专利名称：脂肪胺链修饰的抗肿瘤寡肽及其合成方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及式如Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro-NHCH2(CH2)nCH3(式中 η 为 6、
8、10、12、14或16)的6种寡肽，涉及它们的制备方法，进一步涉及它们在细胞模型和小鼠S180模型上的抗肿瘤作用及抗粘附作用及应用，本发明属于生物医药领域。
背景技术：
恶性肿瘤作为一种复杂的疾病，严重危害着人民生命健康，如何有效有力地治疗肿瘤得到了越来越多学者的关注和研究。目前，化学治疗仍然是临床治疗肿瘤的主要手段，寻找抗肿瘤药物是新药研究的热点之一。发明人了解，七肽LPNISKP能抑制肝癌细胞的运动与侵袭，显著降低肝内及肺转移率，并可降低肿瘤微血管密度，这些结果提示了七肽LPNISKP及其修饰物作为抗侵袭及抗肿瘤剂的临床应用前景。已知肿瘤细胞运动与侵袭的 首要步骤是粘附，这也提示了七肽LPNISKP及其修饰物具有抗肿瘤细胞粘附的潜能。按照一般的认识，含多肽的两亲性分子，例如脂肪胺链修饰的多肽，在适当的条件下通过分子间非共价键相互作用可发生自组装，形成纳米结构。借助纳米结构可改善多肽在体内的输送、延缓多肽在体内的降解速率和提高多肽的体内活性。根据这些认识，发明人提出了本发明。
发明内容
本发明的第一个内容是提供脂肪胺链修饰的抗肿瘤寡肽，如下式Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2)nCH3其中，η为 6、8、10、12、14 或 16。本发明的第二个内容是提供所述寡肽的制备方法，是通过以下技术方案来实现的(I)将保护基保护的脯氨酸(Pro)与饱和脂肪胺缩合，所述饱和脂肪胺为CH3 (CH2)nCH2NH2, η = 6、8、10、12、14 或 16 ；(2)脱去保护基后，再按照现有液相合成技术，逐步接肽合成保护基保护的Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ；(3)按照现有液相合成技术,逐步接肽合成保护基保护的Leu-Pro-Asn-Ile ;(4)将保护基保护的 Leu-Pro-Asn-Ile 与保护基保护的 Ser-Lys-Pro-NHCH2(CH2)IiCH3缩合后脱去保护基得到目标化合物。其中所述保护基包括N端保护基、C端保护基或侧链保护基，所述N端保护基是对多肽的N端进行保护时常用的保护基团，例如可以是叔丁氧羰基(Boc)、苄氧羰基(Z)；C端保护基是对多肽的C端进行保护时常用的保护基团，例如可以是甲氧基(OMe)、苄氧基(OBzl);所述侧链保护基是对多肽侧链进行保护时常用的保护基团，例如可以是苄基(Bzl)、苄氧基(OBzl)、硝基(NO2)、苄氧羰基(Z);所述液相合成技术及涉及的保护、缩合、脱保护的过程是本领域的常规并公知的技术。其中缩合反应是在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三氮唑(HOBt)存在下于无水THF中进行；脱去N端保护基如Boc是在含氯化氢的乙酸乙酯中进行或如Z是在甲醇中发生氢解；脱去C端保护基如OBzl是在甲醇中进行皂化；脱去侧链保护基如Z、OBzl,NO2是在甲醇中发生氢解。具体的，合成路线如图2所示，按照如下步骤制备I)在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三氮唑(HOBt)存在下Boc-Pro在无水THF中与饱和脂肪胺NH2CH2 (CH2)nCH3脱水形成Boc-Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 ;其中η为6、8、10、12、14 或 16 ；2)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Pro-NHCH2(CH2)nCH3脱除Boc生成Pro-NHCH2(CH2)nCH3 ； 3)在 DCC 和 HOBt 存在下 Boc-Lys (Z)在无水 THF 中与 Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 缩合生成 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ；4)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3脱除Boc生成Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ；5)在 DCC 和 HOBt 存在下 Boc-Ser 在无水 THF 中与 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 缩合生成 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NH-CH2 (CH2) nCH3 ；6)将Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3经柱层析纯化后，在含氯化氢的乙酸乙酯中 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 脱除 Boc 生成 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 ；7)在DCC和HOBt存在下Boc-Asn在无水THF中与Ile-ΟΒζΙ缩合生成Boc-Asn-IIe-OBzI ；8)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Asn-Ile-OBzl脱除Boc生成Asn-Ile-OBzl ；9)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro在无水THF中与Asn-I Ie-OBz I缩合生成Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl ；10)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl脱除Boc生成Pro-Asn-Ile-OBzl ；11)在DCC和HOBt存在下Ζ-Leu在无水THF中与Pro-Asn-Ile-OBzl缩合生成Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl ；12)将Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl经硅胶柱纯化后，在甲醇中将Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl 阜化为 Z-Leu-Pro-Asn-Ile ；13)在 DCC 和 HOBt 存在下 Z-Leu-Pro-Asn-Ile 在无水 THF 中与Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 缩合生成 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (C
h2) ch3 ；14)在甲醇中 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 氢解为 Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) nCH3。本发明的第三个内容是通过评价所述寡肽的体外抑制肿瘤细胞增值、抑制肿瘤粘附活性及体内抗肿瘤活性，提供其在制备抗肿瘤和抗粘附药物中的应用。
图I为本发明化合物8a_f在水中自组装纳米球的8天粒径图。图2为本发明提供的合成路线，其中i)DCC，HOBt，NMM ；ii)氯化氢/乙酸乙酯溶液(4N) ;iii)NaOH 水溶液，甲醇；iv)Pd/C, H20图3为本发明化合物8c在水溶液中形成的纳米球的代表性透射电镜照片。
具体实施例方式为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本 发明的限制。实施例I 制备 Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (Ia)将Boc-Pro 3. Og (13. 95mmol)溶于 20ml 无水 THF 中，冰浴下加入2. 07g(15. 22mmol)H0Bt，并使完全溶解。然后加入3. 14g(15. 22mmol)DCC，反应混合物冰浴搅拌10分钟，得对应的活泼酯溶液(I)，待用。将I. 64g (12. 68mmol) CH3 (CH2) 6CH2NH2 用无水 THF 溶解，然后用 N-甲基吗啉(NMM)，调pH = 8-9,得到反应液(II)。冰浴下把反应液(II)加入反应液⑴中,得到的反应混合物室温搅拌24小时。TLC(展开剂CHCl3 MeOH =15 I)显示有产物点生成，反应基本完全。滤除二环己基脲(DCT)，反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。得到的溶液依次用5% NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。酯层用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到3. 43g(83% )标题化合物，为淡黄色油状物。ESI-MS(m/e) 327[M+H]+.实施例2 制备 Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 (Ib)按照实施例I 的方法由 Boc-Pro 3. Og (13. 95mmol)和 I. 99g (12. 68mmol)CH3 (CH2) 8CH2NH2 反应，得到 3. 82g (85% ) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3。ESI-MS (m/e) :355 [M+H] +·实施例3 制备 Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3(lc)按照实施例I 的方法由 Boc-Pro 3. Og (13. 95mmol)和 2. 35g (12. 68mmol)CH3(CH2)10CH2NH2 反应，得到 4. 41g(91 % )Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3。ESI_MS(m/e)383 [M+H]+.实施例4 制备 Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (Id)按照实施例I 的方法由 Boc-Pro 2. 50g(ll. 63mmol)和 2. 25g(10. 57mmol)CH3(CH2)12CH2NH2 反应，得到 4. 03g(93 % ) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3。ESI-MS (m/e)411 [M+H]+.实施例5 制备 Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (Ie)按照实施例I 的方法由 Boc-Pro 2. 50g(ll. 63mmol)和 2. 55g(10. 57mmol)CH3(CH2)14CH2NH2 反应，得到 4. 17g(90 % ) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3。ESI_MS(m/e)439 [M+H]+.实施例6 制备 Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3(lf)按照实施例I 的方法由 Boc-Pro 3. OOg (13. 95mmol)和 4. 127g (15. 35mmol)CH3(CH2)16CH2NH2 反应，得到 5.46g(84 %) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3。ESI-MS (m/e):467 [M+H]+.实施例7 制备 Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (2a)将3. 50g (10. 74mmol) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 溶解在 35ml 氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中，室温搅拌2小时，TLC (展开剂CHCl3 MeOH = 15 I)显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复用少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢，得到2. 67g(95% )标题化合物，为白色固体，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/e) :227[M_H]_.实施例8 制备 Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 (2b)按照实施例7 的方法由 4. IOgdl. 58mmol)Boc-Pro-NHCH2(CH2)8CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到3. 15g(94% )Pro-NHCH2(CH2)8CH3，为白色固体。ESI-MS (m/e) :253 [Μ-ΗΓ.实施例9 制备 Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 (2c)按照实施例 7 的方法由 4. 42g (I I. 57mmol) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 在 氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到3.41g(92% )Pro-NHCH2 (CH2) 1(ICH3，为无色固体。ESI-MS (m/e) :281 [Μ-ΗΓ.实施例10 制备 Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (2d)按照实施例7 的方法由 4. 64g (I I. 32mmol) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到3. 68g(94% )Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3,为无色固体。ESI-MS (m/e) :309 [Μ-ΗΓ.实施例11 制备 Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (2e)按照实施例7 的方法由 4. OOg (9. 13mmol) Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 在氯化氢 _ 乙酸乙酯(4N)溶液中脱除 Boc，得 3. 38g(99% ) Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3，为白色固体。ESI_MS(m/e) :337 [Μ-ΗΓ.实施例12 制备 Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 (2f)按照实施例7 的方法由 4. 97g(10. 63mmol)Boc-Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到3. 98g(93% )Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3,为无色固体。ESI-MS (m/e) :365 [Μ-ΗΓ.实施例I3 制备 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (3a)将4. 78g (12. 57mmol) Boc-Lys (Z)溶于 20ml 无水 THF 中，冰浴下加入
I.87g(13. 72mmol)H0Bt，并使完全溶解。然后加入2. 83g(13. 72mmol)DCC，反应混合物冰浴搅拌10分钟，得对应的活泼酯溶液(I)，待用。将3. OOgdl. 43mmol)Pro-NHCH2(CH2)6CH3 用无水 THF 溶解，然后用 NMM，调 pH =8-9，得到反应液(II)。冰浴下把反应液(II)加入反应液⑴中，得到的反应混合物室温搅拌24小时。TLC(展开剂CHCl3 MeOH =15 I)显示有产物点生成，反应基本完全。滤除DCU，反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。得到的溶液依次用5% NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。酯层用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到5. 38g(80% )，淡黄色油状物。ESI-MS(m/e) :589 [M+H]+·实施例 14 制备 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 (3b)按照实施例13 的方法，由 5. Ig (13. 26mmol) Boc-Lys (Z)和 3. 50g (12. 05mmol)Pro-NHCH2(CH2)8CH3 反应得到产物 5.79g(78% )，淡黄色油状物。ESI_MS(m/e) 617[M+H]+.实施例15 制备 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 (3c)按照实施例13 的方法，由 4. 99g(13. 12mmol)Boc-Lys (Z)和 3. 80g(ll. 93mmol)Pro-NHCH2 (CH2)ltlCH3 反应得到产物 5. 84g(76% )，淡黄色油状物。ESI-MS (m/e) :645 [M+H]+.
实施例16 制备 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (3d)按照实施例13 的方法，由 2. 29g (6. 03mmol) Boc-Lys (Z)和 I. 90g (5. 48mmol)Pro-NHCH2 (CH2)12CH3 反应得到产物 3. 14g(86% )，淡黄色油状物。ESI-MS (m/e) 673 [M+H]+.实施例17 制备 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (3e)按照实施例13 的方法，由 2. 12g (5. 58mmol) Boc-Lys (Z)和 I. 90g (5. 07mmol)Pro-NHCH2 (CH2)14CH3 反应得到产物 3. 12g(88% )，淡黄色油状物。ESI-MS (m/e) 701 [M+H]+.实施例I8 制备 Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 (3f)按照实施例13 的方法，由 4. 46g(ll. 74mmol)Boc_Lys (Z)和 4. 50g(ll. 18mmol)Pro-NHCH2 (CH2)16CH3 反应得到产物 6. 35g(78% )，淡黄色油状物。ESI-MS (m/e) :729 [M+H]+·
实施例 19 制备 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (4a)
将5. 28g(9. 06mmol) Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)6CH3 溶解在 50ml 氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中，室温搅拌2小时，TLC(展开剂CHCl3 MeOH = 15 I)显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复用少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢，得到4.65g(98% )标题化合物，为淡黄色油状物。ESI-MS(m/e) :487[Μ_Η]_.实施例2O 制备 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 (4b)按照实施例19 的方法由 5. IOg (8. 28mmol) Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到4.68g(93% )标题化合物。ESI-MS(m/e)515[Μ-ΗΓ·实施例21 制备 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 (4c)按照实施例19 的方法由 5. 80g (9. Olmmol) Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到4.99g(96% )标题化合物。ESI-MS(m/e)543[Μ-ΗΓ·实施例22 制备 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (4d)按照实施例19 的方法由 3. 14g (4. 67mmol) Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到2.81g(99% )标题化合物。ESI-MS(m/e)571[Μ-ΗΓ·实施例23 制备 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (4e)按照实施例19 的方法由 3. 12g (4. 46mmol) Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到2. 77g(97% )标题化合物。ESI-MS(m/e)599[Μ-ΗΓ·实施例 24 制备 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 (4f)按照实施例19 的方法由 6. IOg (8. 38mmol) Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到5. 27g(95% )标题化合物。ESI-MS(m/e)627[Μ-ΗΓ·实施例25 制备 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (5a)将I. 93g (9. 44mmo1) Boc-Ser 溶于 20ml 无水 THF 中，冰浴下加入 I. 24g (9. 13mmol)HOBt,并使完全溶解。然后加入I. 88g(9. 13mmol)DCC,反应混合物冰浴搅拌10分钟，得对应的活泼酯溶液(I)，待用。将4. 50g(8. 58mmol) Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)6CH3 用无水 THF 溶解，然后用 NMM，调pH = 8-9,得到反应液(II)。冰浴下把反应液(II)加入反应液⑴中，得到的反应混合物室温搅拌24小时。TLC(展开剂CHCl3 MeOH =15 I)显示有产物点生成，反应基本完全。滤除DCU，反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。得到的溶液依次用5% NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。酯层用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，通过柱层析纯化方法，得到I. 97g(34% )标题化合物，无色油状物。ESI-MS(m/e) :676[M+H]+.实施例26 制备 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 (5b)按照实施例25 的方法，由 4. 50g(8. 14mmol) Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 和
I.84g(8. 96mmol) Boc-Ser反应得到产物4. 98g(87% )，淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用石油醚-丙酮系统纯化得到2. 07g(36% )标题化合物，无色油状物。ESI-MS(m/e)704 [M+H]+.实施例27 制备 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 (5c) 按照实施例25 的方法，由 5. OOg (8. 61mmol) Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 和
1.94g(9. 47mmol) Boc-Ser-OH反应得到产物5. 35g(85% )，淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用石油醚-丙酮系统纯化得到1.98g(31% )标题化合物，无色油状物。ESI-MS(m/e) 732 [M+H]+.实施例28 制备 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (5d)按照实施例25 的方法，由 2. 50g(4. IOmmol) Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 和
O.92g(4. 51mmol) Boc-Ser反应得到产物2. 78g(89% )，淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用石油醚-丙酮系统纯化得到I. 12g(36%)标题化合物，无色油状物。ESI-MS(m/e)760 [M+H]+.实施例29 制备 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (5e)按照实施例25 的方法，由 2. 50g(3. 93mmol) Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 和
0.89g(4. 51mmol) Boc-Ser反应得到产物2. 79g(90% )，淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用石油醚-丙酮系统纯化得到I. 12g(37%)标题化合物，无色油状物。ESI-MS(m/e)788 [M+H]+.实施例30 制备 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 (5f)按照实施例25 的方法，由 6. 80g (10. 23mmol) Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 和
2.31g(ll. 26mmol)Boc-Ser反应得到产物6. 09g(73% )，淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用石油醚-丙酮系统纯化得到2. 88g(35% )标题化合物，无色油状物。ESI-MS(m/e)816 [M+H]+.实施例3I 制备 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (6a)将I. 97g (2. 93mmol) Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 溶解在 20ml 氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中，室温搅拌2小时，TLC(展开剂CHCl3 MeOH = 15 I)显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复用少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢，得到
1.72g(96% )标题化合物，无色固体。ESI-MS(m/e) :574[Μ_ΗΓ·实施例32 制备 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 (6b)按照实施例31 的方法由 2. 07g(2. 94mmol) Boc-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2) 8013在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到1.80g(96% )标题化合物。ESI-MS(m/e)602 [M-H]-.实施例33 制备 Ser-Lys (Z) -Pro-OCH2 (CH2) 10CH3 (6c)按照实施例31 的方法由 I. 98g(2. 71mmol) Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到I. 74g(96% )标题化合物。ESI-MS (m/e)630[Μ-ΗΓ·实施例34 制备 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (6d)按照实施例31 的方法由 112g(l. 48mmol)Boc-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2(CH2)12CH3在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到I. OOg(98% )标题化合物。ESI-MS(m/e)658[Μ-ΗΓ·实施例35 制备 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (6e)
按照实施例31 的方法由 I. 12g(l. 42mmol) Boc-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)14CH3在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc得到1.02g(99% )标题化合物。ESI-MS(m/e)686[Μ-ΗΓ·实施例36 制备 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 (6f)按照实施例31 的方法由 2. 88g(3. 53mmol) Boc-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3在氯化氢-乙酸乙酯(4N)溶液中脱除Boc，得到2. 48g(94% )标题化合物。ESI-MS (m/e)714[Μ-ΗΓ·实施例37 制备 Boc-Asn-Ile-OBzl将I. OOg (4. 31mmol) Boc-Asn 溶于 15ml 无水 THF 中，冰浴下加入
O.703g(5. 17mmol)H0Bt，并使完全溶解。然后加入I. 07g(5. 17mmol) DCC，反应混合物冰浴搅拌10分钟，得对应的活泼酯溶液(I)，待用。将I. 86g(4. 74mmol)Tos .Ile-OBzl 用无水 THF 溶解，然后用 NMM,iI pH = 8-9，得到反应液(II)。冰浴下把反应液(II)加入反应液(I)中，得到的反应混合物室温搅拌24h。TLC(展开剂CHCl3 MeOH =15 I)显示有产物点生成，反应基本完全。滤除D⑶，反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。得到的溶液依次用5% NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗、5% KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。酯层用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到1.62g(87% )标题化合物。ESI-MS(m/e) 436[M+H]+.实施例38 制备· Asn-Ile-OBzl将I. 53g(3. 50mmol)Boc-Asn-Ile-OBzl溶解在15ml氯化氢-乙酸乙酯溶液中，室温搅拌2小时，TLC(展开剂CHCl3 MeOH =15 I)显示原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复用少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢，最后I. 19g(95% )标题化合物，为无色固体，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/e) :334[M_H]_.实施例39 制备 Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl按照实施例37 的方法，由 114g(5. 33mmol) Boc-Pro 和 I. 80g (4. 85mmol)Asn-Ile-OBzl反应得到标题化合物2. 49g(97 % )，淡黄色油状物。ESI_MS(m/e)533 [M+H]+.实施例40 制备 Pro-Asn-Ile-OBzl按照实施例38 的方法，将 2. 41g(4. 53mmol)Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl 脱除 Boc 后得到2. 04g(97% )标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e) :431[Μ_ΗΓ·
实施例41 制备 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl按照实施例37 的方法，由 I. 82g(3. 88mmol) Z-Leu 和 2. OOg (4. 27mmol)Pro-Asn-Ile-OBzl反应得到标题化合物2. 34g(89% )，淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用三氯甲烷-甲醇系统纯化得到I. IOg(42% )标题化合物。ESI-MS(m/e) 680[M+H]+.实施例42 制备 Z-Leu-Pro-Asn-Ile将I. IOg(I. 62mmol)Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl 溶于 15ml 甲醇。冰浴下将得到的溶液用NaOH(2N)水溶液调pH = 12并搅拌2小时，TLC显示Z-Leu-Pro-Asn-IIe-OBzI消失。反应混合物用饱和硫酸氢钾溶液调PH= 7，减压浓缩除甲醇。残留物用饱和硫酸氢钾溶液调PH= 2，用乙酸乙酯萃取(30mlX3)。合并的乙酸乙酯相用饱和氯化钠水溶液洗至中性，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干，得O. 90g(1.52mmol)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e) :588[Μ_ΗΓ·
实施例43 制备 Z-Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)6CH3(7a)将I. 91g (3. 24mmol) Z-Leu-Pro-Asn-Ile 溶于 15ml 无水 THF 中，冰浴下加入
0.47g(3. 49mmol)H0Bt,并使完全溶解。然后加入O. 72g(3. 49mmol)DCC,反应混合物冰浴搅拌10分钟，得对应的活泼酯溶液(I)，待用。将I. 80g (2. 94mmol) Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 用无水 THF 溶解，然后用NMM，调pH = 8-9,得到反应液(II)。冰浴下把反应液(II)加入反应液(I)中，得到的反应混合物室温搅拌24h。TLC(展开剂CHCl3 MeOH =15 I)显示有产物点生成，反应基本完全。滤除DCU，反应混合物减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，滤除不溶物。得到的溶液依次用5 % NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗、5 % KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。酯层用无水Na2SO4干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，通过柱层析纯化方法，得到350mg(10% )标题化合物，无色固体。ESI-MS(m/e) 1169[M+Na]+ ；Mp 90-91 V ；[α ]D25 = -68. 00 (c = 0.50，CH3OH) ； IR (KBr) :3296，3064，2958，2930，2864，1670，1636，1532，1454，1246，1053,1021, 739, 695cm_1. 1H-MffiOOOMHz, DMS0_d6) δ /ppm = 8. 20-8. 17 (d, J = 9Hz, 1H), 8. 00-7. 97 (d, J = 9Hz, 1H)，7. 83-7. 80 (d, J = 9Hz,1H) ；7. 69-7. 60 (m, 1H)，7. 51-7. 44 (m, 2H)，7. 42-7. 34 (m, I OH)，7. 22 (m, 1H)，6. 95 (s, 1H)，
5.01 (s，4H)，4. 57-4. 49 (m, 2H)，4. 32-4. 23 (m, 5H)，3. 63-3. 54 (m, 6H)，3. 10-2. 97 (m, 4H)，
2.63-2. 55 (m, 1H), 2. 44-2. 37 (m, 1H), 2. 28-1. 98 (m, 2H)，I. 96-1. 65 (m, 9H)，I. 50-1. 16 (m,21H)，I. 12-1. 04 (m, 2H)，0. 90-0. 79 (m, 15H).实施例44 制备 Z-Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)8CH3 (7b)按照实施例43 的方法，由 Z-Leu-Pro-Asn-Ile I. 57g (2. 66mmol)和
1.55g (2. 42mmol) Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 8CH3 反应得到标题化合物 2. 69g (93 % )淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用三氯甲烷-甲醇系统纯化得到320mg(ll% )标题化合物，无色固体。ESI-MS (m/e) 1197 [M+Na]+ ；Mp 86-87°C ； [ a ]D25 =-49. 67 (c = O. 50, CH3OH)；IR(KBr) :3297，3064，2953，2929，2868，1633，1533，1453，1246，1047, 739,696cm_1.实施例45 制备 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 (7c)按照实施例43 的方法由 Z-Leu-Pro-Asn-Ile I. 07g(I. 81mmo1)和
I.IOg (I. 65mmol) Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 反应，通过柱层析纯化方法，用三氯甲烷-甲醇系统纯化得到270mg(14% )标题化合物，无色固体。ESI-MS(m/e) 1225[M+Na]+ ；Mp :88-89 V ；[α ]D25 = -102. 00 (c = O. 51, CH3OH) ； IR (KBr) :3292, 30642953，2928，28581717，1633，1533，1454，1245，1048，740，695。111'1H-MffiOOOMHz, CDCl3) δ /ppm =9. 30-9. 28 (d, J = 6Hz，1H)，9· 02-9. 00(d，J = 6Hz，1H)，8· 47-8. 45 (d，1H，J = 6Hz)，8. 06-7. 94 (m, 2H)，7. 74 (m, 1H)，7. 32-7. 28 (m, I OH)，6. 93 (s, 1H)，6. 63 (s, 1H)，6. 24 (m, 1H)，5. 58-5. 55 (m, 1H)，5. 33-5. 24 (m, 1H)，5. 08-5. 03 (m, 4H)，4. 85-4. 66 (m, 3H)，4. 45-4. 33 (m,3H)，3. 84 (m, 2H)，3. 54 (m, 3H)，3. 03 (m, 4H)，2. 39-2. 96 (m, 5H)，I. 95-1. 60 (m, 9H)，I. 47-1. 28 (m, 27H)，0. 98-0. 69 (m, 17H).实施例46 制备 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (7d)按照实施例43 的方法，由 Z-Leu-Pro-Asn-Ile O. 71g(l. 20mmol)和
0.76g(l. lOmmol) Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)12CH3 反应，通过柱层析纯化方法，用三氯甲烷-甲醇系统纯化得到200mg(13% )标题化合物，无色固体。ESI-MS(m/e) 1253[M+Na]+ ；Mp :87-89 °C ；[α ]D25 = -111. 00 (c = 0.5，CH3OH) ； IR (KBr) :3294, 3060，2958，2927， 2857，1717，1633，1533，1454，1245，1048,740,695cm—1 !1H-匪R (300MHz，DMS0_d6) δ /ppm = 8.21-8. 19 (d, J = 6Hz，1H)，8. 00-7. 98 (d，J = 6Hz，1H)，7. 83-7. 81 (d，J = 6Hz,1H) , 7. 75-7. 70 (m, 1H)，7. 57-7. 34 (m, 12H) , 7. 22 (m, 1H) ,6. 95 (s, 1H)，5. 00(s，4H)，
4.51-4. 47 (m, 2H)，4. 32-4. 22 (m, 5H)，3. 63-3. 54 (m, 6H)，3. 10-2. 55 (m, 1H)，2. 44-2. 36 (m,1H)，I. 99-1. 65 (m, 11H)，I. 50-1. 03 (m, 35H), 0. 90-0. 79 (m, 15H).实施例47 制备 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (7e)按照实施例43 的方法，由 Z-Leu-Pro-Asn-Ile I. 61g (I. 20mmol)和
1.80g(2. 49mmol) Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3反应得到标题化合物，通过柱层析纯化方法，用三氯甲烷-甲醇系统纯化得到380mg(12%)标题化合物，无色固体。ESI-MS(m/e) :1281 [M+Na]+· Mp :84-86 °C ；[α ]D25 = -83. 67 (c = 0. 51, CH3OH) ； IR (KBr) :3294,3067，2927，2856，1717，1632，1533，1454，1245，1047，1025,739,695cm—1 ; 1H-MffiOOOMHz,DMS0-d6) δ /ppm = 8. 31-8. 18 (d, J = 6Hz, 1H)，8· 01-7. 98 (d, J = 6Hz, 1H)，7· 84-7. 81 (d,J = 6Hz, I Η)，7. 70 (m, 1H)，7. 52-7. 43 (m, 2H)，7. 25 (m, 10H)，7. 22 (m, I Η)，6. 96 (s, I H)，
5.00 (s，4Η)，4. 51-4. 47 (m, 2Η)，4. 32-4. 22 (m, 5Η)，3. 79-3. 54 (m, 6Η)，3. 10-2. 90 (m, 4Η)，
2.63-2. 55 (m, 1Η)，2. 44-2. 36 (m, 1Η)，2. 12-2. 00 (m, 2Η)，I. 98-1. 65 (m, 9Η)，I. 50-1. 15 (m,38Η)，I. 12-1. 03 (m, 1Η), O. 90-0. 79 (m, 15Η).实施例48 制备 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 (7f)按照实施例43 的方法，由 Z-Leu-Pro-Asn-Ile I. 55g (2. 64mmol)和
I.80g(2. 40mmol) Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)16CH3 反应得到标题化合物 2. 50g(81 % )淡黄色油状物。通过柱层析纯化方法，用三氯甲烷-甲醇系统纯化得到540mg(18% )标题化合物，无色固体。ESI-MS (m/e) 1309 [M+Na]+ ；Mp :83-84 °C . [a ]D25 = -78. 67 (c =0.50，CH3OH) ；IR(KBr) :3299，2927，2852，1713，1679，1648，1536，1457，1241，1025，739，694CHT1· 1H-NmrGoomHz, DMS0-d6) ； δ /ppm = 8. 19-8. 17 (d, J = 6Hz, 1Η)，7· 99-7. 97 (d,J = 6Hz, 1Η) ,7. 82-7. 80 (d, J = 6Hz, 1Η) ,7. 69 (m, 1Η) ,7. 51-7. 34 (m, 12Η) ,7. 21 (m,1Η)，6· 94 (s，1Η)，5· 01 (s，4H)，4· 51-4. 49 (m，2H)，4· 32-4. 22(m，5H)，3· 63-3. 54(m，6H)，
3.08-2. 96(m，4H)，2· 62-2. 58 (m, 1Η)，2· 44-2. 37 (m, 1Η)，2· 01-1. 65 (m, 11Η)，I. 50-1. 23 (m,40Η)，I. 08-1. 03 (m, 2Η)，0. 90-0. 79 (m, 16Η).
实施例49 制备 Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) 6CH3 (8a)将150mg (O. 13mmol) Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)6CH3 置于50ml茄形瓶中，用乙醇溶解，加O. 03g Pd/C (20 % )，通H2 (O. 02Mba)，室温搅拌至原料点消失。滤除Pd/C、滤液减压浓缩至干，得92. 45mg(81% )标题化合物，无色固体。ESI_MS(m/e) :880 [M+2H] + ;Mp :104-105 °C ；[α ]D25 = -113. 67 (c = 0. 52, CH3OH) ； IR (KBr) :3298,2970，2931，2872，1649，1541，1455，1384，1344，1243，1071, 759, 693cm_1. 1H-MffiOOOMHz,DMS0-d6) δ /ppm = 8. 37 (s, 3H)，8. 16-7. 79 (m, 2H)，7. 61-6. 98 (m, 1H)，4. 62-4. 47 (m, 2H)，
4.36-3. 99 (m, 5H)，3. 56-3. 45 (m, 4H)，3. 08-2. 91 (m, 3H)，2. 75-2. 71 (m, 2H)，2. 63-2. 57 (m,1H)，2. 44-2. 42 (m, 1H)，2. 06-1. 65 (m, 12H)，I. 53-0. 96 (m, 25H)，0. 92-0. 77 (m, 15H).实施例50 制备 Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2)8CH3 (8b)按照实施例49的方法，由150mg(0. 13mmol) Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)8CH3 脱保护后得到 101mg(84% )标题化合物与，无色固体。ESI-MS (m/e) :908 [M+2H] + ;Mp :101-102 °C ；[α ]D25 = -94. 66 (c=O. 51，CH3OH) ；IR(KBr) :3294，3069，2958，2962，2929，2866，1650，1542，1455，1377，1339，1243,1066, 759,661cm_1. 1H-NMR(300MHz, DMS0-d6) δ /ppm = 8· 38 (s, 2H), 8· 12-7. 81 (m,2Η)，7. 53-6. 98 (m, I H)，4. 61-4. 47 (m, 2Η)，4. 36-4. 22 (m, 5Η)，3. 23 (m, 4Η)，3. 06-2. 95 (m,3Η)，2. 73 (m, 2Η)，2. 62-2. 60 (m, I H)，2. 45 (m, 1Η)，2. 28-2. 15 (m, I H)，2. 02-1. 75 (m, 12Η)，
I.53 (m, 4Η)，I. 56-1. 24 (m, 23Η)，I. 06 (m, 2Η)，O. 91-0. 80 (m, 15Η).实施例51 制备 Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 (8c)按照实施例49的方法，由150mg(0. 12mmol)Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 10CH3 脱保护后得到 93mg(83% )标题化合物，无色固体。ESI-MS (m/e) 936[M+2H]+ ；Mp :103-104 °C . [a ]D25 = -152. 33 (c=0.53, CH3OH) ；IR(KBr) :3301，3066，2953，2928，2861，1648，1540，1454，1384，1345，1242, 1066, 693cm_1 ； 1H-NMR (300MHz, DMS0-d6) δ /ppm = 8. 32(s,4H) ,8. 20-7. 99 (m,1H) , 7. 91-7. 81 (m, 1H) , 7. 64-6. 98 (m, 1H) ,4. 73-4. 62 (m, 1H) ,4. 60-4. 38 (m, 3H)，
4.36-4. 28 (m, 2H)，4. 26-4. 20 (m, 3H)，3. 68-3. 36 (m, 7H)，3. 06-2. 90 (m, 3H)，2. 80-2. 73 (m,2H) ,2. 62-2. 55 (m, 1H)，2. 45-2. 40 (m, 1H) ,0. 91-0. 80 (m, 15H) , 2. 06-1. 62 (m, 11H)，
I.53-1. 17(m，28H)，I. 11-0. 97 (m, 2H).实施例52 制备 Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 (8d)按照实施例49的方法，由IOOmg (O. 08mmol)Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 12CH3 脱保护后得到 69mg (89 % )标题化合物，无色固体。ESI-MS(m/e) :964 [M+2H] + ;Mp :99-100 °C ；[α ]D25 = -69. 33 (c =O. 52, CH3OH) ；IR(KBr) :3300，3064，2958，2927，2857，1650，1542，1456，1376，1344，1240，1066，759，657CHT1· 1H-NmrOOOmHz, DMS0-d6) δ /ppm = 8· 39 (s，4Η)，8· 24-8. 02 (m，1Η)，
7.99-7. 82 (m, 1Η)，7. 65-7. 39 (m, I H)，4. 62-4. 49 (m, 3Η)，4. 47-4. 37 (m, 2Η)，4. 22-4. 19 (m,2Η), 3. 76-3. 67 (m, 6Η), 4. 01-3. 82 (m, 3Η), 3. 10-2. 90 (m, 3Η), 2. 73 (m, 2Η), 2. 62-2. 55 (m,1Η)，2. 45-2. 42 (m, 1Η)，2. 16-1. 65 (m, 12Η)，I. 53-1. 46 (m, 5Η)，I. 35-1. 15 (m, 28Η)，O. 93-0. 77(m,15Η).实施例53 制备 Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 (8e)
按照实施例49的方法由150mg(0. 12mmol)Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 14CH3 脱保护后得到102mg(86 % )标题化合物，无色固体。ESI-MS(m/e) :992[M+2H]+ ；Mp :99-100 °C · [ α ]D25 = -130. 00 (c = O. 54，CH3OH) ；IR(KBr) :3301，3063，2958，2926，2856，1650，1540，1457,1376,1344,1243,1070,693,65801^:4-^^(3001^^,01^0-(16) δ /ppm = 8. 41 (m,2Η)，8. 09-7. 54 (m, 3Η)，7. 34 (m, I H)，4. 75-4. 60 (m, 3Η)，4. 28-4. 22 (m, 5Η)，3. 57-3. 37 (m,3Η)，3. 18-2. 96 (m, 4Η)，2. 73 (m, 2Η)，2. 58 (m, I H)，2. 45 (m, 1Η)，I. 99-1. 77 (m, 13Η)，
1.52-1. 24 (m, 41Η)，O. 88-0. 83 (m, 15Η).实施例54 制备 Leu-Pro-Asn-I Ie-Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 (8f)按照实施例49的方法，由200mg(0. 16mmol)Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) 16CH3 脱保护后得到 134mg(82% )标题化合物，无色固体。ESI_MS(m/e) 1020[M+2H]+ ；Mp :100-101. 3°C；[a ]D25=-19. 33(c = 0. 5，CH3OH) ；IR(KBr) :3301,2958，2926，2855，1651，1542，1457，1346，1243，1066，759，649. cnT1· 1H-NMR (300MHz，DMS0_d6) δ /ppm = 8. 32(s，4H)，7· 82(m，2H)，4· 50 (m,3H)，4. 49 (m, 3H)，4. 28 (m, 3H)，3. 76-3. 55 (m, 6H)，3. 45-3. 37 (m, 3H)，3. 04-2. 95 (m, 3H)，
2.74 (m, 2H)，2. 55 (m, 1H)，2. 38 (m, 1H)，I. 99-1. 76 (m, 5H)，I. 52-1. 46 (m, 5H)，I. 35-1. 09 (m,39H) ,0. 91-0. 80 (m, 15H).实验例I本发明化合物8a_f抑制肿瘤细胞增殖试验本发明的化合物8a_f均用PBS配制。共使用了 ！fepG2 (人肝癌细胞)、K562 (慢性粒细胞白血病细胞)、HL60 (人宫颈癌细胞)>S180 (小鼠腹水瘤细胞)、H22 (小鼠肝癌细胞)5株肿瘤细胞(来自 Lineberger Cancer Center, UNC-CH)。分别将生长状态良好、处于对数生长期的H印G2、K562、HeLa, S180, H22细胞按照3X IO4个/mL的密度接种于96孔板，每孔100 μ I。在37°C、5% CO2培养箱中培养4小时，按预设的浓度梯度70 μ Μ、50 μ Μ、30 μ M和10 μ M加入经灭菌处理的本发明的化合物，对照组加入等体积溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25 μ I浓度为5mg/mL的四噻唑兰(MTT)溶液，置于37°C及5% CO2培养箱中孵育4小时，小心除去上清液(悬浮细胞经离心后除去上清液)后每孔加入100 μ I DMS0，振荡约15min溶解沉淀。立即于酶标仪上570nm波长下测定吸光度(O. D.)值。计算抑瘤率及IC5tl。结果列入表I。结果表明本发明的化合物8a-f对5株肿瘤细胞增殖有明确的抑制作用。表I本发明化合物8a_f的体外抗肿瘤活性(IC5tl 土 SD μ Μ)
化合物 HepG2_Κ562_Η22_Sigo_HL60
8a>100> 100 58.99 ±4.22 > 100> 100
8b>10020.04 ± 1.17 32.94 ± 4.13 17.39 ± 2.45 34.11 ± 4.2
8c 76.30 ± 10.91 76.45 ± 7.19 36.41 ± 4.25 18.48 ± 1.51 18.98 ± 3.1权利要求
1.脂肪胺链修饰的抗肿瘤寡肽，如下式Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro-NHCH2(CH2)nCH3 其中，η 为 6、8、10、12、14 或 16。
2.根据权利要求I所述寡肽的制备方法，包括如下步骤 (1)将保护基保护的脯氨酸(Pro)与饱和脂肪胺缩合，所述饱和脂肪胺为CH3(CH2)nCH2NH2, η = 6、8、10、12、14 或 16 ； (2)脱去保护基后，再按照现有液相合成技术，逐步接肽合成保护基保护的Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ； (3)按照现有液相合成技术，逐步接肽合成保护基保护的Leu-Pro-Asn-Ile； (4)将保护基保护的Leu-Pro-Asn-Ile 与保护基保护的 Ser-Lys-Pro-NHCH2 (CH2) nCH3缩合后脱去保护基得到目标化合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，按照如下步骤进行 . 1)在二环己基碳二亚胺(DCC)和N-轻基苯并三氮唑(HOBt)存在下Boc-Pro在无水THF 中与饱和脂肪胺 NH2CH2(CH2)nCH3 脱水形成 Boc-Pro-NHCH2(CH2)nCH3 ;其中 η 为 6、8、10、.12、14 或 16 ；. 2)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Pro-NHCH2(CH2)nCH3脱除Boc生成Pro-NHCH2(CH2)nCH3; 3)在DCC和HOBt存在下Boc-Lys(Z)在无水THF中与Pro-NHCH2 (CH2)nCH3缩合生成Boc-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ； . 4)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Lys(Z)-Pro-NHCH2(CH2)nCH3脱除Boc生成Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ； . 5)在DCC 和 HOBt 存在下 Boc-Ser 在无水 THF 中与 Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 缩合生成 Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NH-CH2 (CH2) nCH3 ； . 6)将Boc-Ser-Lys(Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3经柱层析纯化后，在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 脱除 Boc 生成 Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2) nCH3 ； .7)在DCC和HOBt存在下Boc-Asn在无水THF中与Ile-OBzl缩合生成Boc-Asn-IIe-OBzI ；.. 8)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Asn-Ile-OBzl脱除Boc生成Asn-Ile-OBzl； . 9)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro在无水THF中与Asn-Ile-OBzl缩合生成Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl ；. 10)在含氯化氢的乙酸乙酯中Boc-Pro-Asn-Ile-OBzl脱除Boc生成Pro-Asn-Ile-OBzl ； . 11)在DCC和HOBt存在下Z-Leu在无水THF中与Pro-Asn-IIe-OBz I缩合生成Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl ； . 12)将Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl经硅胶柱纯化后，在甲醇中将Z-Leu-Pro-Asn-Ile-OBzl 阜化为 Z-Leu-Pro-Asn-Ile ； . 13)在DCC和HOBt存在下Z-Leu-Pro-Asn-Ile在无水THF中与Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 缩合生成 Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z) -Pro-NHCH2 (Ch2) ch3 ；.14)在甲醇中Z-Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys (Z)-Pro-NHCH2 (CH2)nCH3 氢解为 Leu-Pro-ASn-Ile-Ser-LyS-Pro-NHCH2(CH2)nCH3O
4.权利要求I所述的寡肽在制备抗肿瘤和抗粘附药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了Leu-Pro-Asn-Ile-Ser-Lys-Pro-NHCH2(CH2)nCH3(n＝6、8、10、12、14或16)及其合成方法和应用。本发明以亮氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、丝氨酸、赖氨酸为原料合成七肽小分子，然后用脂肪胺对这个七肽小分子进行修饰，从而得到了目标化合物。本发明在细胞模型和小鼠S180模型上评价本发明化合物的抑制肿瘤细胞增值、粘附活性及抗肿瘤活性。体外和体内试验结果表明，本发明化合物无论是在体外或是在体内均具有良好的抗肿瘤活性，并有良好的抗粘附活性，可将其制备成抗肿瘤药物。
文档编号A61P35/00GK102807603SQ20111014892
公开日2012年12月5日 申请日期2011年6月3日 优先权日2011年6月3日
发明者赵明, 彭师奇, 刘春娜 申请人:首都医科大学