专利名称：乳白香青总黄酮的制备方法及其在制备治疗胆囊炎的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域，尤其涉及一种乳白香青总黄酮的制备方法及其在制备治疗胆囊炎的药物中的应用。
背景技术：
胆囊炎是细菌性感染或化学性刺激(胆汁成分改变)引起的胆囊炎性病变，为胆囊的常见病。在腹部外科中其发病率仅次于阑尾炎，本病多见于35 55岁的中年人，女性发病较男性为多，尤多见于肥胖且多次妊娠的妇女。根据发病的急缓和临床的表现可分为急性和慢性两类，均属于胆系感染范畴。急性胆囊炎的症状，主要有右上腹疼、恶心、呕 吐和发热等。急性胆囊炎会引起右上腹疼痛，一开始疼痛与胆绞痛非常相似，但急性胆囊炎引起的腹痛其持续的时间往往较长，作呼吸和改变体位常常能使疼痛加重，因此病人多喜欢向右侧静卧，以减轻腹疼。有些病人会有恶心和呕吐，但呕吐一般并不剧烈。大多数病人还伴有发热，体温通常在38. (TC 38. 5°C之间，高热和寒战并不多见。少数病人还有眼白和皮肤轻度发黄。当医生检查病人的腹部时，可以发现右上腹部有压痛，并有腹肌紧张，大约在1/3的病人中还能摸到肿大的胆囊。化验病人的血液，会发现多数人血中的白细胞计数及中性白细胞增多。B超检查可发现胆囊肿大、囊壁增厚，并可见结石堵在胆囊的颈部。根据以上的症状、体格检查和各种辅助检查，医生一般能及时作出急性胆囊炎的诊断。西医治疗分保守治疗和手术治疗。保守治疗以卧床休息，加强营养，药物多采用抗菌素静脉点滴，消炎痛口服，虽取得了短期较好的效果，但易反复；手术治疗为切除胆囊炎，但手术疗法的死亡率O. 5-3%，黄疸病例死亡率为10-15%，老年病例死亡率高达13. 5-16%，手术并发病约为15%。故手术疗法作为治疗胆囊炎的基本疗法是不能令人满意的。目前治疗胆囊炎的中药主要有，龙胆泻肝汤、疏肝利胆汤、舒肝和胃汤、健胃行气汤、消炎利胆片、疏肝利胆膏、清胆行气汤、清热利湿汤、清胆泻火汤、柴胡汤、茵陈汤调五芩散、茵陈和承气汤、大陷胸汤等，这些药虽然有一定的疗效，但仍不能令人满意。乳白香青为菊科植物乳白香青Anaphalis lactea Maxim.的干燥花序。花盛期采集，晒干。乳白香青、性味，甘平，具有祛风湿，消痞。用于培根病，痞瘤，风湿病，水肿。现代药理研究表明，乳白香青具有抗菌、祛痰、镇咳等活性，。迄今为止，国内外尚未见对乳白香青总黄酮制备方法的报道，其应用的报道更是未见。文献“乳白香青中黄酮类成分的定性定量分析”(包锦渊等，乳白香青中黄酮类成分的定性定量分析，分子科学学报，2009，25 (I) 72-75)公开了乳白香青中黄酮类化学的醋酸镁、三氯化铝、三氯化铁、浓氨水等定性显色试验及以芦丁为对照品，显色法测定总黄酮含量的方法。文献“乳白香青中绿原酸含量的HPLC法测定”(王欢等，乳白香青中绿原酸含量的HPLC法测定，湖北农业科学，2011，50(5):1030-1032)，公开了乳白香青中绿原酸的含量测定方法。文献“乳白香青治疗气管炎的动物实验研究”(袁彦平等，乳白香青治疗气管炎的动物实验研究，中国比较医学杂志，2004，14 (6))公开了乳白香青具有祛痰、镇咳、无明显平喘解痉作用。专利申请号为CN201210066441. 2的专利公开了乳白香青挥发油的制备方法及其应用。采用水蒸气蒸馏及C02超临界萃取法提取乳白香青中的挥发油成分并通过气相色谱/质谱技术首次对其成分进行分析，鉴定了其中的57个成分，占全部精油的94%以上。采用牛津杯法对该挥发油的抑菌杀菌活性进行了研究，发现该挥发油对葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属、沙门氏属、志贺菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属、大肠埃希菌属等细菌以及念珠菌属、隐球菌属、青霉素、曲霉属、毛霉属、小孢子菌属、毛癣菌属、表皮癣菌属等真菌具有明显的杀灭或抑制功能。DPPH法测定发现该挥发油具有良好的抗氧化活性。鉴于该挥发油的良好的活性，其可以在食品、药品、化妆品、保健品等行业得到广泛的应用。综上，尚未见有关乳白香青总黄酮的制备方法及其应用的公开报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供乳白香青总黄酮的制备方法，具体是用作制备 治疗胆囊炎的药物中的应用。本发明的另一个目的是提供一种治疗胆囊炎的药物组合物，含有治疗有效量的乳白香青总黄酮有效部位和要用载体。所述药物组合物，还可以含有有效治疗剂量的总黄酮有效部位和其他具有保肝利胆作用的药物。上述药物组合物可以采用制剂学的常规方法制备成各种剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸等。建议临床患者使用乳白香青总黄酮有效部位的剂量为10(T500mg/次，一日三次。为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案
一种乳白香青总黄酮的制备方法及其在制备治疗胆囊炎的药物中的应用，其中所述乳白香青总黄酮是以乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根为原料药制备而成的药物。本发明的治疗胆囊炎的药物是以乳白香青为原料，制备方法包括如下步骤
取乳白香青，以体积分数50-70%的乙醇为溶剂，提取1-4次，每次提取1-3小时，每
次加乙醇的量为乳白香青药材重量的6-10倍，提取液减压回收乙醇，并浓缩至每毫升浓缩液相当于O. 5-2g乳白香青药材，滤过，滤液用HPD-600型大孔树脂纯化，纯化工艺为用药液重量O. 2-0. 5倍的HPD-600型大孔树脂吸附4_10小时，然后用HPD-600型大孔树脂柱体积4-10倍量的水洗脱，再用HPD-600型大孔树脂柱体积4-10倍量的体积分数50-80%的乙醇洗脱，收集体积分数50-80%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升浓缩液相当于
O.5-2g乳白香青药材，湿法装聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱的粒度为80-100目，先用水洗脱至无还原糖反应，再用乙醇洗脱至无盐酸-镁粉反应，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至50°C时相对密度I. 05-1. 15的浓缩液，在进风口温度180°C，出风口温度75°C下喷雾干燥，得乳白香青总黄酮。本发明的技术方案提供了用乳白香青所制备的治疗胆囊炎的单方制剂，也可以用乳白香青和其他的原料药进行配伍而制备包含乳白香青的用于治疗胆囊炎的复方制剂。本发明重量和体积的关系为g/ml或kg/L。本发明具有如下优点I、本发明的治疗胆囊炎的药物，选用乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根为原料药制备而成，充分利用了原料药，避免了浪费。2、本发明提供了一种治疗 胆囊炎的药物，通过临床试验证明，该药物对由上多种原因引起的胆囊炎，均有很好的治疗作用，取得了总有效率95%的显著效果，可以用于胆囊炎的治疗。3、本发明的乳白香青总黄酮制备方法是采用现代提取技术提取后用大孔树脂进行富集总黄酮，再通过聚酰胺柱，提高纯度，最终得到总黄酮有效部位，总黄酮含量30-80%。4、本发明的治疗胆囊炎的药物制备方法，是采用现代炮制或提取制备、制剂等技术实现的，既提供了用乳白香青所制备的治疗胆囊炎的单方制剂，也可以用乳白香青和其他的原料药进行配伍而制备包含乳白香青的用于治疗胆囊炎的复方制剂。为了更好的理解本发明的实质，下面通过临床观察该药物在治疗“胆囊炎”的试验结果，说明其在制药领域的应用。实验例I :治疗急性胆囊炎 病例入组标准
传统医学虽无胆囊炎的病名，但对其病的症候和诊断早有认识和记载，本病的临床特点是右上腹及胁肋痛或上腹部心窝处痛，发热或者寒热往来或伴有黄疸常有胃脘胀闷、恶心、暖气、腹胀满等症状。因此传统医学的胁痛、胃病、肝气痛、肝胃不和、黄疸、结胸少阳病、胆胀、肝胀等病症中包含了急慢性胆囊炎、胆管炎。诊断标准右上腹突发性疼痛，并向右肩背部放射，伴有发热、恶心、呕吐，体检右上腹压痛和肌卫，墨菲氏征阳性，白细胞计数增高，B超示胆囊壁水肿，即可确诊为急性胆囊炎。选择符合上述标准的病例40例，其中男性20例，女性20例，平均年龄38岁。治疗方案
治疗组给予实施例I药物，轻症服药5-7天为一疗程，重症患者2个疗程。疗效评价标准
痊愈右上腹疼痛、恶心呕吐等症状完全消失；查体右上腹无压痛，未触及胆囊-墨菲氏征阴性出超检查胆囊正常，收缩良好。好转右上腹疼痛明显减轻、偶有恶心，但无呕吐、口苦，查体右上腹轻压痛，有时可触及重大的胆囊，博阿斯氏征阴性；白细胞计数及中性粒细胞正常超检查胆囊略大。无效全身症状无改善。治疗结果轻症7天内症状消失，重症患者一般14天内症状消失，血常规检查正常。B超示胆囊壁水肿消失。经统计有效率95%，治愈率85. 5%。典型病例
I、王X X，女，3 5岁，2 011年秋季患病，就诊时，右上腹突发性疼痛，并向右肩背部放射，疼痛剧烈，大便稀。曾静滴甲硝唑，口服消炎痛3天，停药I天又反复，经服用本发明药物7剂，疼痛缓解并逐步消失，至今未复发。2、张X X，男，45岁，就诊时主诉反复发作右上腹突发性疼痛，伴恶心、呕吐。查体右上腹压痛和肌卫，墨菲氏征阳性，B超检查胆囊壁水肿，经服用本发明药物10剂，疼痛消失，B超检查胆囊壁水肿消失，至今未复发。
具体实施例方式下述实施例用于举例说明本发明治疗胆囊炎药物的制备，但其不能对本发明的范围构成任何限制。实施例I乳白香青总黄酮的制备
一种治疗胆囊炎的药物，原料药乳白香青花序
制备方法取乳白香青取乳白香青花序，以体积分数60%的乙醇为溶剂，提取2次，每次提取2小时，每次加乙醇的量为乳白香青药材重量的8倍，提取液减压回收乙醇，并浓缩至每毫升浓缩液相当于Ig乳白香青药材，滤过，滤液用HPD-600型大孔树脂纯化，纯化工艺为用药液重量O. 3倍的HPD-600型大孔树脂吸附8小时，然后用HPD-600型大孔树脂柱体积6倍量的水洗脱，再用HPD-600型大孔树脂柱体积6倍量的体积分数70%的乙醇洗脱，收集体积分数70%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升浓缩液相当于Ig乳白香青药材，湿 法装聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱的粒度为80-100目，先用水洗脱至无还原糖反应，再用乙醇洗脱至无盐酸-镁粉反应，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至50°C时相对密度
I.10的浓缩液，在进风口温度180°c，出风口温度75°C下喷雾干燥，得乳白香青总黄酮。实施例2乳白香青总黄酮的制备
一种治疗胆囊炎的药物，原料药乳白香青茎和叶
制备方法取乳白香青茎和叶，以体积分数70%的乙醇为溶剂，提取I次，每次提取3小时，每次加乙醇的量为乳白香青药材重量的10倍，提取液减压回收乙醇，并浓缩至每毫升浓缩液相当于O. 5g乳白香青药材，滤过，滤液用HPD-600型大孔树脂纯化，纯化工艺为用药液重量O. 2倍的HPD-600型大孔树脂吸附10小时，然后用HPD-600型大孔树脂柱体积4倍量的水洗脱，再用HPD-600型大孔树脂柱体积10倍量的体积分数80%的乙醇洗脱，收集体积分数80%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升浓缩液相当于O. 5g乳白香青药材，湿法装聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱的粒度为80-100目，先用水洗脱至无还原糖反应，再用乙醇洗脱至无盐酸-镁粉反应，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至50°C时相对密度1.05的浓缩液，在进风口温度180°C，出风口温度75°C下喷雾干燥，得乳白香青总黄酮。实施例3乳白香青总黄酮的制备
一种治疗胆囊炎的药物，原料药乳白香青根
制备方法取乳白香青，以体积分数50%的乙醇为溶剂，提取4次，每次提取I小时，每次加乙醇的量为乳白香青药材重量的6倍，提取液减压回收乙醇，并浓缩至每毫升浓缩液相当于2g乳白香青药材，滤过，滤液用HPD-600型大孔树脂纯化，纯化工艺为用药液重量O. 5倍的HPD-600型大孔树脂吸附4小时，然后用HPD-600型大孔树脂柱体积10倍量的水洗脱，再用HPD-600型大孔树脂柱体积4倍量的体积分数50%的乙醇洗脱，收集体积分数50%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升浓缩液相当于2g乳白香青药材，湿法装聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱的粒度为80-100目，先用水洗脱至无还原糖反应，再用乙醇洗脱至无盐酸-镁粉反应，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至50°C时相对密度I. 15的浓缩液，在进风口温度180°C，出风口温度75°C下喷雾干燥，得乳白香青总黄酮。实施例4药物制剂的制备
一种治疗胆囊炎的药物，原料药乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根
制备方法取乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根，粉碎成30-150微米的细粉，按常规工艺制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸、微丸、分散片等剂型。实施例5药物制剂的制备
一种治疗胆囊炎的药物，原料药乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根 制备方法取乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根，以体积分数60%的乙醇为溶剂，提取2次，每次提取2小时，每次加乙醇的量为乳白香青药材重量的8倍，提取液减压回收乙醇，并浓缩至每毫升浓缩液相当于Ig乳白香青药材，滤过，滤液用HPD-600型大孔树脂纯化，纯化工艺为用药液重量O. 3倍的HPD-600型大孔树脂吸附8小时，然后用HPD-600型大孔树脂柱体积6倍量的水洗脱，再用HPD-600型大孔树脂柱体积6倍量的体积分数70%的乙醇洗脱，收集体积分数70%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升浓缩液相当于Ig乳白香青药材，湿法装聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱的粒度为80-100目，先用水洗脱至无还原糖反应，再用乙醇洗脱至无盐酸-镁粉反应，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至50°C时相对密度I. 10的浓缩液，在进风口温度180°C，出风口温度75°C下喷雾干燥，得乳白香青总黄酮；乳白香青总黄酮，，加常规辅料采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸等各种剂型。实施例6含乳白香青的用于治疗胆囊炎的复方制剂的制备
一种治疗胆囊炎的药物，原料药乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根；
制备方法取乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根，以体积分数60%的乙醇为溶剂，提取2次，每次提取2小时，每次加乙醇的量为乳白香青药材重量的8倍，提取液减压回收乙醇，并浓缩至每毫升浓缩液相当于Ig乳白香青药材，滤过，滤液用HPD-600型大孔树脂纯化，纯化工艺为用药液重量O. 3倍的HPD-600型大孔树脂吸附8小时，然后用HPD-600型大孔树脂柱体积6倍量的水洗脱，再用HPD-600型大孔树脂柱体积6倍量的体积分数70%的乙醇洗脱，收集体积分数70%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升浓缩液相当于Ig乳白香青药材，湿法装聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱的粒度为80-100目，先用水洗脱至无还原糖反应，再用乙醇洗脱至无盐酸-镁粉反应，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至50°C时相对密度I. 10的浓缩液，在进风口温度180°C，出风口温度75°C下喷雾干燥，得乳白香青总黄酮；所得乳白香青总黄酮，作为原料药与如下单味或多味药材配伍，作为治疗胆囊炎的药物
柴胡、积实、延胡索、川楝子、炎甘草、金钱草、海金沙、郁金、炒鸡内金、桅子、牡丹皮、黄芩、石斛、焦三仙、砂仁、黄芪、升麻、生大黄、黄连、黄芩、干姜、制半夏、党参、大枣、龙胆草、薄公英、吴茱萸、高良姜、枳壳、延胡索、白芍、茵陈、炒白术、乌贼骨、瓦楞子、茯苓、竹苑、佛手、苏梗、穿心莲、溪黄草、苦木、紫苏、百合、乌药、猪苓、木香、葛根、乌梅。实施例7 :乳白香青总黄酮含量测定
对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品5. 25 mg,置25 ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(每Iml含芦丁 O. 21 mg)；
标准曲线的制备精密量取芦丁对照品溶液O. O、I. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. 0,6. O ml，分别置25 ml量瓶中，各加入水至6. O ml，加5%亚硝酸钠溶液1.0 ml，混匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以第I份为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录V A)，在510 nm波长处测定吸收度。以对照品加入量为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线；
测定法取总黄酮提取物约O. 2 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解，定容至刻度，摇匀。精密量取供试品溶液3. O ml，置25 ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入水至6. O ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的含量，计算，即得；
异鼠李素3，7- 二 -β -D-葡萄糖苷照高效液相色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI D)测定；
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积份数比28:72的甲醇-体积份数比1%冰醋酸水溶液为流动相；检测波长为403nm ;理论板数按异鼠李素3，7- 二 - β -D-葡萄糖苷计算应不低于3000 ；
对照品溶液的制备取异鼠李素3，7- 二 - β -D-葡萄糖苷对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加体积份数比25%甲醇水溶液制成每Iml含50 μ g的溶液，即得； 供试品溶液的制备取总黄酮提取物约O. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积份数比25%甲醇水溶液25ml，密塞，称定重量，超声40分钟，放冷，再称定重量，用体积份数比25%甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
权利要求
1.一种乳白香青总黄酮的制备方法及其在制备治疗胆囊炎的药物中的应用，其中，所述乳白香青总黄酮的制备方法，包括如下步骤取乳白香青，以体积分数50-70%的乙醇为溶剂，提取1-4次，每次提取1-3小时，每次加乙醇的量为乳白香青药材重量的6-10倍，提取液减压回收乙醇，并浓缩至每毫升浓缩液相当于O. 5-2g乳白香青药材，滤过，滤液用HPD-600型大孔树脂纯化，纯化工艺为用药液重量O. 2-0. 5倍的HPD-600型大孔树脂吸附4-10小时，然后用HPD-600型大孔树脂柱体积4-10倍量的水洗脱，再用HPD-600型大孔树脂柱体积4-10倍量的体积分数50-80%的乙醇洗脱，收集体积分数50-80%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升浓缩液相当于O. 5-2g乳白香青药材，湿法装聚酰胺树脂柱，聚酰胺树脂柱的粒度为80-100目，先用水洗脱至无还原糖反应，再用乙醇洗脱至无盐酸-镁粉反应，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至50°C时相对密度I. 05-1. 15的浓缩液，在进风口温度180°C，出风口温度75°C下喷雾干燥，得乳白香青总黄酮。
2.如权利要求I所述的乳白香青总黄酮，在制备治疗胆囊炎的药物中的应用。
3.根据权利要求I所述的乳白香青总黄酮是以乳白香青花序和或乳白香青茎和或乳白香青叶和或乳白香青根为原料药制备而成的药物。
4.如权利要求1、2、3所述的乳白香青总黄酮可以采用制剂学的常规方法制备成各种剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、滴丸、微丸等。
5.如权利要求I所述乳白香青的提取，其特征在于提取方法包括煎煮、渗漉提取、回流提取。
6.本发明的技术方案提供了用乳白香青所制备的治疗胆囊炎的单方制剂，也可以用乳白香青和其他的原料药进行配伍而制备包含乳白香青的用于治疗胆囊炎的复方制剂。
全文摘要
本发明公开了一种乳白香青总黄酮的制备方法及其在制备治疗胆囊炎的药物中的应用，本发明药物是以乳白香青为原料药，经提取、大孔树脂纯化、聚酰胺再次纯化后得到，可按常规制剂工艺制成各种剂型，本发明克服了现有技术的缺陷，提供了乳白香青在制备治疗胆囊炎的药物中的应用，本发明所提供的药物制备方法简单，成本低，临床试验证实该药物对胆囊炎具有显著的临床疗效，且治愈后不易复发。
文档编号A61K36/28GK102861119SQ201210361750
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者孔倩倩 申请人:济南星懿医药技术有限公司