专利名称：饿蚂蝗提取物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中草药提取物及其应用，具体地说是饿蚂蝗提取物及其应用。
背景技术：
饿蚂蝗又名红掌草、山豆根、烂玉树、大红袍、山蚂蝗、粘身草等，为豆科 山蚂蝗属植物饿蚂蝗Desmodium Multiflorum DC.的全株。具有活血止痛，解毒消肿的功 效，主治脘腹疼痛、小儿疳积、妇女干血痨、腰扭伤、创伤、尿道炎、腮腺炎、淋巴结炎和毒蛇 咬伤等。高脂血症是中老年人常见的疾病之一，也是倍受关注和严重影响中老年人正常生 活的疾病。由于脂肪代谢或运转异常使血浆中的一种或几种脂质高于正常称为高脂血症。 可表现为高胆固醇血症、高甘油三酯血症，或两者兼有。血脂过高是加速动脉粥样硬化多个 因素中的最危险因素。此外，高脂血症也是促进高血压、糖耐量异常、糖尿病的一个重要危 险因素。高脂血症还可导致脂肪肝、肝硬化、胆石症、胰腺炎、眼底出血、失明、周围血管疾 病、跛行、高尿酸血症等。肝脏是全身代谢和营养的中心器官，碳水化合物、蛋白质(氨基酸)、脂肪的合成 和分解主要通过肝脏完成。同时，有多种维生素通过肝脏进行合成、活化和储存。此外，肝 脏还具有生物转化功能，大部分内源性和外源性代谢终末产物需要通过肝脏转化后方能以 安全的形式排出体外。高血脂症是导致脂肪肝的主要原因血浆内甘油三酯升高导致肝脏 内甘油三酯排泄障碍，形成肝内脂质储积，造成脂肪肝。而肝脏疾病是影响人类健康的最为 常见的疾病之一。目前，对脂肪肝的治疗仍是全球性的严峻课题。试验证明，饿蚂蝗提取物在防治肝损伤方面有很好的作用，贵州大学已申请发明 专利《一种饿蚂蝗提取物及其制备方法和应用》申请号200910102986. 2，该发明公开了饿蚂 蝗提取物的提取方法及提取物在制备化学性肝损伤方面的应用，但公开专利涉及的内容不 是饿蚂蝗提取物的全部，而其应用也仅限于肝损伤方面，本发明人开展对饿蚂蝗提取物及 其应用作进一步研究，作为对上述专利的充实和发展。
发明内容
本发明的目的在于在上述已公开的发明的基础上对饿蚂蝗的提取物及 其应用作进一步研究，作为对上述已公开的发明的的充实和发展，使饿蚂蝗提取物获得综 合利用。研究试验证明，饿蚂蝗提取物不仅在防治肝损伤方面有很好的作用，而且在防治 高血脂及高脂血症引起的脂肪肝方面也有很好的作用，特别是乙酸乙酯提取物作用更好。本发明饿蚂蝗提取物是指以饿蚂蝗植物根、茎或叶为原料，经75 95% (V/V)乙 醇回流提取，回收溶剂乙醇，得乙醇总提物浸膏，总提物浸膏用水分散，用乙酸乙酯萃取，回 收萃取剂乙酸乙酯，得乙酸乙酯提取物。本发明饿蚂蝗提取物应用，是指上述饿蚂蝗植物根、茎或叶的乙醇总提物浸膏或 乙酸乙酯提取物在制备用于防治高血脂及高脂血症引起的脂肪肝病的药物的应用。本发明乙醇总提物浸膏或乙酸乙酯提取物，可以制成各种制剂、剂型使用，为了证 明本发明提供的饿蚂蝗提取物对降低血脂和防治高脂血症引起的肝脏疾病的作用效果，本 发明采用灌胃高脂乳剂建立小鼠高脂血症肝损伤模型，同时在造模期间除空白组和模型组外，其余各组灌胃相应的药物。检测小鼠血清中TC、TG水平和ALT、AST活力值，分离出肝 脏，检测肝组织勻浆中SOD活性和MDA含量。实验表明饿蚂蝗四种提取物(饿蚂蝗叶乙醇 总提物和乙酸乙酯提取物；饿蚂蝗根茎乙醇总提物和乙酸乙酯提取物)均能显著降低高脂 性肝损伤小鼠的TG、TC水平，降低ALT、AST的活性，降低MDA含量和提高SOD活性。其中以 饿蚂蝗根茎的乙醇总提物浸膏或饿蚂蝗叶乙酸乙酯提取物的调血脂和保肝作用活性最好， 高低剂量下活性相差不大，稳定性好，有较好的降脂保肝作用，可以应用在制备防治高血脂 及高脂血症弓I起的脂肪肝病的药物方面。饿蚂蝗植物根茎的乙醇总提物浸膏或饿蚂蝗叶乙酸乙酯提取物的应用，还指在制 备调血脂、保肝和抗脂质过氧化及高血脂症引起的脂肪肝病的药物方面的应用。效果本发明提供了饿蚂蝗提取物在制备治疗高脂血症肝损伤的药物中应用，与 现有药物相比，其具有毒性低，安全可靠，药效作用强，资源丰富，工艺简单，制备成本低的 特点，可以制成各种剂型。
具体实施例方式实施例1、干燥饿蚂蝗叶1000g粉碎后加入75% (V/V)乙醇，回流 提取三次(3X3000mL)，每次2h，合并乙醇提取液，回收溶剂，得乙醇总提物浸膏。乙醇总提 物浸膏用水分散，用乙酸乙酯(5X2000mL)五次萃取，回收溶剂，得饿蚂蝗叶乙酸乙酯提取 物。干燥饿蚂蝗根茎1000g粉碎后加入75%乙醇，回流提取三次(3X3000mL)，每次 2h，合并乙醇提取液，回收溶剂，得乙醇总提物浸膏。乙醇总提物浸膏用水分散，用乙酸乙酯 (5X2000mL)五次萃取，回收溶剂，得饿蚂蝗根茎乙酸乙酯提取物。实施例2、本实施例为提取物的降脂保肝作用实验。原理由于脂肪代谢或运转异常使血浆中的一种或几种脂质高于正常称为高脂血 症。可表现为高胆固醇血症、高甘油三酯血症，或两者兼有。高血脂症是导致营养型肝损伤 的主要原因血浆内甘油三酯升高导致肝脏内甘油三酯排泄障碍，形成肝内脂质储积，造成 脂肪肝。仪器UV-2000型紫外可见分光光度计(尤尼可上海仪器有限公司)，CS-H1型混 合器(北京博励阳科技公司)，LRH-150生化培养箱(上海一恒科技有限公司)，Multiskan MK3酶标仪(热电上海仪器有限公司)，TGL-16高速离心机(江苏金坛市中大仪器厂)， 985370-395型组织勻浆机(BI0SREC，Mexico)，各种规格移液器等。试剂联苯双酯滴丸(浙江万邦药业有限公司，批号080210)；决明降脂片(长 春人民药业集团有限公司，批号20071201)；猪油自制，胆固醇(纯度>99. 5%) ；3号胆 盐(北京奥博星生物技术有限公司，批号20080204)；丙硫氧嘧啶(Merck schuchardt 0HG 85662Hochenbrum, Germany，批号608710)；总胆固醇TC、甘油三酯TG(上海北海生物技术 有限公司，批号BH-20612)；谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST (南京建成生物工程研究所， 批号20080807)；超氧化物歧化酶S0D(南京建成生物工程研究所，批号20090727)、丙二醛 MDA (南京建成生物工程研究所，批号20080725)；考马斯亮蓝G250 (上海化学试剂公司分装 厂，批号=20050115)方法脂肪乳剂的配置取20g猪油水浴37°C融化，放于研钵中，往研钵里加10g 胆固醇，10g蔗糖，lg丙硫氧嘧啶，充分搅拌，溶解，加入吐温-801mL，丙二醇2mL，研磨均勻； 徐徐加入10 %胆盐20mL，研磨乳化，再加蒸馏水至lOOmL。制备好之后储存于4°C冰箱备用。
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各项指标测定选用健康雄性小鼠160只(体重25g士2g)，随机分为16组；分别为 空白组、模型组、联苯双酯阳性对照组、决明降脂片阳性对照组及各给药组，上午除空白组 灌胃(ig)蒸馏水外，其余组均灌胃乳剂0.2mL/10g。下午空白组跟模型组灌胃(ig)0.5% 的羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，其余组均灌胃(ig)相应的药。分组情况及给药量见表1。两 周后，末次给药前禁食不禁水12h，末次给药后2h对小鼠眼眶取血，血液3000r/min离心 lOmin,取其血清，按照试剂盒说明分别测定血清TG、TC、ALT、AST，分离肝脏并称量约300mg 和约30mg的肝脏用0-3°C生理盐水勻浆成10% (测MDA)和(测SOD)的肝脏勻浆液， 测定MDA和S0D，用考马斯亮蓝测定蛋白含量。ALT、AST、TG、TC、SOD和MDA的测定均按照试剂盒的要求进行，实验数据& ±3表 示，实验统计采用spssl7. 0统计软件进行单因素方差分析。结果(1)饿蚂蝗提取物对血脂的影响表1显示，模型组血清中的TG、TC水平显著高于空白组(P < 0.01，P < 0.001)， 说明造模成功。与模型组相比，根茎乙醇总提取物、叶乙醇总提物和叶乙酸乙酯提取物的高 剂量组血清中的TC和TG水平明显低于模型组(P < 0. 05，P < 0. 01)，且根茎乙醇总提取物 高剂量组TC水平低于阳性对照决明降脂片，三组的TG均小于阳性对照决明降脂片。从结 果可以看出，饿蚂蝗根茎乙醇总提物的降血脂效果最好，降血脂作用与阳性对照药决明降 脂片相当，且其在高剂量(1000mg/kg)和在低剂量(250mg/kg)下的TG、TC水平相差不大， 说明其稳定性好，具有临床价值；饿蚂蝗叶乙酸乙酯提取物在高剂量(750mg/kg)和低剂量 (187. 5mg/kg)时也均显示有较好的降血脂效果，也具有一定的临床意义；而饿蚂蝗叶乙醇 总提物虽然高剂量(1000mg/kg)下降血脂作用显著，但是在低剂量(250mg/kg)下TG、TC水 平显著增高，并大于模型组，饿蚂蝗根茎乙酸乙酯提取物降血脂作用不明显，高剂量下还显 示一定毒性，所以两者无临床应用价值。表1饿蚂蝗提取物对营养性肝损伤小鼠总胆固醇、甘油三酯的影响(f = 10)
组别剂量/mg/kgTC/mmol/LTG/mmol/L空白组/3.06 士 0.490.39 土 0.17模型组/5.53士1.98##0.83 士 0.14—联苯双酯阳性对照组2002.66 士1.18"0.78 土 0.10决明降脂片阳性对照组7902.91±0.84“0.63 土 0.14* ##P < 0. 01，< 0. 001，与空白组相比；P < 0. 05，**P < 0. 01，与模型组相比。(2)饿蚂蝗提取物对ALT、AST的影响表2可以看出，模型组血清中的ALT、AST显著高于空白组(P < 0. 01，P < 0. 001)， 说明高血脂症能引起小鼠肝损伤。与模型组相比，饿蚂蝗各提取物均具有显著的降低模型 组小鼠血清中ALT和AST活性的能力(P < 0. 001，P < 0. 01，P < 0. 05)。与阳性对照药比较， 根茎乙醇总提物高剂量组降低ALT活性优于联苯双酯。从结果可以看出，饿蚂蝗根茎乙醇 总提物是具有最好的降ALT、AST活性，降酶活性略低于联苯双酯，且其在高剂量(lOOOmg/ kg)和在低剂量(250mg/kg)下的ALT、AST水平相差不大，稳定性好；饿蚂蝗叶乙酸乙酯提 取物在高剂量(750mg/kg)和低剂量(187. 5mg/kg)时均具有较好的降酶活性，也具有一定 的临床意义。表2饿蚂蝗提取物对营养性肝损伤引起肝损伤小鼠ALT，AST, MDA，SOD的影响
(i 土 s， =10) ##P < 0. 01，###P < 0. 001 与空白组相比；P < 0. 05. **P < 0. 01，与模型组相比。(3)饿蚂蝗提取物对脂质过氧化的影响表2显示，模型组肝脏勻浆液中的SOD活性显著低于空白组(P < 0. 001)，MDA含 量显著高于空白组(p< 0.01)，说明高脂血症小鼠脂质过氧化反应增强。与模型组相比， 根茎乙醇总提物和乙酸乙酯提取物高剂量组、叶乙醇总提物和乙酸乙酯提取物高剂量组能 显著降低MDA含量，升高SOD活性((P<0.01)。其中根茎乙醇总提物、叶乙醇总提物和叶 乙酸乙酯提取物的高剂量降低MDA显著性大于联苯双酯阳性对照组，升高SOD显著性与其 相当。根茎乙酸乙脂提取物高剂量组降低MDA和升高SOD显著性与联苯双酯阳性对照组相 当。结果显示，饿蚂蝗根茎乙醇总提物和饿蚂蝗叶乙酸乙酯提取物的高低剂量组均具有很 好的降低MDA和升高SOD活性，说明两者抗氧化效果好，稳定性好。综上所述，饿蚂蝗根茎乙醇总提物和叶乙酸乙酯提取物具有最显著的调血脂(TG， TC)、保肝(ALT、AST)和抗脂质过氧化(MDA，S0D)作用，两者均可用于治疗高血脂症引起的 肝损伤。实施例3、饿蚂蝗提取物片剂的制备制备方法取上述饿蚂蝗根茎乙醇总提物100g，加入淀粉250g、阿拉伯胶15g后加 入适量80 %的甲醇作润湿剂混勻制成软材，于60°C温度下干燥至含水量3%以下，然后将 烘干的物粉碎过14目筛，最后加入硬脂酸镁5g及滑石粉20g混勻后，过12目筛，整粒，压 片，质检、包衣，制成1000片。最后所应说明的是以上实施例仅用以说明，而非限制本发明的技术方案，尽管参 照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解依然可以对本 发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均 应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
权利要求
一种饿蚂蝗提取物，其特征是以饿蚂蝗植物干燥根、茎或叶为原料，经75～95％乙醇回流提取，回收溶剂乙醇，得乙醇总提物浸膏；总提物浸膏用水分散，用乙酸乙酯萃取，回收萃取剂乙酸乙酯，得乙酸乙酯提取物。
2.按照权利要求1所述的饿蚂蝗提取物的应用，其特征是指饿蚂蝗植物根、茎或叶的 乙醇总提物浸膏或乙酸乙酯提取物在制备用于防治高血脂及高脂血症引起的脂肪肝病的 药物方面的应用。
3.根据权利要求2所述的饿蚂蝗提取物的应用，其特征是指饿蚂蝗植物根茎的乙醇总 提物浸膏或饿蚂蝗叶乙酸乙酯提取物在制备用于防治高血脂及高脂血症引起的脂肪肝病 的药物方面的应用。
4.根据权利要求3所述的饿蚂蝗提取物的应用，其特征是饿蚂蝗植物根茎的乙醇总提 物浸膏或饿蚂蝗叶乙酸乙酯提取物在制备调血脂、保肝和抗脂质过氧化及高血脂症引起的 脂肪肝病的药物方面的应用。
全文摘要
本发明饿蚂蝗提取物及其应用，涉及中草药提取物及其应用，是以中药饿蚂蝗植物根茎或叶为原料经75～95％(V/V)乙醇回流浸取，回收溶剂乙醇，得乙醇总提物浸膏。总提物浸膏用水分散，用乙酸乙酯萃取，回收萃取剂得乙酸乙酯提取物，试验证明上述提取物在防治高血脂及高血脂症引起的脂肪肝病有较好的作用，可用于制备防治高血脂及高脂血症引起的脂肪肝病的药物，与现有药物相比，毒性低，安全可靠，药效作用强，资源丰富，工艺简单，成本低。
文档编号A61P39/06GK101912435SQ20101024950
公开日2010年12月15日 申请日期2010年8月10日 优先权日2010年8月10日
发明者康文艺, 张前军 申请人:贵州大学