胶核脂质体冻干粉及其制备方法

专利名称：胶核脂质体冻干粉及其制备方法
技术领域：
本发明属于药物制剂学领域，更具体地说，本发明涉及一种胶核脂质体及其制备方法。
背景技术：
脂质体(liposomes)是一种由排列有序的脂质双分子层组成的单层或多层微囊。 脂质体属于胶体系统，具有类似细胞的结构，与细胞膜亲和力强，可以增加被包封药物透过细胞膜的能力。脂质体生物相容性好，可实现药物体内靶向递送，具有延长药物作用时间、 增加药物的体内外稳定性、降低药物毒性，增强药理作用等诸多优点。目前，脂质体按照结构分为三类①单室脂质体(single unilamellar vesicles, SUV):按照粒径大小又分为小单室脂质体(小于200nm)和大单室脂质体(粒径在200 IOOOnm)ο ②多室脂质体的粒径(multilamellar vesicles, MLV):粒径在 Ιμπι 至 5μπι 之间。③多囊脂质体的粒径(multivesicular liposomes, MVL)粒径在5 μ m以上。理想的脂质体需要达到以下要求(1)脂质体形态圆整且不聚集，可以通过制备方法有效控制粒径范围，实现药物的缓控释作用和靶向递送的目的；(2)脂质体稳定性高， 可以长期放置；(3)脂质体具有较高的包封率和载药量，尤其对于热稳定性差药物或水溶性生物大分子药物；(4)脂质体容易实现灭菌或无菌操作。多室脂质体和多囊脂质体由于粒径大且粒径分布不均勻，很少作为药物微粒载体应用。目前，作为药物载体的脂质体以单室脂质体结构最为常用。但液体核心结构的单室脂质体容易聚集，稳定性差，且容纳药物的能力有限，对于水溶性药物，尤其是热稳定性差或生物大分子药物，传统的单室脂质体存在载药量低、包封率低和突释效应明显等缺点。脂质体的制备方法有多种，如机械分散法、薄膜分散法、逆相蒸发法、复乳法、熔融法、注入法、冷冻干燥法、表面活性剂处理法、钙融合法、载体沉积法等。载体沉积法又称为前体脂质体法，系将极细的水溶性支持剂(氯化钠、甘露醇、山梨醇、果糖、乳糖、葡萄糖)的微粉或药粉分散于脂质体膜材的有机溶媒中，采用改进的旋转蒸发器在减压和搅拌的条件下回收有机溶媒，将脂质吸附于水溶性载体上，即得粉体状态的前体脂质体。载体沉积法应用氯化钠、甘露醇等水溶性小分子化合物为核心骨架，但这些化合物需要预先微粉化处理，再利用脂质体膜材包裹这些微粉化的核心骨架。即使如此， 在减压回收有机溶媒操作过程中，避免不了作为脂质体核心骨架的微粉粒子之间的不规则聚集，因此前体脂质体遇水转变为脂质体微粒时，粒径分布范围大，且形态极不圆整，可以形成包括单室脂质体、多室脂质体和多囊脂质体各种结构形式。此外，由于脂质体内部的小分子水溶性载体溶解后产生高渗透压，因此应用氯化钠、甘露醇等水溶性小分子化合物为核心骨架的前体脂质体存在水溶性药物快速渗漏、突释效应明显等问题。冷冻干燥方法容易实现无菌化操作，得到的脂质体冻干粉稳定性好，但已有报道的冷冻干燥方法制备的脂质体冻干粉遇水形成脂质体溶液时，粒径通常增大数倍，形态不圆整且容易聚集，无法有效控制粒径范围，存在安全性问题。
发明专利“一种制备脂质体的新方法”(申请号03111470. 9)公开了一种制备脂质体的新方法，其权利要求项1为“一种制备脂质体的新方法，其特征在于a.制备一单相溶液，其溶质为(1)用于形成脂质体的脂质、待包封的物质，或( 用于形成脂质体的脂质、待包封的物质和水溶性载体，所述水溶性载体为蔗糖、乳糖或甘露醇；其溶剂由叔丁醇和水组成，叔丁醇和水的体积比大于1: 3。b.冷冻单相溶液除去溶媒，得到冻干产物，将得到的冻干产物水化得到脂质体”。发明专利“一种制备脂质体的新方法”(申请号03111470. 9)虽然利用了叔丁醇为溶液的冷冻干燥工艺，但明确强调(1)水溶性载体为蔗糖、乳糖或甘露醇；( 冷冻干燥前必须得到单相溶液体系。该发明专利制备得到的脂质体冻干粉溶解于水中形成的脂质体粒径虽然小，但结构依然是传统的单室脂质体，因为蔗糖、乳糖或甘露醇等小分子水溶性物质容易透过脂质膜溶解到溶出介质中。此外该发明制备的脂质体由于内部的小分子水溶性载体溶解后产生高渗透压，因此存在水溶性药物快速渗漏的问题，并且该发明药物包封率较低(实施例5为21%，实施例6为40%)，无法满足中国药典2010版对于脂质体包封率(大于 85%)的要求。虽然脂质体制备方法很多，但由于脂质体的表面电荷、双层膜流动性等特点，导致包载水溶性药物的脂质体存在诸多问题(1)脂质体粒径无法有效控制，脂质体微粒易聚集；(2)药物载药量低、包封率低，容易渗漏，突释效应明显；(3)脂质体制备方法操作复杂， 需要加热、除盐、高压均质等剧烈操作步骤，无法适用于热稳定性差药物；(4)无法有效的包载生物大分子药物；(5)无法实现无菌操作。

发明内容
本发明要解决的技术问题是针对现有的脂质体结构的不足之处，提供一种高分子亲水胶体为核心的脂质体一胶核脂质体，胶核脂质体具有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜的结构，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中，胶核脂质体的冻干粉溶解于水中形成的脂质体粒径小，分散均勻且不聚集、稳定性高、药物包封率高。此外，发明人探索出一种胶核脂质体的制备方法。明胶等高分子亲水胶体溶液对于水溶性药物具有较好的吸纳能力，但很难长期保存；W/0型微乳溶液分散度大，但内水相载药量低；固体分散体具有很好的固态分散体系，但需要大量的载体，且存在老化现象；冷冻干燥工艺得到的胶核脂质体稳定性最高，但冷冻干燥后的胶核脂质体冻干品溶解于水后形成的胶核脂质体粒径增大且容易聚集。发明人经过大量实验，创新性地将“胶体技术”、 “乳剂技术”、“微乳技术”、“固体分散体技术”、“冷冻干燥工艺”有机融合成一体，集成了胶体和乳剂的高载药量、微乳和固体分散体技术的高分散性、冷冻干燥工艺的高稳定性等特点， 探索出胶核脂质体的制备方法，克服传统脂质体包载水溶性药物存在的载药量低、药物包封率低、突释效应明显等问题，并且提高了冷冻干燥效率，缩短了冷冻干燥周期。本发明的胶核脂质体制备方法的关键技术组合为①制备高分子亲水胶体溶液的水相，用于容纳水溶性药物；②制备含脂质材料、乳化剂和冻干支持剂的叔丁醇油相；③水相转入油相中形成W/0型乳剂(由于高分子亲水胶体溶液作为内水相，因此不可能与叔丁醇的外油相形成单相溶液体系)；④超声分散W/0型乳剂形成W/0型微乳溶液；⑤超低温速冻处理，使W/0型微乳溶液形成叔丁醇为分散基质的固体分散体；⑥固体分散体冷冻干燥形成冻干粉。以水蛭素为例，实验组按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10 份水中，加入5份水蛭素，混勻形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100 份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混勻，连续超声(60kHZ)处理aiiin形成W/0型乳液，采用液氮超低温速冻成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。发明人设置了对照试验进行观察，对照试验组如下
对照试验组1(不加高分子亲水胶体材料):按照质量配比计算，将5份水蛭素溶解在10 份水中形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200 份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混勻，连续超声(60kHZ) 处理aiiin形成W/0型乳液，采用液氮超低温速冻成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。对照试验组2 (不经超声处理):按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10份水中，加入5份水蛭素，混勻形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混勻，采用液氮超低温速冻成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。对照试验组3 (不经过超低温速冻处理):按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10份水中，加入5份水蛭素，混勻形成水相；将5份磷脂材料、10份聚氧乙烯氢化蓖麻油和100份泊洛沙姆溶解在200份叔丁醇中，形成油相；将含有水溶性药物的水相分散到油相中，混勻，连续超声(60kHZ)处理aiiin形成W/0型乳液，放置于_20摄氏度冰箱中冷冻8小时形成固体，冷冻干燥周期为25h，形成水蛭素胶核脂质体冻干粉。结果发现，按照质量配比计算，将1份实验组的水蛭素胶核脂质体冻干粉溶解于 50份水中，形成的胶核脂质体粒径较小(<1 μ m)，微观形态圆整，分散均勻，放置M小时没有明显变化。采用葡聚糖凝胶分离法结合HPLC测定包封率，实验组的水蛭素胶核脂质体包封率达到98. 6%，并且放置30min后测定，水蛭素胶核脂质体没有突释效应。对照试验组1 (不加高分子亲水胶体材料)，按照质量配比计算，将1份的水蛭素脂质体冻干粉溶解于50份水中，形成的脂质体初始粒径较小，但聚集速度快，容易形成大粒子(>2 μ m)，初始包封率达到88. 2%，但药物渗漏严重，存在明显突释效应。对照试验组2 (不经超声处理)，按照质量配比计算，将1份的水蛭素脂质体冻干粉溶解于50份水中，形成的脂质体粒径较大(>2 μ m)，形状不圆整，且分布不均勻，脂质体包封率为85. 2%ο对照试验组3 (不经过超低温速冻处理)，按照质量配比计算，将1份的水蛭素脂质体冻干粉溶解于50份水中，形成的脂质体粒径大(>2 μ m)，形状不圆整，脂质体包封率为
82. 6%ο实验结果表明，本发明的胶核脂质体制备方法的关键技术组合缺一不可。此外，发明人重复以上“实验组”方法，但冷冻干燥周期缩短为16h，结果发现胶核脂质体冻干粉与实验组的胶核脂质体冻干粉疏松度一致，冻干粉中残余的微量水含量一致，胶核脂质体冻干粉溶解于水后胶核脂质体粒径、微观形态和包封率等结果与实验组完
5全一致。表明本发明的胶核脂质体制备方法可以有效提高冷冻干燥效率，缩短了冷冻干燥周期。实验中还发现，传统脂质体需要大量磷脂材料才能包载一定的药物，药物磷脂的质量比例最低不少于1:5，而本发明的胶核脂质体中药物磷脂的质量比例可以达到1:1甚至更低，节约了磷脂的用量，显著提高脂质体的载药能力。此外，本发明制备工艺简便，不需要采用PH梯度或硫酸铵梯度法即可制备高包封率载药脂质体，省去除盐和高压均质等复杂的操作过程，容易实现无菌化操作。因此，发明人通过大量实验，得到一种稳定的载药脂质体冻干粉，其组分包含高分子亲水胶体材料、水溶性药物、脂质材料、乳化剂和冻干支持剂，这些组分的选择要求如下。高分子亲水胶体材料的要求安全性高，体内可吸收或生物可降解，在水溶液中能够形成稳定的胶体网络骨架，可以吸纳不同类型的药物分子，保护药物分子结构和立体构象在成乳和冷冻干燥过程中不受影响。水溶性药物的要求量小效强，具有一定的水溶性，有确定的活性中心或特定的构象，但存在体内外的稳定性差、穿透生物膜能力差、体内缺乏靶向性、容易和制剂其他组分发生配伍反应、液体药物需要转变为固体状态等问题，需要利用微粒载体保护结构、提高穿透生物膜能力、提高靶向性、与其他组分隔离、改善性状等。脂质材料的要求同时具有亲水链和疏水链，具有很好的生物相容性，临界胶团浓度低，水溶液中能够形成脂质体或脂质囊泡结构。乳化剂的要求具有很好的生物相容性，安全性高，与药物之间无反应，有利于脂质体或脂质囊泡的成型。冻干支持剂的要求水中溶解度高，玻璃化转变温度(Tg)较低，冻干后含水量低 (<3%)，具有很好的溶出速率，形成的溶液澄清度好。满足以上要求的各组分，可以通过“制备载药胶体一形成W/0型乳剂一形成W/0型微乳一形成叔丁醇为基质的固体分散体一冷冻干燥”创新组合的制备工艺，得到脂质体冻干粉。该脂质体冻干粉在水性介质中溶解后形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的胶核脂质体的溶液，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中。该胶核脂质体集成了胶体和乳剂的高载药量、微乳和固体分散体技术的高分散性、冷冻干燥工艺的高稳定性等特点，避免药物受热，实现了包载药物的脂质体的高度分散和粒径均勻性。由此，一种胶核脂质体冻干粉，该脂质体冻干粉中各组分质量配比为1份高分子亲水胶体材料，0. 05-50份水溶性药物，0. 5-50份脂质材料，2-100份乳化剂，10-1000份冻干支持剂，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中。上述的脂质体冻干粉中各组分质量配比优选范围为1份高分子亲水胶体材料， 0. 5-10份水溶性药物，1-10份脂质材料，10-60份乳化剂，100-400份冻干支持剂，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于20-50份的水性介质中形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中。上述的高分子亲水胶体材料是指药学公知的药用高分子亲水胶体材料，包括明胶、胶原、白蛋白、阿拉伯胶、西黄芪胶、瓜木耳胶、结冷胶、淀粉及其衍生物、环糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其钠盐、葡聚糖及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、纤维素及其衍生物。上述的高分子亲水胶体材料是指明胶、胶原或白蛋白。上述的水溶性药物是指单独应用、配合增溶剂应用或在特定pH值范围内药物溶解度大于0. 01mg/ml的生物大分子药物、化学药物或中药有效提取物。上述的生物大分子药物是指蛋白质、多肽、多糖、酶、辅酶、核酸结构的药物及它们的生物降解或衍生产物，包括生长因子、激素、刺激因子、抗体、疫苗、干扰素、白介素、动植物来源的多糖。上述的水溶性药物包括胰岛素、水蛭素、血管内皮生长抑制因子、神经营养因子、 细胞生长因子、干扰素、荧光蛋白、奥沙利钼，卡钼，奈达钼、阿柔比星、多柔比星、表柔比星、 米托蒽醌、博莱霉素、平阳霉素、丝裂霉素、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、达沙替尼、阿立必利、阿扎司琼、昂丹司琼、氯磷酸、美司钠、利妥昔单抗、替伊莫单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、阿那曲唑，氨鲁米特，福美坦，依西美坦、替尼泊苷、依托泊苷，喷司他丁、伊立替康、白消安、氮芥、卡莫斯丁、罗莫司丁、高三尖杉酯碱、门冬酰胺酶、培门冬酶、阿糖胞苷、氟脲苷、吉西他滨、西地尼布、阿伦膦酸钠、瑞舒伐他汀、抗凝血酶、卡莫氟、多西他赛、长春地辛、长春新碱、紫杉醇、索拉菲尼、地西他滨、丙卡巴胼、尼莫地平、硝苯地平、尼群地平、非洛地平、 双氯灭痛、埃索美拉唑、萘普生、非诺贝特、盐酸曲马多、吗啡、硝酸甘油、可乐定、单硝酸异山梨醇酯、盐酸噻氯匹啶、乙酰唑胺、对乙酰氨基酚、氨茶碱、阿米替林、氨苄西林、羟氨苄青霉素、阿司匹林、贝克拉胺、咖啡因、西咪替丁、苯巴比妥、樟脑、氯霉素、氯非那敏、盐酸氯丙嗪、氯贝特、氯唑西林、磷酸可待因、地西泮、右美沙芬、布洛芬、盐酸苯海拉明、盐酸多西环素、依普拉酮、芬氟拉明、柠檬酸亚铁、富马酸亚铁、硫酸亚铁、东莨菪碱、伪麻黄碱、小檗碱、黄连素、喷哚美辛、左旋多巴、碳酸锂、盐酸甲氯芬酯、甲喹酮、甲基安非太明、乙酰螺旋霉素、呋喃妥因、去甲替林、那可丁、盐酸帕努拉明、非那西丁、保泰松、盐酸苯福明、盐酸苯丙胺醇、泼尼松龙、普鲁卡因胺、溴丙胺太林、盐酸右丙氧芬、普萘洛尔、硫酸奎尼尔、硫利达嗪、氟喹啉、利福霉素、葡萄糖酸锌、磺胺托嘧啶、四环素、链霉素、庆大霉素、丁苯酞、 三氟美嗪、阿利马嗪、维生素、核磁造影剂、同位素、Actos, Advair, AmbienCR, Arzerra, Aricept、Arimidex、Atryn> Avapro> Avastin、Brilinta、Bucindolol、Caduet> Campostar> Celevrex、CellCept、CoregCR、Coumadin、Combivir、Enzastaurin、EPO> Erbitux> Femara> Flomax、Gemzar、Gleevec、Herceptin、hGH、Iressa、Imitrex、Kalbitor、Keppra、Levaquin、 Lipitor> Mirapex、NovoSeven、Plavix、Prevacid、Prozac、Protonix、Remicade> Removab> Rituxan> Seroquel>Simponi、Stelara>Suboxone>Tarceva>Tamoxifen>Tarceva>Taxotere> Telaprevir、Tegreto1、Topamax、Tykerb、TPA、Valtrex、Xalatan、Xeloda、ZiageruZyprexa0上述的脂质材料是指药学公知的磷脂和类脂材料，包括天然卵磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物、饱和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、甾体。上述的冻干支持剂包括药学公知的冷冻干燥支持剂，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚维酮和泊洛沙姆。上述的冻干支持剂是指聚乙二醇、泊洛沙姆，包括聚乙二醇1500、聚乙二醇 2000、聚乙二醇4000、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407。
按照质量百分比计算，上述的冻干支持剂泊洛沙姆占冻干支持剂总量的5%_100%。上述的乳化剂是指药学公认的非离子型乳化剂，包括聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温 80、司盘80、苄泽、卖泽。上述的乳化剂是指聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温80。上述的胶核脂质体冻干粉中还包含0. 01-10份质量配比计算的药学公认的助乳化剂，包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油酯。上述的脂质体冻干粉中的助乳化剂质量配比为0. 1-5份，助乳化剂为油酸、丙二上述的脂质体冻干粉中还包含0. 01-10份质量配比计算的药学公认的抗氧化剂， 包括维生素E、维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、二丁基苯酚、叔丁基对羟基茴香醚。上述的脂质体冻干粉中的抗氧化剂的质量配比为0. 1-5份，所述的抗氧化剂是指
维生素E、维生素C、叔丁基对羟基茴香醚。上述的脂质体冻干粉中还包含0. 1-5份质量配比计算的药学公认的稳定剂，包括人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、胆酸、脱氧胆酸、富马酸、枸橼酸、棕榈酸、人体必需氨基酸。上述的脂质体冻干粉中的稳定剂是指人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、富马酸、枸橼酸、棕榈酸、精氨酸、甘氨酸。上述的水性介质是指应用无菌蒸馏水为基础配制的溶液或输液。上述脂质体冻干粉溶解于水性介质中形成的脂质体粒径在微米或纳米范围内。上述脂质体冻干粉溶解于水性介质中形成的脂质体粒径在100nm-650nm范围内。上述的脂质体冻干粉溶解于水性介质中形成的脂质体粒径在100 nm _450歷范围内。上述的脂质体冻干粉是单独使用或组合到制剂处方中应用，通过注射、口服、黏膜、皮肤、创面、腔道途径给药，发挥治疗、诊断、预防、免疫、清洗、消毒、美容、保健的应用。上述的脂质体冻干粉通过选用不同类型的磷脂或类脂材料组合，制成PEG修饰的长循环胶核脂质体冻干粉、PH敏感胶核脂质体冻干粉、温度敏感胶核脂质体冻干粉、表面带正电荷的胶核脂质体冻干粉，以优化胃肠道内定位释药或体内血循环靶向释药作用。上述脂质体冻干粉的制备方法，按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10-200份水中，加入0. 05-50份水溶性药物，混勻形成水相；将0. 5_50份脂质材料、 2-100份乳化剂和10-1000份冻干支持剂溶解在50-4000份叔丁醇中，形成油相；将水相分散到油相中形成W/0型乳液，超声、高速搅拌或高压均质处理形成W/0型微乳溶液，采用超低温速冻工艺形成固体分散体，冷冻干燥除去叔丁醇，形成脂质体冻干粉，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中，形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液。上述的脂质体的制备方法中，按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在50-200份水中，加入0. 5-10份水溶性药物，混勻形成水相；将1-10份脂质材料、10-60 份乳化剂和100-400份冻干支持剂溶解在500-2000份叔丁醇中，形成油相；将水相分散到油相中形成W/0型乳液，超声处理形成W/0型微乳溶液，采用超低温速冻工艺形成固体分散体，冷冻干燥除去叔丁醇，形成脂质体冻干粉，脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中，形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液。上述的水相或油相中还可以加入0. 01-10份质量配比计算的药学公知的助乳化剂，用于减少乳化剂用量，所述助乳化剂包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油酯。上述的助乳化剂质量配比范围为0. 1-5份，所述助乳化剂是指丙二醇、油酸。上述的水相或油相中还可以加入0. 01-10份质量配比计算的药学公知的pH调节剂，用于提高药物在水相中的溶解度，所述PH调节剂包括有机酸、有机碱、无机酸、无机碱、 强酸弱碱盐、强碱弱酸盐、多元酸的盐。上述的水相或油相中还可以加入0. 01-10份质量配比计算的药学公知的抗氧化剂，用于增加载药脂质体在储存过程中的稳定性，所述的抗氧化剂包括维生素E、维生素C、 亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、二丁基苯酚、叔丁基对羟基茴香醚。上述的脂质体冻干粉中的抗氧化剂的质量配比为0. 1-5份，所述的抗氧化剂是指维生素E、维生素C、叔丁基对羟基茴香醚。上述的水相中还可以加入0. 1-5份质量配比计算的药学公知的稳定剂，用于增加药物在制备和储存过程中的稳定性，所述的稳定剂包括人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、胆酸、脱氧胆酸、富马酸、枸橼酸、棕榈酸、人体必需氨基酸。上述的脂质体冻干粉中的稳定剂是指人血清白蛋白、酒石酸、琥珀酸、富马酸、枸橼酸、棕榈酸、精氨酸、甘氨酸。通过调节叔丁醇和冻干支持剂的质量配比可以控制最终制备得到的脂质体的粒径，叔丁醇和冻干支持剂的质量配比越高，制备得到的脂质体粒径越小。上述的超低温速冻是指在_35°C以下的环境中迅速冷冻的工艺，包括在液氮、二氧化碳干冰、超低温乙醇或超低温冰箱的环境中迅速冷冻的处理工艺。上述超声的频率范围为2(Γ100 KHz，超声模式为连续超声模式或脉冲超声模式， 超声时间30s-3min。上述超声的频率范围为5(Γ90 KHz，超声模式为连续超声模式或脉冲超声模式，超声时间30s-2min。上述的高分子亲水胶体材料是指药学公知的药用高分子亲水胶体材料，包括明胶、胶原、白蛋白、阿拉伯胶、西黄芪胶、瓜木耳胶、结冷胶、淀粉及其衍生物、环糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其钠盐、葡聚糖及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、纤维素及其衍生物。上述的高分子亲水胶体材料是指明胶、胶原或白蛋白。上述的水溶性药物是指单独应用、配合增溶剂应用或在特定pH值范围内药物溶解度大于0. 01mg/ml的化学药物、生物大分子药物或中药有效提取物。上述的生物大分子药物是指蛋白质、多肽、多糖、酶、辅酶、核酸结构的药物及它们的生物降解或衍生产物，包括生长因子、激素、刺激因子、抗体、疫苗、干扰素、白介素、动植物来源的多糖。上述的水溶性药物包括胰岛素、水蛭素、血管内皮生长抑制因子、神经营养因子、 细胞生长因子、干扰素、荧光蛋白、奥沙利钼，卡钼，奈达钼、阿柔比星、多柔比星、表柔比星、米托蒽醌、博莱霉素、平阳霉素、丝裂霉素、厄洛替尼、吉非替尼、伊马替尼、达沙替尼、阿立必利、阿扎司琼、昂丹司琼、氯磷酸、美司钠、利妥昔单抗、替伊莫单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、阿那曲唑，氨鲁米特，福美坦，依西美坦、替尼泊苷、依托泊苷，喷司他丁、伊立替康、白消安、氮芥、卡莫斯丁、罗莫司丁、高三尖杉酯碱、门冬酰胺酶、培门冬酶、阿糖胞苷、氟脲苷、吉西他滨、西地尼布、阿伦膦酸钠、瑞舒伐他汀、抗凝血酶、卡莫氟、多西他赛、长春地辛、长春新碱、紫杉醇、索拉菲尼、地西他滨、丙卡巴胼、尼莫地平、硝苯地平、尼群地平、非洛地平、 双氯灭痛、埃索美拉唑、萘普生、非诺贝特、盐酸曲马多、吗啡、硝酸甘油、可乐定、单硝酸异山梨醇酯、盐酸噻氯匹啶、乙酰唑胺、对乙酰氨基酚、氨茶碱、阿米替林、氨苄西林、羟氨苄青霉素、阿司匹林、贝克拉胺、咖啡因、西咪替丁、苯巴比妥、樟脑、氯霉素、氯非那敏、盐酸氯丙嗪、氯贝特、氯唑西林、磷酸可待因、地西泮、右美沙芬、布洛芬、盐酸苯海拉明、盐酸多西环素、依普拉酮、芬氟拉明、柠檬酸亚铁、富马酸亚铁、硫酸亚铁、东莨菪碱、伪麻黄碱、小檗碱、黄连素、吲哚美辛、左旋多巴、碳酸锂、盐酸甲氯芬酯、甲喹酮、甲基安非太明、乙酰螺旋霉素、呋喃妥因、去甲替林、那可丁、盐酸帕努拉明、非那西丁、保泰松、盐酸苯福明、盐酸苯丙胺醇、泼尼松龙、普鲁卡因胺、溴丙胺太林、盐酸右丙氧芬、普萘洛尔、硫酸奎尼尔、硫利达嗪、氟喹啉、利福霉素、葡萄糖酸锌、磺胺托嘧啶、四环素、链霉素、庆大霉素、丁苯酞、 三氟美嗪、阿利马嗪、维生素、核磁造影剂、同位素、Actos, Advair, AmbienCR, Arzerra, Aricept、Arimidex、Atryn> Avapro> Avastin、Brilinta、Bucindolol、Caduet> Campostar> Celevrex、CellCept、CoregCR、Coumadin、Combivir、Enzastaurin、EPO> Erbitux> Femara> Flomax、Gemzar、Gleevec、Herceptin、hGH、Iressa、Imitrex、Kalbitor、Keppra、Levaquin、 Lipitor> Mirapex、NovoSeven、Plavix、Prevacid、Prozac、Protonix、Remicade> Removab> Rituxan> Seroquel>Simponi、Stelara>Suboxone>Tarceva>Tamoxifen>Tarceva>Taxotere> Telaprevir、Tegreto1、Topamax、Tykerb、TPA、Valtrex、Xalatan、XeIoda、ZiageruZyprexa0上述的脂质材料是指药学公知的磷脂和类脂材料，包括天然卵磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物、饱和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、甾体。上述的脂质材料可以是不同类型的磷脂或类脂材料的组合，最终制成PEG修饰的长循环脂质体冻干粉、PH敏感脂质体冻干粉、温度敏感脂质体冻干粉、表面带正电荷的脂质体冻干粉，以优化胃肠道内定位释药或体内血循环靶向释药作用。上述的冻干支持剂包括药学公知的冷冻干燥支持剂，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚维酮和泊洛沙姆。上述的冻干支持剂按照质量百分比计算，泊洛沙姆占冻干支持剂总量的5%_100%。上述的乳化剂是指药学公认的非离子型乳化剂，包括聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温 80、司盘80、苄泽、卖泽。上述的乳化剂是指聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温80。上述的脂质体冻干粉临用前加入水性介质，形成的脂质体粒径在微米或纳米范围内。上述的脂质体冻干粉临用前加入水性介质，形成的脂质体粒径在100nm-650nm范围内。上述的脂质体冻干粉临用前加入水性介质，形成的脂质体粒径在100nm-450nm范围内。
上述的脂质体冻干粉是单独使用或组合到制剂处方中应用，通过注射、口服、黏膜、皮肤、创面、腔道途径给药，发挥治疗、诊断、预防、免疫、清洗、消毒、美容、保健的应用。本发明的胶核脂质体及其制备方法，具有下述优点(1)该脂质体具有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜的结构，水溶性药物分散于高分子亲水胶体核心中， 具有载药量大、磷脂用量小、药物稳定性强、药物包封率高并具有长效释药作用特点；(2) 该脂质体制备工艺创新性地将“胶体技术”、“乳剂技术”、“微乳技术”、“固体分散体技术”、 “冷冻干燥工艺”有机融合成一体，集成了胶体和乳剂的高载药量、微乳和固体分散体技术的高分散性、冷冻干燥工艺的高稳定性等特点，避免药物受热，实现了包载药物的脂质体的高度分散和粒径均勻性；(3)该脂质体制备工艺有效提高了传统脂质体冷冻干燥制备工艺的效率，减少冻干操作时间。(4)该脂质体的药物磷脂的质量比例可以达到1:1甚至更低， 节约了磷脂的用量，显著提高脂质体的载药能力；(5)该脂质体制备工艺简便，不需要采用 PH梯度或硫酸铵梯度法即可制备高包封率脂质体，省去透析除盐等复杂的操作过程，容易实现无菌化操作；(6)可以通过调节叔丁醇和泊洛沙姆的用量控制胶核脂质体粒径；(7)该脂质体的粒径在纳米范围内，并可以有效控制粒径，有利于药物穿透皮肤、黏膜或体内生物膜屏障，适用范围广，可应用于多种剂型，满足注射、口服、黏膜、皮肤、创面、腔道的局部或全身治疗的需要。(8)该脂质体可作为缓控释给药体系或靶向递送给药系统，也可以用于掩盖苦味或臭味、与其他组分隔离、减少药物刺激作用、液体药物转换为固体形式等制剂目的。注玻璃化转变温度(Tg)指的是当溶液浓度达到最大冻结浓缩状态发生玻璃化转变时的温度。“玻璃化”是指物质以非晶态形式存在的一种黏度极大且流动性差的状态。

图1 本发明的脂质体结构示意图(A 胶核脂质体；B 长循环的胶核脂质体) 图2 本发明的脂质体制备流程示意3 阿霉素脂质体体外释药曲线图4 阿霉素温度敏感胶核脂质体体外释药曲线
具体实施方式
现结合下列实例来进一步描述本发明。实施例1 水蛭素胶核脂质体
大部分蛋白和多肽类药物水溶性好，但不耐热，体内易降解。本实施例以水蛭素为对象，制备水蛭素胶核脂质体，水蛭素胶核脂质体组成如表1。表1水蛭素胶核脂质体组分配比
权利要求
1.一种胶核脂质体冻干粉，其特征在于该脂质体冻干粉中各组分质量配比为1份高分子亲水胶体材料，0. 05-50份水溶性药物，0. 5-50份脂质材料，2-100份乳化剂，10-1000 份冻干支持剂，脂质体冻干粉中水分含量低于3%。
2.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的高分子亲水胶体材料是指药学公知的药用高分子亲水胶体材料，包括明胶、胶原、白蛋白、阿拉伯胶、西黄芪胶、 瓜木耳胶、结冷胶、淀粉及其衍生物、环糊精及其衍生物、海藻糖、海藻酸及其钠盐、葡聚糖及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、纤维素及其衍生物。
3.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的水溶性药物是指单独应用、配合增溶剂应用或在特定PH值范围内药物溶解度大于0.01mg/ml的生物大分子药物、化学药物或中药有效提取物。
4.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的脂质材料是指药学公知的磷脂和类脂材料，包括天然卵磷脂、氢化磷脂、合成磷脂及其聚乙二醇修饰衍生物、饱和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、棕榈酸、甾体。
5.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的冻干支持剂包括药学公知的冷冻干燥支持剂，包括甘露醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇、聚维酮和泊洛沙姆。
6.如权利要求5所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的冻干支持剂按照质量百分比计算，泊洛沙姆占冻干支持剂总量的5%-100%。
7.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的乳化剂是指药学公认的非离子型乳化剂，包括聚氧乙烯氢化蓖麻油、吐温80、司盘80、苄泽、卖泽。
8.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的脂质体冻干粉中还包含0. 01-10份质量配比计算的药学公认的助乳化剂，包括乙二醇、丙二醇、甘油、油酸、甘油
9.如权利要求1所述的胶核脂质体冻干粉，其特征在于所述的脂质体冻干粉中还包含0. 01-10份质量配比计算的药学公认的抗氧化剂，包括维生素E、维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、二丁基苯酚、叔丁基对羟基茴香醚。
10.一种如权利要求1、所述的胶核脂质体冻干粉的制备方法，其特征在于按照质量配比计算，将1份高分子亲水胶体材料溶解在10-200份水中，加入0. 05-50份水溶性药物，混勻形成水相；将0. 5-50份脂质材料、2-100份乳化剂和10-1000份冻干支持剂溶解在 50-4000份叔丁醇中，形成油相；将水相分散到油相中形成W/0型乳液，超声、高速搅拌或高压均质处理形成W/0型微乳溶液，采用超低温速冻工艺形成固体分散体，冷冻干燥除去叔丁醇，形成脂质体冻干粉，该脂质体冻干粉中水分含量低于3%，临用前按照质量配比计算，1 份脂质体冻干粉溶解于5-100份的水性介质中，形成含有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜结构的脂质体的溶液。
全文摘要
本发明涉及一种胶核脂质体及其制备方法，该脂质体具有高分子亲水胶体为核心和脂质双分子层为壳膜的结构，水溶性药物分散于亲水胶体核心中，该脂质体采用微乳技术、超低温速冻技术等多种技术结合冷冻干燥工艺制备，该脂质体粒径大小可以控制，无需高压均质操作，该脂质体载药量大、磷脂用量小、药物包封率高，并且该脂质体粒径小且不聚集，药物释放缓慢。该脂质体适用包载水溶性药物，尤其适用于热稳定性差的药物和蛋白、多肽、多糖等大分子药物，可作为缓控释给药体系或靶向递送给药系统，也可以用于掩盖苦味或臭味、与其他组分隔离、减少药物刺激作用、液体药物转换为固体形式等制剂目的，应用于注射、口服、黏膜、皮肤、创面、腔道的局部或全身治疗的多种剂型。
文档编号A61K47/38GK102552182SQ201210022488
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月2日 优先权日2012年2月2日
发明者不公告发明人 申请人:鲁翠涛