病。
背景技术：
：猪牙花(Erythroni咖j即onicumDecne.)为百合禾斗(Xiliaceae)猪牙花属(Erythronium)多年生草本植物，生于林下湿地。分布于我国东北地区，朝鲜、日本也有分布。人体在生命活动的氧化代谢过程中会不断产生各种自由基，体内过多自由基对生物大分子造成损伤，导致细胞和组织的结构和功能减退，并对机体的衰老过程产生影响，最终导致疾病的发生。而人工合成的抗氧化剂具有一定的毒性和致癌作用。所以评价和筛选具有强抗氧化活性的大然植物已成为医学、生物学和食品科学研究的新趋势。目前，对于猪牙花植物的研究国内外鲜见报道。因此，本发明对猪牙花全草的70%的乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用进行了研究。本发明的猪牙花全草的70%的乙醇提取物产品对羟自由基有很强的清除作用，可开发为天然抗氧化药品，代替人工合成的抗氧化剂治疗因人体内自由基过多而产生的疾病。
发明内容1、一种以猪牙花全草为原料制备猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用，其特征在于包括以下步骤步骤(一)取干燥猪牙花全草，除去猪牙花全草中的杂物，然后烘干或晒干，粉碎成40目粉末，用6-8倍量70%乙醇室温下浸提8-10h;步骤(二)将步骤(一)中的70%的乙醇提取液用滤纸过滤，滤渣再分别用8倍量与6倍量70%的乙醇重复以上步骤各一次；步骤(三)将步骤(二)中的70%的乙醇滤液合并，回收乙醇，得猪牙花乙醇提取物；步骤(四)将步骤(三)中的猪牙花乙醇提取物进行抗氧化试验，对羟自由基有很强的清除作用。2、根据权利要求1所述的制备工艺，制备猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用原料为猪牙花(Erythroniumj即onicumDecne.)的干燥全草。根据本发明，本发明中的"％"是重量百分比。具体实施例方式本发明所述的制备猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1:(1)称取干燥猪牙花全草80g，除去其中的杂物，然后烘干，粉碎成40目粉末，用6倍量70%乙醇室温下浸提10h;(2)将步骤(1)中的70%的乙醇提取液用滤纸过滤，滤渣再分别用8倍量与6倍量70%的乙醇重复以上步骤各一次；(3)将步骤(2)中的70%的乙醇滤液合并，回收乙醇，得猪牙花乙醇提取物；(4)将步骤(3)中的猪牙花乙醇提取物进行抗氧化试验，对羟自由基有很强的清除作用。实施例2:(1)称取干燥猪牙花全草80g，除去其中的杂物，然后晒干，粉碎成40目粉末，用8倍量70%乙醇室温下浸提8h;(2)将步骤(1)中的70%的乙醇提取液用滤纸过滤，滤渣再分别用8倍量与6倍量70%的乙醇重复以上步骤各一次；(3)将步骤(2)中的70%的乙醇滤液合并，回收乙醇，得猪牙花乙醇提取物；(4)将步骤(3)中的猪牙花乙醇提取物进行抗氧化试验，对羟自由基有很强的清除作用。药理试验例猪牙花乙醇提取物的抗氧化作用1实验材料1.l材料猪牙花(ErythroniumjaponicumDecne.)采集于吉林省临江市老岭基地。1.2试剂甲基紫、Tris缓冲溶液、H202溶液、FeS04溶液等。2方法2.1样品溶液的制备精密称取猪牙花乙醇提取物0.25g置于50ml具塞容量瓶中，加入适量的蒸馏水，密封超声30min，待其溶解完全后，定容至刻度，得到样品母溶液，备用。在样品母溶液中，用移液枪精密移取体积为5iil，10iil，20iil，40iil，80iil，160iil，320iil，640ii1的样品母液，用蒸馏水定容于10ml容量瓶中得到浓度为0.0025,0.0050,0.0100，0.0200,0.0400，0.0800,0.1600,0.3200mg/ml的样品溶液。2.2试剂的制备称取O.2032g甲基紫用去离子水定容于100ml容量瓶中，备用。用盐酸调Tris缓冲溶液ra为3.5，备用。取30%的H202溶液1.OmL，用去离子水定容于100mL容量瓶中，备用。称取0.0695gFeS047H20用水定容于50mL容量瓶中，备用(现用现配)。2.3羟自由基OH的产生及测定取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，按顺序放入10mL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇匀静置三十分钟，记为A578。取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，Fe2+溶液lmL，H202溶液lmL按顺序放入10mL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇匀静置三十分钟，记为A0。取配制好的甲基紫溶液2mL，Tris缓冲液lmL，不同浓度梯度的待测液2mL，Fe"溶液lmL，H202溶液lmL按顺序放入10mL的刻度管中。并用去离子水定容至刻度，摇匀静置三十分钟。平行三次，记为As。2.4羟自由基OH清除率的计算利用公式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>，得出猪牙花乙醇提取物对羟自由基的清除率。2.550%抑制浓度(IC5。)的计算利用SPSS16.0软件分析，得出IC5。值。3结果3.1不同浓度的猪牙花乙醇提取物溶液对羟自由基的消除率见表l。表1不同浓度猪牙花乙醇提取物清除羟自由基结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>由表1抗氧化结果表明，随着猪牙花提取液浓度的增加，对羟自由基清除呈明显的量效关系，猪牙花提取液在0.0025-0.32mg/ml的浓度范围内，其清除率达到15.50%-64.57%。3.2利用SPSS16.0统计分析3.1中的数据见表2。从表2得出猪牙花提取物IC5。值为0.051mg/mL.这说明猪牙花乙醇提取物对羟自由基有很强的清除作用。为开发天然抗氧化药品、治疗因人体内自由基过多而产生的疾病提供了有力的依据。表2猪牙花乙醇提取物50%抑制浓度(IC5。)95%ConfidenceLimitsforVAR00003Probability:'EstimateLowerBoundUpperBounda.Aheterogeneityfactorisuseda,o厕o細()，o，o細o扁a,a維)睛/瞎2o德禱7瞎2瞎s謹/瞎jo.肌awamf入976/.—;24/.9/5-i，睛00德0德睛/謹/麵20.,0.,/6/O.柳a濯a"/ft2"aj朋2，2.7665."46.緒9.，52/必ft,a,a,o.瞎ft,a,謹5o力"a.(都W.，rt;=^6_rt;rt;o^;"<:::;',^/../.-*N<.Nl-，l-》>556677000GO-o\os90,'o'90.-o-ov57,o25权利要求一种以猪牙花全草为原料制备猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用，其特征在于包括以下步骤步骤(一)取干燥猪牙花全草，除去猪牙花全草中的杂物，然后烘干或晒干，粉碎成40目粉末，用6-8倍量70％乙醇室温下浸提8-10h；步骤(二)将步骤(一)中的70％的乙醇提取液用滤纸过滤，滤渣再分别用8倍量与6倍量70％的乙醇重复以上步骤各一次；步骤(三)将步骤(二)中的70％的乙醇滤液合并，回收乙醇，得猪牙花乙醇提取物；步骤(四)将步骤(三)中的猪牙花乙醇提取物进行抗氧化试验，对羟自由基有很强的清除作用。2.根据权利要求1所述的制备工艺，制备猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用原料为猪牙花(Erythroniumj即onicumDecne.)的干燥全草。全文摘要本发明所属医药产品研究开发
技术领域：
。本发明涉及猪牙花乙醇提取物的制剂工艺和抗氧化作用。取干燥猪牙花全草，除去猪牙花全草中的杂物，然后烘干或晒干，粉碎成40目粉末，用6-8倍量70％乙醇室温下浸提8-10h，然后用滤纸过滤，滤渣再分别用8倍量与6倍量70％的乙醇重复以上步骤各一次，合并三次滤液，回收乙醇，得猪牙花乙醇提取物。本发明产品对羟自由基有很强的清除作用，可开发为天然抗氧化药品，代替人工合成的抗氧化剂治疗因人体内自由基过多而产生的疾病。文档编号A61K36/896GK101780206SQ201010134599公开日2010年7月21日申请日期2010年3月1日优先权日2010年3月1日发明者张崇禧,蔡恩博,郑友兰申请人:山东大学威海分校