专利名称：基于选择病毒受体结合位点的特异性抗体在制备防治病毒感染的生物制品中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于生物领域，具体地，涉及一种基于选择病毒受体结合位点的特异性抗体在制备防治病毒感染的生物制品中的应用。
背景技术：
随着世界经济的不断发展，空间的距离已不再成为人们沟通的障碍，但是伴随着 这种进步，由各种病毒引起的传染病也遍及世界各地。其中以逆转录病毒为病因的艾滋病引起的危害最为引人注目，每年都有数以百万的人口死于艾滋病。中和抗体在抵制病毒感染的作用中有着至关重要的地位。逆转录病毒进入细胞的过程包括吸附，受体结合，膜融合进而将病毒内含物主要为核酸和酶运送入细胞内。中和抗体能够结合病毒表面的蛋白从而阻止病毒进入细胞。中和抗体的作用对象通常是病毒的囊膜蛋白，某些病毒其中一个重要的靶点为位于病毒颗粒表面的囊膜蛋白的融合蛋白亚单位gp41。长期以来有很多研究人员意图通过各种抗原诱导机制产生类似中和抗体，但成功的例子鲜有报道。研究者们逐渐认识到对于慢性病毒来说，其中和抗体大多为构象型抗体。以往的相关疫苗设计研究主要集中在2F5作用靶点，但几乎没有得到相应的中和抗体。一种解释认为，这些疫苗没有将这段2F5识别序列放在一个合适的环境中，因此不能呈递出正确的构象。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种基于选择病毒受体结合位点的特异性抗体在制备防治病毒感染的生物制品中的应用。通过将具有本申请记载的特定氨基酸序列的特异性抗体选择性的结合于gp41 MPER，可以使抗体和病毒发生较好的中和反应，起到较好的防治病毒感染作用。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是基于选择病毒受体结合位点的特异性抗体在制备防治病毒感染的生物制品中的应用，所述特异性抗体重链可变区基因VH包含氨基酸含序列为GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一个或多个⑶Rs，特异性抗体轻链可变区基因VL包含氨基酸含序列为QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一个或多个CDRs，具有该氨基酸序列的特异性抗体选择性的结合于gp41 MPER。本申请的病毒以HIV-I为例，其包膜来自宿主细胞膜，包膜中的两种糖蛋白gpl20和gp41是病毒重要的抗原标志，均由env基因编码。gpl60分子为糖蛋白前体，可裂解为gpl20和gp41。Gpl20分子称外膜蛋白，能与T细胞CD4分子特异性结合而识别靶细胞。Gp41平时镶嵌在包膜内，当gpl20与⑶4分子结合时，gpl20发生构象变化，暴露出病毒辅助受体的结合位点，然后与辅助受体结合后，gp41介导病毒与CD4细胞融合,从而病毒进入细胞内。病毒表面包膜蛋白的免疫原性比病毒核心蛋白强。几乎979^100%艾滋病患者血清中可检测到针对gpl20、gpl60的抗体。Gp41抗体稳定而持久，对病毒的诊断和防治有重要意义。通过比较不同特异性抗体的重链可变区基因VH和轻链可变区基因VL的氨基酸顺序发现，变异仅集中在其中少数区域的氨基酸上(15% 20% )，称为超变区，超变区是抗体的抗原结合位，与抗原决定簇的结构互补，故又称为互补决定区(complementarity —determining regions, Q)Rs)。本申请将gp41MPER区域作为祀点进行了相关研究由于gp41MPER难以在gp41本身蛋白骨架背景下产生特异性免疫，所以通过蛋白融合，并在免疫过程中模拟gp41跨膜前域(MPER)的天然构象，将这个区域的表位呈递给免疫系统，以期获得针对gp41MPER区域的特异性抗体，并分析所获得抗体的中和活性。所述重链可变区基因VH包含氨基酸含序列为GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV的三个CDRs，轻链可变区基因VL包含氨基酸含序列为QSISSY、AAS、QQSYNTPFT 的三个 CDRs。具体地，所述生物制品为生物载体。
或者，所述生物制品为生物片段。或者，所述生物制品为抗体。本发明的有益效果是本发明通过将具有特定序列的特异性抗体选择性的结合于gp41 MPER，可以使抗体和病毒发生较好的中和反应，起到较好的防治病毒感染的作用。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明作进一步的详细描述，但本发明的实施方式不仅限于下述实施例。本事实例为基于选择病毒受体结合位点的特异性抗体在制备防治病毒感染的生物制品中的应用，所述特异性抗体重链可变区基因VH包含氨基酸含序列为GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV的三个CDRs，特异性抗体轻链可变区基因VL包含氨基酸含序列为QSISSY、AAS、QQSYNTPFT的三个CDRs。本实施例的单克隆抗体，拥有的可变重链和可变轻链序列，重链可变区基因VH具体序列为
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly GluSer Leu Lys He Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Asn Phe Ala Ser GluTrp He Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp MetGly Ile He Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser PheGln Gly Gln Val Ile He Ser Ala Asp Lys Ser He Asn Thr Ala TyrLeu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala He Tyr Tyr CysAla Arg Gln Asn His Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Phe Tyr Arg Thr AlaTyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr ValSer Ser
轻链可变区基因VL的氨基酸的具体序列为
Val Ala Gln Ala Ala Asp He Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser LeuSer Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr He Thr Cys Arg Ala Ser GlnSer He Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys AlaPro Asn Leu Leu lie Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Phe Thr Leu Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg
下表I为本实施例已确定的CDR区域的氨基酸序列 表I.单克隆抗体VH和VL的⑶R区域
权利要求
1.基于选择病毒受体结合位点的特异性抗体在制备防治病毒感染的生物制品中的应用，其特征在于，所述特异性抗体重链可变区基因VH包含氨基酸含序列为GYNFASEW、IYPGDSDT, ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一个或多个CDRs，特异性抗体轻链可变区基因VL包含氨基酸含序列为QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一个或多个⑶Rs，具有该氨基酸序列的特异性抗体选择性的结合于gp41 MPER。
2.根据权利要求I所述的应用，其特征在于，所述重链可变区基因VH包含氨基酸含序列为 GYNFASEW、IYP⑶SDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV 的三个 CDRs，轻链可变区基因 VL 包含氨基酸含序列为QSISSY、AAS、QQSYNTPFT的三个CDRs。
3.根据权利要求I或2所述的应用，其特征在于，所述生物制品为生物载体。
4.根据权利要求I或2所述的应用，其特征在于，所述生物制品为生物片段。
5.根据权利要求I或2所述的应用，其特征在于，所述生物制品为抗体。
全文摘要
本发明公开了一种基于选择病毒受体结合位点的特异性抗体在制备防治病毒感染的生物制品中的应用。该特异性抗体重链可变区基因VH包含氨基酸含序列为GYNFASEW、IYPGDSDT、ARQNHYGSGSYFYRTAYYYAMDV中的一个或多个CDRs，特异性抗体轻链可变区基因VL包含氨基酸含序列为QSISSY、AAS、QQSYNTPFT中的一个或多个CDRs，具有该氨基酸序列的特异性抗体选择性的结合于gp41MPER。本发明通过将具有特定序列的特异性抗体选择性的结合于gp41MPER，可以使抗体和病毒发生较好的中和反应，起到较好的防治病毒感染的作用。
文档编号A61P31/20GK102727889SQ20121020720
公开日2012年10月17日 申请日期2012年6月21日 优先权日2012年6月21日
发明者丁兆, 朱仲玉 申请人:四川汇宇制药有限公司