含醇的他克莫司组合物及其制备方法

专利名称：含醇的他克莫司组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种含有醇的他克莫司的组合物，以及它们的制备方法。本发明新颖的含醇组合物可用作皮肤局部给药系统，例如可作为醇质体制剂用于皮肤给药。
背景技术：
特应性皮炎(atopic dermatitis, AD，也称为特应性湿疹)是一种以剧烈瘙痒为特征的慢性、复发性、炎症性皮肤病，其病因和发病机制尚不明确，但普遍认为与免疫功能异常有关。由于缺乏特效治疗手段，对患者生活质量影响较大，且其发病率日益上升，因此成为近年来的研究热点。近40年来，外用皮质类固醇已成为AD的主要治疗方法，但这类药物治疗AD存在明显的局限性，长期应用易导致皮肤萎缩变薄、毛细血管扩张等不良反应， 因而仅限于短期治疗，并且激素制剂不能用于颜面和颈部。因此迫切需要一种非皮质类固醇类，且安全有效的治疗药物。他克莫司(Tacrolimus, FK506),商品名为普乐可复(PullockReusable),是日本藤泽集团(Fujisawa)于1984年从tsukubaensis链霉菌(一种类似真菌的细菌，由Tsukuba 在土壤样本中发现)的发酵培养基中分离而得的一种大环内酯类强效免疫抑制剂。他克莫司的免疫抑制作用比环孢素A(CsA)强10 100倍，因而大大降低了临床使用剂量，同时不良反应也明显降低。他克莫司软膏(tacrolimus ointment,商品名普特彼)是全球首个获批准的非皮质类固醇类外用免疫调节剂。2000年12月美国FDA批准0. 03 %和0. I %他克莫司软膏剂在美国上市，2005年4月在中国上市。他克莫司软膏的适应症是因潜在危险而不宜使用激素治疗、或对激素治疗疗效欠佳、或无法耐受的中至重度特应性皮炎患者，作为短期或间歇性长期治疗。其中，0.03%他克莫司软膏被批准用于2岁及以上儿童及成人AD患者，0. 1% 他克莫司软膏被批准用于成人AD患者。目前，已经上市并用于临床的他克莫司外用制剂仅有上述的软膏剂一种。根据相关的文献报道，由于该软膏剂为油脂性基质，因此存在令人不愉快的粘性以及油腻性，而且不容易清洗，更重要的是软膏基质的特性限制了药物自其中的释放，影响了药效的及时发挥(Kudla RM. Topical ointment. US 4279901)。就他克莫司而言，现有的产品仍然为油性基质软膏剂，而且产品的固有性能例如药物的释放、吸收等并未见有所改观。因此，本领域仍然需要有适合于他克莫司给药特别是通过皮肤给药的组合物，尤其是可以避免使用油性基质而且期望在例如药物的释放、吸收等方面有改观的组合物。

发明内容
本发明的目的在于提供一种可供皮肤局部使用的他克莫司组合物，以克服现有的他克莫司软膏剂的以下缺点的至少一项1)油脂性基质，存在令人不愉快的粘性以及油腻性，而且不容易清洗；2)软膏基质的特性限制了药物自其中的释放，影响了药效的及时发挥。本发明人发现，以水为基质，使他克莫司与磷脂和醇组合，获得的水性液体组合物可以有效地克服至少一项上述缺点。本发明基于此发现而得以完成。发明概述本发明第一方面提供一种他克莫司的组合物，其中包含0. 001 0. 5wt%他克莫司、0. 2 10wt*%磷脂、10 60wt*%醇、0 0. 5wt*%胆固醇、和余量的水。本发明第二方面提供制备本发明第一方面所述组合物的方法，其为注入法或薄膜分散法。发明详述本发明第一方面提供了一种他克莫司的组合物，其中包含0. 001 0. 5wt%他克莫司、0. 2 10wt*%磷脂、10 60wt*%醇、0 0. 5wt*%胆固醇、和余量的水。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中含有0. 005 0. 25被％他克莫司，或者含有0. 01 0. 2wt %他克莫司，或者含有0. 01 0. Iwt %他克莫司，或者含有 0. 02 0. ^^%他克莫司，或者含有0. 03 0. lwt%他克莫司。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中所述磷脂是选自天然磷脂或合成磷脂中的一种或多种。在一个实施方案中，其中所述天然磷脂是选自下列中的一种或多种大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油。 在一个实施方案中，其中所述合成磷脂是选自下列中的一种或多种硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰胆碱，或硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰乙醇胺及其衍生物。在一个实施方案中，其中所述合成磷脂是选自下列中的一种或多种硬脂酰和/或棕榈酰和/或油酰磷脂酰胆碱， 或硬脂酰和/或棕榈酰和/或油酰磷脂酰乙醇胺及其衍生物。在一个实施方案中，其中所述磷脂是选自下列中的一种或多种磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine, PC)、氢化PC、磷脂酸(phosphatidic acid, PA)、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine, PS)、磷脂酰乙醇胺 (phosphatidyl ethanol amine, PE)、憐脂酸甘油(phosphatidyglycerol, PPG)和憐脂酸肌醇(phosphatidylinositol, PI)。在一个实施方案中，其中所述磷脂是选自下列中的一种或多种大豆卵磷脂、脑磷脂、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、油酰磷脂酰胆碱(POPC)、蛋黄卵磷脂、油酰磷脂酰胆碱(POPC)。在一个实施方案中，其中所述磷脂是大豆卵磷脂。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中含有0. 4 8wt%磷脂，或者含有0. 5 6wt%磷脂，或者含有0. 5 5wt%磷脂，或者含有I 4wt%磷脂，或者含有 2 3wt*%憐脂。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中所述醇是选自下列中的一种或多种乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇、分子量为200-600的聚乙二醇(例如聚乙二醇 200、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600)。在一个实施方案中，其中所述醇选自乙
醇、丙二醇及其组合。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中含有10 50wt%醇，或者含有10 45￥丨％醇，或者含有15 45￥丨％醇，或者含有20 45￥丨％醇，或者含有30 40wt%醇。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中含有0 0. 25wt%胆固醇，或者含有0 0. 20wt%胆固醇,或者含有0 0. lwt%胆固醇,或者不含胆固醇。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中含有0. 001 0. 5￥丨％他
4克莫司、0. 5 5wt*%磷脂、10 45wt*%醇、0 0. 5wt*%胆固醇、和余量的水。在本发明第一方面所述组合物的一个实施方案中，其中含有0. 03 0. lwt%他克莫司、I 4wt*%磷脂、30 40wt*%醇,0 0. lwt*%胆固醇、和余量的水。根据本发明第一方面所述的组合物，在显微镜下观察，其中含有平均粒径小于 500nm的囊泡粒子。在一个实施方案中，该组合物中含有平均粒径小于400nm、小于300nm、 小于250nm、小于200nm或小于IOOnm的囊泡粒子。在一个实施方案中，该组合物中含有平均粒径为 50-500nm、50-400nm、50-250nm、50-200nm、或 50_100nm 的囊泡粒子。根据本发明第一方面所述的组合物，在显微镜下观察，其中含有基本上呈不规则的球形的囊泡粒子。根据本发明第一方面所述的组合物，在显微镜下观察，其中含有基本上呈球形的囊泡粒子。根据本发明第一方面所述的组合物，在显微镜下观察，其中含有基本上呈椭球形的囊泡粒子。根据本发明第一方面所述的组合物，其中还可以含有一种或多种选自下列的辅料增稠剂(例如但不限于西黄耆胶、阿拉伯胶、果胶、海藻酸、海藻酸钠、海藻酸钾、黄原胶、琼脂、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸、聚丙烯酸钠、聚乙烯醇、卡波姆、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甘油)、着色剂(例如但不限于焦糖、茜菜红、 伊红、柠檬黄、胭脂红及靛蓝、美蓝)、PH调节剂(例如但不限于盐酸、硫酸、磷酸、醋酸、硼酸、枸橼酸、苹果酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、二乙胺、三乙醇胺、枸橼酸钠、硼砂)。 本领域技术人员理解，在存在这些辅料时，他克莫司、磷脂、醇、胆固醇在最终组合物中的重量百分数不变，而只要简单地适当调节水的用量即可。此外，这些辅料的选择和加入方法是在本领域技术人员技术范围内的，例如在配制组合物时适量减少水的用量，在最终形成具有期望形状和大小的囊泡粒子后，再补充用水配制的水溶性增稠剂(例如羟丙基甲基纤维素、卡波姆、海藻酸钠、黄原胶、阿拉伯胶等)溶液至组合物全量。本发明第二方面提供了制备本发明第一方面任一项所述组合物的方法，其为注入法或薄膜分散法。在本发明第二方面所述方法的一个实施方案中，该方法是注入法，其包括如下步骤i)使他克莫司、磷脂和任选的胆固醇(例如在恒温和/或密闭条件下)溶解于醇中；ii)使步骤i)所得混合物(例如在恒温和/或密闭条件下，例如在与步骤i)相同的恒温和/或密闭条件下)注入(例如以均匀的流速注入)水中；和iii)使步骤ii)所得混合物进行匀质分散(例如通过超声法和/或过滤法和/或挤压法)，得到组合物。在所述注入法的一个实施方案中，所述步骤ii)的恒温条件为30 50°C，优选为 40 50°C。在所述注入法的一个实施方案中，所述步骤iii)将混合物通过匀质分散后，所得组合物在显微镜下观察，其中含有平均粒径小于500nm的囊泡粒子。在一个实施方案中，该组合物中含有平均粒径小于400nm、小于300nm、小于250nm、小于200nm或小于IOOnm的囊泡粒子。在一个实施方案中，该组合物中含有平均粒径为50-500nm、50-400nm、50-250nm、 50-200nm、或50_100nm的囊泡粒子。
在所述注入法的一个实施方案中，所述步骤iii)将混合物通过匀质分散后，所得组合物在显微镜下观察，其中含有基本上呈不规则的球形的囊泡粒子。根据本发明第一方面所述的组合物，在显微镜下观察，其中含有基本上呈椭球形的囊泡粒子。在本发明第二方面所述方法的一个实施方案中，该方法是薄膜分散法，其包括如下步骤a)在适宜的容器(例如烧瓶，例如圆底烧瓶)中，使他克莫司、磷脂和任选的胆固醇溶解于有机溶剂(例如氯仿)中，然后所得溶液蒸发除去有机溶剂，以容器壁上形成均匀的脂质月吴;b)将步骤a)的包含脂质膜的容器中加入醇和水的混合物，使所述脂质膜水合；c)使步骤b)所得混合物进行匀质分散(例如通过超声法和/或过滤法和/或挤压法)，得到组合物。在所述薄膜分散法的一个实施方案中，所述步骤c)将混合物通过匀质分散后，所得组合物在显微镜下观察，其中含有平均粒径小于500nm的囊泡粒子。在一个实施方案中， 该组合物中含有平均粒径小于400nm、小于300nm、小于250nm、小于200nm或小于IOOnm的囊泡粒子。在一个实施方案中，该组合物中含有平均粒径为50-500nm、50_400nm、50_250nm、 50-200nm、或50_100nm的囊泡粒子。在所述薄膜分散法的一个实施方案中，所述步骤c)将混合物通过匀质分散后，所得组合物在显微镜下观察，其中含有基本上呈不规则的球形的囊泡粒子。根据本发明第一方面所述的组合物，在显微镜下观察，其中含有基本上呈椭球形的囊泡粒子。根据本发明第二方面所述的方法，其中在步骤iii)和步骤c)中，所述超声法和/ 或过滤法和/或挤压法各自独立地是采用以下任意一种方法或多种方法的组合1)采用探头式超声仪于冰浴中超声l_30min进行精细匀质化；再用0. 45 ii m或0. 22 ii m微孔滤膜过滤，即得最终含有囊泡粒子的组合物(在本文中可称为醇质体)；2)采用浴式超声仪于冰水浴中超声1-30分钟，再用0. 45 y m或0. 22 y m微孔滤膜过滤，即得最终含有囊泡粒子的组合物；3)采用挤压机于55 °C下挤压连续地(或单独地)通过孔径在200nm、100nm和80nm 的聚碳酸酯滤膜各5次，即得最终含有囊泡粒子的组合物。在本发明的任一方面，其中任意两个或更多个实施方案之间所具有的特征可以相互组合，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间组合时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。如本文所述的，术语“组合物”，其还可以是指药物组合物或者可以是指化妆品组合物，可用于在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症或不良健康状况。如本文所述的，术语“受试者”可以指患者或者其它接受本发明组合物以治疗、预防、 减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的动物，特别是哺乳动物，例如人、狗、猴、牛、马等。
本发明的目的是提供一种他克莫司的组合物，该组合物呈现醇质体制剂的特点， 因此在本文中，本发明获得的他克莫司组合物亦可称为他克莫司醇质体或他克莫司醇质体制剂，其具有粒径较小且分布均匀、稳定性好、和/或皮肤渗透能力强的特点。在本发明的一个实施方案中，所述他克莫司组合物的组成及重量百分含量为 0. 001 0. 5wt*%他克莫司、0. 5 5wt*%憐脂、10 45wt低分子量醇，0 0. 5wt*%胆固醇，其余为蒸馏水。在本发明的一个实施方案中，所述他克莫司组合物的组成及重量百分含量优选为0. 03 0. lwt*%他克莫司、2 3wt*%磷脂、30 40wt*%低分子量醇，0 0. lwt*%胆固醇，其余为蒸馏水。在本发明中，当提及本发明组合物中水的量时，使用“余量的水”，“其余为蒸馏水” 等短语，其并不表示本发明欲意限定本发明配方为封闭式的，而应理解为在此类短语修饰时水的量是加至100%配方全量(可以是重量/重量百分数、或重量/体积百分数、或者任何其它形式的百分数)。例如本发明组合物中还可以含有色素、PH调节剂、皮肤角质软化剂等，在这些情况下，加入这些添加剂后，可以加入“余量的水”以使本发明组合物达到配方 100%的全量。在本发明中“wt%”，如未另外指明，表示重量/重量百分数。根据本发明，磷脂是形成醇质体的主要成膜材料。所述的磷脂包括天然磷脂或合成磷脂中的一种或多种。天然磷脂包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、 溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油等；合成磷脂包括硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰胆碱，或硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰乙醇胺及其衍生物。优选天然磷脂中的大豆卵磷脂。醇(例如低分子量醇和液态聚乙二醇)也是形成醇质体的一种必要的组分，其目的是可能增加药物在角质层的溶解度，改变角质层脂质的相变温度，增强其流动性、柔韧性，还能增强醇质体膜的柔性和流动性，使醇质体在经皮传递过程中发生变形，更易通过比其粒径小的间隙，到达皮肤深层。所述的低分子量醇为含有2-4个碳原子的一元醇或多元醇(例如但不限于乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇)；所述液态聚乙二醇例如是分子量为 200-600的聚乙二醇(例如PEG200、PEG300、聚乙二醇400、聚乙二醇600)。优选的醇是乙醇或丙二醇或者此二者的组合。胆固醇是普通脂质体中经常加入的一种组分，其目的是改变脂质膜的相变温度， 增强脂质体膜的稳定性；但同时，胆固醇的加入也会增加膜的刚性，使其不易变形；而醇质体的一个重要特点是膜的柔性和变形性，因此，胆固醇的加入量不可过多，在一些情况下也可以不加入。本发明的他克莫司醇质体的制备方法之一为注入法，包括如下步骤按处方比例称取他克莫司和磷脂、任选的胆固醇，置于玻璃瓶中，向其中加入处方比例的低分子量醇 (玻璃瓶与注射器密闭连接，通过注射器加入醇类，可避免其挥发)，于恒温、密闭条件下， 用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。然后，于相同的恒温、密闭条件下，将上述含药物及磷脂的醇溶液以均匀的流速注入处方量的水中，注完之后继续搅拌均匀，再采用适宜的超声和过滤方法进行处理，即得最终均质化的醇质体。本发明的他克莫司醇质体的另一种制备方法为薄膜分散法，包括如下步骤按处方比例称取他克莫司和磷脂、任选的胆固醇，置圆底烧瓶中，加入少量氯仿溶解后，置于旋转蒸发仪中，于恒温条件下旋转蒸发除去溶剂，在烧瓶壁上形成均匀的脂质膜。按处方比例配制醇/水混合溶液，将该混合溶液与脂质膜旋转水合。然后采用与权利要求5中所述相同的适宜的过滤和超声方法超声处理，即得最终均质化的醇质体。所述的恒温条件为30 50°C，优选为40 50°C。所述的适宜的超声和过滤方法包括1)采用探头式超声仪于冰浴中超声5min进行精细匀质化；再用0. 22 y m微孔滤膜过滤，即得最终醇质体。2)采用浴式超声仪于冰水浴中超声5-10分钟，再用0.22 微孔滤膜过滤，即得最终醇质体。3)采用挤压机于55°C 下挤压连续通过孔径在200nm、100nm和SOnm的聚碳酸酯滤膜各5次，即得最终醇质体。早在20 世纪 90 年代中期，Touitou 等(T0UIT0U E, Compositions for applying active substances to or through the skin US 5540934)提出了一种称为醇质体 (ethosomes)的新型脂质体，可专门用于药物的经皮传输，因该系统中含有相对高浓度的乙醇而得名。据认为醇质体是一种多层囊泡结构，与普通脂质体相比，它粒径较小，结构稳定， 包封率高，双分子层流动性较高，易于变形，有更好的柔性和渗透性，可穿透皮肤屏障进入皮肤深层，从而据说可以显著提高了透皮速率及皮肤滞留药量。然而，对于他克莫司这种具有较大分子量并且结构独特的大环内酯类化合物而言，要形成具有理想性能的醇质体形式对于本领域技术人员而言仍然存在挑战。本发明人令人惊奇地发现，通过采用适宜比例的药物和磷脂、醇、任选的胆固醇、和水，制备出了粒径较小且分布均匀、稳定性好、和/或皮肤渗透能力强的皮肤用他克莫司醇质体制剂。本发明他克莫司醇质体制剂为亲水性的液体制剂，具有良好的皮肤渗透性，药物释放较快，能够很好地克服他克莫司软膏存在的令人不愉快的粘性以及油腻性感觉、不容易清洗以及药物释放缓慢的缺点。特别地，本发明组合物具有优良的角质层和深部皮肤药物滞留特性。


图I为他克莫司醇质体的粒径分布图。图2为他克莫司醇质体的电镜扫描图。图3为克莫司醇质体抗小鼠耳特应性皮炎的研究结果。
具体实施例方式通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。A、制备实施例部分实施例I称取他克莫司30mg，大豆卵磷脂2.0g，置于玻璃瓶中，向其中加入乙醇40g，于恒温45°C、密闭条件下，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。然后，于相同的恒温、密闭条件下，将上述含药物及磷脂的乙醇溶液以均匀的流速注入约60ml水(使体系达到IOOg)中，注完之后继续搅拌均匀，再采用浴式超声仪于冰水浴中超声5分钟，最后用0. 22 y m微孔滤膜过滤，即得最终醇质体。实施例2称取他克莫司0.5(^，脑磷脂5.(^，置于玻璃瓶中，向其中加入乙醇30g，于恒温 50°C、密闭条件下，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。然后，于相同的恒温、密闭条件下，将上述含药物及磷脂的乙醇溶液以均匀的流速注入约70ml水(使体系达到IOOg)中，注完之后继续搅拌均匀，再采用探头式超声仪于冰浴中超声5min进行精细匀质化；再用0. 22 pm微孔滤膜过滤，即得最终醇质体。实施例3称取他克莫司0. 10g，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE) I. 0g，置于玻璃瓶中，向其中加入丙二醇45g，于恒温30°C、密闭条件下，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。然后，于相同的恒温、密闭条件下，将上述含药物及DSPE的丙二醇溶液以均匀的流速注入约55ml水(使体系达到IOOg)中，注完之后继续搅拌均匀，再采用挤压机于55°C下挤压连续通过孔径在 200nm、IOOnm和80nm的聚碳酸酯滤膜各5次，即得最终醇质体。实施例4称取他克莫司lmg，油酰磷脂酰胆碱(POPC)O. 50g，胆固醇0. 10g，置于玻璃瓶中， 向其中加入IOg的聚乙二醇400，于恒温40°C、密闭条件下，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。 然后，于相同的恒温、密闭条件下，将上述含药物及磷脂、胆固醇的聚乙二醇溶液以均匀的流速注入约90ml水(使体系达到IOOg)中，注完之后继续搅拌均匀，再采用浴式超声仪于冰水浴中超声5分钟，最后用0. 22 y m微孔滤膜过滤，即得最终醇质体。实施例5称取他克莫司30mg，大豆卵磷脂I. 0g，胆固醇0. 50g，置圆底烧瓶中，加入少量氯仿溶解后，置于旋转蒸发仪中，于室温条件下旋转蒸发除去溶剂，在烧瓶壁上形成均匀的脂质膜。将乙醇30g与约水70ml (使体系达到IOOg)混合均匀，然后将该溶液与脂质膜旋转水合。再采用探头式超声仪于冰浴中超声5min进行精细匀质化；再用0. 22 y m微孔滤膜过滤，即得最终醇质体。实施例6称取他克莫司0. 10g，大豆卵磷脂3. 0g，置于玻璃瓶中，向其中加入乙醇20g，丙二醇20g，于恒温50°C、密闭条件下，用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。然后，于相同的恒温、密闭条件下，将上述溶液以均匀的流速注入约60ml水(使体系达到IOOg)中，注完之后继续搅拌均匀，再采用探头式超声仪于冰浴中超声5min进行精细匀质化；再用0. 22 y m微孔滤膜过滤，即得最终醇质体。实施例7称取他克莫司30mg，蛋黄卵磷脂I. Og,油酰磷脂酰胆碱(POPC)O. 5g，置圆底烧瓶中，加入少量氯仿溶解后，置于旋转蒸发仪中，于室温条件下旋转蒸发除去溶剂，在烧瓶壁上形成均匀的脂质膜。将乙醇10g、丙二醇20g与约水70ml (使体系达到IOOg)混合均匀，然后将该溶液与脂质膜旋转水合。再采用挤压机于55°C下挤压连续通过孔径在200nm、IOOnm 和SOnm的聚碳酸酯滤膜各5次，即得最终醇质体。B、实验例部分实验例I
本实验例的目的在于考察他克莫司醇质体的粒径及其分布。方法采用动态光散射法，用激光粒度仪测定实施例I所制备的他克莫司醇质体粒径，计算多分散指数(PDI)。测定结果见图I。图I结果表明，按照实施例I所制备的他克莫司醇质体的平均粒径较小，为 91. 47nm，粒径分布均匀，PDI = 0. 333。此外，按照以上方法，本发明人还发现，实施例2、6、7所制备的他克莫司醇质体的平均粒径均在7 0 -110 nm之间，实施例3、4所制备的他克莫司醇质体的平均粒径均在 90-160nm之间，各实施例所获得的粒子粒径分布均匀；实施例2_7所制备的他克莫司醇质体的PDI值均在0. 2-0. 5之间。实骀例2本实验例的目的在于测定他克莫司醇质体的粒子大小及形态。方法采用透射电镜，测定实施例I所制备的醇质体的粒子大小及形态。测定结果见图2。图2结果表明按照实施例I所制备的他克莫司醇质体的粒子较小，粒子形态为椭球形，个别有粘连。没有呈现规则的球形与其柔性强、有较好的变形性有关。另外测定实施例2-7的样品，结果显示醇质体的粒子大小及形态总体上与实施例I的样品相同。实骀例3本实验例为皮肤滞留实验，其目的在于测定他克莫司醇质体的皮肤累积透过量及皮肤滞留量。方法取Wistar大鼠，体重为200 250g。将其断颈处死、剃毛，分离完整的腹部皮肤，小心剥离皮下脂肪，洗净后备用。采用改良Franz扩散池法，将上述处理好的皮肤置于供给室和接受室间，角质层面向供给室；接受液为PBS (pH7. 4)，供给室中加入I. Oml他克莫司醇质体(实施例I制备) 或市售品(普彼特软膏，0.03%，安斯泰来制药(中国)有限公司产品)，(37±1)°C水浴恒温24h后，取接收液，采用RP-HPLC法测定其中药物浓度，并计算累积透过量。实验结束后， 用胶带剥离法分离角质层，将粘有角质层的胶带置于3. Oml甲醇中，涡旋混合5min，该溶液经0. 22 y m微孔滤膜滤过后，适当稀释，取20 y L注入液相色谱仪，测定大鼠角质层中的药物含量。将胶带剥离后的皮肤组织捣碎并置于IOml甲醇中，涡旋混合lOmin，超声30min循环3次后，溶液经0. 45 y m微孔滤膜滤过，取20 y L注入液相色谱仪，测定大鼠深部皮肤中的他克莫司含量。试验结果见表I。表I、他克莫司醇质体及市售品(普特彼软膏)的皮肤渗透试验结果(n = 3)
权利要求
1.一种他克莫司的组合物，其中包含O. 001 O. 5wt%他克莫司、O. 2 IOwt%磷脂、 10 60wt%醇、O O. 5wt%胆固醇、和余量的水。
2.权利要求I的组合物，其中所述磷脂是选自天然磷脂或合成磷脂中的一种或多种。
3.权利要求1-2任一项的组合物，其中所述磷脂是选自下列中的一种或多种大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、脑磷脂、肌酐、肌醇磷脂、溶血磷脂、磷脂酸、磷脂酰甘油、硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰胆碱，或硬脂酰/棕榈酰/油酰磷脂酰乙醇胺及其衍生物、磷脂酰胆碱 (phosphatidylcholine, PC)、氢化 PC、憐脂酸(phosphatidic acid, PA)、憐脂酸丝氨酸 (phosphatidyl serine, PS)、憐脂酸乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE)、憐脂酸甘油 (phosphatidyglycerol, PPG)和磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol, PI)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、油酰磷脂酰胆碱(POPC)、蛋黄卵磷脂、油酰磷脂酰胆碱(POPC)。
4.权利要求1-3任一项的组合物，其中所述醇是选自下列中的一种或多种乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇、分子量为200-600的聚乙二醇。
5.权利要求1-4任一项的组合物，其中含有0.001 0. 5wt%他克莫司、0. 5 5wt% 磷脂、10 45wt%醇、O 0. 5wt%胆固醇、和余量的水。
6.权利要求1-5任一项的组合物，在显微镜下观察，其中含有平均粒径小于500nm的囊泡粒子。
7.权利要求1-6任一项的组合物，在显微镜下观察，其中含有基本上呈不规则的球形的囊泡粒子、和/或基本上呈球形的囊泡粒子、和/或基本上呈椭球形的囊泡粒子。
8.权利要求1-7任一项的组合物，其中还可以含有一种或多种选自下列的辅料增稠剂、着色剂、PH调节剂。
9.制备权利要求1-8任一项所述组合物的方法，其为注入法或薄膜分散法，其中，所述注入法包括如下步骤i)使他克莫司、磷脂和任选的胆固醇(例如在恒温和/或密闭条件下)溶解于醇中； )使步骤i)所得混合物(例如在恒温和/或密闭条件下，例如在与步骤i)相同的恒温和/或密闭条件下)注入(例如以均匀的流速注入)水中；和iii)使步骤ii)所得混合物进行匀质分散(例如通过超声法和/或过滤法和/或挤压法)，得到组合物；所述薄膜分散法包括如下步骤a)在适宜的容器(例如烧瓶，例如圆底烧瓶)中，使他克莫司、磷脂和任选的胆固醇溶解于有机溶剂(例如氯仿)中，然后所得溶液蒸发除去有机溶剂，以容器壁上形成均匀的脂质膜；b)将步骤a)的包含脂质膜的容器中加入醇和水的混合物，使所述脂质膜水合；c)使步骤b)所得混合物进行匀质分散(例如通过超声法和/或过滤法和/或挤压法)，得到组合物。
10.权利要求9的方法，在所述步骤iii)或步骤c)将混合物通过匀质分散后，所得组合物在显微镜下观察，其中含有平均粒径小于500nm的囊泡粒子。
全文摘要
本发明公开了一种含醇的他克莫司组合物及其制备方法。本发明的他克莫司的组合物包含0.001～0.5wt％他克莫司、0.2～10wt％磷脂、10～60wt％醇、0～0.5wt％胆固醇、和余量的水。本发明提供的可作为皮肤局部使用的他克莫司组合物为醇质体型制剂，其不但能够克服市售软膏的油脂性基质所产生的令人不愉悦的粘性和油腻性、不易清洗的缺点，并能够提高药物的释放速度，增加皮肤内药物的滞留量，从而增强疗效。
文档编号A61P37/06GK102579437SQ20111033138
公开日2012年7月18日 申请日期2011年10月27日 优先权日2011年1月6日
发明者丁维明, 夏桂民, 李桂玲, 李眉 申请人:中国医学科学院医药生物技术研究所