一种glp-1衍生物dlg3312及其固相化学合成方法
【专利摘要】本发明属于生物、化学工程【技术领域】，公开了一种GLP-1衍生物DLG3312，包括其互变异构体、溶剂化物和药物学可接受盐，其结构为X-Y-X；其中，X表示的序列为H-X8-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG，其中：X8是A、G、dA或V中的任意一个；Y表示二氨基羧酸，包括Lys、Orn、2，4-DAB或2，6-DAP。本发明还公开了所述GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法。本发明制备的DLG3312具有长于天然GLP-1的体内降血糖时间；本发明固相化学合成的制备方法生产步骤少，生产成本低，特别适于在制备治疗糖尿病的药物中作该药物的活性成分。
【专利说明】-种GLP-1衍生物DLG3312及其固相化学合成方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物、化学工程【技术领域】，具体地涉及一种具有人胰高血糖素样 肽-1 (GLP-1)活性的GLP-1衍生物DLG3312及其固相化学合成方法。
【背景技术】
[0002] 1929年，Zunz和Labbare将-类从肠道中分离出来的、可以促进葡萄糖刺激胰岛 素分泌的体液因子命名为肠降糖素（incretin)，GLP-1是其中的主要成分。GLP-1是由肠 道L细胞分泌的胰高血糖素前原基因的产物，其在食物摄入后分泌。体内主要存在两种生 物活性形式：GLP-1 (7?36) amide和GLP-1 (7?37)，GLP-1约80%的循环活性来自前者。 GLP-1作为一种激素，通过刺激分泌胰岛素降低餐后血糖，同时抑制胰高血糖素的分泌。并 且，其具有抑制胃肠道食物的清空和食物的摄入，此外，其能够引起胰岛β细胞的增殖。
[0003] GLP-1适用于II型糖尿病的治疗，其降低血糖的效应是血糖依赖性的，当血糖浓 度高于6mmol/L时，GLP-1显著促进胰岛素分泌，而一旦血糖恢复至正常值则不再继续发挥 降糖作用，所以在用药过程中不会出现低血糖。通过长期治疗，能够有效改善Π 型糖尿病 患者的糖化血红蛋白量，对II型糖尿病的预防和治疗具有良好的应用前景。
[0004] 在实际应用中，根据以往研究结果，GLP-1进入体内后的半衰期为2min，其原因在 于体内的多种蛋白酶对GLP-1的降解，目前DPP-4是其中最主要关注的酶。为抵抗此酶对 GLP-1的降解，延长在体内的药效时间，已有多种方法，如氨基酸的定点突变、分子修饰等。 如GLP-1衍生物CJC-1131在动物体内有效降糖时间为10?12h，其通过化学合成利用接 头分子将多肽与血浆蛋白相连接并于8位替换为D-Ala而大大延长半衰期；LY315902是在 GLP-1上连接1个8C脂肪链，在狗体内半衰期为3-6h ;利拉鲁肽（Liraglutide)，其于GLP-1 的26位的赖氨酸处连接1个16C脂肪酸侧链，并将34位突变为赖氨酸，皮下注射在人体内 血浆中半衰期为12?13h ;PEG修饰过的GLP-1其有效降糖时间是天然GLP-1血浆半衰期 的12倍左右等等。
[0005] 虽然通过对GLP-1的序列进行改造能够延长药效时间，但是由于改造后的分子与 天然GLP-1的同源率低，差异较大导致不同程度的副作用，如过敏、呕吐、胃肠不适等。
[0006] 现有技术中已有采用DNA重组技术制备GLP-1衍生物，名称为"一种人胰高血糖素 样肽-1衍生物及其制备和应用"发明专利（200610024355. X)中存在以下缺点：利用大肠 杆菌作为GLP-1衍生物表达的宿主菌，在后续纯化过程中，需要检测和控制大肠杆菌内毒 素以及大肠杆菌DNA的残留量，增加了生产步骤和成本。
[0007] GLP-1在体内有两种形式，一种为GLP-1 (7?36)amide，由30个氨基酸残基组 成，另一种为GLP-1 (7-37)，由31个氨基酸残基组成，二者均有生物学活性。本发明涉及的 GLP-1 指 GLP-1 (7-37)，其序列如下：HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG。
[0008] 本发明改进了 GLP-1序列及结构，提出了一种GLP-1衍生物DLG3312及其固相化 学合成方法。本发明提出的GLP-1衍生物DLG3312在保留良好的体内降糖活性的基础上解 决了天然GLP-1体内降糖时间短的问题，其原因主要在于：本发明GLP-1衍生物DLG3312的 结构X-Y-X中，X与Y的连接方式为2个X的碳端羧基分别与Y的2个氨基缩合连接，形成 由2个X与1个Υ构成的特定结构的为尾-尾同源二聚体。本发明中，二聚体的激动活性 相对于单体有较大提高，从而能够更有效地增加胰岛素分泌的总量；二聚体中包含突变的 氨基酸，同时，二聚结构就其本身而言，能阻碍与体内多种酶与其的结合，从而降低对其的 降解速率；二聚体与单体相比，具有相对较大的分子量，由此相对延长因肾小球滤过作用对 其清除的时间，使之在体内停留时间增加，延长药效时间。同时，本研究的DLG3312还解决 了安全性问题：避免了目前所使用的多种糖尿病药物具有的副作用--造成低血糖、体重 增加，引起胰岛素抵抗、胰岛β细胞衰竭等等，DLG3312具备改善胰岛素抵抗和抑制胰岛β 细胞凋亡的功能，从根本改善Π 型糖尿病患者的糖代谢能力；此外，在成本和产品质控也 体现出极大优势：本发明提出的制备方法具有生产步骤少、操作简便、成本低廉的优势，具 有更大的应用潜力。
【发明内容】
[0009] 本发明提出了一种GLP-1衍生物DLG3312,包括其互变异构体、溶剂化物和药物学 可接受盐；所述GLP-1衍生物DLG3312的结构为Χ-Υ-Χ ;其中，X表示的序列为H-X8-EGTFTS DVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG，其中：Χ8 是 A、G、dA 或 V 中的任意一个，dA 表示 D-Ala ;Υ 表示 二氨基羧酸，包括Lys、0rn、2,4-DAB或2,6-DAP ;所述GLP-1衍生物DLG3312通过所述X的 碳端羧基与所述Y的氨基缩合连接成同源二聚体。
[0010] 其中，2,4-DAB是2,4-二氨基丁酸，结构如以下式（I)所示：
[0011]
【权利要求】
1. 一种GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于，所述GLP-1衍生物DLG3312包括其互变异 构体、溶剂化物和药物学可接受盐；所述GLP-1衍生物DLG3312的结构为X-Y-X ;其中，X表 示的序列为 H-X8-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG，其中：X8 是 A、G、dA 或 V 中的任意一 个，dA 是 D_Ala ; Y表示二氨基羧酸，包括Lys、Orn、2,4-DAB或2,6-DAP ; 所述GLP-1衍生物DLG3312通过所述2个X的碳端羧基与所述Y的氨基缩合连接成同 源二聚体。
2. 如权利要求1所述的GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于， 当X8为A，则序列X为Seq ID No. 1 ; 当X8为G，则序列X为Seq ID No. 2 ; 当X8为dA，则序列X为Seq ID No. 3 ; 当X8为V，则序列X为Seq ID No. 4。
3. 如权利要求1所述的GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于， 序列X为Seq ID No. 1时，当Y为Lys，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-1如下结构 式（1)所示，当Y为〇rn，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-5如下结构式（5)所示，当Y为 2,4-DAB，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-9如下结构式（9)所示，当Y为2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-10如下结构式（10)所示： HAEGTFTSD￥SSYLEGQAAKEFIAWL￥KGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF1AWLVKGRG I I Lys Om I I HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKCiRCi (1) (5) HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWU'KGRG HAECjIFTSDVSS'iXEGQAAKEFIAWLVKGRG i I 2.4-DAB 2,6-DAP I I HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG m (10) 序列X为Seq ID No. 2时，当Y为Lys，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-2如下结构式 (2)所示，当Y为Orn，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-6如下结构式（6)所示，当Y为2， 4-DAB，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-11如下结构式（11)所示，当Y为2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-12如下结构式（12)所示： l!(il￡OTFTSDVSSYLEGQAAKEFlA\VLVK_(m(i HGifOTFrSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG I I Lys (>m i i 1Ι(Η?(?ΤΙ·ΤΗ1)ν88Υ?Η(ι〇ΛΛΚΙ·；Ι?Λ\ν?νΚ(Η?ι Π(ι1'ΧΠ1·'ΤΗΙ3νΗ^ΥΙΙ·；(?〇ΛΛΚΙ*；Ι'ΙΛν￥?νΚΙιΜι (2) (6) 1IG EGTFTSD VSSY LEGQAAKEFIAWLVKG RG HGEGTFTSDVSSYLEC.QAAKEFiAWLVKGRG I i 2,4-DAB 2,6-DAP ! 1 HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLA'KGRG HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG (11) (12) 序列X为Seq ID No. 3时，当Y为Lys，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-3如下结构式 (3)所示，当Y为Orn，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-7如下结构式（7)所示，当Y为2， 4-DAB，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-13如下结构式（13)所示，当Y为2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-14如下结构式（14)所示： HdAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFlAWLVKGRG Lys HdA HG 丁 FTSDVSSY LHGQA ΛΚ HF1 AWLVICCiRG (3) UdAHCiTFTSDVSSYLHCiQAAKHFlAWLVKCiRCi Oni i 1 IdAI-XJTFTSDVSSYl J-XJQAAK HFlAWLVK(jR(j (7) [IdA !·；( JTFTSOVSS Y LHC JQAA K HF1AWLVKC ? 1? ? 2,4-?)ΛΒ HdA !·：( HTTSD VSSY LHC ?〇Λ Λ K BF1 AWLVKCiRC ? (13) IldAKGTFTSDVSSYIJ￡(i〇AAKHF!AWLVI<(lR(i i 2.6-DAP HdA HGTFTSD VSS Y LI-GQA AK E FI AWLVKO RG (14) 序列X为Seq ID No. 4时，当Y为Lys，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-4如下结构式 (4)所示，当Y为Orn，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-8如下结构式（8)所示，当Y为2， 4-DAB，所述的GLP-1衍生物为DLG3312-15如下结构式（15)所示，当Y为2,6-DAP，所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-16如下结构式（16)所示： HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF1AWLVKGRG 1 I Lys Om i 1 HVHcrri-TSDVssYLi-XiQAAKHMAWLVKiiRCi ιινι·:(Π?Γ：Β?)ν--γυ':(κ}ΑΑ?α':ι·?Α\ντνκ(Η?(ι (4) (Η) HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG H\'EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVK.GRG 1 I 2,4-DAB 2,6-DAP ! 1 HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRti HVEGTF 丁 SDVSSYLEGQAAKEHAWLVKGRG (15) (16)"
4. 一种如权利要求1-3所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法，其 特征在于，先将树脂置入多肽合成仪，将带保护基的二氨基羧酸Y与所述树脂结合，再 将带保护基的氨基酸单体按照权利要求1或2所述X序列，从C端向N端排列在多肽 合成仪中，合成带侧链保护基的多肽树脂，再经脱保护基、切断树脂、HPLC纯化、冷冻 干燥，得到所述的GLP-1衍生物DLG3312 ;其中，所述带保护基的二氨基羧酸Y包括： Fmoc-L-Lys (Fmoc)-〇H> Fmoc-L-〇rn (Fmoc)-〇H> Fmoc-2,4-DAB (Fmoc)-〇H> DI-Fmoc-2, 6-Diaminoheptanedioic Acid，所述带保护基的氨基酸单体包括：Fmoc-L-Ala-〇H、 Fmoc-D-Ala-〇H> Fmoc-L-Arg (Pbf) -〇H> Fmoc-L-Asp (OtBu)-〇H> Fmoc-L-Gln (Trt)-〇H> Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H> Fmoc-L-Gly-〇H> Fmoc-L-His(Trt)-〇H> Fmoc-L-I1e-〇H> Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-〇H 〇
5. 如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法，其特征在于，当序 列 X 为 Seq ID No. 1， 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Arg(Pbf)-〇H> Fmoc-L-Gly-〇H> Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H> Fmoc-L-Val-〇H> Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc_L-Phe-〇H、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H> Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H> Fmoc-L-Ala-〇H> Fmoc-L-Ala-〇H> Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-1 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-5 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-9 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-10。
6.如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法，其特征在于，当序 列 X 为 Seq ID No. 2， 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-2 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-6 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-11 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-12。
7.如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法，其特征在于，当序 列 X 为 Seq ID No. 3， 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-3 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-7 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-13 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-14。
8.如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法，其特征在于，当序 列 X 为 Seq ID No. 4， 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-4 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-8 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-15 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为：DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时，所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-16。
9. 一种药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1-3所述GLP-1衍生物DLG3312和药 学上可接受的赋形剂。
10. 如权利要求1-3所述的GLP-1衍生物DLG3312在制备治疗糖尿病及肥胖症的药物 中的应用。
【文档编号】A61P3/10GK104098689SQ201310226925
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2013年6月7日 优先权日:2013年4月12日
【发明者】张金龙, 劳勋, 吴自荣, 黄静, 张利, 韦云平 申请人:华东师范大学