专利名称：用于制备并入了有效生物活性分子的微粒的方法
技术领域：
本发明涉及用于制备药物填充的聚合物微粒的方法，该聚合物微粒包括气体内核以及外壳，所述粒子适合于作为治疗成分的部分，尤其适合用于药物输送。
背景技术：
使用基于微粒的超声造影剂来增强医疗成像中的超声对比度。最近的研究表明微粒对从脉管系统的药物输送也具有治疗可能；微泡可以增大内皮细胞的渗透性，并且因此降低从脉管系统的药物输送的障碍。药物输送还可以通过自身装载了微泡的药物直接进行，这将允许生物配送中的巨大改变，同时可能减少诸如细胞毒性药剂的副作用。美国6，896，659涉及使用超声将治疗药剂输送到受试者内局部区域、以便触发药剂从具有指定组的机械属性的中空微泡释放的方法。在美国6，896，659中所公开的药剂具有受控脆性，其特征在于，均勻的壁厚度与直径比(其定义了离散阈值力量强度)。美国 6，896，659专门公开了用于制备微泡的单一乳剂方法，其中，使用环辛烷作为在微泡创建中形成内核的液体。在稍后步骤中通过冻干法移除该环辛烷。从现有技术中已知经复乳剂(double emulsion)方法在聚合物球体中的药物合并。(Sorisoles Diez 等’ European Journal of Pharmaceutics andBiopharmaceutics 63 (2006) 188-197)(Diez 等))根据这里所描述的复乳剂方法，通过将含药水溶液添加到有机溶剂中的聚合物溶液内以制备第一乳剂来合成聚合球体。随后，使该第一乳剂再次乳化在水相中，其后萃取出有机溶剂。
发明内容
期望合成这样一种药剂，其具有单独一个大的气态内核，可以以在超声药物输送中能够接受的压力和频率在声学上激活该气态内核，并且该药剂具有包括亲水和/或疏水 (hydrophopic)药物的能力。我们惊奇地发现当通过使用特定比率的聚合物和溶剂获得具有大的中空内核的稳定微粒时，合并的疏水和亲水药物的量都增加了。因此，在第一方面中，本发明涉及用于制备生物活性药剂填充的聚合物微粒的下列方法，所述方法包括下列步骤通过混合有机溶剂(1)、生物可降解的聚酯以及对于聚合物的有机非溶剂(2)并且向该混合物添加从0到40%体积比(ν/ν)的水溶液来提供第一乳剂(Α)，其中，生物可降解的聚酯/有机非溶剂的比率是1 10到1 1，并且其中，将生物活性药剂添加到有机混合物和/或水溶液；通过将过量水溶液添加到该第一乳剂(A)来制备第二乳剂(B)；施加用于使有机溶剂(1)挥发的条件；施加用于去除水的条件；
施加用于去除非溶剂O)的条件。通过使用该方法，获得聚合微粒，其将对于亲水和/或疏水药物的高合并效率与大的优选是中空的内核相结合。经由根据Diez等的方法形成的微粒带来了具有比水的密度更高的聚合物球体，其因此可以用离心机而被分离到药水瓶的底部。这意味着不存在大的内核。然而，该大的内核对于可以用于经由超声的实际药物释放的声学属性是必要的。通过执行根据本发明的方法，获得大小在0. 5-5微米范围内，特别是在1-3微米范围内的、具有单独一个气态内核并且在再分散时稳定的小的聚合微粒。在步骤a)中，在疏水药剂的情况下将生物活性药剂添加到有机溶剂并且对于亲水药剂将生物活性药剂添加到水相中。在另一方面中，本发明涉及通过该方法获得的粒子，它们包括在造影剂和治疗药剂中，并且涉及造影剂或者治疗成分，其中，可以通过具有在用于超声诊断成像的常用范围内的强度的超声能量激活大多数粒子。在所附独立和从属权利要求中陈述了本发明的特定和优选方面。可以酌情并且不只是如权利要求中所明确陈述的那样将来自从属权利要求的特征与独立权利要求的特征以及其它从属权利要求的特征相结合。
图1-7 经由根据本发明的方法获得的微粒的粒子大小分布。
具体实施例方式在本发明的上下文中使用下列定义。将参考特定实施例并且参考某些附图对本发明进行描述，但是本发明不限于此， 而仅由权利要求来限定。不应该将权利要求中的任何参考标记解释为对范围的限制。所描述的附图仅仅是示意性而不是限制性的。在附图中，为了说明性目的，可能夸大一些要素的大小并且不按比例绘制。在本说明书和权利要求中使用术语“包括”的地方，不排除其它要素或者步骤。当提及诸如“一”、“一个”、“这个”的单数名词时，使用不定冠词或者定冠词， 除非特别声明，否则这包括多个该名词。本发明的方法步骤a)在根据本发明的方法中，步骤(a)包括提供包括外壳形成聚合物、第一溶剂(1)和第二非溶剂O)的混合物。该混合物优选在从4至30°C的温度下、并且更优选是在大约室温下制成。在本发明的上下文中，外壳形成聚合物是生物可降解聚酯，更优选是从下列物质的组中选择生物可降解聚酯，该组包括L或者DL型的聚交酯、聚交酯-共-乙交酯和聚己内酯、这些组合和这些的嵌段共聚物(blockco-polymer)。使用具有1. 000和200. 000g/mol 分子量范围内的生物可降解聚酯获得中空聚合物微粒。更优选地，生物可降解聚酯的分子量在1500和20. 000之间，并且更优选地在1500和5000之间。在优选实施例中，生物可降解聚酯包括以至少一个疏水基改性的至少一个基团 (moiety)，该至少一个疏水基优选从下列组中选择，该组包括氟化物、包括6至M个碳原子的烷基链、或者它们的组合。在本发明的上下文中，溶剂(1)优选是用于外壳形成聚合物的良好溶剂。溶剂(1) 优选是对于形成外壳的聚合物的良好溶剂，并且非溶剂( 是对于形成外壳的聚合物的不良溶剂。溶剂(1)优选至少某种程度溶入水中。溶剂(1)优选相对是挥发性的。溶剂(1)优选是在步骤(C)条件下具有比水更高的蒸汽压力的溶剂，并且更优选地是从包括二氯甲烷、二氯乙烷或者三氯甲烷的组中选择的，其中，二氯甲烷、二氯乙烷或者三氯甲烷是可以使用的溶剂的例子，不过也可以使用诸如乙酸异丙酯的不含氯溶剂。认为提供非溶剂( 是为了制造包括气态内核和外壳的粒子而不是固态粒子。因此，用于溶剂O)的合适成分是期望的相对非挥发性成分，其中，所选择的外壳成分不溶解或者仅在非常低的程度上溶解。与溶剂1相反，对于非溶剂O)，水溶性优选非常低，接近零。非溶剂( 从包括在步骤(d)条件下具有明显低于水的蒸汽压力的有机成分的组中选择。更优选地，在步骤(d)条件下，非溶剂O)的蒸汽压力比水的蒸汽压力的至少低2 倍，优选低4倍。选择非溶剂( ，使得其蒸汽压力仍然足够高，以便使得其能够在冷冻干燥条件并可选地结合适当减压而被去除，使用公知的标准装置可以很容易达到这样的条件。该低蒸汽压力和低溶解度将确保溶剂( 真正停留在正在形成的囊内，导致最终形成具有中空气态空间的囊。优选地，囊包括至少一个中空空间。最优选地，囊包括一个主要的中空空间。如果在溶剂1的去除完成之前非溶剂(2)从囊中消失，那么在步骤(c)中， 粒子将显示太多收缩，从而增大它们的壁厚度。在优选实施例中，从包括具有10至20个碳原子的碳链长度的烃类的组中选择非溶剂O)。发现从环辛烷、环癸烷、癸烷、2-莰酮或者其组合中选择非溶剂( 是有利的。 在最优选的实施例中，非溶剂( 包括环辛烷，甚至更优选地，非溶剂( 必须由环辛烷组成。在本发明的上下文中，“必须由组成”意味着非溶剂O)的至少80%重量、优选是90% 至100%重量是环辛烷。可选地，在步骤(a)中，预混合物使用溶剂(1)和O)以及外壳成分和溶剂(1)。添加到有机溶剂(1)和( 以及外壳形成聚合物的混合物的是0至0. 4，优选是大约0. 2体积的水溶液，从而得到乳剂A。优选地，该水溶液是缓冲的。为了生成乳剂，优选施加搅拌或者另一种形式的搅动/剪切力。可选地，包括另外的乳化处置以便形成具有所期望的、优选是单分散的、粒子大小分布的乳剂。例如，从胶体磨、均化器、超声波降解器中选择获得这种乳化处置的合适装置。可选地，在这种处置之前或者之后，将乳剂按压通过玻璃过滤器。当期望时，可以重复这种处置许多次。如果除气相之外期望在微泡中有无极性液体贮存部，就可以将有机溶剂或者非溶剂与不能或者很难被冷冻干燥去除的油或者烷烃(诸如十六烷)混合。可以经该无极性液体贮存部将疏水治疗成分包括在内核中。可以使用十六烷或者石蜡油使内核中的治疗成分溶解。可以包括在粒子内核中的可能药物包括诸如紫杉醇 (paclitaxel)的抗癌药物。我们惊奇地发现十六烷是对于疏水治疗成分非常合适的载运液体。我们发现这些成分很容易保持溶解或者非常好地分散在十六烷中，并且因此将这些成分合并在粒子内核内部保持在油相中。因此，仅在采用超声激活之后，从粒子中释放所溶解的成分。因此，在优选实施例中，本发明涉及所要求的、还包括用于治疗成分的至少一种载运液体的粒子。最优选的载运液体是十六烷。将亲水药物添加到乳剂A中的第一水溶液。步骤b)另一个步骤(b)包括将步骤(a)的乳剂与含水组合物结合，从而形成步骤(a)的混合物在水相的乳剂B。优选将包含步骤(a)混合物的外壳成分添加到含水组合物。为了生成乳剂，优选施加搅拌或者另一种形式的搅动/剪切力。可选地，包括另外的乳化处置以便形成具有所期望的、优选是单分散的粒子大小分布的乳剂。例如，从胶体磨、均化器、超声波降解器中选择获得这种乳化处置的合适装置。可选地，在这种处置之前或者之后，将乳剂按压通过玻璃过滤器。当期望时，可以重复这种处置许多次。生成所期望的具有狭窄分布的粒子大小的备选实施例是使用诸如喷墨技术或者使用具有微通道或者微孔的衬底的乳化产生单分散乳剂的方法。优选地，对条件进行控制，使得水并且尤其是非溶剂( 还没有被去除。可选地，在步骤(a)或者(b)中包括稳定成分。优选从包括诸如聚乙烯醇、白蛋白的表面活性剂和聚合物的组或者至少两种表面活性剂和/或聚合物的组合中选择这种稳定成分。如果过程中包括这种稳定剂，过程就优选在去除溶剂(1)之后包括洗涤步骤，以便去除稳定剂。优选使用浓度在0. 1-20%之间、更优选在5-15%之间的稳定剂。步骤C)步骤(c)中的条件优选使得大部分非溶剂( 尚未被去除，更优选地，基本上没有非溶剂( 被去除。因此，优选地，在该步骤中不采取诸如应用真空的任何措施减小混合物周围的压力。去除溶剂⑴的合适方式是增加温度，例如，将温度增加到比将要去除的溶剂的沸点低几度的值，或者简单地通过搅拌混合物给定时间量。不希望受任何理论约束，认为当溶剂(1)蒸发时，乳剂内相中外壳成分的浓度增大到溶解度阈值之上，并且在该时刻外壳成分将开始沉淀。该沉淀随后导致在乳剂内相表面(乳剂小滴)处形成聚合物的外壳。认为一旦大多数或者全部溶剂(1)已蒸发，就得到外壳成分，其覆盖包括非溶剂O)、水和可选的可以在过程早期阶段已添加的其它材料的内核。步骤d)在该步骤中，使微粒与水相隔离，并且可选地，对微粒进行洗涤以净化粒子。由于微粒具有比水更低的密度，所以可以很容易通过诸如离心分离来促进粒子的分离。步骤e)在另一个步骤(e)中，施加从内核去除水的条件。这之后立即进行在步骤(f)中对非溶剂O)的去除。非常优选地，将水和非溶剂O)的去除分开在两个不同步骤中。实际上，在这些步骤之间不可避免地有一些交叠，但是优选应该避免交叠。一般情况下，通过诸如冷冻干燥技术获得水的去除。非溶剂O)的去除可能需要进一步减小压力。在步骤(e)之后得到的粒子在使用之前通常再次悬浮在合适的液体中。如果将要使用的药剂作为用于动物或者人类的造影剂或者治疗剂，就优选将粒子再次悬浮在生理盐水溶液中。通过根据本发明的方法获得的聚合粒子本发明的优选方面涉及包括气体内核和聚合外壳的聚合粒子，其中，粒子具有0.5 至5微米的平均粒子大小。更优选地，至少90%的粒子具有0. 5至5微米的粒子大小，甚至更优选地95%以上的粒子具有0. 5至5微米的粒子大小。可以通过应用机械指数最多为3、更优选地最多为1. 6、更优选地最多为1. 2、甚至更优选地最多为1. 0、甚至更优选地最多为0. 8的超声在声学上激活这种粒子。优选在0. 2以上的机械指数上、更优选地在0. 2和0. 8之间、甚至更优选地在0. 2 和0.6之间的下限处引起激活。对于超声调节的药物释放应用，期望聚合微粒再次悬浮在合适的液体中形成分散。最优选地，治疗成分包括如上所述的粒子，其中，一旦施加了在至多是3、优选低于 2的机械指数上的超声，至少声学地激活80%、优选是90%至100%的粒子，其中，将机械指数定义为峰值负压力除以频率的平方根。通常，这意味着一旦施加超声至少80%的粒子从内核释放气体和其它组分。非常期望该释放发生在很短时间范围内并且在很小的机械指数范围内。可以通过在示例中描述的事件计数设置对该声学激活进行监控。在该设置中，当 (从所激活的微粒)接收的散射信号的幅度大于检测系统噪声级别的两倍时，对激活事件进行量化和计数。在示例性实施例中，本发明涉及包括粒子的治疗成分，所述粒子包括气体内核和聚合外壳，其中，在0. 01至3的机械指数范围内、更优选在0. 1至2的机械指数范围内、更优选在0. 4至2的机械指数范围内，在0. 5单位的机械指数窗内、优选在0. 4单位的窗内、 更优选在0. 3单位的窗内，通过超声能量激活至少80%的粒子。在示例中所指定的条件下，优选通过事件计数增大到至少50来证明该激活。该事件计数的增大优选对应于回波强度增大到如上所述的机械指数窗和范围内的初始值至少1000倍(times)。可以使用标准超声换能器提供超声能量。可以脉冲触发该声能，但是为了最大化地触发药物释放，优选以连续波提供超声能量。可以使用在临床可接受的对于患者安全的诊断功率水平下的若干声脉冲对包含粒子的气体进行成像。现在，通过下列非限制性示例对本发明进行说明。药物组合物可选地，将根据本发明的微粒配制成诊断成分，其优选用于肠胃外给药。例如，肠胃外药物剂型有利地包含无菌水溶液或者根据本发明的微粒悬浮液。用于制备合适的药物溶液和悬浮液的各种技术在本领域中是已知的。这些溶液还可以包含药剂上可接受的缓冲剂以及可选地，诸如但不限于电解液(诸如氯化钠)或者抗氧化剂的添加剂。肠胃外成分可以直接注射或者与声学成像中惯用的一种或多种佐剂混合注射。
常规的赋形剂是药剂上可接受的适合于肠胃外、肠内或者局部施用的有机或者无机载体物质，其与药剂不发生有害反应。合适的药剂上可接受的佐剂包括但是不限于水、 盐溶液、乙醇、阿拉伯树胶、植物油、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉糖、硬脂酸镁、滑石粉、硅酸、 粘性石蜡、香水油、脂肪酸单甘酯和双甘酯、双季戊四脂肪酸酯、胺基酸、聚乙烯基吡咯烷酮等。可以对药物制备进行杀菌，并且如果期望，将其与诸如润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、 乳化剂、用于影响渗透压的盐分、缓冲剂、着色、调味和/或芳香物质等的辅助剂混合，辅助剂不与活性成分发生有害反应。对于肠胃外应用，特别合适的是可注射的无菌溶液，优选是油或者水溶液、也可以是悬浮液、乳剂或者包括栓剂的植入剂。安瓿是方便的单位剂量。优选在诸如可注射溶液的肠胃外施用中使用包含微粒的造影剂。以常规方式在超声过程中使用本发明的治疗成分。以充足量施予治疗成分，以便给温血动物提供全身或者将要进行成像的器官或者组织的局部的充足可视化和/或药物输送，随后使动物经受该过程。取决于所使用的诊断技术以及将要成像的器官，该剂量可以大范围变化。示例狐‘储#夕卜龍馳、100%气ι·铺碰如在Chlon等中所描述的那样制备的具有含氟端基的0. Ig的pLLA(M 2400g/ mol)。将比率1 8、1 5或者1 3的生物大分子2009和环辛烷(Aldrich C109401)溶入0. 5g 二氯甲烷中。添加120μ1、ρΗ 7. 5的30mMTrisHCl缓冲剂，并且在室温、以IlOW对其进行两次3秒的声处理(1秒时间间隔)。给该第一乳剂添加aiil 9%的聚乙烯醇(pVA、 MW13. 000-23. 000、Aldrich 363170)，并且在室温使用 25. OOOrpm 的 Ultra turrax 分散机使其均勻。将复乳剂逐滴添加到使用磁搅拌器以660rpm搅动的8ml9%的PVA中。在室温搅拌3小时之后在4000rpm(G大约是1720g)用离心机分离样本45分钟以去除DCM。重新取回顶部馏分并且用超纯水再洗涤两次(two more times)，持续20分钟。在_80°C、在预先冷却的药水瓶中对样本进行快速冷冻。使用Christ epsilon 2_6冷冻干燥机进行M小时冷冻干燥。在冷冻干燥之后，给系统充满氮。将样本储存在4°C。在冷冻干燥之前，pLLA-pFO微囊包含环辛烷。在冷冻干燥之后，对于如图1中所示的外壳厚度的所有变化，充氮的微粒保持它们的大小分布(库尔特计数器)。经冷冻干燥的微泡再次悬浮在水相中显示它们都是漂浮的。50%气体填充的pLLA-pFO微粒如在Chlon等中所描述的那样制备具有含氟端基的0. 0166g的pLLA_(Mw 2400g/ mol)。将生物大分子 2009、0. 0417g 十六烷(Aldrich H6703)和 0. 0417g 环辛烷(Aldrich C109401)溶入0. 5g 二氯甲烷中。添加120 μ UpH 7. 5的30mM TrisHCl缓冲剂，并且在室温、1 IOff对其进行两次3秒的声处理(1秒时间间隔)。给该第一乳剂添加aiil 9 %的聚乙烯醇(pVA、MW13. 000-23. 000,Aldrich 363170)，并且在室温使用 25. OOOrpm 的 Ultra turrax 分散机使其均勻。将复乳剂逐滴添加到使用的磁搅拌器以660rpm搅动的8ml 9%的PVA 中。在室温搅拌3小时之后，在4000rpm(G大约是1720g)用离心机分离样本45分钟，以去除DCM。重新取回顶部馏分并且用超纯水再洗涤两次，持续20分钟。在-80°C、在预先冷却的药水瓶中对样本进行快速冷冻。使用Christ epsilon 2_6冷冻干燥机进行M小时冷冻干燥。在冷冻干燥之后，给系统填充氮。将样本储存在4°C。在如图2中所示的冷冻干燥之后，维持包含十六烷和环辛烷的微粒的大小分布(库尔特计数器)，其中，通过冻干法用氮取代环辛烷，导致半充满的粒子。经冷冻干燥的微泡再次悬浮在水相中显示它们都是漂浮的、指示完整的粒子。100%气体填充的dDLA-dFO微粒将0. 0166g 的 pDLA-pFOO^ 4000g/mol)和 0. 0833g 的环癸烷(Flul ^8699)溶入 0. 5g 二氯甲烷中。添加120μ1、ρΗ 7. 5的30mM TrisHCl缓冲剂，并且在室温、IlOW对其进行两次3秒的声处理(1秒时间间隔)。给该第一乳剂添加aiil 9%的聚乙烯醇(pVA、MW 13. 000-23. 000、Aldrich363170)，并且在室温使用 25. OOOrpm 的 Ultra turrax 分散机使其均勻。将复乳剂逐滴添加到使用磁搅拌器以660rpm搅动的8ml 9%的PVA中。在室温搅拌 3小时之后，在4000rpm(G大约是1720g)用离心机分离样本45分钟，以去除DCM。重新取回顶部馏分并且用超纯水再洗涤两次，持续20分钟。在-80°C、在预先冷却的药水瓶中对样本进行快速冷冻。使用Christepsilon 2-6冷冻干燥机进行M小时的冷冻干燥。在冷冻干燥之后，给系统填充氮。将样本储存在4°C。如在图3中所示，由无定形pDLA-pFO制成的微粒在冷冻干燥之后显示出与在冷冻干燥之前大小分布可比较的大小分布(库尔特计数器)。形成少量聚集体导致大小分布峰值稍微增宽。在将这些微泡再次悬浮在水相中之后，粒子都是漂浮的，指示粒子完整。填充以模型疏水分子的微泡100%和50%气体填充的装载了苏丹黑的微粒将0. 0166g pLLA-pFO (Mw 2400g/mol)和溶入 0. 0833g烧烃(环辛烧，Fluka 28699 或者比率1 1的具有十六烷Aldrich H6703的环辛烷)中的0. 23mg苏丹黑溶入0. 5g 二氯甲烷中。添加120μ 1超纯水，并且在室温、110W对其进行两次3秒的声处理(1秒时间间隔)。给该第一乳剂添加 anl 9% 的聚乙烯醇(p VA, MW 13. 000-23. 000,Aldrich 363170)， 并且在室温使用25. OOOrpm的Ultra turrax分散机使其均勻。将复乳剂逐滴添加到使用磁搅拌器以660rpm搅动的8ml 9 %的PVA中。在室温搅拌3小时之后在4000rpm (G大约是1720g)用离心机分离样本45分钟，以去除DCM。重新取回顶部馏分并且用超纯水再洗涤两次，持续20分钟。在_80°C、在预先冷却的药水瓶中对样本进行快速冷冻。使用Christ epsilon 2_6冷冻干燥机进行M小时的冷冻干燥。在冷冻干燥之后，给系统填充氮。将样本储存在4°C。在冷冻干燥之前和之后，包含100%和(en) 50%气体填充的具有苏丹黑的粒子的微粒大小分布是可比较的，并且低于5微米。经冷冻干燥的微泡再次悬浮在水相中显示它们都是漂浮的、指示粒子完整。可以成功地将作为疏水模型化合物的苏丹黑合并到用复乳剂制备的微粒中。封装效率通过从在十二烷产品中提取染剂测量吸光度确定，对于100%气体填充的微泡，给出合并效率是84%，对于半气体填充的微泡，给出合并效率是93%。由单乳剂方法制成的样品显示对于100%气体填充和50%气体填充的微泡的合并效率分别是46和 76% (Kooiman 等，J. Contr. Rel. 2009)。100%气体填充的具有疏水模型化合物尼罗红的pLLA-pFO微粒将0.0166g pLLA-pFO (Mw 2400g/mol)和 0. 0833g 环辛烧(AldrichC109401)溶入0. 5g溶解了尼罗红的二氯甲烷中。添加120 μ 1、pH 7. 5的30mM TrisHCl缓冲剂，并且在室温、IlOW对其进行两次3秒的声处理(1秒时间间隔)。给该第一乳剂添加aiil 9%的聚乙烯醇(pVA、MW13. 000-23. 000、Aldrich 363170)，并且在室温使用 25. OOOrpm 的 Ultra turrax分散机使其均勻。将复乳剂逐滴添加到使用磁搅拌器以660rpm搅动的8ml9%的 PVA中。在室温搅拌3小时之后，在4000rpm(G大约是1720g)用离心机分离样本45分钟以去除DCM。重新取回顶部馏分并且用超纯水再洗涤两次，持续20分钟。在-80°C、在预先冷却的药水瓶中对样本进行快速冷冻。使用Christ epsilon 2_6冷冻干燥机进行M小时的冷冻干燥。在冷冻干燥之后，给系统填充氮。将样本储存在4°C。在冷冻干燥之前和之后，包含尼罗红的微粒的大小分布(库尔特计数器)是可比较的，并且在图4中示出。将经冷冻干燥的微泡再次悬浮在水相中显示它们都是漂浮的、指示粒子完整。可以成功地将作为疏水模型化合物的尼罗红合并到采用复乳剂制备的微粒中。荧光显微镜显示尼罗红合并在外壳中。100%和50%气体填充的装载了紫杉醇的dLLA-DFO微粒将0. 0166g pLLA-pFO (Mw 2400g/mol)和 0. Ig烷烃(环辛烷(AldrichC109401)，或者比率1 1的具有十六烷Aldrich H6703的环辛烷)溶入0. 5g0.6%的紫杉醇的二氯甲烷溶液中。添加120 μ UpH 7. 5或者pH 8. 0的30mMTrisHCl缓冲剂，并且在室温、IlOW对其进行两次3秒的声处理(1秒时间间隔)。给该第一乳剂添加aiil 9%的聚乙烯醇(pVA、 MW 13. 000-23. 000,Aldrich 363170)，并且在室温使用 25. OOOrpm 的 Ultra turrax 分散机使其均勻。将复乳剂逐滴添加到使用660rpm的磁搅拌器搅动的8ml 9%的PVA中。在室温搅拌3小时之后，在4000rpm(G大约是1720g)用离心机分离样本45分钟以去除DCM。重新取回顶部馏分并且用超纯水再洗涤两次，持续20分钟。在-80°C、在预先冷却的药水瓶中对样本进行快速冷冻。使用Christepsilon 2-6冷冻干燥机进行M小时的冷冻干燥。在冷冻干燥之后，给系统填充氮。将样本储存在4°C。图5示出了对于由复乳剂技术制成的100%和50%气体填充的粒子的大小分布 (库尔特计数器)，在冷冻干燥之前，两种大小分布都在1-5 μ m范围内。50%气体填充的粒子显示出一些聚合，这对于具有残油的粒子是众所周知的。所使用的缓冲剂的PH值对大小分布没有任何影响。虽然由单乳剂方法制成的粒子一般在大小上稍大，但是由单乳剂技术制成的粒子在冷冻干燥之前和之后显示出相同的大小分布趋势。这在图中示出。在通过单乳剂或者复乳剂处理使100%和50%气体填充的粒子再次悬浮在水相中之后，它们都开始漂浮，指示粒子完整。通过反相液相层析法(pevered phase liquid chromatography)确定紫杉醇浓度。在Agilent 1200HPLC系统上使用反相液相层析法(RP-LC)分离在二甲基甲酰胺中的所有样本的10和20 μ L的等份，该Agilent 1200HPLC系统由二进制泵、温度受控孔板取样器和二极管阵列检测器组成，装配了以0. 7mL/min流速在A (水中0. FA)中施加20 分钟B (ACN中0. 1 % FA)的线性梯度的苯基-己基(4. 6*100mm，3. 5 μ m粒子)柱。随后，使用在254nm的UV检测和能够在m/z 200-2000的质量范围中以交替(在正和负之间切换)模式执行串联质谱法测量的Agilent ESI离子阱(MSD)质谱仪对洗脱化合物进行分析。在表1中给出了所得到的封装效率，作为如在Kooiman等的J. ControledRelease 2009中所描述的单乳剂微粒的合并效率的参考。表1 对于通过单或者复乳剂制备的微粒的紫杉醇装载效率
权利要求
1.一种用于制备生物活性药剂填充的聚合物微粒的方法，所述方法包括下列步骤(f)通过混合有机溶剂(1)、生物可降解的聚酯以及对于聚合物的有机非溶剂( 并且向该混合物添加从0到40%体积比的水溶液来提供第一乳剂(A)，其中，生物可降解的聚酯 /有机非溶剂的比率是1 10到1 1，并且其中，将生物活性药剂添加到所述有机混合物和/或水溶液；(g)通过将过量水溶液添加到该第一乳剂㈧制备第二乳剂⑶；(h)施加用于使所述有机溶剂(1)挥发的条件；(i)施加用于去除水的条件；(j)施加用于去除所述非溶剂O)的条件。
2.如权利要求1所述的方法，其中，生物活性药剂填充的聚合物微粒具有在0.5和 5μπι之间的平均微粒大小。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述生物可降解的聚酯具有在1.000和200. OOOg/ mol之间的分子量。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述生物活性药剂是亲水的。
5 如权利要求1所述的方法，其中，所述生物活性药剂是疏水的。
6.如权利要求1所述的方法，其中，所述生物可降解的聚酯/有机非溶剂(2)的比率是 1 8 至 1 3。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，将在步骤e)中不被去除的非溶剂(3) 添加到步骤a)。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中，从包括下列的组中选择所述聚合物L 或者DL型的聚交酯、聚交酯-共-乙交酯、聚己内酯、这些的组合或者这些的嵌段共聚物。
9.如权利要求8所述的方法，其中，所述聚合物包括以至少一个疏水基改性的至少一个基团，所述疏水基优选从包括下列的组中选择氟化物、包括6至M个碳原子的烷基链、 或者这些的组合。
10.如权利要求1所述的方法，其中，从包括线性或者环形烃类的组中选择非溶剂，所述烃类的碳链长度为从6至14个碳原子。
11.如权利要求10所述的方法，其中，从包括环辛烷、环癸烷、癸烷或者这些的组合的组中选择所述非溶剂。
12.一种根据前述权利要求中的任一项所述的方法能够获得的包括生物活性药剂的聚合物微粒，所述聚合物微粒具有在0. 5和5 μ m之间的范围内的微粒大小。
13.如权利要求12所述的聚合物微粒，其中，所述生物活性药剂是亲水的。
14.如权利要求12所述的聚合物微粒，其中，所述生物活性药剂是疏水的。
15.一种包括如权利要求12至14中的任一项所述的聚合物微粒的药物组合物。
全文摘要
本发明涉及用于制备药物填充的聚合物微粒的方法，该聚合物微粒包括气体内核以及外壳，所述粒子适合于作为治疗成分的部分，其尤其用于药物输送。通过使用该方法，获得了聚合微粒，其将亲水和/或疏水药物与大的优选是中空的内核以高合并效率组合。
文档编号A61K49/00GK102470100SQ201080033986
公开日2012年5月23日 申请日期2010年7月20日 优先权日2009年7月31日
发明者C·H·T·什洛, M·R·博默 申请人:皇家飞利浦电子股份有限公司