专利名称：一种异香豆素类化合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种天然来源的异香豆素类(isocoumarin)新化合物及其制备方法, 以及其在制备抗细菌感染药物、抗肿瘤药物中的应用。
背景技术：
细菌对抗生素的耐药尤其是多重药物耐药已成为全球关注的医学与社会问题，严重威胁着感染性疾病的治疗。目前，几乎所有的病原菌，特别是“ESKAPE”病原菌(肠球菌、 金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肠道杆菌属)均呈现出抗生素耐药性。然而，批准应用于临床的抗生素却逐年减少，甚至到无药可用的地步。因此， 探索新型结构的抗生素，特别发现针对“ESKAPE”耐药菌的新型抗耐药化合物分子是现在我国药物领域的重点研究方向。
Amicoumacin是一类来源于微生物的异香豆素类化合物。该类化合物具有异香豆素(isocoumarin)类母核结构，自1975年发现第一个该类抗生素baciphelacin以来, 已报道了 20多种来源于微生物的Amicoumacin类化合物,它们具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、 抗炎、抗溃瘍等广泛的生物活性，其中Amicoumacin A对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌 (MRSA)具有强烈的抑制作用；BaCiphelaCin对革兰氏阳性菌有专一抑制活性，特别是对青霉素、链霉素、大环内酯类抗生素多重耐药的金黄色葡萄球菌具杀死作用；Xenocoumacins 对革兰氏阴性菌如大肠杆菌、鲁氏不动杆菌(Acinetobacter Iwoffi)有强效活性，另外 xenocoumacins I还对真菌新型隐球菌(Cyptococcus neoformans)具有强烈抑制作用， Sgl7-l-4、Y-05460M-A除了有部分抑菌作用外，还呈现一定的抗肿瘤活性。
本发明人从一株植物叶片内生枯草芽孢杆菌的次级代谢产物中分离得到 amicoumacin类抗生素-Hetiamacin A,经紫外光谱、红外光谱、高分辨质谱及核磁共振等波谱学数据的仔细分析，确定Hetiamacin A为amicoumacin类新抗生素,该结构与迄今发现的所有amicoumacin类抗生素不同，其侧链有一个独特的六氢喃唳环。对Hetiamacin A进行抗菌活性评价发现，Hetiamacin A具有较广谱的细菌抑制活性，对革兰氏阳性菌如葡萄球菌属(耐β_内酰胺抗生素的菌株)、革兰氏阴性菌如肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、福氏志贺氏菌(Shigella fIexneri)> 肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)等在体外都具有强抑制作用。同时,Hetiamacin A对HeLa肿瘤细胞也具有良好的抑制作用。因此，Hetiamacin A有望成为新抗感染、抗肿瘤先导化合物并具有潜在的良好开发前景。发明内容
本发明提供了如式(I)所示结构的新活性化合物Hetiamacin A 2~ {5_轻基_4-[1-((3，4-二氢-8-羟基-I-氧-I氢-2-苯并吡喃)-3-甲基叔丁基)-氨基甲酰]-六氢嘧啶_6烷基}-乙酸，其化学式为
权利要求
1.一种异香豆素类化合物，其特征在干，具有如式(I)所示的结构
2.—种权利要求I所述的异香豆素类化合物的生产方法，其特征在于，包括如下步骤发酵培养保藏编号为CGMCC No. 6688的枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subtilis subsp.inaquosorum) PJS，收获发酵物；然后从发酵物中提取并分离所述异香豆素类抗生素化合物。
3.如权利要求2所述的生产方法，其特征在干，异香豆素类抗生素化合物的发酵培养步骤为将枯草芽孢杆菌菌株PJS接种于种子培养基培养，然后转入发酵培养基震荡培养，培养成熟后收获发酵液。
4.如权利要求2或3所述的生产方法，其特征在于，异香豆素类抗生素化合物的提取、分离步骤为将发酵液离心后，上清液用こ酸こ酯萃取，有机相经无水Na2SO4脱水、减压浓缩，得粗提物；粗提物再经制备薄层层析，分离得到半纯品；半纯品溶于甲醇，用HPLC进行制备，冷冻干燥，得到成品。
5.如权利要求2或3所述的生产方法，其特征在于，异香豆素类抗生素化合物的提取分离步骤为上清液用こ酸こ酯萃取，有机相经无水Na2SO4脱水、减压浓缩，得到油状浅黄色粗提物；而后粗提物经制备薄层层析，以展开剂氯仿-甲醇=6(Γ70:3(Γ40进行分离得到半纯品；半纯品溶于甲醇，用HPLC进行制备，冷冻干燥，得到白色粉末状的成品化合物。
6.如权利要求2或3所述的生产方法，其特征在于，所述的氯仿-甲醇展开剂中，氯仿甲醇比例为65:35，所述异香豆素类化合物在硅胶板上的Rf = O. 35。
7.权利要求I所述的异香豆素类化合物在制备抗生素药物中的用途。
8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述抗生素药物为预防或治疗耐β-内酰胺抗生素的革兰氏阳性菌葡萄球菌属、肺炎克雷伯菌、福氏志贺氏菌感染或肺炎链球菌造成感染的药物。
9.权利要求I所述的异香豆素类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为白血病、肺癌、肝癌、胰腺癌或子宫颈癌。
全文摘要
本发明提供了一种异香豆素类化合物及其制备方法和在制备抗生素药物以及抗肿瘤药物中的应用。该化合物侧链具有六氢嘧啶环的独特结构，通过对枯草芽孢杆菌菌株的发酵并分离而得，具有广谱细菌抑制活性，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较高抗菌活性，且显示出对肿瘤的较强抗性。
文档编号A61P31/04GK102977082SQ201210473479
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月20日 优先权日2012年11月20日
发明者孙承航, 刘少伟, 靳婧, 陈川, 刘佳萌, 游雪甫, 王飞飞, 蒋忠科, 郭琳 申请人:中国医学科学院医药生物技术研究所