专利名称：一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法
技术领域：
本发明属于黄酮类化合物的制备技术领域，具体涉及荞麦黄酮的制备方法。
背景技术：
黄酮类化合物是以2-苯基色原酮为基本母核的一类化合物，广泛存在于植物中， 黄酮类化合物具有心血管系统活性、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化自由基、抗炎、镇痛、保肝降压、消炎、清热解毒等多种生物活性，特别是具有抗自由基及抗癌、防癌的作用，所以黄酮类化合物在医药、食品、保健品等领域的应用具有广阔的前景。因此，研究黄酮类化合物的提取、分离纯化制备技术具有重要的经济价值和实用价值。现有制备黄酮类化合物的方法，例如《农产品加工》2009年第5期中的“荞麦粉中黄酮类化合物提取工艺的研究”一文中，公开的方法是采用乙醇浸提法提取荞麦粉中的黄酮类化合物，其最佳工艺为以荞麦粉为原料，用乙醇体积浓度75%的乙醇溶液为提取剂， 按料液比为1 30，在温度80°C下提取9h，浸提荞麦粉中的黄酮类化合物。该方法的主要缺点是①未分离氨基酸、多糖、蛋白质等大小分子杂质，导致产品中黄酮含量低，颜色深， 重新溶解时出现大量沉淀，产品质量差；②未对该制备过程中产生的废液等进行回收再利用或无害化处理，污染环境；③原料利用率低，经济效益差。又如《离子交换与吸附》2008年第M期中的“大孔吸附树脂分离纯化香椿叶总黄酮的研究”一文中，公开的方法是以香椿叶粉末为原料，以50 80%的乙醇为提取剂，先在70°C下提取2次，再用经预处理的X-5 大孔吸附树脂对提取液进行吸附分离纯化制得总黄酮。该方法的主要缺点是①大孔树脂以极性相似原理进行吸附分离，选择性不高，不能有效区分结构与黄酮差异大，但极性相近的杂质；②生产过程中的分离效率低，制得的产品纯度低，需要用液相色谱或硅胶柱等进一步纯化；③未对分离黄酮后的过柱液进行无害化处理，污染环境。
发明内容
本发明的目的是针对现有制备黄酮类化合物方法的不足，提供一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，具有工艺简单，节约能源，无有害废物排放，资源综合利用率高，产品纯度高等特点。本发明的原理是在碱性条件下，1,6-己二醇二缩水甘油醚可交联壳聚糖微球及槲皮素的游离羟基反应，生成以醚键相连的反应性高分子，该反应性高分子以含有大量微孔结构的交联壳聚糖微球为载体、以接枝的槲皮素为吸附官能团，利用槲皮素具有黄酮化合物基本母核、可与具有相同或相似结构的吸附质形成基于大JI-JI键疏水结合的特性， 实现对黄酮化合物的选择性分离，再用洗脱剂洗脱吸附于该树脂上的黄酮化合物，接着经过浓缩、干燥等处理，即可获得高纯度的黄酮化合物。实现本发明目的的技术方案是一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法先以荞麦粉为原料制备出荞麦黄酮提取液，再以壳聚糖为原料制备出接枝槲皮素交联壳聚糖树脂，然后用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂进行吸附，最后经洗脱、真空浓缩及冻干而得到荞麦黄酮产品。其具体的方法步骤如下(1)制备荞麦黄酮提取液以荞麦粉为原料，按荞麦粉的质量(g)乙醇体积浓度为40 60%的乙醇溶液体积(mL)的比为1 30 40的比例，先在荞麦粉中加入乙醇溶液，在常温下搅拌溶解2 4小时，然后再放置于离心机中，在转速为6000 10000转/分下，进行离心分离10 20 分钟，分别收集离心清液和离心沉淀。对于收集的离心清液，即为制备荞麦黄酮提取液，用于吸附分离荞麦黄酮；对于收集的离心沉淀，送入闪蒸器中进行干燥，用于制备荞麦淀粉。(2)制备接枝槲皮素交联壳聚糖树脂①制备交联壳聚糖溶液第(1)步完成后，以壳聚糖为原料，按壳聚糖的质量(g)体积浓度为的盐酸溶液的体积(mL)比为1 25 50的比例，先将壳聚糖溶解于盐酸溶液中，形成壳聚糖溶液。再在搅拌条件下加入等体积的液体石蜡进行分散，制备出液体石蜡分散的壳聚糖溶液。 然后按壳聚糖的质量(g)体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积(mL)比为1 10 30 的比例，在液体石蜡分散的壳聚糖溶液中加入戊二醛溶液，进行交联反应20 30分钟，就制备出交联反应壳聚糖溶液。②制备交联壳聚糖微球第O)-①步完成后，将第O)-①步制备出的交联反应壳聚糖溶液，先按致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 0. 5 1的比例，在交联壳聚糖溶液中加入致孔剂碳酸钙粉末，搅拌混合均勻。然后再用稀氢氧化钠溶液调节体系PH为9 10，再加热升温至60 70°C，并在60 70°C恒温下反应2. 5 3. 5小时后，将反应溶液泵人抽滤机中，进行第一次抽滤，分别收集第一次抽滤渣和抽滤液。对于收集的第一次抽滤渣，先用等体积的温度为50 60°C热蒸馏水反复进行洗涤2 4次，除去残留的液体石蜡，分别收集洗涤液和洗涤后的滤渣。对于收集的洗涤液，先与收集的第一次抽滤液合并后，再泵人离心机中，在转速为2000 4000转/分下，进行离心分离，分别收集上层液体石蜡和下层清液。对于收集的上层液体石蜡，可再次用于分散壳聚糖溶液；对于收集的下层清液，经生化处理达标后排放；对于收集的洗涤后的滤渣，先加入3 6倍体积的体积浓度为2 5 %的盐酸溶液，在搅拌下溶解洗涤后滤渣中的碳酸钙而形成混合液。然后将该混合液泵人抽滤机中，进行第二次抽滤，分别收集脱碳酸钙滤过液和脱碳酸钙滤渣。将收集的脱碳酸钙滤过液泵人蒸发器中，在80 100°C下，进行蒸发浓缩，回收氯化钙浓缩液，可再利用；对于收集的脱碳酸钙滤渣，先用蒸馏水反复进行洗涤至洗涤液的PH值为6. 5 7. 5为止，分别收集洗涤液和洗涤后的碳酸钙滤渣(即为制备出的交联壳聚糖微球)。对于洗涤液经生化处理达标后排放。③制备接枝槲皮素交联壳聚糖树脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制备出的交联壳聚糖微球中的游离羟基1， 6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 5 15的比例，先将第 (2)-②步制备出的交联壳聚糖微球加入槲皮素的质量浓度为0. 15 0. 25%的槲皮素蒸馏水溶液中，搅拌进行分散后，再用稀氢氧化钠调节其pH为9. 5 11. 5，搅拌吸附50 60分钟后升温至70 95°C，然后加入1，6己二醇-二缩水甘油醚，恒温反应2 4小时。反应完成后通过抽滤机进行抽滤，分别收集滤渣和滤液。对于收集的滤液，即为未反应的槲皮素和1，6己二醇-二缩水甘油醚，可再用于制备接枝槲皮素交联壳聚糖吸附树脂；对于收集的滤渣，先用3 5倍体积的蒸馏水洗涤，除去未参与接枝反应的槲皮素，然后再在60 80°C 下进行干燥直至恒重，就制备出接枝槲皮素交联壳聚糖树脂。(3)吸附荞麦黄酮第O)-③步完成后，将第O)-③步制备出的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂装入中压层析柱中，先用与接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱等体积的蒸馏水进行反冲，排出接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱中的气泡后，再泵入第(1)步制备出的荞麦黄酮提取液进行吸附， 直至过柱流出液中出现荞麦黄酮时为止，收集过柱流出液(即为卸载荞麦黄酮的过柱流出液)。吸附完成后，再次泵入与接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱等体积的蒸馏水进行洗涤，洗涤夹杂于树脂间的杂质，分别收集洗涤流出液和出吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱。对于收集的洗涤流出液与卸载荞麦黄酮的过柱流出液合并后，先减压蒸馏回收乙醇，再进行好氧处理，达标后排放。(4)洗脱荞麦黄酮第C3)步完成后，在第( 步收集的吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱中，泵入乙醇体积浓度为85 95%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱吸附于接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱上的荞麦黄酮，直至洗脱流出液中无荞麦黄酮时为止，乙醇洗脱液的流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的3 5倍/小时。分别收集洗脱流出液和洗脱荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂。对于洗脱流出液，用于制备荞麦黄酮冻干粉；对于洗脱荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂，用蒸馏水洗涤后可再次用于吸附荞麦黄酮。(5)制备荞麦黄酮冻干粉第(4)步完成后，将第(4)步收集的洗脱流出液，泵入真空浓缩装置中，在真空度为-0. 6 -0. 9Mpa、温度为75 90°C下，进行真空浓缩，直至浓缩液中无乙醇气味时为止， 收集荞麦黄酮浓缩液和蒸发液(即回收的乙醇)。对于回收的乙醇，调节其浓度后可再次用于提取荞麦黄酮或洗脱荞麦黄酮；对于收集的荞麦黄酮浓缩液，先在_18°C的冰箱中预冻 5 6小时，然后再置于冷冻干燥机中，在温度为-50 _60°C、真空度为25 501 的条件下，干燥M 30小时，就制备出纯度为85 95%的荞麦黄酮冻干粉。本发明采用上述技术方案后，主要有以下效果(1)本发明基于大π键间的疏水作用，直接从荞麦黄酮粗提取物溶液中选择性吸附黄酮，省去使用硅胶柱或液相色谱的纯化工序，工艺简单并且高效，获得纯度为85 95%的荞麦黄酮冻干粉。(2)本发明使用常规的生产设备在温和的条件下进行生产，操作简便且易于控制， 因此生产成本低、能源消耗少。(3)本发明制备的接枝槲皮素交联壳聚糖吸附树脂可重复使用，再生效果好；对提取、洗脱荞麦黄酮的乙醇进行了回收及回用，对卸载荞麦黄酮的过柱流出液，进行了净化处理，降低了生产成本且无“三废”排放，是一种绿色环保的分离方法。本发明方法制备的产品，可广泛应用于医药、保健、化妆品等行业中。在医药行业中，作为合成抗生素、抗肿瘤、降压药等的原料，或作为抗氧化、抗菌等功能性添加剂等。
具体实施方式
下面结合具体方式，进一步说明本发明。实施例1一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，具体步骤如下(1)制备荞麦黄酮粗提取液以荞麦粉为原料，按荞麦粉的质量(g)乙醇体积浓度为40%的乙醇溶液体积 (mL)的比为1 30的比例，先在荞麦粉中加入乙醇溶液，在常温下搅拌溶解2小时，然后再放置于离心机中，在转速为6000转/分下，进行离心分离10分钟，分别收集离心清液和离心沉淀。对于收集的离心清液，即为制备荞麦黄酮提取液，用于吸附分离荞麦黄酮；对于收集的离心沉淀，送入闪蒸器中进行干燥，用于制备荞麦淀粉。(2)制备接枝槲皮素交联壳聚糖树脂①制备交联壳聚糖溶液第(1)步完成后，以壳聚糖为原料，按壳聚糖的质量(g)体积浓度为的盐酸溶液的体积(mL)比为1 25的比例，先将壳聚糖溶解于盐酸溶液中，形成壳聚糖溶液。再在搅拌条件下加入等体积的液体石蜡进行分散，制备出液体石蜡分散的壳聚糖溶液。然后按壳聚糖的质量(g)体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积(mL)比为1 10的比例，在液体石蜡分散的壳聚糖溶液中加入戊二醛溶液，进行交联反应20分钟，就制备出交联反应壳聚糖溶液。②制备交联壳聚糖微球第O)-①步完成后，将第O)-①步制备出的交联反应壳聚糖溶液，先按致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 0.5的比例，在交联壳聚糖溶液中加入致孔剂碳酸钙粉末，搅拌混合均勻。然后再用稀氢氧化钠溶液调节体系PH为9，再加热升温至60°C，并在60°C恒温下反应2. 5小时后，将反应溶液泵人抽滤机中，进行第一次抽滤，分别收集第一次抽滤渣和抽滤液。对于收集的第一次抽滤渣，先用等体积的温度为50°C热蒸馏水反复进行洗涤2 次，除去残留的液体石蜡，分别收集洗涤液和洗涤后的滤渣。对于收集的洗涤液，先与收集的第一次抽滤液合并后，再泵人离心机中，在转速为2000转/分下，进行离心分离，分别收集上层液体石蜡和下层清液。对于收集的上层液体石蜡，可再次用于分散壳聚糖溶液；对于收集的下层清液，经生化处理达标后排放；对于收集的洗涤后的滤渣，先加入3倍体积的体积浓度为2%的盐酸溶液，在搅拌下溶解洗涤后滤渣中的碳酸钙而形成混合液。然后将该混合液泵人抽滤机中，进行第二次抽滤，分别收集脱碳酸钙滤过液和脱碳酸钙滤渣。将收集的脱碳酸钙滤过液泵人蒸发器中，在80°C下，进行蒸发浓缩，回收氯化钙浓缩液，可再利用； 对于收集的脱碳酸钙滤渣，先用蒸馏水反复进行洗涤至洗涤液的PH值为6. 5为止，分别收集洗涤液和洗涤后的碳酸钙滤渣(即为制备出的交联壳聚糖微球)。对于洗涤液经生化处理达标后排放。③制备接枝槲皮素交联壳聚糖树脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制备出的交联壳聚糖微球中的游离羟基1， 6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 5的比例，先将第⑵ 步制备出的交联壳聚糖微球加入槲皮素的质量浓度为0. 15%的槲皮素蒸馏水溶液中，搅拌进行分散后，再用稀氢氧化钠调节其PH为9. 5，搅拌吸附50分钟后升温至70°C，然后加入 1,6己二醇-二缩水甘油醚，恒温反应2小时。反应完成后通过抽滤机进行抽滤，分别收集滤渣和滤液。对于收集的滤液，即为未反应的槲皮素和1，6己二醇-二缩水甘油醚，可再用于制备接枝槲皮素交联壳聚糖吸附树脂；对于收集的滤渣，先用3倍体积的蒸馏水洗涤，除去未参与接枝反应的槲皮素，然后再在60°C下进行干燥直至恒重，就制备出接枝槲皮素交联壳聚糖树脂。(3)吸附荞麦黄酮第O)-③步完成后，将第O)-③步制备出的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂装入中压层析柱中，先用与接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱等体积的蒸馏水进行反冲，排出接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱中的气泡后，再泵入第(1)步制备出的荞麦黄酮提取液进行吸附， 直至过柱流出液中出现荞麦黄酮时为止，收集过柱流出液(即为卸载荞麦黄酮的过柱流出液)。吸附完成后，再次泵入与接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱等体积的蒸馏水进行洗涤，洗涤夹杂于树脂间的杂质，分别收集洗涤流出液和吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱。对于收集的洗涤流出液与卸载荞麦黄酮的过柱流出液合并后，先减压蒸馏回收乙醇， 再进行好氧处理，达标后排放。(4)洗脱荞麦黄酮第C3)步完成后，在第( 步收集的吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱中，泵入乙醇体积浓度为85%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱吸附于接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱上的荞麦黄酮，直至洗脱流出液中无荞麦黄酮时为止，乙醇洗脱液的流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的3倍/小时。分别收集洗脱流出液和洗脱荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂。对于洗脱流出液，用于制备荞麦黄酮冻干粉；对于洗脱荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂，用蒸馏水洗涤后可再次用于吸附荞麦黄酮。(5)制备荞麦黄酮冻干粉第(4)步完成后，将第(4)步收集的洗脱流出液，泵入真空浓缩装置中，在真空度为-0. 6Mpa、温度为75°C下，进行真空浓缩，直至浓缩液中无乙醇气味时为止，收集荞麦黄酮浓缩液和蒸发液(即回收的乙醇)。对于回收的乙醇，调节其浓度后可再次用于提取荞麦黄酮或洗脱荞麦黄酮；对于收集的荞麦黄酮浓缩液，先在_18°C的冰箱中预冻5小时，然后再置于冷冻干燥机中，在温度为-50°C、真空度为25 的条件下，干燥M小时，就制备出纯度为85%的荞麦黄酮冻干粉。实施例2—种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，同实施例1，其中第(1)步中，荞麦粉的质量(g)乙醇体积浓度为50%的乙醇溶液体积(mL)的比为1 35，搅拌溶解3小时，离心机中在转速为8000转/分下，离心15分钟。第O)-①步中，壳聚糖的质量(g)体积浓度为的盐酸溶液的体积(mL)比为 1 35。壳聚糖的质量(g)体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积(mL)比为1 20，交联反应25分钟。第O)-②步中，致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 0. 8。调节体系pH为9. 5， 升温至65°C，并在65°C恒温下反应3小时。用温度为55°C热蒸馏水洗涤3次。在洗涤后的滤渣中加入5倍体积的体积浓度为3. 5%的盐酸溶液。蒸发器的温度为90°C ；用蒸馏洗涤至洗涤液的PH值为7为止。第O)-③步中，交联壳聚糖微球中的游离羟基1，6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 10，加入槲皮素的质量浓度为0.20%的槲皮素蒸馏水溶液中，调节其PH为10，搅拌吸附55分钟后升温至80°C，恒温反应3小时。用4倍体积的蒸馏水洗涤，在70°C下进行干燥直至恒重。第(4)步中，泵入乙醇体积浓度为90%的乙醇溶液，流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的4倍/小时。第(5)步中，真空浓缩机的真空度为-0. 7Mpa、温度为80°C。预冻5. 5小时，冷冻干燥机的温度为45°C、真空度为40 ，干燥27小时。实施例3一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，同实施例1，其中第(1)步中，荞麦粉的质量(g)乙醇体积浓度为60%的乙醇溶液体积(mL)的比为1 40，搅拌溶解4小时，离心机中在转速为10000转/分下，离心20分钟。第O)-①步中，壳聚糖的质量(g)体积浓度为的盐酸溶液的体积(mL)比为 1 50。壳聚糖的质量(g)体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积(mL)比为1 30，交联反应30分钟。第O)-②步中，致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 1。调节体系PH为10，升温至701，并在701恒温下反应3.5小时。用温度为60°C热蒸馏水洗涤4次。在洗涤后的滤渣中加入6倍体积的体积浓度为5%的盐酸溶液。蒸发器的温度为100°C;用蒸馏洗涤至洗涤液的PH值为7. 5为止。第O)-③步中，交联壳聚糖微球中的游离羟基1，6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 15，加入槲皮素的质量浓度为0.25%的槲皮素蒸馏水溶液中，调节其PH为11.5，搅拌吸附50 60分钟后升温至95°C，恒温反应4小时。用5倍体积的蒸馏水洗涤，在80°C下进行干燥直至恒重。第(4)步中，泵入乙醇体积浓度为95%的乙醇溶液，流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的5倍/小时。第(5)步中，真空浓缩机的真空度为-0. 9Mpa、温度为90°C。预冻6小时，冷冻干燥机的温度为-60°C、真空度为50 ，干燥30小时。
权利要求
1. 一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，其特征在于具体方法步骤如下(1)制备荞麦黄酮提取液以荞麦粉为原料，按荞麦粉的质量乙醇体积浓度为40 60%的乙醇溶液体积的比为Ig 30 40mL的比例，先在荞麦粉中加入乙醇溶液，在常温下搅拌溶解2 4小时，然后再放置于离心机中，在转速为6000 10000转/分下，进行离心分离10 20分钟，分别收集离心清液和离心沉淀，将收集的离心沉淀选入闪蒸器中进行干燥；(2)制备接枝槲皮素交联壳聚糖树脂①制备交联壳聚糖溶液第(1)步完成后，以壳聚糖为原料，按壳聚糖的质量体积浓度为的盐酸溶液的体积比为Ig 25 50mL的比例，先将壳聚糖溶解于盐酸溶液中；再在搅拌条件下加入等体积的液体石蜡进行分散；然后按壳聚糖的质量体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积比为Ig 10 30mL的比例，在液体石蜡分散的壳聚糖溶液中加入戊二醛溶液，进行交联反应20 30分钟；②制备交联壳聚糖微球第O)-①步完成后，将第O)-①步制备出的交联反应壳聚糖溶液，先按致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 0.5 1的比例，在交联壳聚糖溶液中加入致孔剂碳酸钙粉末， 搅拌混合均勻；然后再用稀氢氧化钠溶液调节体系pH为9 10，再加热升温至60 70°C， 并在60 70°C恒温下反应2. 5 3. 5小时后，将反应溶液泵人抽滤机中，进行第一次抽滤， 分别收集第一次抽滤渣和抽滤液；对于收集的第一次抽滤渣，先用等体积的温度为50 60°C热蒸馏水反复进行洗涤2 4次，分别收集洗涤液和洗涤后的滤渣，对于收集的洗涤液，先与收集的第一次抽滤液合并后，再泵人离心机中，在转速为2000 4000转/分下，进行离心分离，分别收集上层液体石蜡和下层清液；对收集的下层清液，经生化处理达标后排放；对于收集的洗涤后的滤渣，先加入3 6倍体积的体积浓度为2 5%的盐酸溶液，在搅拌下溶解洗涤后滤渣中的碳酸钙而形成混合液；然后将该混合液泵人抽滤机中，进行第二次抽滤，分别收集脱碳酸钙滤过液和脱碳酸钙滤渣，将收集的脱碳酸钙滤过液泵入蒸发器中，在80 100°C下，进行蒸发浓缩，回收氯化钙浓缩液；对于收集的脱碳酸钙滤渣，先用蒸馏水反复进行洗涤至洗涤液的PH值为6. 5 7. 5为止，分别收集洗涤液和洗涤后的碳酸钙滤渣，即为制备出的交联壳聚糖微球；对于洗涤液，经生化处理，达标后排放；③制备接枝槲皮素交联壳聚糖树脂第O)-②步完成后，按第O)-②步制备出的交联壳聚糖微球中的游离羟基1，6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 5 15的比例，先将第O)-② 步制备出的交联壳聚糖微球加入槲皮素的质量浓度为0. 15 0. 25%的槲皮素蒸馏水溶液中，搅拌进行分散后，再用稀氢氧化钠调节其pH为9. 5 11. 5，搅拌吸附50 60分钟后升温至70 95°C，然后加入1，6己二醇-二缩水甘油醚，恒温反应2 4小时；反应完成后通过抽滤机进行抽滤，分别收集滤渣和滤液，对于收集的滤渣，先用3 5倍体积的蒸馏水洗涤，然后再在60 80°C下进行干燥直至恒重；(3)吸附荞麦黄酮第O)-③步完成后，将第O)-③步制备出的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂装入中压层析柱中，先用与接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱等体积的蒸馏水进行反冲，再泵入第(1)步制备出的荞麦黄酮提取液进行吸附，直至过柱流出液中出现荞麦黄酮时为止，收集过柱流出液，即为卸载荞麦黄酮的过柱流出液，吸附完成后，再次泵入与接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱等体积的蒸馏水进行洗涤，分别收集洗涤流出液和吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱，对收集的洗涤流出液与卸载荞麦黄酮的过柱流出液合并后，先减压蒸馏回收乙醇，再进行好氧处理，达标后排放；(4)洗脱荞麦黄酮第(3)步完成后，在第C3)步收集的吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱中， 泵入乙醇体积浓度为85 95%的乙醇溶液进行洗脱，直至洗脱流出液中无荞麦黄酮时为止，乙醇洗脱液的流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的3 5倍/ 小时；分别收集洗脱流出液和洗脱荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂；(5)制备荞麦黄酮冻干粉第⑷步完成后，将第⑷步收集的洗脱流出液，泵入真空浓缩装置中，在真空度为-0. 6 -0. 9Mpa、温度为75 90°C下，进行真空浓缩，直至浓缩液中无乙醇气味时为止， 收集荞麦黄酮浓缩液和蒸发液；对于收集的荞麦黄酮浓缩液，先在_18°C的冰箱中预冻5 6小时，然后再置于冷冻干燥机中，在温度为-50 _60°C、真空度为25 50 的条件下， 干燥M 30小时，就制备出纯度为85 95%的荞麦黄酮冻干粉。
2.按照权利要求1所述的一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，其特征在于第(1)步中，荞麦粉的质量乙醇体积浓度为40%的乙醇溶液体积的比为Ig 30mL, 搅拌溶解2小时，离心机中在转速为6000转/分下，离心10分钟；第O)-①步中，壳聚糖的质量体积浓度为的盐酸溶液的体积比为Ig 25mL，壳聚糖的质量体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积比为Ig 10mL，交联反应20分钟；第O)-②步中，致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 0.5，调节体系pH为9，升温至 60°C，并在60°C恒温下反应2. 5小时，用温度为50°C热蒸馏水洗涤2次，在洗涤后的滤渣中加入3倍体积的体积浓度为2%的盐酸溶液，蒸发器的温度为80°C，用蒸馏洗涤至洗涤液的 PH值为6. 5为止；第O)-③步中，交联壳聚糖微球中的游离羟基1，6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 5，加入槲皮素的质量浓度为0.15%的槲皮素蒸馏水溶液，调节其pH为9. 5，搅拌吸附50分钟后升温至70°C，恒温反应2小时，用3倍体积的蒸馏水洗涤，在60°C下进行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇体积浓度为85%的乙醇溶液，流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的3倍/小时；第(5)步中，真空浓缩机的真空度为-0. 6Mpa、温度为75°C，预冻5小时，冷冻干燥机的温度为_50°C、真空度为25Pa，干燥M小时。
3.按照权利要求1所述的一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，其特征在于第(1)步中，荞麦粉的质量乙醇体积浓度为50%的乙醇溶液体积的比为Ig 35mL, 搅拌溶解3小时，离心机中在转速为8000转/分下，离心15分钟；第O)-①步中，壳聚糖的质量体积浓度为的盐酸溶液的体积比为Ig 35mL，壳聚糖的质量体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积比为Ig 20mL，交联反应25分钟；第O)-②步中，致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 0.8，调节体系pH为9. 5，升温至65°C，并在65°C恒温下反应3小时，用温度为55°C热蒸馏水洗涤3次，在洗涤后的滤渣中加入5倍体积的体积浓度为3. 5%的盐酸溶液，蒸发器的温度为90°C，用蒸馏洗涤至洗涤液的PH值为7为止；第O)-③步中，交联壳聚糖微球中的游离羟基1，6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 10的比例，加入槲皮素的质量浓度为0.20%的槲皮素蒸馏水溶液，调节其PH为10，搅拌吸附55分钟后升温至80°C，恒温反应3小时，用4倍体积的蒸馏水洗涤，在70°C下进行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇体积浓度为90%的乙醇溶液，流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的4倍/小时；第(5)步中，真空浓缩机的真空度为-0. 7Mpa、温度为80°C;预冻5. 5小时，冷冻干燥机的温度为45°C、真空度为401 ，干燥27小时。
4.按照权利要求1所述的一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，其特征在于第(1)步中，荞麦粉的质量乙醇体积浓度为60%的乙醇溶液体积的比为Ig 40mL, 搅拌溶解4小时，离心机中在转速为10000转/分下，离心20分钟；第O)-①步中，壳聚糖的质量体积浓度为的盐酸溶液的体积比为Ig 50mL，壳聚糖的质量体积浓度为2. 5%的戊二醛溶液的体积比为Ig 30mL，交联反应30分钟；第O)-②步中，致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为1 1，调节体系PH为10，升温至 700C，并在70°C恒温下反应3. 5小时，用温度为60°C热蒸馏水洗涤4次，在洗涤后的滤渣中加入6倍体积的体积浓度为5%的盐酸溶液，蒸发器的温度为100°C，用蒸馏洗涤至洗涤液的PH值为7. 5为止；第O)-③步中，交联壳聚糖微球中的游离羟基1，6己二醇-二缩水甘油醚槲皮素游离羟基的摩尔比为1 1 15，加入槲皮素的质量浓度为0.25%的槲皮素蒸馏水溶液， 调节其PH为11. 5，搅拌吸附50 60分钟后升温至95°C，恒温反应4小时，用5倍体积的蒸馏水洗涤，在80°C下进行干燥直至恒重；第(4)步中，泵入乙醇体积浓度为95%的乙醇溶液，流速为吸附荞麦黄酮的接枝槲皮素交联壳聚糖树脂柱体积的5倍/小时；第(5)步中，真空浓缩机的真空度为_0.9Mpa、温度为90°C;预冻6小时，冷冻干燥机的温度为_60°C、真空度为50Pa，干燥30小时。
全文摘要
一种用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂分离荞麦黄酮的方法，属于黄酮类化合物的制备技术领域，本发明先以荞麦粉为原料制备出含荞麦黄酮提取液，再以壳聚糖为原料制备出接枝槲皮素交联壳聚糖树脂，然后用接枝槲皮素交联壳聚糖树脂进行吸附，最后经洗脱、真空浓缩及冻干而得荞麦黄酮产品。本发明具有工艺简单，节约能源，无有害废物排放，资源综合利用率高，产品纯度高等特点。采用本发明方法制备出的产品，可广泛应用于医药、保健、化妆品等行业中。在医药行业中，作为合成抗生素、抗肿瘤、降压药等的原料，或作为抗氧化、抗菌等功能性添加剂等。
文档编号A61K36/70GK102172371SQ201110045489
公开日2011年9月7日 申请日期2011年2月25日 优先权日2011年2月25日
发明者周小华, 张 杰, 徐涣涣, 徐溢, 桑鲁燕, 王永红, 王颖丽 申请人:重庆大学