专利名称：硫代紫杉烷类衍生物新用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物化学和医药技术领域，具体涉及一种硫代紫杉烷类衍生物的用途。
背景技术：
据世界卫生组织资料显示，目前全球患乙肝的人超过3亿，其中25%的患者面临 肝硬化及肝癌的威胁。我国是乙肝病毒感染的高发区，乙肝表面抗原(HBsAg)携带率为 10%，慢性乙肝病人约3000万，此类患者病情迁延不愈，部分可发展为肝硬化和肝癌，对人 类健康危害极大。接种乙肝疫苗预防乙肝是最有效的措施，但一旦发病则必须积极的治疗。目前国内公认的治疗乙肝的疗法是综合治疗，具体为1)清除病毒，祛病毒是乙 肝的根本治疗措施，只有清除病毒，病根才能去，亦即中医所说的“治本”。近年国内外公认 的抗乙肝病毒有效药物是干扰素，但用后HBV-DNA转阴率仅30 50%，停药后易反跳。新 近研究发现，安体维康、拉米夫定、法昔洛韦、华蟾素有抗HBV作用，几种药物联用可使疗效 持久。但长期服用拉米夫定治疗引起乙型肝炎病毒变异；2)调，调整免疫，提高T细胞功能 也是治疗乙肝的有效措施。常用的免疫调整药物有DNA疫苗、基因佐剂、日达仙、胸腺肽、白 介素多糖、灵芝胺多糖、左旋咪唑(涂布剂)等，这类药物常和抗病毒药联合应用；3)保，保 肝降酶退黄疸是治疗乙肝之“标”的一种措施。常用的药物有肝力宝、硫普罗宁、水飞蓟素、 联苯双脂等；4)阻，预防和阻止肝炎发展为肝硬化和肝癌，常用的药物有虫草化纤胶囊、秋 水仙碱、D-青霉胺、复方861等。上述药物虽然对于乙肝的治疗具有一定的作用，但是仍然存在着疗效不明显、毒 副作用较大等问题。因此，寻找天然、安全、作用机制明确的新的治疗乙肝药物具有重要的 科学意义和经济价值。而关于紫杉烷类化合物抗病毒方面的研究至今还没有报道。
发明内容
本发明的一个目的是提供具有抗乙肝病毒作用的新型硫代紫杉烷类衍生物。本发明的另一个目的是提供该新型硫代紫杉烷类衍生物在制备治疗乙肝药物上 的应用。式(1)所示的硫代紫杉烷类衍生物
0HO O OH
R、S人 NH O V=UII
δΗΗ0 δ 0Y0
^ ( 1 )其中，
R为氢、Cl 18烷基、Cl 18取代烷基、C2 10烯基、C2 10炔基、C3 6环
烷基、C4 6环烯基、芳基、取代芳基、杂环基或取代杂环基，所述的取代基选自Cl 8烷 基、Cl 8烷氧基、Cl 8卤代烷基、卤素、芳基、硝基或氨基中的一种或几种。
R优选为氢、Cl 18直链或支链烷基、Cl 18直链或支链取代烷基、C2 6直 链或支链烯基、C2 6直链或支链炔基、C3 6环烷基、C4 6环烯基、芳基、取代芳基、 C5 6杂环基，所述的取代基选自Cl 8烷基、Cl 8烷氧基、Cl 8卤代烷基、卤素、芳 基、硝基或氨基中的一种或几种。R进一步优选为Cl 18烷基或苯代Cl 18烷基。R更进一步优选为Cl 12烷基或苯代Cl 4烷基。R最优选为C2 12直链烷基、C3 6支链烷基或苄基。除非另外说明，在说明书和权利要求中使用的以下术语具有下面讨论的含义“烷基”是包括直链的烷基和支链的烷基。“取代烷基”是指烷基被一个或多个取代基取代的烷基。“芳基”表示1至12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电 子系统，包括单环芳基、多环芳基以及非苯芳基。芳基的非限制性实例有苯基、萘基和蒽基。“杂环基”是含有一个或多个杂原子的环状基团，包括具有芳香性基团和非芳香性 基团，而杂原子一般是指N、0、S、P等。杂环基包括但不限于四氢吡喃基、2，2-二甲基-1， 3-二氧戊环、哌啶子基、N-甲基哌啶-3-基、哌嗪子基、N-甲基吡咯烷-3-基、吡咯烷基、吗 啉代基、硫代吗啉代基、硫代吗啉代-1-氧化物、硫代吗啉代-1，1-二氧化物、4-乙氧羰基哌 嗪子基、3-氧代哌嗪子基、2-咪唑啉酮、2-吡咯烷酮、四氢嘧啶-2-酮及其衍生物。“卤素”包括氟、氯、溴和碘。本发明进一步提供硫代紫杉烷类衍生物在制备治疗乙肝药物上的应用。药理研究 显示式(1)所示的硫代紫杉烷类衍生物具有明显抗乙肝病毒作用以及良好的剂量依赖关系。因此，本发明的硫代紫杉烷类衍生物可制成包含安全有效量硫代紫杉烷类衍生物 及药用载体的各种制剂。“安全有效量”指的是化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作 用。安全有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等来确定。“药用载体”指的是一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于 人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能 和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受 的载体部分例子有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)，淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉等)，纤维 素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)，明胶，滑石，固体润 滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)，多元醇 (如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)，乳化剂(如吐温. )、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)， 着色剂，调味剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水等。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例绝不是对本发明的任何限制。实施例1 取IOOmL三口烧瓶，烧干，通氮气，在0°C温度下，加入BTC(3. 82g)后，加入干燥的 CH2Cl2 (40mL)，BTC全溶后，加入乙基硫醇(2. 41mL)，缓慢滴加Et3N(4. 48mL)，有白色沉淀产 生，滴加完毕后，室温过液，反应液滤去不溶物，得硫代酰氯的溶液不经任何处理，直接用于 下一步反应。取一 IOOmL三口烧瓶，加入紫杉醇中间体化合物2 (500mg)、用CH2Cl2(IOmL) 溶解，冰水浴中缓慢滴加过量酰氯，滴加完毕，室温下搅拌过液，停止反应，乙酸乙酯萃取， 饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，除去溶剂，柱层析(洗脱液石油醚/乙酸乙酯= 2/1)。得中间体化合物3为0. 165g，收率30.6%。取一 IOmL单口圆底烧瓶，烘干，冲氮气， 加入中间体化合物3(135mg)、Zn(270mg)，然后加入CH3OH,滴加冰HOAc (3mL)，在50°C下反 应，TLC检测(展开剂石油醚/乙酸乙酯=2/1)，2小时后原料消失，除去甲醇，加入乙 酸乙酯，用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水分别洗涤，无水硫酸钠干燥，除去溶剂，柱层析 (洗脱液石油醚/丙酮=2/1)得产物Ia为67mg，收率70. 1%。化合物la(R 为乙基)/H NMR (300MHz，CDCl3) δ 1. 11 (s, 3Η, 17-CH3), 1. 11 (t, 3H, J = 6. 9Hz,2 “ -CH3)，1. 23 (s, 3H, 16_CH3)，1. 73 (s, 3H, 19_CH3)，1. 83 (s, 3H, 18_CH3)，
2.24 (m, 2H, 14_CH2)，2. 36 (s, 3H, OAc)，1. 83 和 2. 54 (2m, 2H, 6_CH2)，2. 77 (q, 2H, J = 6. 9Hz)，
3.87 (d, 1H, J = 6. 9Hz，3-CH)，4. 18 和 4· 30 (2d, 2Η, J = 8. 7Hz，20_CH2)，4. 23 (m, 1H, 7-CH)，
4.70 (br s, 1H,2 ‘ -CH)，4. 93 (d, 1H, J = 9. 0Hz，5-CH)，5. 27 (s, 1H, 10-CH)，5. 60 (d, 1H, J =7. 2Hz，3' -CH)，5. 65 (d, 1H, J = 6. 9Hz，2_CH)，6. 24 (t, 1H, J = 8. 7Hz, 13-CH) ,6. 55 (d, 1H, J = 7. 5Hz，-C0NH-)，7. 34(m，1H，p_Ph)，7. 39(m，4H，o-Ph 和 m_Ph)，7. 51(t，2H，J = 7. 5Hz, m-OBz)，7. 62 (t, 1H, J = 7. 5Hz, p-0Bz) ,8. ll(d，2H，J = 7. 5Hz, o-0Bz) ；ESIMS m/z 818. 2[M+Na]+. lb :R = (CH2)2CH3Ic :R = (CH2)3CH3Id :R = (CH2)4CH3Ie :R = (CH2)5CH3lf:R= (CH2)11CH3除将乙基硫醇分别替换为丙基硫醇外、其他方法同实施例1，得到化合物lb， ESIMSm/z832. 1 [M+Na+]。除将乙基硫醇分别替换为丁基硫醇外、其他方法同实施例1，得到化合物lc， ESIMSm/z846. 2[M+Na+]。除将乙基硫醇分别替换为戊基硫醇外、其他方法同实施例1，得到化合物ld，ESIMS m/z 860. 2 [M+Na+]。除将乙基硫醇分别替换为己基硫醇外、其他方法同实施例1，得到化合物le， ESIMSm/z874. 2[M+Na+]。除将乙基硫醇分别替换为十二烷基硫醇外、其他方法同实施例1，得到化合物lf， ESIMSm/z958. 4[M+Na+]。实施例2 Ig :R = (CH3)3CIhR = CH3CH2 (CH3) CH
Ii :R = CH3CH2(CH3)2CIj :R = (CH3)2CHCH2IK :R= (CH3)2CH(CH3)CH 化合物lg(R 为异丙基)/H NMR(300MHz, CDCl3) δ 1. 11 (s，3H，17_CH3)，1. 14 (d, 3H, J = 7. 2Hz, 1 “ -CH3)，1. 19(d，3H，J = 7. 2Hz，3 〃 -CH3)，1. 24(s，3H，16_CH3)，1. 72 (s, 3H, 19-CH3)，1. 83 (s，3H, 18_CH3)，2. 25 (d, 2H, J = 7. 5Hz, 14_CH2)，2. 35 (s, 3H, OAc)，1. 83 禾口 2. 53 (2m, 2H, 6_CH2)，3. 49 (m, 1H, 2 “ -CH)，3. 86 (d, 1H, J = 6. 6Hz，3-CH)，4. 17 和 4. 30 (2d, 2H，J = 8.7Hz，20-CH2)，4.21(m，lH，7-CH)，4.45(s，lH，2' -OH),4. 72 (br s, 1H,2' -CH)， 4. 93 (d, 1H, J = 9. 0Hz，5-CH)，5· 30 (s, 1H, 10-CH)，5· 59 (d, 1H, J = 9. 0Hz，3' -CH), 5. 65 (d, 1H, J = 6. 6Hz，2-CH)，6. 24(t,1H, J = 8. 7Hz，13-CH)，6. 52(d,1H, J = 8. 7Hz, -C0NH-)，
7.33 (m, 1H, p-Ph)，7. 39 (m, 4H, o-Ph 和 m-Ph)，7. 50 (t, 2H, J = 7. 5Hz, m-OBz)，7. 62 (t, 1H, J = 7. 5Hz，p-OBz)，8. 11 (d，2H，J = 7. 5Hz，o-OBz) ；ESIMSm/z832. 1 [M+Na] +·化合物lh(R 为叔丁基)/H NMR (300MHz, CDCl3) δ 1. 11 (s，3H，17_CH3)，1. 24 (s， 3H, I6-CH3)，1. 35(s，9H，t_Bu)，1. 71 (s，3H，19_CH3)，1. 85(s，3H，18_CH3)，2. 29(d，2H，J =
8.7Hz，14-CH2)，2. 34(s，3H，OAc)，1. 85 和 2. 51 (2m，2H，6_CH2)，2. 84 (d，1H，J = 6. OHz, 1-OH), 3. 85 (d, 1H, J = 6. 9Hz，3_CH)，4. 16 和 4. 30(2d，2H，J = 8. 7Hz，20_CH2)，4. 21 (m, 1H, 7-CH),4. 41(br s，lH，2' -OH)，4. 54 (s，1H，10-0H)，4. 74 (br s，lH，2' -CH)，4. 94 (d，1H， J = 9. 3Hz，5-CH)，5. 35 (s, 1H, 10-CH)，5. 57 (d, 1H, J = 8. 4Hz,3 ' -CH)，5. 65 (d, 1H, J = 6. 6Hz，2-CH)，6. 22 (t, 1H, J = 8. 7Hz, 13-CH) ,6. 49 (d, 1H, J = 9. OHz, -C0NH-)，7. 33 (m, 1H, p-Ph)，7. 41(m，4H，o-Ph 和 m_Ph)，7. 49(t，2H，J = 7. 5Hz, m_0Bz)，7. 61 (t, 1H, J = 7. 5Hz, p-OBz) ,8. 10(d，2H，J = 7. 5Hz,o-OBz) ；ESIMSm/z846. 2[M+Na]+。化合物Ii (R 为 1-甲基丙基)，ESIMSm/z846. 2[M+Na]+。化合物Ij (R 为 1，I- 二甲基丙基)，ESIMSm/z860. 2[M+Na]+。化合物Ik (R 为 2-甲基丙基)，ESIMSm/z846. 2 [M+Na] +。化合物11 (R 为 1，2 二甲基丙基)，ESIMSm/z860. 2[M+Na]+。实施例3化合物Im (R 为苯甲基)，1H NMR(400MHz, CDCOCD3) δ 1. 14 (s，3Η，17_CH3)， 1. 19 (s，3H, 16-CH3)，1· 71 (s，3H, 19_CH3)，1. 86 (s, 3H, 18_CH3)，2. 20 (m, 2H, 14_CH2)，2. 36 (s, 3H, OAc)，1. 82and 2. 44 (2m, 2H, 6_CH2)，3. 77 (s, 1H, 2' -OH)，3. 90 (d, 1H, J = 7. OHz，3-CH)， 4. 07(d,2H, J = 4. OHz, 1 “ -CH2)，4· 15 (d，2H，J = 5· 1Hz，20_CH2)，4· 29 (m，1Η，7-CH)， 4. 35 (s，1H, 10-0H)，4. 68 (d, 1H, J = 4. 8Hz,2' -CH)，4. 94 (d, 1H, J = 9. 5Hz，5-CH)，5. 21 (s， 1H, 10-CH)，5. 55 (d, 1H, J = 6. 0Hz,3 ' -CH)，5. 66 (d, 1H, J = 7. 0Hz，2_CH)，6. 18 (t, 1H, J =8. 8Hz, 13-CH)，7. 25 (m, 1H, p-Ph), 7. 28 (t, 1H, J = 7. 7Hz, p_l〃 -Ph)，7. 39(m，4H，o-Ph and m-Ph)，7. 40(t，2H，J = 7. 2Hz，m_l〃 -Ph)，7. 47(d，2H，J = 7. 3Hz，o_l〃 -Ph)，7. 56 (t, 2H, J = 7. 5Hz, m-OBz)，7. 64 (t, 1H, J = 7. 3Hz, p-0Bz)，7. 90 (m, 1H, J = 5. 2Hz, -C0NH-)， 8. 10(d，2H，J = 7. 3Hz, o-0Bz) ；ESIMSm/z880. 3[M+Na]+。化合物ln(R 为对甲基苯基)，ESIMS m/z 880. 3[M+Na]+。化合物Io (R 为对甲氧基苯基)，ESIMS m/z 896. 3 [M+Na]+。实施例4
体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的体外活性测试试验(一)试验目的样品抗乙型肝炎病毒(HBV)活性筛选。试验包括在病毒-细胞水平的试验中，检 测样品的细胞毒性、对乙型肝炎病毒表面和核心抗原的分泌，以及病毒核酸(DNA)的复制 水平的影响作用。( 二)试验方法DMTT法检测样品对IfepG 2. 2. 15细胞的毒性将H印G 2. 2. 15细胞在96孔培养板中培养3天后，加入不同浓度含药培养液，继 续培养9天(每3天换液一次)，收集培养上清液待测。向96孔培养板中加MTT，4小时后加 入150 μ L DMS0,震荡lOmin，使结晶物充分溶解，置入酶联检测仪中以570nm波长测定各孔 光吸收值(OD值)，重复3次，依照Reed2Muench法计算药物对H印G 2. 2. 15细胞的毒性作 用，影响细胞生长的状况，导致半数细胞死亡量所需的浓度(TC5tl)和最大无毒浓度(TCtl)。
2)培养上清液中HBsAg和HBeAg含量的检测(ELISA法)用上海实业科华生物技术公司的HBsAg和HBeAg诊断试剂盒测定，向包被好的条 形板中加入样品，并加入等量的酶标结合物，37°C反应1小时后洗板，重复5次。加入显色 液A和B，15分钟后终止反应，测定0D45(i/63(i，并根据OD值计算样品对HBV抗原的抑制率。(三)试验结果表1硫代紫杉烷类衍生物对HBsAg和HBeAg的抑制 *测试拉米夫定体外抗乙肝病毒活性通用浓度。
试验结果表明硫代紫杉烷类衍生物对HBsAg和HBeAg的抑制均有一定的抑制，且 大部分化合物的抑制率均高于阳性对照拉米夫定。
权利要求
一种式(1)所示的硫代紫杉烷类衍生物在制备治疗乙肝药物中的用途，其中，R为氢、C1～18烷基、C1～18取代烷基、C2～10烯基、C2～10炔基、C3～6环烷基、C4～6环烯基、芳基、取代芳基、杂环基或取代杂环基，所述的取代基选自C1～8烷基、C1～8烷氧基、C1～8卤代烷基、卤素、芳基、硝基或氨基中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的硫代紫杉烷类衍生物，其中R为氢、Cl 18直链或支链烷 基、Cl 18直链或支链取代烷基、C2 6直链或支链烯基、C2 6直链或支链炔基、C3 6环烷基、C4 6环烯基、芳基、取代芳基、C5 6杂环基，所述的取代基选自Cl 8烷基、 Cl 8烷氧基、Cl 8卤代烷基、卤素、芳基、硝基或氨基中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的硫代紫杉烷类衍生物，其中R为Cl 18烷基或苯代Cl 18烷基。
4.根据权利要求1所述的硫代紫杉烷类衍生物，其中R为Cl 12烷基或苯代Cl 4焼基。
5.根据权利要求1所述的硫代紫杉烷类衍生物，其中R为C2 12直链烷基、C3 6支链烷基或苄基。
6.药物组合物，包括权利要求1 5中任一项所述的硫代紫杉烷类衍生物及药用载体。
全文摘要
本发明公开了一种硫代紫杉烷类衍生物的新用途，硫代紫杉烷类衍生物具有式(1)结构，其中，R为氢、C1～18烷基、C1～18取代烷基、C2～10烯基、C2～10炔基、C3～6环烷基、C4～6环烯基、芳基、取代芳基、杂环基或取代杂环基，所述的取代基选自C1～8烷基、C1～8烷氧基、C1～8卤代烷基、卤素、芳基、硝基或氨基中的一种或几种。本发明的硫代紫杉烷类衍生物可以应用于制备治疗乙肝药物方面。
文档编号A61P1/16GK101838250SQ201010156619
公开日2010年9月22日 申请日期2010年4月27日 优先权日2010年4月27日
发明者孙逊, 昌军, 林国强, 檀爱民, 章思及, 谢晨, 陆洪福 申请人:江苏先声药物研究有限公司