专利名称：一种亚砜生物碱类化合物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种亚砜生物碱类化合物及其制备与应用，属于微生物技术领域。
背景技术：
随着抗生素在临床上的普遍应用，临床上耐药性病原菌不断出现以及近年来出现的SARS、禽流感和超级细菌”，迫切需要开发新的抗生素类药物。放线菌生产的活性物质很多具有医药和植物保护方面的用途，已广泛用作抗细菌、抗真菌和抗肿瘤药物。现在已发现的数万种微生物来源的生物活性物质中，约有70%是由放线菌所合成的。然而，随着陆地放线菌的过度开发，发现新颖生物活性化合物的几率逐年降低。海洋微生物生活在高压、高盐、寡营养等特殊环境中，形成了独特的生长和代谢方式，与陆地微生物相比更有可能产生结构新颖、功能独特的次级代谢物，具有巨大的开发潜力。海洋链霉菌(Streptomycesxinghaiensis NRRL B246741)是本实验室于 2006 年分离自大连星海湾水下20米海泥样品中，经过16S rRNA,形态和生理生化实验确定为一株新的海洋链霉菌。前期研究表明，海洋链霉菌发酵液粗提物对大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草芽孢杆菌，铜绿假单胞菌具有不同程度的抑制作用。亚砜类化合物由于具有广谱的生物活性，如杀虫活性、抗菌活性、抗肿瘤活性、除草剂活性等，受到国内外学者的普遍关注，但天然亚砜类化合物报道很少，已有的报道常常来自于陆地植物中，如分离自牙甘蓝(Brussels sprouts)中的S-methyl-cysteinesulfoxid 和西西里蜜蒜(Allium siculums)中的 S_alk(en) yl-L-cysteine sulfoxide,S-n-buty 1-cysteine sulfoxide。在海洋无脊椎动物中，如海绵(Pseudoceratinapurpurea)和海鞘(Polycitor sp.)中也分离得到少量的亚砜类化合物，如psammaplinN， eudistomin K， lehualides J, varacins B 和 varacins D, eudistomidin E 和aplisulfamines等。到目前 为止,还没有亚砜类化合物从海洋微生物中发现得到。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有药用价值的新化合物及其制备方法和该化合物在抗菌及抗肿瘤治疗中的应用。本发明采用的技术方案是:一种亚砜生物碱类化合物的分子结构式I为:
权利要求
1.一种亚砜生物碱类化合物，其特征是:所述化合物的分子结构式I为:
2.根据权利要求1所述的亚砜生物碱类化合物的制备方法，其特征是:将海洋链霉菌接种到胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基中，28-30°C，180-200rpm培养48_72h，以10%接种量接种到发酵培养基中，28-30 0C，180-200rpm培养432_456h，发酵液经分离纯化法得到亚砜生物碱类化合物。
3.根据权利要求2所述的亚砜生物碱类化合物的制备方法，其特征是:所述分离纯化法如下:将6升发酵液6000 r/min离心10 min,得到发酵液上清液与菌丝体；上清液以1:2的比例与乙酸乙酯混合，反复萃取三次，并使用旋转蒸发仪蒸干，得到的上清液乙酸乙酯提取物；菌丝体使用等体积比甲醇/丙酮破壁浸提12h后,6000 r/min离心10 min后取上清液，得到甲醇/丙酮菌丝体提取物，使用旋转蒸发仪除去甲醇/丙酮，并用乙酸乙酯萃取，得到菌丝体乙酸乙酯提取物，将上清液与菌丝体的乙酸乙酯提取物合并后得到发酵液粗提物；将发酵液粗提物过硅胶柱，干法上柱，以乙酸乙酯-二氯甲烷和甲醇-乙酸乙酯进行梯度洗脱，在洗脱前首先用二氯甲烷平衡，然后按照如下洗脱梯度，用100毫升的不同梯度洗脱液进行洗脱，洗脱梯度分别为纯二氯甲烷，二氯甲烷:乙酸乙酯=2: 1、二氯甲烷:乙酸乙酯=1: 1、二氯甲烷:乙酸乙酯=1:2，纯乙酸乙酯，乙酸乙酯:甲醇=2: 1、乙酸乙酯:甲醇=1:1、乙酸乙酯:甲醇=1:2，纯甲醇，以上洗脱梯度均为体积比；得到9个组分，以金黄色葡萄球菌为指示菌进行活性检测，结果显示组分5具有拮抗金黄色葡萄球菌的活性；以C18反相柱对组分5进行分离，分别用浓度为30%、60%、80%和100%的甲醇进行洗脱，结果显示80%的甲醇洗脱液具有拮抗金黄色葡萄球菌的活性；对该组分进行高效液相色谱检测，并在半制备型HPLC进行制备，得到所述亚砜生物碱类化合物。
4.根据权利要求2所述的亚砜生物碱类化合物的制备方法，其特征是:所述胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基的组分如下:酪蛋白胨17 g、大豆蛋白胨3 g、葡萄糖2.5 g、NaCl 5g、K2HP04 2.5g，蒸馏水定容至1000 ml, pH 7.0±0.2 ;发酵培养基组成如下:可溶性淀粉20.0 g、大豆粉25 g、葡萄糖10 g、酵母粉4 g、牛肉膏I g、蛋白胨2 g、NaCl 2 g、K2HP040.5 g、CaCO3 5 g，蒸馏水定容至 1000 ml, pH 7.2。
5.根据权利要求1所述的亚砜生物碱类化合物的应用，其特征是:用于制备抑制金黄色葡萄球菌的抗菌制剂，或用于制备治疗肺癌、肝癌、白血病的抗肿瘤药物。
全文摘要
一种亚砜生物碱类化合物及其制备与应用，属于微生物技术领域。这种亚砜生物碱类化合物是将海洋链霉菌接种到胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基中，28-30℃，180-200rpm培养48-72h，以10%接种量接种到发酵培养基中，28-30℃，180-200rpm培养432-456h，发酵液经分离纯化法得到。该化合物对多种细菌尤其是金黄色葡萄球菌具有显著的抑制作用，同时对人乳腺癌细胞MCF-7，人肝癌细胞SMMC-7721，人急性骨髓性白血病细胞U937以及小细胞肺癌细胞NCI-H1688具有一定的抗肿瘤活性，具有较好的抗癌新药及抗菌新药开发前景。
文档编号A61P31/04GK103145740SQ20131006426
公开日2013年6月12日 申请日期2013年2月28日 优先权日2013年2月28日
发明者赵心清, 矫文策, 白凤武 申请人:大连理工大学