亚氯酸盐或氯酸盐脂质体组合物的制作方法
【专利摘要】本申请包括包含包封在脂质体核心内部的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体和脂质体组合物、其制备方法和使用方法，特别是作为药物的使用方法。
【专利说明】亚氯酸盐或氯酸盐脂质体组合物
[0001] 本申请要求2011年12月22日提交的第61/57, 326号共同待审（copending)美 国临时专利申请的优先权，其内容以其整体援引加入本文。
[0002] 申请领域
[0003] 本申请涉及含有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体组合物，其制备方法及其 使用方法，例如作为药物的使用方法。
[0004] 申请背景
[0005] 脂质体
[0006] 对于将脂质体作为用于药物递送的载体已进行了广泛的研究。已有将脂质体 有效用于药物和疫苗的递送的报道（Gregoriadis，G. TIBITECH，1995,13:527-537及其 中所引用的参考文献）。例如，基于脂质体的药物递送系统广泛用于给药如盐酸多比柔 星（以Doxil和Myocet的形式上市）的药物的静脉内抗癌化疗（Abraham等人，Methods Enzymol. 2005, 391:71-91)。脂质体还可以用于递送吸入型气雾剂药物，例如：1)胰岛 素 （Huang等人，J Control Release，2006，113:9-14) ;2)抗生素，特别是革巴向肺泡巨 噬细胞结核感染的抗生素 （Vyas等人，Int J Pharm. 2005,296:12-25) ;3)抗癌化疗药 物（Verschraegen 等人 Clin Cancer Res. 2004, 10:2319-2326);以及 4)其它（参见第 5, 049, 388号美国专利）。
[0007] 将特定大小的有机分子包含于脂质体中更常见。已知较小的分子（如乙醇、葡萄 糖、氨和乙酸酯）会渗透穿过脂质体的脂双层。将该行为称作渗漏。
[0008] 虽然有将脂质体成功用作药物递送系统的实例，对于许多应用仍有未满足的挑 战。化学稳定性和物理稳定性、清除率、包封率和靶向性是其中一些最大的挑战，特别是当 要包封较小的分子时。
[0009] 亚氯酸盐、氯酸盐及其混合物
[0010] 在本文中称为亚氯酸盐的亚氯酸根离子（C1CV)已用于多种场景中。亚氯酸钠是 强氧化剂，其已用于水净化、消毒以及漂白和除臭。在酸性条件下，亚氯酸钠产生高毒性的 二氧化氯气体，因此使用的水性溶液通常以强碱性（大约pH 13)溶液的形式提供，使用如 氢氧化钠的碱性物质调节pH。
[0011] 氯酸盐也已用于多种场景中。在本文中称为氯酸盐的氯酸根离子（C1CV)是 强氧化剂，并以用于烟花、消毒和杀虫药中。此外，氯酸盐被用作用于治疗皮肤疾病的抗 真菌剂（第5, 427,801号美国专利），并已发现其可逆性抑制沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis)感染的细胞中蛋白聚糖的硫酸化（JMed Microbiol, 2004年2月第53卷第2 期：93-95)。
[0012] 包含亚氯酸盐和氯酸盐的混合物的组合物也已用于多种场景中，例如用于治疗多 种疾病和病况。稳定化的亚氯酸盐是此类组合物的非限制性例例。例如，第4, 725, 437、 4, 507, 285和4, 851，222号美国专利公开了稳定化的亚氯酸盐用于治疗伤口和感染以及使 骨髓再生的用途。在第2011/0076344号美国专利申请公开中描述了稳定化的亚氯酸盐用 于抑制抗原特异性免疫应答的用途。第2001/017030号PCT专利申请公开中公开了通过给 药氧化剂（如稳定化的亚氯酸盐）对于多种巨噬细胞相关的病症的治疗。第7, 105, 183号 美国专利描述了稳定化的亚氯酸盐用于治疗巨噬细胞相关的神经变性（neurogenerative) 疾病的用途。第5, 877, 222号美国专利描述了稳定化的亚氯酸盐在治疗AIDS相关的痴呆 中的用途。第2008/145376号PCT专利申请公开报道了稳定化的亚氯酸盐在治疗变应性哮 喘、变应性鼻炎和遗传特应性皮炎中的用途。第2007/009245号PCT专利申请公开中公开 了与氟嘧啶组合的稳定化的亚氯酸盐在癌症治疗中的用途。第2001/012205号PCT专利申 请公开中公开了稳定化的亚氯酸盐用于治疗癌症和其它受调节巨噬细胞功能影响的病况 的用途。第255145号EP专利申请公开了稳定化的亚氯酸盐在眼科学中的用途。已报道 了评估稳定化的亚氯酸盐在对患有晚期出血性放射性膀胱炎和直肠炎的患者的治疗中的 用途的二期研究（Veerasarn，V·等人，Gynecologic Oncology, 2006, 100:179-184)。已证 明稳定化的亚氯酸盐在哨齿动物心脏模型（Hansen, A.等人，Pharmacology&Toxicology， 2001,89:92-95)和其它研究（Kemp, Ε·等人，Transplantation Proceedings, 2000,32:1018-1019)中延长异种移植物的存活。也已报道稳定化的亚氯酸盐的抗菌 作用(Stoll, P.等人，Zeitschrift fuer Antimikrobielle und Antineoplastische Chemotherapie，1993，11:15-20 ;Stoll，P.等人，Chemotherapy, 1993,39:40-47 ; Hollfelder，K.等人，Reakt.Sauerstoffspezies Med, 1987, 253-262 ;Adamczyk，R.等人， Reakt. Sauerstoffspezies Med, 1987, 247-252 ；Gillissen, G.等人，Arzneimittel-Forsc hung, 1986,36:1778-1782 ;Ullmann，U.等人，Infection, 1985,13:S236-S240 ;Ullmann，U. 等人，Infection，1984,12:225-229)。近期研究表明稳定化的亚氯酸盐能够刺激自然杀伤 (NK)细胞对恶性细胞的细胞毒性，这与稳定化的亚氯酸盐增强对肿瘤细胞免疫的能力有关 (Kuhne, L.等人，Biomedicine and Biotechnology, 2011，ρ· 436587) 〇
[0013] 在上述出版物中，所述亚氯酸盐是稳定化的亚氯酸盐的可商购剂型的形式，其称 为Oxovasin?(局部剂型）或者WF10(用于静脉内给药的药物产品）。Oxovasin?和WF10 为0X0-K993的稀释液，0X0-K993本身是水性溶液。最初认为0X0-K993是含有叫作四氯 十氧（tetrachlorodecaoxygen，TO)0)的化合物作为活性成分的溶液，并且在过去的文 献中经常使用术语四氯十氧、十氧化四氯（tetrachlorodecaoxide)和TO)0指代WF10和 Oxoferin中的活性剂。但是，随后的分析测试测定0Χ0-Κ993不包含Τ⑶0,而是亚氯酸根 离子、氯离子、氯酸根离子和硫酸根离子及钠阳离子的水性溶液。因此，向患者静脉内给药 WF10或者局部施用Oxoferin?时必然（entail)递送离子的混合物。0X0-K993可得自NUV0 Manufacturing GmbH(Wanzleben, Germany)。在第 4, 507, 285 号美国专利中描述 0X0-K993 及其制备。已发表描述0X0-K993和WF10的综述文章，其描述了该物质在当时已知的多种用 途（Drugs in R&D, 2004, 5:242-244 ;McGrath等人，Current Opinion in Investigational Drugs, 2002, 3:365-373)。
[0014] 包封方法：
[0015] 第5, 269, 979号美国专利公开了形成用于包封过客（passenger)分子的叫作溶剂 稀释微载体（SDMC)的载体的方法。使用多步方法形成包封载体：首先涉及"形成（formed) 溶液"的制备，然后通过构建（organization)步骤导致从所述"形成溶液"中生成所述 SDMC。所述"形成溶液"通过以下步骤制备：将两亲性（amphiphatic)物质和过客分子在有 机溶剂中溶解，然后加入水得到浑浊的溶液，然后加入更多的有机溶剂以得到澄清的"形成 溶液"。可将形成溶液立即使用或储存。使用构建步骤制备SDMC，所述构建步骤可包括：将 所述"形成溶液"稀释入水性体系中，原位雾化或者再水合。在SDMC中，过客分子包封于双 分子层自身中，或者与双分子层的组分结合，而不是在由球形的双分子层所生成的空间内 部。包封在SDMC中的载体分子有十氧化四氯（TCDO)。注意到在该申请中描述的方法不包 括"纯化"步骤，使得在SDMC制备中使用的所有物质保留在测试使用的最终溶液中。
[0016] 第2, 636, 812号加拿大专利申请公开了用于在水性介质中排出包封的物质的包 膜（enveloping membrane)。在一个实例中，所述包封的物质为氧化性的氯氧化合物，特别 是T⑶0。所述包膜在中性水性介质中为不溶的并且水可渗透，其通常由阳离子或者阴离子 的水不溶性聚合物构成。该申请中所制备的组合物可用于液体和基质表面的消毒和纯化， 以及用于水的消毒。
[0017] 第KR2003/072766号韩国专利申请公开中公开了口服卫生组合物，其包含亚氯酸 盐（具体为亚氯酸钠），以及包封在脂质体中的锌离子。此组合物可另外含有载体或者赋 形剂，其可具有双相或者单相结构，并且pH为7-8. 5。在一实例中，所述脂质体由卵磷脂制 备。
[0018] 第W0 00/19981号的PCT专利申请公开中公开了抗菌制剂，其包含与过氧化合物 (例如过氧化氢）组合的亚氯酸盐，以及使用这些制剂来对物品或表面进行消毒的方法。所 述制剂可被配制为脂质体的形式，其pH可为6. 8-7. 8。亚氯酸盐和过氧化合物都是对于微 生物活性所需要的。在该申请中显然未制备真正的脂质体制剂。
[0019] 第2007/0145328号美国专利申请公开中公开了用于肠胃外、全身或静脉内给药 的亚氯酸盐（如亚氯酸钠）制剂，其含有亚氯酸盐和pH调节剂。所述pH调节剂调节所述 制剂的pH，使其处于约7至约11. 5的范围。该申请教导所述制剂的毒性低于WF10。
[0020] Panasenko 等人（Member Cell Biol，1997 ;11 (2) :253-8)公开了次氯酸钠 (NaCIO)、亚氯酸钠（NaC102)、氯酸钠（NaC103)和高氯酸钠（NaC10 4)引发脂质过氧化反应的 能力。所述脂质体由pH为7. 4的卵磷脂酰胆碱在单一的氯化钠和缓冲液中制备。含氧氯 酸盐仅加入外相中。没有进行用亚氯酸盐或者氯酸盐负载囊泡或者将含氧氯酸盐从外相移 除的步骤。
[0021] 第2011/0052655号美国专利申请公开描述了为了控制水性体系中原生动物营养 子和孢囊，将抗微生物剂包封入微囊剂或者纳米囊（包括脂质体）中。
[0022] 第2011/0177147号美国专利申请公开描述了为了移除含工业用水的系统中的生 物污着，将抗菌组合物与至少一种稳定剂联合包封。所述抗菌组合物可以为非氧化性杀生 物（biocidal)的化合物，如异噻唑林，并且所述稳定剂可以为含氯酸盐的缓冲液。
[0023] 申请概述
[0024] 本申请涉及含有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体组合物，其制备方法以及 使用方法。
[0025] 因此，本申请包括脂质体组合物，其包含具有至少一个脂双层且内部包封有亚氯 酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质。通常所述 组合物中具有多个分离的脂质体（亦称为囊泡）。通常所述囊泡分散于水相中并包封一种 或多种水性组合物。因此，根据一个实施方案，亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物被包封于多个 囊泡中，所述囊泡的壁含有一个或多个脂双层。本申请还包括包含至少一个脂双层且内部 包封有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂 质。
[0026] 本申请还包括脂质体组合物，其包含包封和未包封的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合 物，其中所述包封的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物在组合物的内相中，并且未包封的亚氯酸 盐、氯酸盐或其混合物在组合物的外相中。或者，外相可含有除了亚氯酸盐、氯酸盐或其混 合物的物质，例如其它的治疗剂或者氯化钠。在一个实施方案中，内相和外相的pH相同。在 另一实施方案中，内相和外相的pH不同，例如，内相中的pH可为约5至约14、约6至约13、 约8至约12. 5或者约10至约12的pH，并且外相的pH可为大约中性，例如约6至8。在本 发明的一个实施方案中，内相和外相的pH通过缓冲液（例如碳酸盐缓冲液）来进行调节。
[0027] 在另一实施方案中，脂质体包含适合用于包封亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂 质，所述亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的pH为约5至约14、约8至约13、约9至约12. 5或 者约10至约12。在一实施方案中，所述脂质选自形成脂质体的那些，所述脂质体在约5°C 或高于约5°C下不渗透渗漏亚氯酸根离子和/或氯酸根离子。这样的脂质包括例如磷脂，如 具有足够长的饱和和/或不饱和脂肪酸链的磷酯酰胆碱，和/或鞘脂，如鞘磷脂，或者显示 期望的性质的这样的脂质的合适的混合物。
[0028] 在另一实施方案中，所述亚氯酸盐为稳定化的亚氯酸盐组合物，例如0X0-K993或 者含有 1-10%、10-20%、20-30%、30-50%或者 50-90%^八)(《0-1(993 的组合物。在另 一实施方案中，所述稳定化的亚氯酸盐含有10% (w/v)的0X0-K993(以这种方式稀释的 0Χ0-Κ993 称作 WF10)。
[0029] 在一实施方案中，所述稳定化的亚氯酸盐含有约2% (w/v)的0Χ0-Κ993 ;在另一 实施方案中，所述稳定化的亚氯酸盐含有约2% (w/v)的0X0-K993、约2% (w/v)的甘油 和约 96% (w/v)的水。这样的组合物以 Oxovasin? 或 Oxoferin?(Nuvo Manufacturing GmbH, Wanzleben, Germany)的形式商业出售。
[0030] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物包含以所述组合物中的总包封离子含量的 约 0· 01% (w/w)至约 50% (w/w)、约 0· 1% (w/w)至约 20% (w/w)或约 0· 5% (w/w)至约 10% (w/w)的量存在的包封亚氯酸盐。
[0031] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物包含以所述组合物中的总包封离子含量的 约 0· 01% (w/w)至约 50% (w/w)、约 0· 1% (w/w)至约 20% (w/w)或约 0· 5% (w/w)至约 10% (w/w)的量存在的包封氯酸盐。
[0032] 在又一实施方案中，所述脂质体组合物包含以所述组合物中的总包封离子含量的 约 0· 01% (w/w)至约 50% (w/w)、约 0· 1% (w/w)至约 20% (w/w)或约 0· 5% (w/w)至约 10% (w/w)的量存在的包封氯酸根离子和亚氯酸根离子的混合物。含有亚氯酸根离子和/ 或氯酸根离子的物质的任意组合物也可含有至少一种反荷离子以保持电中性。因此，根据 本申请中的一个实施方案，所述脂质体组合物含有一种或多种阳离子。可能的阳离子的非 限制性实例包括碱金属阳离子（例如钠或Na+)和碱土金属阳离子。在另一实施方案中，所 述脂质体组合物含有亚氯酸根离子、氯酸根离子或其混合物，其还含有钠和/或钾反荷离 子。在另一实施方案中，所述脂质体组合物就个体体液而言是等渗的。在此方面测定等渗 性是技术人员熟知的。
[0033] 本申请还包括制备具有至少一个脂双层且内部包封有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合 物的脂质体的方法，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质，所述脂质可得自天然的、 半合成的或者合成的来源。在一个实施方案中，所述方法包括：
[0034] (a)向内表面至少部分具有所述一种或多种脂质的薄膜的容器中加入亚氯酸盐、 氯酸盐或其混合物的水性溶液；
[0035] (b)在足以全部或者部分移除所述内表面的所述薄膜的条件下搅拌所述容器，以 得到含有包封有亚氯酸盐和/或氯酸盐的脂质体的浑浊溶液；
[0036] (c)对所述浑浊溶液进行处理，以将所述脂质体的平均直径减小至所需的量；以 及
[0037] (d)任选地对所述脂质体进行处理，以从所述脂质体的外部溶液中移除亚氯酸盐、 氯酸盐或其混合物。
[0038] 按照本申请的方法，在一实施方案中，本发明的脂质体中的亚氯酸盐、氯酸盐或其 混合物的包合率为约〇. 1 %至约50 %、约0. 5 %至约25 %、约1 %至约15 %、约1 %至约10 % 或者约1 %至约5%。
[0039] 在另一实施方案中，本申请的脂质体使用乙醇注入法制备。在另一实施方案中，所 述脂质体使用包括交叉流技术的乙醇注入法制备。
[0040] 该申请还包括包含脂质体和至少一种生理学上可接受的载体或者赋形剂的药物 组合物。
[0041] 本申请还包括本申请的组合物作为药物的用途。取决于它们的预期用途，本申请 的组合物可以为无菌的或者非无菌的。本发明的组合物也可以是无热源的。
[0042] 本申请还包括用于治疗受益于给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的疾病、病症或 病况的方法，其包括向需要其的个体给药有效量的本申请的组合物。
[0043] 本申请还包括本申请的组合物用于治疗受益于给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物 的疾病、病症或病况的用途。
[0044] 在一个实施方案中，使用所述组合物的方法包括告知使用者特定的安全性或临床 效果。例如，可告知使用者所述脂质体组合物比提供或预计会提供类似治疗效果的非脂质 体组合物更稳定、更具靶向特异性或更具治疗有效性。也可告知使用者所述组合物比提供 或预计会提供类似治疗效果的非脂质体制剂在一个或多个方面上更安全。例如，用所述脂 质体组合物进行治疗，可以产生更低的副作用（如减少的静脉刺激（静脉炎）），从而提高患 者的耐受性和顺从性。还可告知使用者与提供或预计会提供类似治疗效果的非脂质体制剂 相比，脂质体组合物可以更快的速率（例如静脉内推注相对于稀释输注）或者以降低的体 积给药。还可告知使用者所述脂质体组合物可使活性成分延长释放、控制释放或延迟释放。 此外，可告知使用者这种延长释放或延迟释放可根据脂质体中脂质的特性和使用者治疗处 理所需时机进行定制或调整。可以通过公开的材料（如标签或者产品说明书）的方式告知 使用者。
[0045] 从以下详细说明会明确本申请的其它特征和优点。但是应当理解，尽管详细说明 和具体的实施例说明本申请的实施方案，但其仅作为说明给出，因为从该详细的说明，本领 域技术人员会明确本申请的精神和范围内的多种变化和修饰。
[0046] 附图简要说明
[0047] 现将参照所附附图对本申请的实施方案进行更详细的描述，其中：
[0048] 图1显示WF10的稀释曲线，其用于将测量的亚氯酸盐/氯酸盐的吸光度与实施例 7的邻联甲苯胺方法B(用于检测样品中的亚氯酸盐/氯酸盐）中的特定反稀释因子相联 系。反稀释因子相对于在447nm处测量的吸光度作图。左手边的图表显示整个数据集，而 右手边的图表仅呈现非线性域。顶部和底物的线分别代表数据集的线性和非线性部分的拟 合。二者的第一个交叉点标志着两个域的转换。
[0049] 图2为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由1-棕榈 酰-2-油酰-sn-3-甘油基-3-磷酸胆碱（P0PC)制备，并将其在5°C、23°C和37°C下储存。
[0050] 图3为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由鞘磷脂（SM)制 备，并将其在5°C、23°C和37°C下储存。图的末尾（大约522h)处的数据点的聚集是有目的 地将温度升高至37°C后的测量。
[0051] 图4为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由3:1比率的 P0PC:P0PG(1-棕榈酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸-(Γ-消旋-甘油））制备，并将其在 5°C、23°C和 37°C下储存。
[0052] 图5为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由2:1比率的 P0PC: P0PG制备，并将其在5 °C、23 °C和37 °C下储存。
[0053] 图6为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由1:1比率的 P0PC: P0PG制备，并将其在5 °C、23 °C和37 °C下储存。
[0054] 图7为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由1，2-二肉豆蘧 酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DMPC)制备，并将其在5°C和23°C下储存持续1、5和7天。
[0055] 图8为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由鞘磷脂SM制 备。在5°C (蓝）和23°C (红）下储存，然后将温度升高至37°C (这立即导致渗漏）。 [0056] 图9为显示脂质体中亚氯酸盐和氯酸盐的渗漏的图，所述脂质体由DPPC和DPPC/ DMPC制备，并将其在22°C和38°C下储存。
[0057] 图10呈现对DPPC和DPPC/DMPC脂质体的长期稳定性研究的概况。每条代表样品 在室温（约22°C )和冰箱中（约6°C )的温度下的渗漏实验的结果。X轴代表时间（以天 计）。中度灰色标志发现外部介质中的WF10含量小于L0D的脂质体。更浅的灰色标志外部 介质中的WF10含量小于L0Q的时期。深灰色表明WF10的含量高于L0Q。
[0058] 图11显示实施例12中描述的2011年12月12日用SX122进行的高分辨率渗漏 (HRL)实验的结果。可看见两个样品的图。温度曲线参考右手边的y轴。渗漏的物质的量 以总样品体积的分数的形式提供。所述实验用于测定渗漏在数小时内开始的温度。
[0059] 图12显示实施例12中描述的2012年1月6日用SX122进行的HRL实验的结果。 可看见两个样品的图。温度曲线参考右手边的y轴。渗漏的物质的量以总样品体积的分数 的形式提供。所述实验检查38°C下的渗漏特性。所述实验进行数天，表明在该温度下非常 慢的渗漏。
[0060] 图13显示实施例12中描述的2012年1月26日用SX126进行的HRL实验的结果。 可看见两个样品的图。温度曲线参考右手边的y轴。渗漏的物质的量以总样品体积的分数 的形式提供。从该图中可见部分渗漏。
[0061] 图14显示实施例12中描述的2012年2月22日用SX126进行的HRL实验的结果。 可看见两个样品的图。温度曲线参考右手边的y轴。渗漏的物质的量以总样品体积的分数 的形式提供。
[0062] 图15显示实施例12中描述的2012年1月25日用SX126进行的HRL实验的结果。 可看见两个样品的图。温度曲线参考右手边的y轴。渗漏的物质的量以总样品体积的分数 的形式提供。
[0063] 图16为显示实施例14中报道的释放的物质的量占总样品体积的分数相对于实验 的时间作图的图。大图显示整个实验，以及渗漏上限（其中所包封的WF10被完全释放）。 这为整个样品体积的大约7. 5%，因此这也表明脂质体的包封容量。较小的图更详细地报告 发生一些渗漏的时期。
[0064] 图17显示在本申请的一个实施方案中使用乙醇注入法制备脂质体的图示。出钢 室的脂质体包封WF10并分散于含有WF10的外相中。
[0065] 图18为显示在使用乙醇注入法制备包含WF10的脂质体的渗滤过程期间滤液中收 集的亚氯酸盐的量的图。
[0066] 图19为显示在使用乙醇注入法制备包含WF10的脂质体的渗滤过程期间滤液中收 集的亚氯酸盐的量的图（重复图18中报道的实验）。
[0067] 图20为显示在使用乙醇注入法制备包含WF10的脂质体的渗滤过程期间滤液中收 集的亚氯酸盐的量的图。所述脂质体使用与图18和图19中报道的实验相比两倍浓度的 WF10来制备。
[0068] 图21为显示小鼠的胶原诱导性关节炎（CIA)的得分的图，所述小鼠在诱导CIA后 接受WF10、脂质体形式的WF10或者NaCl (i. p.)。
[0069] 图22为显示接受WF10、脂质体形式的WF10或者NaCl(i.p.)的小鼠第16天的CIA 得分的棒图。
[0070] 申请详述
[0071] I.定义
[0072] 除非另外说明，如本领域技术人员会理解，在本部分和其它部分中所描述的定义 和实施方案意图可应用于它们适合的本文中所描述的本申请的所有实施方案及方面。
[0073] 本文中所使用的术语"a"、"an"和"the"不仅包括具有一员（member)的方面，也 包括具有多于一员的方面。例如，一包括"磷脂"的实施方案应理解为提供具有一种磷脂或 者两种或更多种额外的磷脂的方面。
[0074] 在含有"额外的/附加（additional) "或者"第二"组分的组合物中，如本文中使 用的第二组分与其它组分或者第一组分化学上不同。"第三"组分与其它组分、第一组分和 第二组分不同，并且进一步列举的或"额外的/附加"组分类似地不同。
[0075] 如本文中所使用的术语"剂/物质（agent) "指化合物或者化合物的混合物，当将 其加入至组合物中时，会对组合物的性质产生特定作用。
[0076] 如本文中所使用的术语"亚氯酸盐"指阴离子"C1CV"。阴离子物质通常以离解的 形式存在于水性溶液中，但阴离子经常源自含有阴离子和阳离子的母体盐。
[0077] 如本文中所使用的术语"氯酸盐"指阴离子"C1CV"。阴离子物质通常以离解的形 式存在于水性溶液中，但阴离子经常源自含有阴离子和阳离子的母体盐。
[0078] 如本文中所使用的术语"稳定化的亚氯酸盐"指组合物或者物质，其含有亚氯酸根 离子（C1CV)，并且其中亚氯酸根离子的浓度、pH和/或活性在使用前保持稳定，持续可接受 的时期。在稳定化的亚氯酸盐中，在使用前亚氯酸根离子基本上不降解，并且亚氯酸根离子 的活性基本上保持。稳定化的亚氯酸盐可含有缓冲剂，例如碳酸钠/氢氧化钠缓冲系统，其 维持制剂的碱性pH。可监测亚氯酸根离子的浓度，例如通过高效液相色谱法（HPLC)进行。
[0079] 本文中所使用的"WF10"指药物物质0X0-K993的10% (w/v)水性稀释液，分析上 表征为包含亚氯酸根离子（4. 25%)、氯酸根离子（1.5%)、氯离子（2.0%)、硫酸根离子 (0· 7% )和钠离子（4. 0% )的溶液。
[0080] 如本文中所使用的术语"可接受的时期"意指至少约1天、至少约1周、至少约30 天、至少约6个月、至少约1年、至少约2年或者至少约制备和使用之间的时间。
[0081] 如本文中所使用的术语"脂质体"指含有至少一个环绕内部核心的脂双层的人工 制备的囊泡。内相（inner phase或internal phase)或者内部核心（在本文中可交换地 使用）含有如亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的物质。所述囊泡可用于递送物质，例如局部地 或在体内递送。有三种类型的脂质体:MLV (多层囊泡）、SUV (小单层囊泡，直径25-300nm) 和LUV (大单层囊泡，直径大于300nm)。囊泡外的物质体积称为外相（external phase或 outer phase)或者连续相。这些术语在本文中可交换地使用。脂质体组合物会含有多个独 立的、分离的脂质体，并且内相和外相通常含有水。
[0082] 鞘脂为一类含有结合至多种首基（head group)上的鞘氨醇（2-氨基-4-十八 烯-1，3-二醇）主链的脂质。
[0083] 鞘磷脂（SM)指在动物细胞膜中，特别是在环绕一些神经细胞轴突的膜状髓鞘中 发现的鞘脂类型。鞘磷脂具有神经酰胺核心（通过酰胺键与脂肪酸键连的鞘氨醇）以及极 性首基，所述极性首基为磷酸胆碱或者磷酸乙醇胺。
[0084] 如本文中所使用的术语"包封（encapsulated) "或"包封（entrapped) "意指被提 及的物质位于脂质体的内部，或者在脂质体的内相或核心中。物质也可位于外相或者连续 相中。
[0085] 如本文中所使用的术语"包合率"指制备过程期间包封入脂质体囊泡中的物质或 溶液相对于原料的百分比。
[0086] "药物组合物"指药用物质的组合物。术语"药物组合物"和"制剂"可相互交换地 使用。
[0087] "多分散性指数"或者"Pdl"是与溶液中颗粒的粒径分布相关的无量纲 (dimensionless)数。Pdl可通过对用称作动态光散射的技术测量的对比数据进行分析得 至1J。该指数为由对比数据的简单双参数拟合（累积量分析，cumulants analysis)计算的 数。Pdl为无量纲的，并且度量使得除具有高度单分散标准之外几乎不会看到小于0. 05的 值。大于〇. 7的值表明该样品具有非常宽的粒径分布，并且可能不适合通过动态光散射法 (DLS)技术进行粒径分布测量。多种粒径分布算法可用于这两个极值之间的数据。这些参 数的计算如ISO标准文件13321:1996E和ISO 22412:2008中定义。
[0088] "公开的材料"意指提供信息的介质，其包括印刷的、音频的、可看得见的或者电子 的介质，例如传单、广告、产品说明书、印刷的标签、互联网网站、互联网网页、互联网弹出窗 口、无线电广播或者电视广播、光盘、DVD、播客、录音或者其它录制的或电子介质。
[0089] "安全性"意指与给药组合物相关的不良事件（包括与患者相关因素相关的副作 用）的发病率或严重性。
[0090] 如本文中所使用的术语"有效量"意指足以达到期望的结果的量，因此其会取决于 成分及其期望的结果。但是，一旦已知期望的效果，测定有效量在本领域技术人员的技能范 围内。
[0091] 如本文中本申请的组合物的成分中所使用的术语"水"指药学上可接受的水。 [0092] 如本文中所使用的术语"水性溶液"意指其中溶剂主要为水，但是可存在少量（例 如小于10、9、8、7、6、5、4、3、2或1% (v/v))的非水性溶剂的溶液。
[0093] 如本文中所使用的术语"w/v"意指100mL的溶液中溶质的克数。
[0094] 如本文中所使用的术语"w/w"意指100g的溶液中溶质的克数。
[0095] 如本文中所使用的术语"浑浊溶液"指由于存在单个颗粒或者悬浮的固体使外观 不透明或者混浊的溶液，所述单个颗粒或者悬浮的固体分别通常用裸眼不可见。
[0096] 如本文中所使用的术语"相变温度"指诱导脂质的物理状态从有序凝胶相（其中 烃链完全伸展并紧密堆积）变化为无序液晶相（其中烃链在流体中任意定向）所需的温 度。
[0097] 通常，图中的"误差棒"表示平均值的标准误差，而实心的、阴影的棒的顶部表示单 一数据值，其为数据值分布的平均值。
[0098] 术语"药学上可接受的"意指与动物（特别是人）的治疗是相容的。
[0099] 如本文中所使用的且本领域所熟知的术语"治疗（treating或treatment) "意指 获得包括临床结果的有益的或者期望的结果的方法。有益的或者期望的临床结果可包括， 但是不限于可检测或不可检测的一种或多种症状或病况的缓和或者改善、病变范围的缩 小、疾病状态的稳定化（即不恶化）、疾病传播的预防、疾病恶化的延迟或者减慢、疾病状态 的改善或者缓和、疾病复发的减少和减退（局部或者整体）。"治疗"也可意指与如果不接 受治疗的预期存活相比，存活延长。如本文中所使用的"治疗"也包括预防性治疗。治疗方 法包括向个体给药治疗有效量的活性药剂，并且其任选地由单次给药组成，或者其包括系 列施用。治疗期的长度取决于多种因素，例如病况的严重性、患者的年龄、活性成分或者药 剂的浓度、如本文中所述的组合物的活性，和/或其组合。治疗期也可包含周期，例如每天 给药一次，持续约2-7天，然后停止约1-20天的时期，以构成一个治疗周期。患者可被治疗 多于一个周期，例如至少两个、三个、四个或者五个周期。也会理解，在特定的治疗或预防方 案过程中，用于治疗或预防的药剂的有效剂量可以增加或者减少。通过本领域已知的标准 诊断测定法可得到剂量的变化，并且其变得清楚。在一些情况种可能需要慢性给药。例如， 向个体给药足以治疗患者的量的组合物，并持续足以治疗患者的时间。
[0100] 如本文中所使用的术语"个体"包括动物界的所有成员，包括哺乳动物，并且适合 地指人。
[0101] "使用者"意指个体，如患者、医护工作者或者药物供应者。
[0102] " ζ电位"是与液体中颗粒的表面电荷相关的量，其指示分散于液体中的固体或者 分散于液体中的液体的势稳定性。如果悬浮液中所有的颗粒具有大的负或者正ξ电位， 则它们会倾向于彼此排斥，并且没有絮凝的趋势。但是，如果颗粒具有低ξ电位值，则会 存在较小的阻止颗粒聚集的力，并且颗粒可能具有更大的絮凝趋势。关于ξ电位的更多 信息可参照 Hunter, R. J. (1988)Zeta Potential in Colloid Science:Principles And Applications，Academic Press，UK〇
[0103] 当在本申请的治疗方法和组合物的用途中使用时，"需要其的"个体可以是疑似患 有、已经诊断患有或者之前已对要治疗的病况进行治疗的个体。
[0104] 在理解本发明公开的范围中，如本文中所使用的术语"包含/包括（comprising)" 及其派生词意图是开放式术语，其说明存在所描述的特征、元素、组分、基团、整数和/或步 骤，但是不排除存在其它未描述的特征、元素、组分、基团、整数和/或步骤。上述内容也用 于具有相似含义的词，如术语"包含/包括（including)"，具有（having)"及其派生词。 如本文中所使用的术语"由…组成（consisting) "及其派生词意图为封闭式术语，其说明存 在所描述的特征、元素、组分、基团、整数和/或步骤，但是排除其它未描述的特征、元素、组 分、基团、整数和/或步骤的存在。如本文中所使用的术语"基本上由…组成"意图说明存 在所描述的特征、元素、组分、基团、整数和/或步骤，以及不实质上影响特征、元素、组分、 基团、整数和/或步骤的基本上的和新颖的特征的那些。
[0105] 如本文中所使用的程度的术语（如"基本上"、"约"和"大约"）意指所修饰术语的 合理量的偏差，使得最终结果未显著变化。如果该偏差不会否定其修饰的词语的含义，则这 些术语应被解释为包含所修饰的术语的至少±5%的偏差。
[0106] II.脂质体组合物
[0107] 本申请涉及含有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体组合物及其制备方法以及 使用方法。
[0108] 因此，本申请包括脂质体组合物，其包含具有至少一个脂双层且内部包封有亚氯 酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质。所述脂质 体组合物含有许多脂质体，所述脂质体均含有双分子层包封的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合 物。所述脂质体含有合适的脂质，其包括例如磷脂，如具有足够长的饱和和/或不饱和脂肪 酸链的磷酯酰胆碱，和/或鞘脂，如鞘磷脂，或者显示期望的性质的这样的脂质的合适的混 合物。这些脂质可以为天然的、半合成的或者合成的来源。所述脂质体还可包含如胆固醇 或硫酸胆固醇的额外的组分，以使一个或多个双分子层和/或带电荷的脂质的刚性增加并 且渗透性降低，以增强所述脂质体的稳定性。
[0109] 本申请还包括脂质体，其包含至少一个脂双层和包封在脂质体内部中的亚氯酸 盐、氯酸盐或其混合物，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质。
[0110] 本申请还包括脂质体组合物，其包含包封和未包封的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合 物，其中所述包封的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物在脂质体的内相中，并且未包封的亚氯酸 盐、氯酸盐或其混合物在脂质体的外相中。在另一实施方案中，包封于至少一个脂双层中的 亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物和存在于所述外相中的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的比例 为约100:1至约1:100,或约90:10至10:90。或者，所述外相可含有除了亚氯酸盐、氯酸盐 或其混合物的物质，例如其它的治疗剂和/或氯化钠。
[0111] 在本申请的一实施方案中，内相和外相的pH相同。在另一实施方案中，内相和外 相的pH不同，例如，内相中的pH可为约6至约13、约8至约12. 5或者约10至约12的pH， 并且外相的pH可为大约中性，例如约6至8。在另一实施方案中，所述脂质体组合物的内部 核心相和外部连续相之间的pH差异为约1至约7、约1至约5或者约1至约3。
[0112] 在本申请的另一实施方案中，脂质体的内相和外相为等渗的，或者表现相同的渗 量。即内相和外相的相互之间的渗量在1、2、3、4、5、6或7%之内。在一实施方案中，通过使 脂质体的内部和外部的溶液的渗透压相同或者相似，减少脂质体的向内或向外渗漏的物质 的量。在另一实施方案中，相对于个体的体液，脂质体组合物是等张的或等渗的。
[0113] 或者，在一个实施方案中，脂质体内相和外相的渗量不同。例如，内相和外相之间 的渗量差异可以为约8、10、15、20、25、50、100或200%。
[0114] 在一实施方案中，本申请的脂质体组合物表现约3-48个月的药学上可接受的稳 定性。在另一实施方案中，所述药学上可接受的稳定性是在约5°C至约50°C或约5°C至约 30°C的温度下储存所述组合物实现的。
[0115] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物可以为冻干的。脂质体的冻干技术是公知 的，例如，Chen 等人（J. Control Release 2010 年 3 月 19 日；142(3) :299-311)总结了决定 冷冻干燥的脂质体的冻干保护（lyoprotective)效果的关键因素。
[0116] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体为平均直径为约 80至约300nm、约90nm至约200nm或者约100nm至约140nm的单层和/或多层囊泡。在另 一实施方案中，所述脂质体组合物包含脂质体，所述脂质体为平均直径为约80nm至约15微 米、约300nm至约12微米或者约7微米至约10微米的单层和/或多层囊泡。粒度分布的 性质可以为单式的或者多模式的，并且多分散性指数可以如本领域技术人员已知的制备方 法进行控制，并基于期望的递送途径确定。
[0117] 根据给药途径，可期望给药特定直径的囊泡。例如，直径为约80nm至约300nm的 囊泡可用于静脉内给药，而直径为约80nm至约10微米的囊泡可以用于通过吸入给药，如经 肺、气管或者鼻的途径。
[0118] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物可被灭菌。适合的灭菌技术的非限制性实 例包括过滤、高压灭菌、伽马射线和冻干（冷冻干燥）。在一个实施方案中，通过使用220nm 的滤器过滤来进行灭菌。
[0119] 考虑到亚氯酸盐和氯酸盐分别仅含有3或4个原子，令人惊奇地发现可以研发以 下的脂质体：其中形成脂质体囊泡的脂双层对亚氯酸盐和/或氯酸盐是基本上不可渗透的 (即所述囊泡为离子密封（ion-tight)的）。尽管已知其它分子（如乙醇、葡萄糖、氨和乙 酸盐）渗透通过脂质体的脂双层的事实。因此，在本申请的一个实施方案中，脂双层对亚氯 酸盐是基本上不可渗透的。在本申请的另一实施方案中，脂双层对氯酸盐是基本上不可渗 透的。在另一实施方案中，脂双层对亚氯酸盐和氯酸盐是基本上不可渗透的。
[0120] 本申请的离子密封的脂质体可以用单壁脂质体囊泡实现。在本申请的一个实施方 案中，所述离子密封的脂质体表现商业上可接受的贮存期（例如在室温或者冷冻温度下约 3-48个月）内的稳定性。在另一实施方案中，离子密封的脂质体囊泡分散其中的外部（或 者外相）可被设计为含有不同于包封的内部（或者内相）的组合物。例如内相和外相可含 有不同浓度的亚氯酸盐，或者两相中的任一相可基本上不含亚氯酸盐。作为另一实例，内 相和外相可含有不同浓度的氯酸盐，或者两相中的任一相可基本上不含氯酸盐。在本申请 的一个实施方案中，离子密封的脂质体制剂的内相和外相的pH不同。例如，外相可含有盐 水溶液，并且其pH可与可含有亚氯酸盐和/或氯酸盐的内相基本上不同。在一个实施方 案中，外相可含有氯化钠，基本上不含有亚氯酸盐和/或氯酸盐并且pH为大约中性，而内相 含有亚氯酸盐和/或，并且pH高于外相。因此，形成脂质体囊泡的脂双层可以另外对H+和 0H-是基本上不可渗透的。理论上，可以使用基于 13C-NMR的方法测量脂质体中的pH。本申 请中的离子密封的脂质体组合物可基本上不含氯酸盐，或者可包含含有与外相浓度不同的 氯酸盐的脂质体囊泡。在本申请的另一实施方案中，含有脂质体组合物的离子密封的囊泡 的直径分布具有多个值。在另一实施方案中，内相、外相或其二者含有多种物质。在其它实 施方案中，脂质体分散液中的不同脂质体中包封的物质组成有变化。
[0121] 在一实施方案中，本申请的脂质体组合物不含有过氧化氢、异噻唑啉和/或锌离 子。在另一实施方案中，所述脂质体组合物不含有由卵磷脂制备的脂质体。在另一实施方 案中，所述脂质体组合物不含有亚氯酸盐和/或亚氯酸盐仅包封在脂双层的两层脂质之间 的脂质体。在另一实施方案中，所述脂质体组合物基本上不含降解产物。
[0122] 在另一实施方案中，本申请的脂质体是稳定的，即亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物不 从脂质体内部渗漏，持续可接受的贮存期（例如在食品和药品监督管理局（FDA)或者其它 政府管理机构批准的产品说明书中所定义）。在一个实施方案中，所述脂质体在低于约30、 25、20、15、10、9、8、7或6°C的温度下稳定，持续足以使其用于预期目的的时间。例如，持续1 分钟至1小时、1小时至24小时、1天至30天、30天至200天、6个月至1年或者更久的时 间。
[0123] A.亚氯酸盐、氯酸盐及其混合物
[0124] 本申请的脂质体组合物包含亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物。在一个实施方案中，所 述脂质体组合物含有亚氯酸盐。在一个实施方案中，所述脂质体组合物含有稳定化的亚氯 酸盐。在一个实施方案中，所述脂质体组合物含有氯酸盐。在一个实施方案中，所述脂质体 组合物含有亚氯酸盐和氯酸盐。在一个实施方案中，所述脂质体组合物含有亚氯酸盐，且基 本上不含氯酸盐。在一个实施方案中，所述脂质体组合物含有氯酸盐，且基本上不含亚氯酸 盐。在一个实施方案中，所述脂质体组合物为不含氯酸盐的组合物。在另一实施方案中，所 述脂质体组合物为不含亚氯酸盐的组合物。
[0125] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物含有稳定化的亚氯酸盐。基于稳定化的亚 氯酸盐的组合物的非限制性实例包括在第6, 350, 438、6, 251，372、6, 235, 269、6, 132, 702、 6, 077, 502和4, 574, 084号美国专利中描述的那些，其各自的内容以其整体援引加入。
[0126] 在另一实施方案中，所述稳定化的亚氯酸盐为含有如0Χ0_Κ993(其包含亚氯酸 盐和氯酸盐）的亚氯酸盐的组合物，或者含有约1-10%、10-20%、20-30%、30-50%或者 50-90% (w/v)0X0-K993的组合物。在另一实施方案中，所述稳定化的亚氯酸盐是含有WF10 的组合物或者是WF10。
[0127] 在一实施方案中，所述稳定化的亚氯酸盐是含有约2% (w/v)0X0_K993的组合 物；在另一实施方案中，所述稳定化的亚氯酸盐是含有约2% (w/v)0X0-K993、约2% (w/ v)甘油和约96% (w/v)水的组合物。这样的组合物以Oxovasin?或Oxoferin?(Nuvo Manufacturing, Wanzleben, Germany)的名称销售，其中 lmL 的 Oxovasin? 包含在 1. OmL 水 中的约0· 85mg(或者约0· 085% w/v)的亚氯酸盐。Oxovasin?的pH为10. 75至11. 90。
[0128] 在本申请的一实施方案中，使用以下方法制备0X0-K993 :
[0129] 将亚氯酸钠（NaC102)和次氯酸钠（NaOCl)以4. 8至1的摩尔比在注射用水 (WFI)中混合。溶液的pH应大于pH 11.0。向该混合物中加入催化剂、亚氯酰基硫酸 (chlorylsulfuric acid) [C102+] [HS<V]，然后可观察到以下反应：
[0130] 2C102、0Cr +2H+ - 2C102+Cr +H20 (1)
[0131] 溶液的pH降低。在方程（1)所描述的氧化还原过程中部分亚氯酸盐被氧化为二 氧化氯（C10 2)。在平衡反应中，生成的二氧化氯与过量的未氧化亚氯酸盐形成强烈的灰色 电荷转移络合物，如方程（2)所示：
[0132] _ι _ Γ/^1 1 - I ........................... I I
[0133] 然后向溶液中加入9. 65mmol (每kg的反应溶液）碳酸钠过氧化氢（sodium carbonate peroxohydrate, 2Na2C03 ·3Η202)。在加入碳酸钠过氧化氢时，部分二氧化氯被还 原为亚氯酸盐，并且同时形成氧气：
[0134] 2C102+H202+20!T - 2C102、02+2H20 (3)
[0135] 合适的时间（例如15分钟）后，向溶液中加入102mmol (每kg的反应溶液）过氧 化钠（Na202)，当剩下的二氧化氯完全被还原为亚氯酸盐时，溶液被完全脱色。在通常需要 至少4周的缓慢过程（方程4)中，由过氧化钠生成氧气。同时形成氢氧根离子，导致溶液 的高pH值（pH> 13)，由此稳定化活性物质亚氯酸盐。
[0136] 2022-+2H20 - 02+40!Γ (4)
[0137] 由该合成得到的最终反应产物0Χ0-Κ993为稳定的水溶液，其含有亚氯酸根阴离 子（4. 25%)、氯阴离子（2.0%)、氯酸根阴离子（1.5%)和硫酸根阴离子（0.7%)，与阳离 子形式的钠，以及维持制剂碱性pH的碳酸钠/氢氧化钠缓冲系统。
[0138] 技术人员会认识到任意化学上稳定的亚氯酸盐溶液（包括0X0-K993、WF10、 Oxovasin?的衍生物或者其它基于亚氯酸盐或基于氯酸盐的溶液及其衍生物）都在本申请 的范围内。这些溶液可在本申请的组合物、方法和用途中使用，这样，本申请的范围不一定 限于使用本文中所描述的产物。
[0139] 0X0-K993及其衍生物（WF10、0xoferin、0xovasin)也是含有离子混合物的组合物 的实例，因为所述制剂含有亚氯酸根离子、氯离子、氯酸根离子、硫酸根离子和钠离子。在本 申请的一个实施方案中，含有离子混合物的组合物为含有至少两种不同种类的阴离子（氯 酸根和亚氯酸根）的组合物。在本申请的另一实施方案中，所述组合物可含有至少三种不 同种类的阴离子。在本申请的另一实施方案中，所述组合物可含有至少4种、至少5种或者 至少6种不同种类的阴离子。
[0140] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物含有以所述组合物的总包封离子含量的约 0· 01% (w/w)至约 50% (w/w)、约 0· 1% (w/w)至约 20% (w/w)或约 0· 5% (w/w)至约 10% (w/w)的量存在的包封亚氯酸盐。
[0141] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物含有以所述组合物的总包封离子含量的约 0· 01% (w/w)至约 50% (w/w)、约 0· 1% (w/w)至约 20% (w/w)或约 0· 5% (w/w)至约 10% (w/w)的量存在的包封氯酸盐。
[0142] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物含有以所述组合物的总包封离子含量的约 0· 01% (w/w)至约 50% (w/w)、约 0· 1% (w/w)至约 20% (w/w)或约 0· 5% (w/w)至约 10% (w/w)的量存在的包封氯酸根离子和亚氯酸根离子的混合物。含有亚氯酸根和/或氯酸根 离子的物质的任意组合物也含有至少一种反荷离子以保持电中性。因此，根据本申请中的 一个实施方案，所述脂质体组合物含有一种或多种阳离子。可能的阳离子的非限制性实例 包括碱金属阳离子（例如钠或Na+)和碱土金属阳离子。在另一实施方案中，所述脂质体组 合物含有亚氯酸根离子、氯酸根离子或其混合物，其还含有钠和/或钾反荷离子。
[0143] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物含有以所述组合物的总包封阴离子含量的 约 0· 1% (w/w)至约 100% (w/w)、约 1% (w/w)至约 90% (w/w)、约 2% (w/w)至约 80%、 约3% (w/w)至约70% (w/w)、约4% (w/w)至约60%或者约5% (w/w)至约50%的量存在 的包封亚氯酸盐。
[0144] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物含有以所述组合物的总包封阴离子含量的 约 0· 1% (w/w)至约 100% (w/w)、约 1% (w/w)至约 90% (w/w)、约 2% (w/w)至约 80%、 约3% (w/w)至约70% (w/w)、约4% (w/w)至约60%或者约5% (w/w)至约50%的量存在 的包封氯酸盐。
[0145] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物含有以所述组合物的总包封阴离子含量的 约 0· 1% (w/w)至约 100% (w/w)、约 1% (w/w)至约 90% (w/w)、约 2% (w/w)至约 80%、 约3% (w/w)至约70% (w/w)、约4% (w/w)至约60%或者约5% (w/w)至约50%的量存在 的包封氯酸根离子和亚氯酸根离子的混合物。
[0146] 技术人员会认识到所述脂质体组合物中的阴离子比例可以基于其预期用途定性 地或者定量地调节。例如，为了治疗特定疾病、病症和病况，可调节组合物中的阴离子比例。 在一个实施方案中，第一种阴离子与第二种阴离子的比例为约100:1至约1:100、约90:10 至约10:90、约1:1至约3:1 (w/w)或约2:1 (w/w)。在一实施方案中，第一种阴离子为亚氯 酸根，并且第二种阴离子为氯酸根。
[0147] 在一实施方案中，所述亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的pH大于约8、大于约9或者 大于约10。在一实施方案中，所述pH为约8至约14、约8至约13、约9至约12. 5或者约 10至约12。
[0148] 在另一实施方案中，所述亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的pH小于约8、小于约7或 者小于约6。在一实施方案中，所述pH为约5至约8、约6至约7或者约7至约7. 5。
[0149] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物可有两个pH值，第一个值与内相或者包封 相的pH有关，第二个值与外相的pH有关。例如，脂质体组合物内相的pH为约6-13,而脂质 体组合物外相的pH可为约6-8。因此，在一个实施方案中，内相和外相之间的pH差异为约 1-7、约 1-6、约 1-5、约 1-4、约 1-3、约 1-2 或者约 1。
[0150] 本申请中所使用的亚氯酸盐和氯酸盐可以由任意可用来源获得或者是商购可得 的。在一实施方案中，所述亚氯酸盐或氯酸盐为钠盐，但是本领域技术人员会理解可以使用 其它金属盐。
[0151] 在本申请的脂质体组合物中的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的量通常为使用制备 方法可包封在脂质体中的最大量。在一实施方案中，所述亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的包 封率或者包合率为约1 %至约50%、约2%至约25%或约5%至约15%。
[0152] B.脂质
[0153] 包含于本申请的脂质体中的脂质选自适合用于包封pH为约5至约14、约6至约 13、约8至约12. 5或约10至约12的离子的脂质。决定脂质对于制备本申请的脂质体的适 合性的因素包括：（1)在水性介质中形成脂双层的能力；（2)包封可观的量的离子的能力； (3)形成的脂质体不渗透渗漏亚氯酸根离子和/或氯酸根离子；(4)形成的脂质体在碱性环 境（例如，如果内部pH为8或者更高）中对水解作用的抵抗力；和/或（5)形成的脂质体 在约5°C至约50°C的范围内的储存温度下保持稳定持续可接受的时间的能力。
[0154] 本文中所提供的实例说明并非所有的脂质都适于制备用于包封如氯酸根或亚氯 酸根的离子的稳定脂质体。通过本申请的教导，在一个实施方案中令人惊奇地发现合适的 脂质选自磷脂和鞘脂。在另一实施方案中，合适的磷脂选自含有足够长的饱和或不饱和脂 肪酰基链的磷酯酰胆碱（PC)，所述足够长如大于12个、大于13个或大于14个碳原子，并 且合适的鞘脂选自鞘磷脂（SM)。在另一实施方案中，所述合适的脂质选自鞘磷脂（SM)、 1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)、1，2-二肉豆蘧酰-2-sn-甘油基-3-磷 酸胆碱（DMPC)、氢化大豆磷脂或者蛋黄磷脂及其混合物。在另一实施方案中，所述合适的脂 质选自形成在约5°C或更高、约23°C或更高、约37°C或更高或者约50°C或更高的温度下不 渗透渗漏离子的脂质体的脂质。在另一实施方案中，本申请的脂质体在形成它们的脂质的 相变温度（PTT)下或附近温度下可以是或者不可以是不渗透性的。已知多种脂质的PTT， 例如1-棕榈酰-2-油酰-sn-3-甘油基-3-磷酸胆碱（_2°C )、1，2-二肉豆蘧酰-2-sn-甘 油基-3-磷酸胆碱（23°C )、鞘磷脂（37°C )、1，2_二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱 (41°C )和氢化大豆磷脂或者蛋黄磷脂（如氢化大豆磷脂为50°C )。
[0155] 本申请的脂质体可含有两种或者更多种合适的脂质。当脂质体含有两种合适的脂 质时，所述脂质可以20:1至1:1、15:1至5:1或10:1至9:1的摩尔比存在。在一个实施方 案中，所述两种合适的脂质选自鞘磷脂（SM)、1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱 (DPPC)、1，2-二肉豆蘧酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DMPC)和氢化大豆磷脂或者蛋黄磷 脂。
[0156] 本申请的组合物还可包含至少一种如胆固醇或硫酸胆固醇的附加组分以提高所 述脂双层的刚性和/或降低所述脂双层的渗透性。所述至少一种附加组分可以总脂质含量 的约0. 1 %至约50%、约1 %至约30%、约5%至约25%或者约10%至约20%的量存在。
[0157] 在另一实施方案中，本申请组合物还含有至少一种使所述脂质体具有减少所述脂 质体聚集的ξ电位的附加组分，例如至少大于约+〇. 5mV或者小于约-0. 5mV的ζ电位。在 一实施方案中，所述ξ电位为约+lmV至+50mV、约+10mV至+40mV或者约+15mV至+30mV。在 另一实施方案中，所述ζ电位为约 -lmV至_50mV、约-10mV至_40mV或者约_15mV至_30mV。 在另一实施方案中，所述至少一种使所述脂质体具有减少所述脂质体聚集的ξ电位的附 加组分为带电荷的脂质。在另一实施方案中，用于制备本申请的脂质体的脂质包含至少一 种带电荷的脂质。尽管不希望受理论的限制，带电荷的脂质的存在导致当他们相互靠近时， 临近的脂质体排斥，减少脂质体之间的接触量，因此减少导致脂质体尺寸增加的融合和聚 集的量。因此，在本申请的一个实施方案中，脂质体含有提供使脂质体互相排斥的ζ电位 的带电荷的脂质，所述ζ电位例如至少大于+lmV、+5mV、+10mV、+15mV、+25mV、+35mV或者 +45mV，或者小于-lmV、-5mV、-10mV、-15mV、-25mV、-35mV 或者-45mV。
[0158] 在一实施方案中，所述带电荷的脂质为带负电荷的脂质，例如磷脂酰甘油、磷脂酰 乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或者磷脂酸。但是带电荷的脂质不一定为磷脂或者鞘脂。
[0159] 对于制备本申请的脂质体，优选带负电荷的脂质，但是，本申请的脂质体不排除 使用带正电荷的脂质。因此在一个实施方案中，本申请的脂质体可包含至少一种带正电 荷的脂质。例如，1，2-二月桂酰-sn-甘油基-3-乙基磷酸胆碱盐酸盐EPC(盐酸盐）、 N-[l-(2,3-二油酰氧基（dioleyloyx))丙基]-N-N-N-三甲基氯化铵（D0TMA)、二甲基 二十八烷基溴化铵盐（DDAB)和其它pH敏感的阳离子磷脂。但是，带电荷的脂质不一定为 磷脂或鞘脂。例如，其它带电荷的脂质，如N-[l-(2,3-二油酰氧基）丙基]-N，N，N-三甲基 铵硫酸甲酯盐（DOTAP)可用于制备本申请的脂质体。
[0160] 在一个实施方案中，所述带电荷的脂质以使未带电荷的脂质：带电荷的脂质的摩 尔比为20:1至1:1、15:1至5:1或10:1至9:1的量存在。在另一实施方案中，脂质体中带 电荷的脂质的存在改善所生成的脂质体的稳定性，特别是与除无带电荷的脂质外相同的脂 质体相比。
[0161] 在一实施方案中，包含于本申请的脂质体中的合适的脂质选自表1中所列的脂 质。
[0162] 在一实施方案中，合适的脂质选自1，2_二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆 碱（DPPC)、1，2-二肉豆蘧酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DMPC)、1-肉豆蘧酰-2-硬脂 酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（MSPC)、1-棕榈酰-2-肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸胆 碱（PMPC)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DSPC)、氢化卵磷脂酰胆碱（HEPC)、 1-棕榈酰-2-硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（PSPC)、1-硬脂酰-2-肉豆蘧酰-sn-甘 油基-3-磷酸胆碱（SMPC)、1_硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（S0PC)、1_硬 脂酰-2-棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（SPPC)、二花生酰基（arachidoyl)磷脂酰 胆碱（DAPC)、1，2-二山嵛酰（behenoyl) -sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DBPC)、1，2-二芥 酰（erucoyl)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DEPC)、1，2-二油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱 (D0PC)、氢化大豆磷脂或蛋黄磷脂及其混合物。在另一实施方案中，所述脂质为鞘磷脂（SM) 或乳鞘磷脂。在另一实施方案中，所述脂质为氢化大豆磷脂或蛋黄磷脂。在另一实施方案 中，所述合适的脂质选自1，2_二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)、1，2-二肉豆 蘧酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DMPC)、氢化大豆磷脂或蛋黄磷脂及其混合物与带电荷的 脂质或其它脂质的组合。在另一实施方案中，所述带电荷的脂质为带负电荷的磷脂。在另 一实施方案中，所述带负电荷的磷脂为磷脂酰甘油，例如1，2-二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷 酸甘油（DPPG)、1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DMPG)、1，2-二油酰-sn-甘油 基-3-磷酸甘油（D0PG)或1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DSPG)的盐，磷脂酰 乙醇胺如1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺（DSPE)或1，2-二硬脂酰-sn-甘油 基-3-磷酸乙醇胺-甲基-聚乙二醇（MPEG-DSPE)的盐，或其混合物。在另一实施方案中， 所述磷脂酰甘油为DPPG或DSPG或其混合物。
[0163] 在本申请的一实施方案中，当在脂质体中使用脂质的混合物时，以主要量存在的 脂质为PTT大于约5°C至约30°C的脂质。这样的脂质为例如含有包含超过12个连续的碳 原子的碳链的脂质。
[0164] 在本申请的一个实施方案中，期望特定比率的脂质，在另一实施方案中，所述脂质 选自摩尔比为9:1的1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)和1，2-二肉豆蘧 酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DMPC)。在另一实施方案中，所述脂质选自摩尔比为9:1的 1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)和1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷 酸甘油（DMPG)。在另一实施方案中，所述脂质选自摩尔比为9:1的1，2-二棕榈酰-2-sn-甘 油基-3-磷酸胆碱（DPPC)和1，2-二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DPPG)。在另一实 施方案中，所述合适的脂质为纯DPPC。
[0165] 也可选择具有特定PTT的脂质来制备本申请的脂质体组合物。因此在本申请的一 实施方案中，脂质体含有PTT 1?于动物的体温的脂质。在本申请的另一实施方案中，脂质体 含有PTT低于动物的体温的脂质。
[0166] 这样的物质为可商购获得的，例如得自Avanti Polar Lipids (Alabaster, Alabama USA)、LIPOID GmbH(Germany)，或者可使用本领域已知的方法 制备。
[0167] C.脂质体表面修饰剂
[0168] 为了增加本申请的脂质体的循环时间，在一实施方案中，用增加亲水性的分子修 饰（如用亲水聚合物修饰）脂质体的表面或者脂双层。
[0169] 在一实施方案中，所述亲水聚合物为聚乙二醇（PEG)。已证明脂质体表面上的PEG 的存在延长血液循环时间，同时减少单核巨噬细胞系统（MPS)的摄取。
[0170] 可以数种方式实现脂质体用PEG的表面修饰：通过将聚合物物理性吸附至囊泡表 面、通过在脂质体制备期间掺入PEG-脂质缀合物，或者通过将反应性基团共价连接至预先 形成的脂质体表面。
[0171] 已证明将PEG接合至脂质体具有数种生物学上和技术上的优势。PEG化囊泡的最 显著特点为其有力地减少MPS的摄取及其延长的血液循环，从而改善其在灌注的组织中的 分布。此外，脂质体表面上的PEG链避免囊泡聚集，改善其稳定性。PEG修饰的脂质体也常 被称为"隔离的"脂质体。Doxil?(盐酸多柔比星脂质体注射液）为脂质体包封的多柔比 星，其利用附属的聚乙二醇（PEG)来逃避网状内皮系统（RES)并延长药物循环时间（参见 Vail D Μ, Amantea M A, Colbern G T等人,"Pegylated Liposomal Doxorubicin. Proof of Principle Using Preclinical Animal Models and Pharmacokinetic Studies. " Semin Oncol. (2004) 31 (Suppl 13): 16-35)。
[0172] 在由磷脂和胆固醇构成的脂质体中，发现PEG增加囊泡循环寿命的能力取 决于接合的PEG的量和聚合物的长度或分子量（Allen T Μ等人，Biochim Biophys Acta. 1989, 981:27-35)。在大多数情况下，长链PEG产生对于血液滞留时间的最大改善。在 一实施方案中，PEG的分子量为约500至约5000。
[0173] 其它可用于本申请的脂质体表面修饰的亲水性聚合物包括水溶性的、亲水性的、 具有弹性主链的和生物相容性的聚合物。在一实施方案中，亲水性聚合物选自PEG、聚乙烯 吡咯烷酮（PVP)、聚丙烯酰胺（PAA)、磷脂酰聚甘油、聚[N-(2-羟丙基）甲基丙烯酰胺]、 L-氨基酸系生物可降解聚合物、聚乙烯乙醇（例如分子量为约20, 000的PVA)、聚（2-甲 基-2-噁唑林）、聚（2-乙基-2-噁唑林）及其混合物。
[0174] 在另一实施方案中，脂质体的表面用神经节苷脂和/或唾液酸衍生物（如单唾液 酸神经节苷脂（GM1))修饰。在静脉内注射后脂质体的MPS摄取的研究中测试数种糖脂： 糖脂GM1 (源自脑组织的单唾液酸神经节苷脂）在并入脂质体表面时显著减少MPS摄取，并 且该制剂在血液循环中保留数小时。直径在90-200nm范围的GM1接合脂质体比不在该尺 寸范围的脂质体具有更长的血液滞留，由此在肿瘤组织中蓄积。GM包被的脂质体可用于口 服给药和向脑部的递送，特别地已表明在用作口服药物载体的脂质体制剂中，含有GM1和 GM III型的脂质体制剂更可能在通过胃肠道后继续存在（TairaMC等人Drug Deliv. 2004; 11:123-8)。此外，在两个半球的皮层、基底神经节和中脑中对于GM1脂质体的脑部示踪剂 摄取比对于对照脂质体的脑部示踪剂摄取更高；相反地，在示踪剂的肝摄取或者血液浓度 中未观察到显著变化（Mora Μ等人Pharm Res. 2002 ; 19:1430-8)。
[0175] 除了 PEG修饰的脂质体，研究者研发了多种其它衍生的脂质。这些衍生的脂质也 可惨入脂质体中。参见例如：国际专利申请W0 93/01828 ;Park Y S，Maruyama K, Huang L. ''Some negatively charged phospholipids derivatives prolong the liposome circulation in vivo.''Biochimica et Biophysica Acta (1992) 1108:257-260 ;Ahl 等 人，Biochimica Biophys. Acta (1997) 1329:370-382。
[0176] D.靶向某闭
[0177] 为了增加脂质体药物在期望的组织中的蓄积，产生更高和更具选择性的治疗活 性，在一个实施方案中，通过将细胞特异性靶向基团连接至脂质体的表面来修饰本申请的 脂质体，以便于它们和特定的细胞或组织类型结合。靶向基团包括例如单克隆抗体（MAb) 或片段、多肽、生长因子、糖蛋白、糖或受体配体，或者其混合物。示例性靶向基团包括但不 限于转铁蛋白、叶酸、叶酸盐、透明质酸、糖链（例如半乳糖、甘露糖等）、单克隆抗体的片 段、脱唾液酸糖蛋白等，以及其它技术人员已知的靶向因子及其混合物。在具体的实施方案 中，靶向因子为针对细胞表面受体的蛋白质、肽或者其它分子（如转铁蛋白、叶酸盐、叶酸、 脱唾液酸糖蛋白）。
[0178] 含有靶向因子的脂质组合物的实例包括在第5, 049, 390、5, 780, 052、 5, 786, 214、6, 316, 024、6, 056, 973、6, 245, 427、6, 524, 613、6, 749, 863、6, 177, 059、和 6, 530, 944 号美国专利；第 2004/0022842、2003/0224037、2003/143742、2003/0228285、 2002/0198164、2003/0220284、2003/0165934 和 2003/0027779 号美国专利申请公 开；第 TO 95/33841、TO 95/19434、W0 2001037807、W0 96/33698、TO 2001/49266、 TO 9940789、TO 9925320、TO 9104014、W0 92/07959、EP 1369132 和 JP 2001002592 号 国际专利申请以及在 Iinuma H 等人 Int J Cancer, 2002, 99:130-137 ;Ishida 0 等人 Pharmaceutical Research, 2001，18:1042-1048 ;Holmberg 等人 Biochem. Biophys. Res. Comm. 1989, 165(3) :1272-1278 ;Nam等人，J.Biochem. Mol. Biol. 1998,31(1) :95-100和Nag 等人 J. Drug Target. 1999,6(6) :427-438 中公开的那些。
[0179] 特别地，Linuma等人（ibid)研发了 Tf-PEG-脂质体，转铁蛋白结合在脂质体的表 面，并且证明更大量的脂质体结合至肿瘤细胞的表面。肿瘤细胞对于Tf-PEG-脂质体比对 于PEG脂质体具有更高的脂质体摄取（Inuma等人，ibid ;Ishida等人，ibid)。
[0180] 特异性靶向基团的实例以及它们的治疗靶点如下：抗HER2(曲妥珠单抗）-乳 腺癌/卵巢癌；抗EGF-实体瘤；抗⑶19-淋巴瘤；抗⑶22-B细胞淋巴瘤；抗β 1整联蛋 白-癌症细胞；抗GD2-成神经细胞瘤；抗GAH-胃、结肠和乳腺癌；叶酸-癌细胞；转铁蛋 白-癌细胞；茴香酰胺-乳腺癌、黑色素瘤和前列腺癌；血管活性肠肽28-mer-乳腺癌细 胞的成像、RGD-成神经细胞瘤、黑色素瘤和结肠癌；血管生成归巢肽（Angiogenic homing peptide) -黑色素瘤、肉瘤和结肠癌。
[0181] 在一实施方案中，将本申请的脂质体组合物注射入个体中，并加热相关身体部位 以使囊泡内容物能够靶向递送。这对于在体温下稳定的脂质体时特别有用的。如癌症的升 温治疗（hyperthermic treatment)的已知方法可受益于本申请的组合物的祀向递送。
[0182] 在一实施方案中，本申请的脂质体含有表面修饰的亲水性肽和靶向基团。在另一 实施方案中，通过将合适的脂质的PEG衍生物（在PEG链的端头含有马来酰亚胺基团）混 合入脂质体制剂中来制备这些脂质体。制备脂质体后，例如含有亲核性的N、0和/或S原 子的靶向基团通过表面键合结合至上述PEG脂质体的马来酰亚胺基团，得到稳定的键。或 者，将市售预负载的长循环脂质体通过靶向基团的后插入进行修饰。
[0183] E.其它鉬分
[0184] 在本申请的另一实施方案中，本申请的脂质体组合物和脂质体还含有对于特定应 用所期望的其它添加剂或药剂。这样的添加剂或药剂包括但不限于湿润剂、溶剂、抗生素、 着色剂、香料、芳香剂等。在一个实施方案中，所述组合物含有抗氧化剂。在一实施方案中， 本申请中所使用的抗氧化剂包括丁羟甲苯、丁羟茴醚、抗坏血酸亚油酸酯、抗坏血酸二棕榈 酸酯、抗坏血酸生育酚马来酸盐、抗坏血酸钙、类胡萝卜素、曲酸及其药学上可接受的的盐、 巯基乙酸及其药物可用的盐（例如铵盐）、生育酚、维生素 E、生育酚聚醚（t〇C〇phereth)-5、 生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18或生育酚聚醚-80,或者其混合物。
[0185] III.制备方法
[0186] 本申请的脂质体可使用用于制备脂质体的任意已知方法来制备，所述方法例如薄 膜法、超声法、挤出法、高压/均质法、微流化法、洗涤剂透析法、乙醇注入法、包括交叉流 技术的乙醇注入法、小脂质体囊泡的钙诱导融合法和乙醚输注法。这些方法是本领域中 公知的（参见例如"Liposome Technology"，G.Gredoriadis(Ed·)，1991，CRC Press:Boca Raton,Fla. ；D. Deamer and A. D. Bangham, Biochim. Biophys. Acta, 1976, 443:629-634 ； Fraley 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1979, 76:3348-3352 ;F. Szoka 等人，Ann. Rev. Biophys. Bioeng.，1980, 9:467-508 ;Hope 等人，Biochim. Biophys. Acta, 1985, 812:55-65 ; L.D.Mayer 等人，Biochim.Biophys. Acta, 1986,858:161-168 ;Hope 等人，Chem.Phys. Lip. ,1986, 40:89-1-7 ;K.J. Williams 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. ,1988, 85:242-246; Wagner 和 Vorauer-Uhl, Journal of Drug Delivery, 2011，pp. 1-9 ;Wagner 等人，Journal of Liposome Research, 2002, 12(3):259-270 ;Wagner 等人，European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2002, 54:213-219 以及第 4, 217, 344、4, 235, 871、 4, 241，046、4, 356, 167、4, 485, 054、4, 551，288、4, 663, 161、4, 737, 323、4, 752, 425、 4, 774, 085、4,781，871、4,877, 561、4, 927, 637、4, 946, 787、5, 190, 822、5,206, 027、 5, 498, 420、5, 556, 580 和 5, 700, 482 号美国专利）。
[0187] 在一个实施方案中，使用传统的薄膜法制备脂质体。在该方法中，将形成双分子 层的元素与挥发性的有机溶剂或者溶剂混合物（例如氯仿、乙醚、甲醇、乙醇、丁醇、环己烷 等）混合。然后将溶剂蒸发（例如使用旋转蒸发仪、干燥的氮气或氩气流或者其它方法）， 导致干燥脂质膜的形成。然后将所述膜用含有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的水性介质水 合。所使用的水合步骤影响形成的脂质体的类型（例如双分子层的数目、囊泡尺寸和包封 体积）。水合的脂质薄膜在搅拌过程中分离，自封闭形成不同尺寸的，大的多层囊泡（MLV)。 通过在更剧烈的搅拌条件下水合脂质，或者通过加入增溶洗涤剂（如脱氧胆酸盐），可使所 生成的多层囊泡的尺寸变得更小。或者或另外，可通过超声法、冻融法或挤出法来减小囊泡 尺寸（参见下述）。
[0188] 大单层囊泡（LUV)可以由MLV通过使用多种方法中的任一种来制备。例如，通 过滤器挤出MLV可提供LUV，其尺寸取决于所使用的滤器孔径。在这样的方法（例如在 第5, 008, 050号美国专利中所描述）中，将MLV脂质体悬浮液反复通过挤出装置，得到一 群粒径分布均匀的LUV。当使用由凝胶转变为液晶的温度大于环境温度的脂质时，可以使 用具有加热圆筒的挤出机（或thermojacket)。如Mayer等人（Biochim.Biophys. Acta, 1985,817:193-196)所描述，在挤出操作前，LUV可接受至少一次冷冻和融化循环。
[0189] 其它制备单层囊泡的方法依赖于对脂质体的水性分散体应用剪切应力。这样的方 法包括超声法和均质法。使用浴式超声波仪或者探头超声波仪（probe sonicator)来超声 处理脂质体悬浮液导致尺寸逐渐减小为尺寸小于50nm的小单层囊泡。可通过准弹性光散 射（QELs) (V. A. Bloomfield，Ann. Rev. Biophys. Bioeng.，1981，10:421-450)测定脂质体囊 泡的尺寸。在代表性均质方法中，在3, 000-14, OOOpsi，优选10, 000-14, OOOpsi的压力和对 应于具有最高Tc的脂质的凝胶-液晶转化温度下，将多层囊泡反复通过标准乳液匀化器中 循环，直至观察到所选择的脂质体尺寸，通常为约100-500nm。
[0190] 其它用于制备LUV的技术包括反相蒸发法（第4, 235, 871号美国专利）和输注法 以及洗涤剂稀释法。例如，单层囊泡可通过以下制备：将脂质在氯仿或者乙醇中溶解，然后 将所述脂质注射入缓冲液中，导致脂质自发地聚集并形成单层囊泡。或者，可将磷脂溶解于 洗涤剂（例如胆酸盐、Triton-X或者正烷基葡糖苷）中。在溶解的脂质-清洁剂胶束形成 后，通过透析、凝胶过滤、亲和色谱法、离心、超滤或者任意其它合适的方法移除清洁剂。
[0191] 在一个实施方案中，本申请包括制备含有包封于至少一个脂双层内的亚氯酸盐、 氯酸盐或其混合物的脂质体的方法，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质，所述方 法包括：
[0192] (a)向内表面至少部分具有所述一种或多种脂质的薄膜的容器中加入亚氯酸盐、 氯酸盐或其混合物的水性溶液；
[0193] (b)在足以全部或者部分移除所述内表面的所述薄膜的条件下搅拌所述容器，以 得到含有包封有亚氯酸盐和/或氯酸盐的脂质体的浑浊溶液；
[0194] (c)对所述浑浊溶液进行处理，以将所述脂质体的平均直径减小至所需的量，例如 约50nm至约300nm ;以及
[0195] (d)任选地对所述脂质体进行处理，以从所述脂质体的外部溶液中移除亚氯酸盐、 氯酸盐或其混合物。
[0196] 在另一实施方案中，使用乙醇注入法制备本申请的脂质体，例如Wagner和 Vorauer-Uhl, Journal of Drug Delivery, 2011，ρρ· 1-9)中所述，其有关部分援引加入本 文。在另一实施方案中，使用通过交叉流技术的乙醇注入法制备所述脂质体，例如在Wagner 等人，Journal of Liposome Research, 2002, 12 (3) :259-270)中所述，其有关部分援引加 入本文。
[0197] 在一实施方案中，在（a)中的所述一种或多种合适的脂质与所述亚氯酸盐、氯酸 盐或其混合物之间的摩尔比为约〇. 01:1至约10000:1、约〇. 1:1至约5000:1、约0. 5:1至 约 2500:1、约 1:1 至约 1000:1 或约 0. 1:1 至约 100:1。
[0198] 可购买溶液形式的用于制备本申请的脂质体的脂质，特备是购自Avanti Lipids。 LIPOID AG提供未稀释的固态的脂质。在特定实施方案中，所述溶液的浓度为每毫升的溶液 约10mg至约100mg的脂质。用于制备脂质体的该溶液的量会根据所需脂质的量变化，所需 脂质的量会取决于所需的样品体积。如果使用纯的、未溶解的脂质，则将它们在合适的体积 的氯仿或者其它合适的有机溶剂中溶解。
[0199] 为了得到内表面至少部分具有所述一种或多种脂质的薄膜的容器，在一实施方案 中，将容器在减压下以及接近或者高于全部一种或多种脂质的相变温度（PTT)的温度下搅 拌处理，以移除溶剂。注意，在蒸发步骤中不需要保持高于PTT。对于氯仿溶液，可使用37°C 的水浴，所述温度低于DPPC的PTT(41°C )和氢化大豆磷脂的PTT(50°C )。在一实施方案 中，使用旋转蒸发仪，在将容器保持在高于全部一种或多种脂质的相变温度的温度下，将溶 剂移除。
[0200] 向容器中添加水性溶液，并将容器在足以将薄膜从所述容器的内表面移除的条件 下搅拌，以提供含有脂质体的浑浊溶液/分散体。在一实施方案中，足以移除薄膜的条件包 括晃动容器，并将容器加热至高于全部一种或多种脂质的脂质相变温度的温度。在另一实 施方案中，所述条件还包括在高于全部一种或多种脂质的脂质相变温度的温度下晃动，持 续约1分钟至约2小时，或者约5分钟至约1小时。在此步骤中，随着脂质体的形成和亚氯 酸盐、氯酸盐或者其混合物的溶液的包封，发生一种或多种脂质的再水合。这些所谓的初级 脂质体为在脂质体内部（内相）和外部（外相）均含有所述溶液的大多层囊泡（LMV)。在 该阶段，样品为浑浊的、乳白色溶液/分散体。
[0201] 可使用用于减小脂质体尺寸的任意已知方法来处理所述浑浊溶液，以将脂质体的 平均直径减小至约50nm至约300nm。在本申请的一实施方案中，使用冻融循环和挤出法的 组合。在另一实施方案中，仅使用挤出法。
[0202] 对于冻融循环，在一实施方案中，将样品转移至合适的容器中（如果需要），例如 冻存管（cryotube)，并将容器浸入液氮中，随后在高于全部一种或多种脂质的脂质相变温 度的水浴中解冻。在一实施方案中，至少进行2、3、4、5、6、7、8、9或10次循环。尽管不希望 受理论限制，冷冻导致初级脂质体的破坏，并且在高于全部一种或多种脂质的脂质相变温 度下解冻导致平均直径较小的脂质体自发再形成。但是，冻融法是任选的。
[0203] 在本申请的一实施方案中，挤出法通过使脂质体样品通过至少一个约50nm至约 200nm的滤片的挤压下进行；在一实施方案中，通过向含有合适的滤器的挤出机施加压力 下进行挤压。在另一实施方案中，在高于全部一种或多种脂质的脂质相变温度的温度下进 行挤出，并且重复至少2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
[0204] 在一实施方案中，使用挤出法仅提供平均直径为约50nm至约150nm或者约100nm 的单层脂质体。在另一实施方案中，可使用超声法来减小粒度或者将MLV转化为LUV/SUV。
[0205] 在另一实施方案中，本申请的方法提供基本上不含降解产物（例如通过 MALDI-T0F监测）的脂质体组合物。在另一实施方案中，本申请的方法提供含有降解产物的 水平符合由FDA或者其它管理机构批准的准则的脂质体组合物。
[0206] 在该阶段，样品含有分散在亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的溶液中的填充有离子 的脂质体。在一实施方案中，含有所述溶液的外相被例如盐水，使用任选的透析处理来置 换。在一实施方案中，将样品填充至透析室内，并将其置于温度低于全部一种或多种脂质的 PTT的盐水溶液中。在约1小时后，在搅拌下，交换过量的介质，并将该步骤重复至少1、2、3 或4次。在一实施方案中，重复该步骤直到亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的浓度低于邻联甲 苯胺（o-tolidin)法的检出限。这种用于分析亚氯酸盐/氯酸盐的方法基于以下事实：亚 氯酸根和氯酸根（分别为C1CV和C1CV)与在强盐酸溶液中的邻联苯甲胺反应，产生颜色的 变化，该颜色的变化高度取决于存在于溶液中的ckv和ckv的量。该方法提供单独检测 两种物质的两步法。然而，由于WF10中亚氯酸盐与氯酸盐的恒定比，仅需要使用一步其中 两种组分对颜色的变换都有贡献的步骤。实施邻联甲苯胺法的方法在实施例7中描述。
[0207] 在本申请的实施方案中，将含有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体和含有这 些脂质体的组合物在低于约1〇、9、8、7或者6°C，适合地低于约6°C下储存。
[0208] 在另一实施方案中，所述脂质体组合物可被灭菌。适合的灭菌技术的非限制性实 例包括过滤、高压灭菌、伽马射线和冻干（冷冻干燥）。在一个实施方案中，通过使用220nm 的滤器过滤来进行灭菌。
[0209] IV.治疗应用
[0210] 亚氯酸盐和氯酸盐为公知的强氧化剂。这些物质的氧化能力倾向于随着pH的降 低而增加。因此，用于医药用途的市售稳定化的亚氯酸盐制剂（例如WF10和Oxoferin (用 于治疗慢性伤口的治疗））通常以高pH水性溶液的形式提供，其含有少量或者不含有可与 亚氯酸盐反应或者由于高pH环境（例如由于酯基的水解作用）而分解的有机物质。可使 用该策略确保产品具有商业上可接受的架存期，但是就产品副作用而言可能是不利的，并 且限制了可研发的产品的种类。
[0211] 例如，通过静脉内输注给药强碱性溶液（例如WF10)可导致静脉炎（血管炎症）， 除非缓慢地进行输注，并且仅在WF10用约250-500mL的盐水稀释后进行。鉴于此，WF10的输 注通常可能在如1. 5小时的时期内给药，这导致患者的不便和大量医疗资源的使用。类似 地，在数个国家中批准Oxoferin用于治疗伤口，并且不出意料地，考虑到它的高pH，最常见 的副作用之一为疼痛（参见Hinz J, Hautzinger H, Stahl KW. Rationale for and results from a randomised, double-blind trial of tetrachlorodecaoxygen anion complex in wound healing. Lancet. 19864 月 12 日；1 (8485) :825-8)。也预料到 WF10 和 Oxoferin 的 强碱性本质也使其不适合其它部位的给药，例如给药至肺部递送模式所靶向的肺泡的脆弱 上皮细胞。
[0212] 药物剂型研发领域的技术人员也会理解亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物与许多有 机物质的共同配制的困难可造成不期望的限制。例如，当一些敷料（dressing)材料用 Oxoferin浸透时不表现长期稳定性，这使研发如预负载有Oxoferin的袋形伤口愈合敷料 的产品是挑战性的。研发包含多于一种活性药物成分的药物产品也是常见作法，会预计到 如果活性剂与含有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的溶液混合，许多活性剂不会表现出商业 上可接受的稳定性。
[0213] 认为WF10通过其对巨噬细胞的作用来发挥其治疗益处（参见 McGrath，Kodelja，V. Balanced macrophage activation hypothesis: a biological model for development of drugs targeted at macrophage functional states. Pathobiology，67, 277-281 (1999))。另一方面，WF10经常以非常接近可能出现毒副 作用的限度的剂量给药。例如，在WF10对患有晚期AIDS患者的试验中，使用0. 5mL/ kg的WF10剂量，因为在之前的使用0. lmL/kg至1. 5mL/kg的剂量范围的剂量范围试验 中，接受大于〇. 5mL/kg的患者中表现静脉炎、高铁血红蛋白水平升高以及红细胞（RBC) 谷胱甘肽还原酶水平降低，因此认为0. 5mL/kg是最大耐受剂量（参见Raffanti，S. P. , Schaffner, ff. , Federspiel, C. F. , Blackwell, R. B. , Ah Ching, 0. , Kiihne, F. W. Randomized,double blind, placebo-controlled trial of the immune modulator WFlOin patients with abvanced AIDS.Infection,Vol. 26, 4, 201-206(1998)) 〇
[0214] 也已研究（WF10形式的）0X0-K993对由患有晚期颈板瘤的患者的放射疗 法引起的并发症的治愈和预防中的作用（参见Rattka, P.，Hinz, J. Inf luence of TCDO on the results of radiotherapy in advanced collum carcinoma stage IIIB. Abstract:Int. Symp.on Tissue Repair, Pattaya, Thailand,Dec.6-8 (1990) in:Highlights-International Symposium on Tissue Repair, 30-31 (1990)) 〇 在该石开究 中，在照射治疗组的患者1.5小时前给药WF10,并且该论文作者得到了以下印象：照射前给 予WF10治疗显著增加辐射期间对肿瘤组织的生物学作用。对于这样的治疗，具有将稳定化 的亚氯酸盐制剂靶向至肿瘤组织的方法是期望的，但是不幸地，静脉内给药稳定化的亚氯 酸盐（如WF10)的溶液制剂是困难的。
[0215] 在其中外相基本上不含这些药剂的制剂的脂质体中包封亚氯酸盐、氯酸盐或其混 合物的能力具有很多优势。例如，含有脂质体的组合物的外相也可含有与亚氯酸盐、氯酸盐 或其混合物不相容的物质（如有机物质），其包括例如特定活性药物成分或者赋形剂。所述 脂质体制剂也可分散于固体基质中，否则所述固体基质与如施用于伤口的敷料材料的这些 物质不容易相容。类似地，可有利地利用制备大约中性pH的不含亚氯酸盐或氯酸盐的外相 的能力以减少当向身体静脉内或局部给药高pH溶液剂时观察到的副作用（如静脉炎和疼 痛）的发生，并使亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物可以通过新的给药方式（例如肺部途径）递 送。
[0216] 也会理解可将脂质体的结构设计为优选被巨噬细胞循环清除，巨噬细胞被认为是 基于亚氯酸盐或氯酸盐的药物的作用部位。例如，脂质体可降低亚氯酸盐、氯酸盐或其混合 物实现给定治疗效果所必须的剂量，并且可改善药剂的安全界限。或者，脂质体可用于在不 诱发不可接受的毒性下，增加亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的药理作用。
[0217] 或者，可将脂质体设计为递送至除巨噬细胞的靶点。例如，可应用如化疗药物 Doxil (盐酸多柔比星脂质体注射剂，Centocor Ortho Biotech Products LP)中所使用的 技术以靶向患者体内的肿瘤。当期望使用亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物作为放射疗法前的 敏化剂时，应用这样的靶向作用可以是有利的。
[0218] 因此，本申请还包括本文中所述脂质体和含有所述脂质体的组合物的所有用途， 以及包括这些实体的方法。在特定实施方案中，本申请包括本申请的脂质体或组合物作为 药物的用途。
[0219] 通过将活性物质并入脂质体中可改善所述活性物质的益处。改善的脂质体组合物 的特性包括：例如改变的药物代谢动力学、生物分布和/或对亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物 的保护。通过提供持续释放制剂，也可降低给药药剂的频率或提供更快的输注速率。用本 申请的脂质体组合物也可向肺部的巨噬细胞或者向发炎组织靶向递送亚氯酸盐、氯酸盐或 其混合物。通过向靶位靶向递送，可以降低剂量，例如，按约1至约1000的系数降低。益处 还可包括减少当向身体静脉内或局部给药高pH亚氯酸盐溶液剂时观察到的副作用（如静 脉炎和疼痛）的发生，并使药剂可以通过新的给药方式递送，例如通常需要较低剂量体积 的肺部途径或弹丸注射，如在短时间（例如小于30分钟、小于15分钟、小于5分钟）内静 脉内递送组合物。
[0220] 本申请的脂质体的一个具体优势为通过改变脂质膜的组成调整所包封的药剂的 释放时间的能力。因此所包封的一种或多种药剂的释放时间可以通过选择具有期望的温度 释放曲线的脂质的组合来控制。例如，对于伤口愈合应用，可选择脂质使得释放温度为或者 接近皮肤温度，并且将脂质体向皮肤给药导致当组合物达到皮肤温度时小量或逐步释放， 此时大量药剂释放。
[0221] 因此，本申请还包括治疗给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物是有益的疾病、病症或 病况的方法，其包括向需要其的个体给药有效量的本申请的组合物。
[0222] 本申请还包括本申请的组合物用于治疗给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物是有益 的疾病、病症或病况的用途，以及用于治疗给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物是有益的疾 病、病症或病况的本申请的组合物。
[0223] 在一个实施方案中，本申请包括调节巨噬细胞功能的方法，其包括向需要其的个 体给药有效量的本申请的组合物。本申请还包括本申请的组合物用于调节巨噬细胞功能的 用途，以及用于调节巨噬细胞功能的本申请的组合物。
[0224] 不受理论束缚，调节巨噬细胞功能与治疗由于不适当的免疫应答产生慢性炎症的 症状的疾病有关（参见例如第2011/0076344号美国专利申请公开）。因此，在一实施方 案中，所述给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物是有益的疾病、病症或病况选自可由抗原特异 性免疫应答引发的那些，例如，自身免疫病和由不适当的免疫应答引起的疾病，如重症肌无 力、系统性红斑狼疮、血清病、糖尿病、类风湿关节炎、幼年型类风湿关节炎、风湿热、干燥综 合征（Sjorgen syndrome)、系统性硬化病、椎关节病变、莱姆病、结节病、自身免疫性溶血、 自身免疫性肝炎、自身免疫性中性粒细胞减少症、自身免疫性多腺性疾病、自身免疫性甲状 腺疾病、多发性硬化、炎性肠病、结肠炎、克罗恩氏病、慢性疲劳综合征等。至少在一些患者 中，慢性阻塞性肺病（C0PD)也可能具有一些自身免疫病因。在自身免疫反应中，患者身体 产生过多的细胞毒性T-淋巴细胞（CTL)，或者其它变为针对自身健康细胞并破坏它们的细 胞因子。有接受移植（transplant)或移植（graft)的患者中，由于免疫系统将移植的器官 或者移植物的抗原识别为外来的并因此要破坏它们，因此产生不适当的免疫应答。这导致 移植物排斥。同样地，当移植的器官或者移植物的免疫系统将宿主的抗原识别为外来的并 要破坏它们，接受移植（transplant)和移植（graft)的患者可产生移植物对抗宿主的反 应。这导致移植物抗宿主病。在变应性哮喘、变应性鼻炎和特应性皮炎中观察到其它不适 当的免疫应答。此外，产生慢性炎症症状的疾病也涉及不适当的免疫应答，其特征在于过度 的巨噬细胞活化。例如，对组织损伤（如身体的伤口）或病原性生物（如细菌或病毒）侵 入的健康反应涉及巨噬细胞的活化（通过"常规的"促炎途径）并导致炎症应答。但是，如 果促炎免疫应答不能被抑制，该应答可能以不适当的方式"超调"，导致慢性炎症。如乙型肝 炎和丙型肝炎、慢性肝炎以及coro的表现（如明显由长期暴露于非特异性支气管和肺部刺 激物所导致的阻塞性支气管炎和肺气肿）的疾病的特征在于由过度的巨噬细胞活化引起 的慢性炎症（肝炎中肝部的慢性炎症以及C0PD中肺组织的慢性炎症）。
[0225] 其它给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物是有益的疾病、病症或病况选自肿瘤性疾 病（癌症）、HIV感染、AIDS、神经变性疾病、AIDS相关的痴呆、中风、脊髓病状、微生物感染 及其它病毒感染。
[0226] 神经变性疾病的实例包括例如肌萎缩侧索硬化（ALS)、阿尔茨海默病（AD)、帕金 森氏病（PD)和多发性硬化（MS)。所述癌症可为但不限于肾上腺皮质癌、直肠癌、再生障碍 性贫血、胆管癌、膀胱癌、骨癌、骨转移、中枢神经系统（CNS)癌症、周围神经系统（PNS)癌 症、乳腺癌、卡斯尔曼病、宫颈癌、儿童非霍奇金氏淋巴瘤、结肠和直肠癌、子宫内膜癌、食道 癌、尤文氏肿瘤家族（如尤文氏肉瘤）、眼癌、胆囊癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤、妊娠滋 养细胞疾病、多毛细胞白血病、霍奇金氏病、卡波西肉瘤、肾癌、喉癌和下咽癌、急性淋巴细 胞白血病、急性髓性白血病、小儿白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓样白血病、肝癌、肺 癌、肺类癌瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、男性乳癌、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综 合征、骨髓增生病、鼻腔和鼻侧癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔和口咽癌、骨肉瘤、卵巢癌、 胰腺癌、阴茎癌、垂体瘤、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、涎腺癌、肉瘤（成人软组 织癌）、黑色素皮肤癌、非黑色素皮肤癌、胃癌、睾丸癌、胸腺癌、甲状腺癌、子宫癌（如子宫 肉瘤）、阴道癌、夕卜阴癌和Waldenstrom's巨球蛋白血症。
[0227] 在一实施方案中，所述给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物是有益的疾病、病症或病 况选自变应性哮喘、变应性鼻炎、特应性皮炎、肿瘤性疾病、HIV感染及AIDS。在一实施方案 中，所述肿瘤性疾病或者癌症为胃肠道、头、颈、乳腺或者胰脏的癌症。
[0228] 其它给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物是有益的治疗应用包括对遭受放射综合征 或者暴露于环境毒素的患者的治疗。所述放射综合征可包括由放射疗法或者如战斗或恐怖 袭击中使用的核武器所导致的急性放射综合征或辐射照射的迟发效应。也考虑到对于伤口 愈合的治疗应用，所述伤口愈合包括压力、术后的或创伤后的伤口愈合，或者如在如糖尿病 性溃疡、静脉溃疡、动脉溃疡或褥疮溃疡中的慢性伤口愈合。
[0229] 可使用任意合适的途径向个体给药本申请的组合物及其制剂，所述合适的途径例 如静脉内给药、动脉内给药、肌内给药、腹膜内给药、皮下给药、真皮内给药、关节内给药、鞘 内给药、脑室内给药、直肠给药、眼部给药、作为鼻腔喷雾剂通过肺部吸入给药和口服给药， 以及本领域技术人员已知的其它适合的给药途径。可使用本申请的方法和用途来治疗的组 织包括但不限于鼻、肺、肝、肾、骨、胰腺、再生性软组织、肌肉、肾上腺组织和乳腺。可治疗的 组织既包括癌性组织，其它患病的或受损（compromised)组织，也包括如果如此期望的健 康组织。
[0230] 进一步明确，术语"本申请的组合物"指本文中所述的脂质体组合物，其为所制备 的形式或者与另外的载体和/或其它成分组合。
[0231] 本申请的组合物及其制剂被单独使用或者与其它治疗形式（例如辅助性癌症疗 法、综合治疗（combined modality treatment))联合（例如，之前、与其并行或之后）使用。 例如，与其它治疗剂（例如，本文中所述和本领域技术人员已知的癌症化疗剂（如烷化剂、 抗代谢药、紫杉烷、代谢抑制物、抗肿瘤抗生素、植物碱、激素治疗药物、分子靶向药物等））、 外科手术和/或放射疗法组合。如果被治疗的病况为癌症，本文中所述组合物及其制剂可 以与一种或多种如本文中所述和本领域已知的其它抗癌药或细胞毒性化合物、一种或多种 用于降低副反应和/或其临床表现的发生和/或严重性的额外的药剂、外科手术（例如用 于移除肿瘤或淋巴结等）或放射联合给药。其中一种或多种外科手术或者放射为治疗方 案的一部分，所述组合物或者其制剂可在放射疗法或者外科手术之前、与其并行或者之后 给药。同样，本文中所述的组合物及其制剂可在给药一种或多种抗癌药之前、与其并行或者 之后给药。本文中所述组合物及其制剂也可与减轻与病况或者治疗方案有关的药物（如减 少呕吐、脱发、免疫抑制、腹泻、疹、感觉障碍、贫血、疲劳、口炎、手足综合征等的药物）联合 (例如，之前、与其并行或之后）给药。所述组合物也可在治疗方案（如手术后，以及与放射 疗法并行和之后等）的多于一个阶段（包括全程）给药。在一个实施方案中，将本申请的 组合物或其制剂与5-氟脲嘧啶及其前药（如卡培他滨）中的一种或两者联合给药。
[0232] 在本申请的另一实施方案中，当所述组合物及其制剂用于治疗变应性哮喘或者变 应性鼻炎，或者其它肺部或者呼吸系统疾病、病症或病况时，通常将它们通过静脉内途径或 者跨黏膜（transmucosally)(更具体地，经鼻、经眼或经肺）给药。例如，可将本申请的组 合物以鼻腔喷雾剂、滴鼻剂和/或滴眼剂的形式给药。也可使用任意电动或者气动喷雾器 通过喷雾疗法将本申请的组合物以精细的雾的形式向肺部给药。对于鼻腔粘膜给药，可使 用任意最先进的适合用于制备水性脂质体组合物的喷雾的设备。本申请的组合物及其制剂 被单独使用或者与其它用于变应性哮喘和变应性鼻炎的治疗形式联合（例如，之前、与其 并行或之后）使用。例如，与本领域技术人员已知的其它治疗剂（例如类固醇和抗组织胺 药）组合。也可将本申请的组合物在使用前缓冲或稀释，例如在通过静脉内输注前用合适 的稀释剂（如盐水）缓冲或稀释。
[0233] 在本申请的另一实施方案中，当所述组合物及其制剂用于治疗特应性皮炎或其它 皮肤疾病、病症或者病况时，通常将它们例如以洗剂、搽剂、胶冻剂、软膏剂、乳膏剂、糊剂、 凝胶剂、水凝胶剂、气雾剂、喷雾剂、散剂、颗粒剂、粒剂（granulate)、锭剂、栓剂、油膏剂 (salve)、口香糖、软锭剂（pastille)、囊剂、漱口药、片剂、牙线、硬膏剂、绷带、板、泡沫剂、 膜剂、海绵、敷料、浸液剂（drench)、生物吸附性贴剂、棒剂（stick)等的形式局部或者经皮 给药。本申请的组合物及其制剂被单独使用或者与其它用于特应性皮炎的治疗形式联合 (例如，之前、与其并行或之后）使用。例如，与本领域技术人员已知的其它治疗剂组合。
[0234] V.制剂和给药
[0235] 如之前所述，将本申请的组合物和药物制剂向需要其的个体按照本文中所述的使 用方法给药，以治疗本文中所述的病况。
[0236] 所述脂质体组合物可以其自身给药，也可以药物组合物或者制剂的形式给药。因 此本申请还包括含有包封有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体与至少一种生理学上可 接受的载体或者赋形剂混合的药物组合物。在一个实施方案中，所述药物组合物提供持续 释放的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物，因此其包括持续释放的制剂。
[0237] 如上所述，将所述脂质体组合物或者其药物组合物或制剂使用任意合适的途径向 个体给药，所述途径例如静脉内给药、动脉内给药、肌内给药、腹膜内给药、皮下给药、真皮 内给药、经皮肤给药、皮内（epicutaneous)给药、关节内给药、鞘内给药、脑室内给药、作为 鼻腔喷雾剂通过肺部吸入给药和口服给药，以及本领域技术人员已知的其它合适的给药途 径，并将其相应地配制。
[0238] 根据给药方式，所述药物组合物可以为液体、固体或者半固体剂型的制剂。例如， 所述组合物可以配制为溶液剂、分散剂、混悬剂、乳剂、合剂、洗剂、搽剂、胶冻剂、软膏剂、乳 膏剂、糊剂（包括牙膏）、凝胶剂、水凝胶剂、气雾剂、喷雾剂（包括口喷雾剂）、散剂（包 括牙粉）、颗粒剂、粒剂、锭剂、栓剂、油膏剂（salve)、口香糖、软锭剂（pastille)、囊剂、 漱口药、片齐?、牙线、硬膏齐?、绷带、板、泡沫齐?、膜齐?、海绵、敷料、浸液齐?、生物吸附性贴剂、 棒剂（stick)、片剂、口含片剂、糖锭剂（troches)、胶囊剂、酏剂、混悬剂、糖楽剂、薄片剂 (wafer)、修饰释放片剂等。
[0239] 本申请的药物组合物可以根据一般药学实践（参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences (2000_20th edition)以及在美国药典：国家处方集（USP 34NF19)中）进行配制。
[0240] 本申请的药物组合物中所使用的生理学上可接受的载体或者赋形剂可由本领域 技术人员根据具体用途常规选择。所述载体或赋形剂包括但不限于溶剂、缓冲剂、惰性稀释 齐喊者填充剂、助悬剂、分散剂或者湿润剂、防腐剂、稳定剂、螯合剂、乳化剂、消泡剂、胶凝 齐?、软膏基质、渗透促进剂、致湿剂、软化剂和护肤剂。
[0241] 溶剂的实例为水、醇、植物油、海油和矿物油、聚乙二醇、丙二醇、甘油和液体聚烷 基硅氧烷。惰性稀释剂和填充剂可以为蔗糖、山梨醇、糖、甘露醇、微晶纤维素、淀粉、碳酸 钙、氯化钠、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或者磷酸钠。缓冲剂的实例包括柠檬酸、乙酸、乳酸、氢磷 酸（hydrogenophosphoric acid)和二乙胺。合适的助悬剂为例如天然存在的树胶（如金 合欢胶、阿拉伯胶、黄原胶和黄蓍胶）、纤维素（如羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤 维素和羟丙基甲基纤维素）、藻酸盐和壳聚糖。分散剂或者湿润剂的实例为天然存在的磷脂 (如卵磷脂或者大豆卵磷脂）、环氧乙烷与脂肪酸或者长链脂肪醇的缩合产物（例如聚氧乙 烯硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇单油酸酯和聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯）。
[0242] 可向本申请的药物组合物中加入防腐剂，以防止可影响制剂的稳定性并导致患者 中感染的微生物污染。合适的防腐剂的实例包括对羟苯甲酸酯（例如羟苯甲酯、羟苯乙酯、 羟苯丙酯、对羟基苯甲酸酯、羟苯丁酯、羟苯异丁酯和羟苯异丙酯）、山梨酸钾、山梨酸、苯甲 酸、苯甲酸甲酯、苯氧乙醇、溴硝丙二醇、bronidox、MDM乙内酰脲、碘丙炔正丁胺甲酸酯、苯 扎氯铵（benzalconium chloride)、西三溴胺和苯甲醇。螯合剂的实例包括EDTA钠和朽1檬 酸。
[0243] 乳化剂的实例为天然存在的树胶、天然存在的磷脂（如大豆卵磷脂、山梨聚糖单 油酸酯衍生物）、山梨坦酯、单脂肪酸甘油酯、脂肪醇和脂肪酸酯（如脂肪酸的甘油三酯）。 消泡剂通常促进生产，它们通过使空气-液体界面不稳定并使液体从气袋中流出来使泡沫 消散。消泡剂的实例包括西甲硅油、二甲硅油、乙醇和乙醚。
[0244] 凝胶基质或增粘剂的实例为液状石蜡、聚乙烯、脂肪油、胶体硅或胶体铝、甘油、丙 二醇、羧乙烯基聚合物、镁-铝硅酸盐、亲水性聚合物（如淀粉或纤维素衍生物）、水可溶胀 的水胶体、角叉菜胶、透明质酸盐和藻酸盐。适用于本申请的组合物的软膏基质可以为疏 水性的或者亲水性的，并且其包括石蜡、羊毛脂、液体聚烷基硅氧烷、鲸蜡醇、鲸蜡醇棕榈酸 酯、植物油、脂肪酸的山梨坦酯、聚乙二醇和脂肪酸的山梨坦酯、环氧乙烷之间的缩合产物 (例如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯）以及聚山梨酯。
[0245] 致湿剂的实例为乙醇、异丙醇甘油、丙二醇、山梨糖醇、乳酸和尿素。合适的软化剂 包括胆固醇和甘油。护肤剂的实例包括维生素 E、尿囊素（allatoin)、甘油、氧化锌、维生素 和防晒剂。
[0246] 在一个实施方案中，本申请的组合物储存于低于约10、9、8、7或6°C，合适地低于 约6 °C的温度下。
[0247] 在另一实施方案中，本申请的组合物为冻干的或冷冻干燥的。脂质体冻干的技术 是公知的，例如 Chen 等人（J. Control Release 2010 年 3 月 19 日；142(3) :299-311)总结 了决定冷冻干燥的脂质体的冻干保护效果的关键因素。
[0248] 本申请的组合物通常会以有效达到所期望的结果的量使用，例如，以有效治疗或 者预防所治疗的具体病况、疾病或者病症的量使用。本领域技术人员容易确定使用本申请 的组合物和脂质体向个体给药的亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的剂量和/或比例。在一个 实施方案中，与使用治疗相同疾病或病症的标准给药方案所给药的亚氯酸盐、氯酸盐或其 混合物的有效量相比，所给药的包封于治疗疾病或病症的脂质体制剂中的亚氯酸盐、氯酸 盐或其混合物的有效量降低约1至约1000的系数。
[0249] 在一个实施方案中，将本申请的组合物或其制剂在延长的时间内（例如大于约1 分钟至数小时，如2、3、4、6、24个小时或者更多个小时）静脉内给药。
[0250] 在一个实施方案中，治疗为每天给药一次。在另一实施方案中，治疗为每天给药两 次。在另一实施方案中，治疗为每天给药三次。在另一实施方案中，治疗为每天给药四次。 在另一实施方案中，治疗为每天给药1-2次，持续持续一、二、三、四、五、六或七天。在另一 实施方案中，治疗为每天给药至少一次，持续更长的时期，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或 12周。在另一实施方案中，治疗为每天给药至少一次，直到病况改善至不需进一步治疗。在 另一实施方案中，治疗提供活性的持续释放并需要更低频率地给药，例如，每周一次、每月 一次、每六个月一次、每年一次、每两年一次或者每五年一次。在另一实施方案中，给药所述 脂质体组合物后，疾病或者病症的持续时间减少，例如六个月、一年或者两年。
[0251] 在另一实施方案中，治疗为每周给药至少一次。在另一实施方案中，治疗为每周给 药两次。在另一实施方案中，治疗为每周给药三次。在另一实施方案中，治疗为每周给药四 次。在另一实施方案中，治疗为每周给药五次。在另一实施方案中，治疗为每周给药六次。 在另一实施方案中，治疗为每周给药一至六次，持续一、二、三、四、五、六或七周。在另一实 施方案中，治疗为每周给药至少一次，持续更长的时期，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12 周。在另一实施方案中，治疗为每周给药至少一次，直到病况改善至不需进一步治疗。
[0252] 在另一实施方案中，治疗可以使用输液泵连续地、间断地或者患者控制地输注形 式给药。在一个实施方案中，输液泵用于静脉内给药所述治疗。
[0253] VI.实施例
[0254] 实施例1 :制备鞘磷脂/WF10脂质体
[0255] 将 2700 μ L 的鞘磷脂（鸡蛋 SM(MW 703. 3)，Avanti Polar Lipids, Alabama, USA) 溶液（在氯仿中的25mg/mL溶液=67. 5mg，0. 095mmol SM)加入至装有1/3氯仿的圆底烧 瓶（通常为25mL)中。将溶液蒸发至干燥，以提供在烧瓶内表面上的薄的、清晰可见的脂质 膜。
[0256] 加入4800yL的WF10(0. 095mmol/4. 8mL)，并将烧瓶在涡旋混合器中，于大约 45°C (高于脂质的相变温度）下摇动。当薄膜不再可见时停止涡旋。在该步骤中脂质的再 水合导致为大多层囊泡（LMV)的脂质体的形成。WF10在脂质体的内部（内相）和外部（外 相）中。
[0257] 为减小初级脂质体的尺寸，将所述混合物反复冻融。使用液氮作为冷冻剂，并将其 在通常为45°C的水浴中融化，在约30至40分钟的总持续时间内，使冷冻/融化循环重复 10次。冷冻导致初级脂质体的破坏。融化在高于相变温度下进行。这样，小于初级脂质体 的脂质体再次自发地形成。由于给定的温度方案（_180°C/45°C)，所有样品均远高于室温， 持续约20分钟。
[0258] 然后将上述混合物（大约5mL)反复通过（相同的）100nm孔隙宽度的盘式滤器进 行挤压。使用带有加热夹套的不锈钢隔室和叠放两层的lOOnm的盘式滤器（但是也可使用 单一滤器）。对于SM的工作温度为45°C。使用30bar的氮气来实现挤压，重复挤出10次， 已知这得到为相对一致的直径的单层囊泡。包合率为大约2%至3%，理论上可能为7%。
[0259] 将挤出的混合物（外相：WF10,内相：WF10)分离至3个透析室中。将所述室放置以 漂浮在0.9%的氯化钠溶液中。所用透析室为"Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes, 20K MWC0"，其最大体积为3mL，至多可渗透20kDa。将脂质体混合物（lmL)置于内室中，并且外部 介质为NaCl 0.9% (盐水，1L)。将该过程用新鲜的盐水重复4次。其余的脂质体混合物（大 约5mL-3X lmL透析的）用于磷酸酯的测定和DSC(%i不扫描嚴热法#测定相变温度）。
[0260] 在透析阶段结束时，脂质体制剂的外相由0. 9%的氯化钠溶液（盐水）构成。目的 是使外相中的亚氯酸盐和氯酸盐的浓度低于定量所使用的方法的检出限。通过这样做，可 通过监测这些离子的重现来测试脂质体的渗漏性质。
[0261] 实施例2 :制备P0PC/WF10脂质体
[0262] 使用如实施例1中所述的方法，并且挤出步骤的工作温度为室温（不连接加热夹 套），制备由P0PC制成的并含有WF10的脂质体。
[0263] 实施例3 :制备P0PC:P0PG/WF10脂质体
[0264] 使用如实施例1中所述的方法，并且冷冻/融化的工作温度为35°C，挤出步骤的工 作温度为23°C，制备由1-棕榈酰-2-油酰-sn_3-甘油基-3-磷酸胆碱（P0PC)和1-棕榈 酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷酸-(Γ-消旋-甘油）（P0PG) (3:1、2:1和1:1)制成的并含 有 WF10 的脂质体。P0PG 得自 Avanti Polar Lipids, Alabama, USA。
[0265] 实施例4 :制备DPPC/WF10脂质体
[0266] 使用如实施例1中所述的方法，并且挤出步骤的工作温度为45°C，制备由1，2-二 棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)制成的并含有WF10的脂质体。DPPC得自Avanti Polar Lipids, Alabama, USA。
[0267] 实施例5 :制备DMPC/WF10脂质体
[0268] 使用如实施例1中所述的方法，并且挤出步骤的工作温度为30°C，制备由1，2-二 肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DMPC)制成的并含有WF10的脂质体。DMPC得自Avanti Polar Lipids, Alabama, USA。
[0269] 实施例6 :另外的制备方法
[0270] (a)脂质的蒸发
[0271] 将溶解于氯仿中的脂质加入至100mL的圆底烧瓶中。在多数情况中，已购买的脂 质是溶液的形式，代表性浓度为约25mg/mL。通常将以粉末形式递送的脂质在加入烧瓶前溶 解，使其具有相似的浓度。然后将所加入的脂质总量通过体积控制。对于14mL的40mM样品， 代表性的量为300-400mg。然后，将烧瓶装在Buchi'Rotavapor? R-210'旋转蒸发仪上，抽 真空同时在37°C的水浴中以15rpm旋转。在此操作期间，烧瓶中的压力降低至约5-15mbar 的值。当全部溶剂被移除，并且在烧瓶中不能闻到氯仿的气味时，认为蒸发结束。在该阶段 的结果为瓶壁上有可见的脂质膜，并且（取决于脂质的量）烧瓶底部有额外的蓄积的松散 粉末。
[0272] (b)水合作用
[0273] 在水合步骤期间，将脂质在水性介质中悬浮，随后将其包封于最终的脂质体中。已 知在此步骤期间形成多层囊泡（MLV)。首先，将必要量的WF10介质加入至圆底烧瓶中。其 体积与所期望的总样品体积（通常约8_14ml)相当。所得到的为含有大脂质聚集体的浑浊 溶液。然后，准备温度比脂质的脂质相变温度（PTT)高5K的水浴，在此期间轻轻摇动烧瓶。 一达烧瓶中的温度达到PTT，悬浮液变成均匀的乳白色液体。在高于PTT的温度下大约5分 钟后，将脂质膜从烧瓶壁移除，并且在底部无脂质粉末残留。最后，将烧瓶用涡旋混合器摇 动数秒。立即将仍然热的样品送至挤出装置，以开始下一制备步骤或者将其在冰箱温度下 储存直到该进行下一制备步骤时。
[0274] (c)挤出
[0275] 在挤出步骤期间，将样品通过220nm的滤片反复挤压。这迫使大囊泡重组，并形成 具有更少层的较小结构。通常这得到单层囊泡，然而，对于较大的孔径（如220nm)，仍可能 得到多层囊泡，但其仅具有数层。在挤出步骤前，将挤出机装备上3个层叠的220nm滤片 (Millipore GPWP，直径25mm)，并将其加热至比LPTT高5K的温度。将脂质悬浮液装入挤出 室，然后向室施加25bar的压力，迫使样品通过滤器。通过压缩氮气施加压力。在挤出机的 排出口处收集样品。整个挤出进行至少10次。
[0276] (d)透析
[0277] 在该阶段，脂质体已处于其最终状态，但是仍然悬浮于WF10溶液中。为了将外部 WF10介质用0. 9%盐水溶液代替，进行了一系列连续的透析步骤。首先将样品引入Thermo Scientific Slide-A-Lyzer?透析框架中。所述框架的膜的分子量截留为20, OOODa并且容 量为3-12mL。对于体积大于6mL的样品，将样品分流并分配至两个这样的框架中，将二者放 置在相同的烧杯中。透析装备包括置于磁力搅拌装置上的装有〇. 9%盐水溶液的1L玻璃烧 杯。盐水溶液通常由去离子水和标准的实验室NaCl (最低纯度99%)制成，并且其体积为 约900-950mL。将所述框架浸没在透析介质中，持续大约1小时，然后对于随后的步骤，将介 质用新鲜的介质置换。通常取所述透析介质的少量样品用于"邻联甲苯胺快速检查"，其与 通常的邻联甲苯胺分析方法相似。当样品呈现深黄色时，在之前置换介质。也进行这样的 快速检查来测定透析系列的终点。当测试期间两个连续的透析步骤未表现可见的颜色变化 时以及透析持续一小时后，认为透析完成。在每个透析步骤后，置换透析介质，直至进行至 少5个步骤。在最后的步骤后，将样品在大约6°C下储存，以供进一步使用。
[0278] 实施例7 :用于检测亚氯酸盐和氯酸盐的邻联甲苯胺法
[0279] 方法 A
[0280] 该邻联甲苯胺法包括将50 μ L的155mg邻联甲苯胺在200mL水和67mL 12M盐酸 的混合物中的溶液加入至200mL的过量介质中。将该混合物制备两次。分别加入250 μ L 的4. 8Μ或12Μ盐酸，并将混合物孵育5-10分钟。使用较低浓度的盐酸仅能检测亚氯酸盐， 而使用较高浓度的盐酸还能检测氯酸盐。分别在442nm(4. 8Μ HC1)或445nm(12M HC1)下 测量测试溶液的吸收。使用由未处理的WF10制备的标准稀释来确立校正曲线。
[0281] 方法 B
[0282] 方法B为方法A的改进，所述改进在于方法B可以检测亚氯酸盐和氯酸盐二者。 所述方法包括将114mg的邻联甲苯胺在150mL水中溶解，加入50mL的盐酸（37% )，以制备 邻联甲苯胺溶液。要在首次使用之前至少24小时制备邻联甲苯胺溶液，并且其可在6°C下 储存数月。注意在开始分析步骤后要同时测量所有的样品，以避免在制备分析混合物后立 即发生的漂白的影响。设计分析方案以同时分析至多96个样品，并以确保那些能力的方式 选择时间。在分析步骤开始时，将400 μ L的待分析样品装入标准2mL反应容器。在时间、 时，向各反应容器中加入l〇〇yL的邻联甲苯胺溶液。十分钟（tflOmin)后，加入500yL的 盐酸（37% )。再过10分钟（tWOmin)后，将200 μ L的各容器中的样品转移至标准96孔 板中，用于测量在447nm波长下的吸光度。这些测量在TECAN Infinite 200PR0?酶标仪上 进行，并且在15分钟α'βδπ?η)后开始。
[0283] 在计算中，WF10在储存介质中的浓度由反稀释因子d表示。该量表示每体积的储 存介质中未稀释的WF10的体积。因此，它是无量纲的，对于未稀释的WF10, d = 1。
[0284] 为了将所测量的吸光度值与特定反稀释因子相关联，记录WF10的稀释曲线。所述 曲线如图1中所示。对于d大于大约6ΧΚΓ 5的值，数据显示强线性相关，并且发现相应方 程：
[0285] (KA)=mA+n (1)
[0286] 中的参数为m= (3. 87±0. 02) Χ1(Γ4并且η = (7±2) Χ10Λ对于低于所述值的 浓度的非线性域使用以下方程拟合：
[0287] d(A) = α | Α-Α。| Ρ (2)
[0288] 其中 A。= 0·0787±0·0007，α = (3·36±0:05)Χ1(Γ4 并且 p = 0·631±0·009。 在两种情况中，根据数据点的不确定性对拟合加权。为了考虑吸收度值的相对大的不确定 性，还使用反函数进行反数据集的拟合。所呈现的参数为两个结果的算术平均值。
[0289] 由所测定的储存介质中反WF10稀释因子d，计算从脂质体内部释放的WF10的量 (xmo)。给出样品体积V样品以及储存介质的体积V储存，使用以下方程计算d的值：
[0290]
[0291] 因此，
【权利要求】
1. 脂质体组合物，其包含具有至少一个脂双层且内部包封有亚氯酸盐、氯酸盐或其混 合物的脂质体，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质。
2. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物含有亚氯酸盐，并且其中所述亚氯 酸盐为稳定化的亚氯酸盐。
3. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述组合物含有亚氯酸盐，并且其中所述亚氯 酸盐为0X0-K993。
4. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述稳定化的亚氯酸盐含有1-10%、10-20%、 20-30%、30-50%或 50-90%^八）的0父0-1(993。
5. 根据权利要求1所述的组合物，其中以在所述组合物中的总包封离子含量为基础， 所述组合物含有约0. 01% (w/w)至约50% (w/w)、约0. 1% (w/w)至约20% (w/w)、约0. 5% (w/w)至约10% (w/w)、约0. 3% (w/w)至约3% (w/w)或约1.0% (w/w)的包封亚氯酸盐。
6. 根据权利要求1所述的组合物，其中以在所述组合物中的总包封离子含量为基础， 所述组合物含有约0. 01% (w/w)至约50% (w/w)、约0. 1% (w/w)至约20% (w/w)、约0. 5% (w/w)至约10% (w/w)、约0.3% (w/w)至约3% (w/w)或约1.0%的包封氯酸盐。
7. 根据权利要求1所述的组合物，其中以在所述组合物中的总包封离子含量为基础， 所述组合物含有约0. 01% (w/w)至约50% (w/w)、约0. 1% (w/w)至约20% (w/w)、约0. 5% (￥/\￥)至约10%(￥/\￥)、约0.3(%(￥/\￥)至约3(%(￥/\￥)或约1.0 (%的包封亚氯酸盐和氯酸 盐的混合物。
8. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述包封亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的pH为 大于约5、大于约6、大于约8或者大于约10。
9. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述包封亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的pH为 约5至约14、约6至约13、约8至约12. 5或约10至约12。
10. 根据权利要求1所述的组合物，其中包含于所述脂质体中的所述脂质适合用于包 封pH为约5至约14、约6至约13、约8至约12. 5或约10至约12的亚氯酸盐、氯酸盐或其 混合物。
11. 根据权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中所述合适的脂质选自磷脂、鞘脂 及其混合物。
12. 根据权利要求11所述的组合物，其中所述磷脂为含有足够长的饱和或者不饱和脂 肪酰基链的磷脂酰胆碱（PC)，并且所述鞘脂为鞘磷脂（SM)。
13. 根据权利要求1-12中任一项所述的组合物，其中所述合适的脂质选自形成在约 5°C至约50°C的范围内的储存温度下保持稳定持续可接受的时间的脂质体的脂质。
14. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述合适的脂质选自形成在约5°C的温度下 不渗透渗漏离子的脂质体的脂质。
15. 根据权利要求1-14中任一项所述的组合物，其中所述脂质体含有两种或者两种以 上类型的合适的脂质。
16. 根据权利要求15所述的组合物，其中所述脂质体含有两种类型的合适的脂质，并 且所述脂质以20:1至1:1、15:1至5:1或10:1至9:1的摩尔比存在。
17. 根据权利要求1-16中任一项所述的组合物，其还含有至少一种提高所述脂双层的 刚性和/或降低所述脂双层的渗透性的附加组分。
18. 根据权利要求17所述的组合物，其中所述至少一种附加组分以总脂质含量的约 0. 1%至约50%、约1%至约30%、约5%至约25%或者约10%至约20%的量存在。
19. 根据权利要求17或18所述的组合物，其中所述至少一种附加组分选自胆固醇和硫 酸胆固醇。
20. 根据权利要求1-19中任一项所述的组合物，其还含有至少一种使所述脂质体具有 减少所述脂质体聚集的ξ电位的附加组分。
21. 根据权利要求20所述的组合物，其中所述减少所述脂质体聚集的ζ电位至少大于 +5mV或者至少小于-5mV。
22. 根据权利要求20或21所述的组合物，其中所述至少一种使所述脂质体具有减少所 述脂质体聚集的ξ电位的附加组分为带电荷的脂质。
23. 根据权利要求22所述的组合物，其中所述带电荷的脂质为带负电荷的脂质。
24. 根据权利要求23所述的组合物，其中所述带负电荷的脂质为磷脂酰甘油、磷脂酰 乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或者磷脂酸。
25. 根据权利要求24所述的组合物，其中所述带负电荷的脂质选自以下物质的盐： 1，2-二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DPPG)、1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸甘 油（DMPG)、1，2-二油酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DOPG)、l，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷 酸甘油（DSPG)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺（DSPE)或1，2-二硬脂酰-sn-甘 油基-3-磷酸乙醇胺-甲基-聚乙二醇（MPEG-DSPE)及其混合物。
26. 根据权利要求25所述的组合物，其中所述带负电荷的脂质选自1，2-二棕榈 酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DPPG)、1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DMPG) 和1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DSPG)及其混合物。
27. 根据权利要求22-25中任一项所述的组合物，其中所述带电荷的脂质以使未带电 荷的脂质：带电荷的脂质的比为20:1至1:1、15:1至5:1或10:1至9:1的量存在。
28. 根据权利要求1-26中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种合适的脂质选自 1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)、1，2-二肉豆蘧酰-2-sn-甘油基-3-磷 酸胆碱（DMPC)、1-肉豆蘧酰-2-硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（MSPC)、1-棕榈酰-2-肉 豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（PMPC)、1，2-二硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DSPC)、 氢化卵磷脂酰胆碱（HEPC)、1-棕榈酰-2-硬脂酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（PSPC)、1-硬脂 酰-2-肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（SMPC)、1-硬脂酰-2-油酰-sn-甘油基-3-磷 酸胆碱（SOPC)、1_硬脂酰-2-棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（SPPC)、二花生酰基磷脂 酰胆碱（DAPC)、1，2-二山嵛酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DBPC)、1，2-二芥酰-sn-甘油 基-3-磷酸胆碱（DEPC)、1，2-二油酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DOPC)、氢化大豆磷脂、蛋 黄磷脂、鞘磷脂（SM)、乳鞘磷脂及其混合物。
29. 根据权利要求1-28中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种合适的脂质选自 1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)、1，2-二肉豆蘧酰-2-sn-甘油基-3-磷 酸胆碱（DMPC)、氢化大豆磷脂、蛋黄磷脂及其混合物。
30. 根据权利要求23-27中任一项所述的组合物，其中所述一种或多种合适的脂质 为摩尔比为9:1的1，2_二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)和1，2_二肉豆蘧 酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DMPC)、摩尔比为9:1的1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷 酸胆碱（DPPC)和1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油基-3-磷酸甘油（DMPG)、摩尔比为9:1的 1，2-二棕榈酰-2-sn-甘油基-3-磷酸胆碱（DPPC)和1，2-二棕榈酰-sn-甘油基-3-磷酸 甘油（DPPG)，或 DPPC。
31. 根据权利要求1-30中任一项所述的组合物，其中所述脂双层用增加亲水性的分子 修饰表面。
32. 根据权利要求1-31中任一项所述的组合物，其中所述脂双层通过将细胞特异性靶 向基团与其表面连接进行修饰，以促进其与特定细胞或组织类型结合。
33. 脂质体，其包含至少一个脂双层且内部包封有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的，其 中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质。
34. 根据权利要求33所述的脂质体，其平均直径为约80nm至约300nm、约90nm至约 200nm、约 100nm 至约 140nm、约 80nm 至约 15 μ m、约 300nm 至约 12 μ m 或约 7 μ m 至约 10 μ m。
35. 根据权利要求33或34所述的脂质体，其中所述亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的包 封率或者包合率为1 %至约50%、约2%至约25%或约5%至约15%。
36. 制备具有至少一个脂双层且内部包封有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体的 方法，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质，所述方法包括： (a) 向内表面至少部分具有所述一种或多种脂质的薄膜的容器中加入亚氯酸盐、氯酸 盐或其混合物的水性溶液； (b) 在足以全部或者部分去除所述内表面的所述薄膜的条件下搅拌所述容器，以得到 含有包封有亚氯酸盐和/或氯酸盐的脂质体的浑浊溶液； (c) 对所述浑浊溶液进行处理，以将所述脂质体的平均直径减小至所需的量；以及 (d) 任选地对所述脂质体进行处理，以从所述脂质体的外部溶液中移除亚氯酸盐、氯酸 盐或其混合物。
37. 根据权利要求36所述的方法，其中（a)中所述一种或多种合适的脂质与所述亚氯 酸盐、氯酸盐或其混合物之间的摩尔比为约〇. 01:1至约10000:1、约〇. 1:1至约5000:1、约 0. 5:1 至约 2500:1、约 1:1 至约 1000:1 或约 0. 1:1 至约 100:1。
38. 制备具有至少一个脂双层且内部包封有亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的脂质体的 方法，其中所述脂双层含有一种或多种合适的脂质，其中所述方法为乙醇注入法。
39. 根据权利要求38所述的方法，其中所述乙醇注入法使用交叉流技术进行。
40. 药物组合物，其含有如权利要求1-32中任一项所述的脂质体组合物或者如权利要 求33-35中任一项所述的脂质体，所述脂质体组合物或者脂质体与至少一种生理学上可接 受的载体或者赋形剂混合。
41. 如权利要求1-32中任一项所述的脂质体组合物、如权利要求33-35中任一项所述 的脂质体或者如权利要求40所述的药物组合物作为药物的用途。
42. 如权利要求1-32中任一项所述的脂质体组合物、如权利要求33-35中任一项所述 的脂质体或者如权利要求40所述的药物组合物，其用作药物。
43. 用于治疗受益于给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物的疾病、病症或病况的方法，其 包括向需要其的个体给药有效量的如权利要求1-32中任一项所述的脂质体组合物、如权 利要求33-35中任一项所述的脂质体或者如权利要求40所述的药物组合物。
44. 调节巨噬细胞功能的方法，其包括向需要其的个体给药有效量的如权利要求1-32 中任一项所述的脂质体组合物、如权利要求33-35中任一项所述的脂质体或者如权利要求 40所述的药物组合物。
45. 根据权利要求44所述的方法，其中调节巨噬细胞功能导致对于因不适当的免疫应 答而产生慢性炎症症状的疾病的治疗。
46. 根据权利要求43所述的方法，其中所述受益于给药亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物 的疾病、病症或病况选自自身免疫病、由不适当的免疫应答、伤口愈合、放射综合征或暴露 于环境毒素引起的疾病。
47. 根据权利要求46所述的方法，其中所述疾病、病症或病况选自重症肌无力、系统性 红斑狼疮、血清病、糖尿病、类风湿关节炎、幼年型类风湿关节炎、风湿热、干燥综合征、系统 性硬化病、椎关节病变、莱姆病、结节病、自身免疫性溶血、自身免疫性肝炎、自身免疫性中 性粒细胞减少症、自身免疫性多腺性疾病、自身免疫性甲状腺疾病、多发性硬化、炎性肠病、 结肠炎、克罗恩氏病、慢性疲劳综合征、慢性阻塞性肺病（COPD)、移植物排斥、移植物抗宿主 病、变应性哮喘、变应性鼻炎、特应性皮炎、对组织损伤的不适当反应、乙型肝炎、丙型肝炎、 慢性肝炎、阻塞性支气管炎、肺气肿、肿瘤性疾病（癌症）、HIV感染、AIDS、神经变性疾病、 AIDS相关的痴呆、微生物感染及其它病毒感染。
48. 根据权利要求46所述的方法，其中所述疾病、病症或病况选自变应性哮喘、变应性 鼻炎、特应性皮炎、肿瘤性疾病、脊髓病状、HIV感染及AIDS。
49. 根据权利要求48所述的方法，其中所述肿瘤性疾病为胃肠道、头、颈、胸或者胰腺 的癌症。
50. 方法，其包括向使用者提供如权利要求1-32中任一项所述的脂质体组合物、如权 利要求33-35中任一项所述的脂质体或者如权利要求40所述的药物组合物，以及告知所述 使用者特定的安全性或临床效果。
51. 方法，其包括向使用者提供如权利要求1-32中任一项所述的脂质体组合物、如权 利要求33-35中任一项所述的脂质体或者如权利要求40所述的药物组合物，以及告知所述 使用者所述脂质体组合物比提供或预计会提供类似治疗效果的非脂质体组合物更稳定、更 具靶向特异性或更具治疗有效性。
52. 根据权利要求50或51所述的方法，其中通过公开的材料的方式告知所述使用者。
53. 根据权利要求52所述的方法，其中所述公开的材料为标签或者产品说明书。
54. 脂质体组合物，其包含外部连续相和一个或多个内部核心相，所述内部核心相包含 亚氯酸盐、氯酸盐或其混合物，并且被包含在多个脂质体囊泡中，其中所述囊泡的壁含有至 少一个脂双层，并且所述脂质体组合物的外部连续相基本上不含亚氯酸盐和氯酸盐。
55. 根据权利要求54所述的组合物，其中所述外部连续相含有氯化钠。
56. 根据权利要求54所述的组合物，其中所述外部连续相的pH为约5-8。
57. 根据权利要求54-56中任一项所述的组合物，其中所述内部核心相的pH为约 8-13。
58. 根据权利要求54所述的组合物，其所述内部核心相和外部连续相之间的pH差异为 约1至约7。
59. 根据权利要求54所述的组合物，其中所述脂质体组合物表现约3-48个月的药学上 可接受的稳定性。
60. 根据权利要求59所述的组合物，其中所述药学上可接受的稳定性是在约5°C至约 50°C的温度下储存所述组合物实现的。
61. 根据权利要求59所述的组合物，其中所述组合物基本上不含降解产物。
【文档编号】A61K33/20GK104125826SQ201280070434
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2012年12月21日 优先权日:2011年12月22日
【发明者】R·马丁, J·阿恩霍尔德, R·赛弗特, D·金-史密斯, T·德赛, A·华格纳 申请人:努沃研究有限责任公司