一种glp-1衍生物dlg3312及其固相化学合成方法

文档序号:1255644阅读:298来源:国知局
一种glp-1衍生物dlg3312及其固相化学合成方法
【专利摘要】本发明属于生物、化学工程【技术领域】,公开了一种GLP-1衍生物DLG3312,包括其互变异构体、溶剂化物和药物学可接受盐,其结构为X-Y-X;其中,X表示的序列为H-X8-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG,其中:X8是A、G、dA或V中的任意一个;Y表示二氨基羧酸,包括Lys、Orn、2,4-DAB或2,6-DAP。本发明还公开了所述GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法。本发明制备的DLG3312具有长于天然GLP-1的体内降血糖时间;本发明固相化学合成的制备方法生产步骤少,生产成本低,特别适于在制备治疗糖尿病的药物中作该药物的活性成分。
【专利说明】-种GLP-1衍生物DLG3312及其固相化学合成方法

【技术领域】
[0001] 本发明属于生物、化学工程【技术领域】,具体地涉及一种具有人胰高血糖素样 肽-1 (GLP-1)活性的GLP-1衍生物DLG3312及其固相化学合成方法。

【背景技术】
[0002] 1929年,Zunz和Labbare将-类从肠道中分离出来的、可以促进葡萄糖刺激胰岛 素分泌的体液因子命名为肠降糖素(incretin),GLP-1是其中的主要成分。GLP-1是由肠 道L细胞分泌的胰高血糖素前原基因的产物,其在食物摄入后分泌。体内主要存在两种生 物活性形式:GLP-1 (7?36) amide和GLP-1 (7?37),GLP-1约80%的循环活性来自前者。 GLP-1作为一种激素,通过刺激分泌胰岛素降低餐后血糖,同时抑制胰高血糖素的分泌。并 且,其具有抑制胃肠道食物的清空和食物的摄入,此外,其能够引起胰岛β细胞的增殖。
[0003] GLP-1适用于II型糖尿病的治疗,其降低血糖的效应是血糖依赖性的,当血糖浓 度高于6mmol/L时,GLP-1显著促进胰岛素分泌,而一旦血糖恢复至正常值则不再继续发挥 降糖作用,所以在用药过程中不会出现低血糖。通过长期治疗,能够有效改善Π 型糖尿病 患者的糖化血红蛋白量,对II型糖尿病的预防和治疗具有良好的应用前景。
[0004] 在实际应用中,根据以往研究结果,GLP-1进入体内后的半衰期为2min,其原因在 于体内的多种蛋白酶对GLP-1的降解,目前DPP-4是其中最主要关注的酶。为抵抗此酶对 GLP-1的降解,延长在体内的药效时间,已有多种方法,如氨基酸的定点突变、分子修饰等。 如GLP-1衍生物CJC-1131在动物体内有效降糖时间为10?12h,其通过化学合成利用接 头分子将多肽与血浆蛋白相连接并于8位替换为D-Ala而大大延长半衰期;LY315902是在 GLP-1上连接1个8C脂肪链,在狗体内半衰期为3-6h ;利拉鲁肽(Liraglutide),其于GLP-1 的26位的赖氨酸处连接1个16C脂肪酸侧链,并将34位突变为赖氨酸,皮下注射在人体内 血浆中半衰期为12?13h ;PEG修饰过的GLP-1其有效降糖时间是天然GLP-1血浆半衰期 的12倍左右等等。
[0005] 虽然通过对GLP-1的序列进行改造能够延长药效时间,但是由于改造后的分子与 天然GLP-1的同源率低,差异较大导致不同程度的副作用,如过敏、呕吐、胃肠不适等。
[0006] 现有技术中已有采用DNA重组技术制备GLP-1衍生物,名称为"一种人胰高血糖素 样肽-1衍生物及其制备和应用"发明专利(200610024355. X)中存在以下缺点:利用大肠 杆菌作为GLP-1衍生物表达的宿主菌,在后续纯化过程中,需要检测和控制大肠杆菌内毒 素以及大肠杆菌DNA的残留量,增加了生产步骤和成本。
[0007] GLP-1在体内有两种形式,一种为GLP-1 (7?36)amide,由30个氨基酸残基组 成,另一种为GLP-1 (7-37),由31个氨基酸残基组成,二者均有生物学活性。本发明涉及的 GLP-1 指 GLP-1 (7-37),其序列如下:HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG。
[0008] 本发明改进了 GLP-1序列及结构,提出了一种GLP-1衍生物DLG3312及其固相化 学合成方法。本发明提出的GLP-1衍生物DLG3312在保留良好的体内降糖活性的基础上解 决了天然GLP-1体内降糖时间短的问题,其原因主要在于:本发明GLP-1衍生物DLG3312的 结构X-Y-X中,X与Y的连接方式为2个X的碳端羧基分别与Y的2个氨基缩合连接,形成 由2个X与1个Υ构成的特定结构的为尾-尾同源二聚体。本发明中,二聚体的激动活性 相对于单体有较大提高,从而能够更有效地增加胰岛素分泌的总量;二聚体中包含突变的 氨基酸,同时,二聚结构就其本身而言,能阻碍与体内多种酶与其的结合,从而降低对其的 降解速率;二聚体与单体相比,具有相对较大的分子量,由此相对延长因肾小球滤过作用对 其清除的时间,使之在体内停留时间增加,延长药效时间。同时,本研究的DLG3312还解决 了安全性问题:避免了目前所使用的多种糖尿病药物具有的副作用--造成低血糖、体重 增加,引起胰岛素抵抗、胰岛β细胞衰竭等等,DLG3312具备改善胰岛素抵抗和抑制胰岛β 细胞凋亡的功能,从根本改善Π 型糖尿病患者的糖代谢能力;此外,在成本和产品质控也 体现出极大优势:本发明提出的制备方法具有生产步骤少、操作简便、成本低廉的优势,具 有更大的应用潜力。


【发明内容】

[0009] 本发明提出了一种GLP-1衍生物DLG3312,包括其互变异构体、溶剂化物和药物学 可接受盐;所述GLP-1衍生物DLG3312的结构为Χ-Υ-Χ ;其中,X表示的序列为H-X8-EGTFTS DVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG,其中:Χ8 是 A、G、dA 或 V 中的任意一个,dA 表示 D-Ala ;Υ 表示 二氨基羧酸,包括Lys、0rn、2,4-DAB或2,6-DAP ;所述GLP-1衍生物DLG3312通过所述X的 碳端羧基与所述Y的氨基缩合连接成同源二聚体。
[0010] 其中,2,4-DAB是2,4-二氨基丁酸,结构如以下式(I)所示:
[0011]

【权利要求】
1. 一种GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于,所述GLP-1衍生物DLG3312包括其互变异 构体、溶剂化物和药物学可接受盐;所述GLP-1衍生物DLG3312的结构为X-Y-X ;其中,X表 示的序列为 H-X8-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG,其中:X8 是 A、G、dA 或 V 中的任意一 个,dA 是 D_Ala ; Y表示二氨基羧酸,包括Lys、Orn、2,4-DAB或2,6-DAP ; 所述GLP-1衍生物DLG3312通过所述2个X的碳端羧基与所述Y的氨基缩合连接成同 源二聚体。
2. 如权利要求1所述的GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于, 当X8为A,则序列X为Seq ID No. 1 ; 当X8为G,则序列X为Seq ID No. 2 ; 当X8为dA,则序列X为Seq ID No. 3 ; 当X8为V,则序列X为Seq ID No. 4。
3. 如权利要求1所述的GLP-1衍生物DLG3312,其特征在于, 序列X为Seq ID No. 1时,当Y为Lys,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-1如下结构 式(1)所示,当Y为〇rn,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-5如下结构式(5)所示,当Y为 2,4-DAB,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-9如下结构式(9)所示,当Y为2,6-DAP,所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-10如下结构式(10)所示: HAEGTFTSD¥SSYLEGQAAKEFIAWL¥KGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF1AWLVKGRG I I Lys Om I I HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKCiRCi (1) (5) HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWU'KGRG HAECjIFTSDVSS'iXEGQAAKEFIAWLVKGRG i I 2.4-DAB 2,6-DAP I I HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG m (10) 序列X为Seq ID No. 2时,当Y为Lys,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-2如下结构式 (2)所示,当Y为Orn,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-6如下结构式(6)所示,当Y为2, 4-DAB,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-11如下结构式(11)所示,当Y为2,6-DAP,所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-12如下结构式(12)所示: l!(il£OTFTSDVSSYLEGQAAKEFlA\VLVK_(m(i HGifOTFrSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG I I Lys (>m i i 1Ι(Η?(?ΤΙ·ΤΗ1)ν88Υ?Η(ι〇ΛΛΚΙ·;Ι?Λ\ν?νΚ(Η?ι Π(ι1'ΧΠ1·'ΤΗΙ3νΗ^ΥΙΙ·;(?〇ΛΛΚΙ*;Ι'ΙΛν¥?νΚΙιΜι (2) (6) 1IG EGTFTSD VSSY LEGQAAKEFIAWLVKG RG HGEGTFTSDVSSYLEC.QAAKEFiAWLVKGRG I i 2,4-DAB 2,6-DAP ! 1 HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLA'KGRG HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG (11) (12) 序列X为Seq ID No. 3时,当Y为Lys,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-3如下结构式 (3)所示,当Y为Orn,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-7如下结构式(7)所示,当Y为2, 4-DAB,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-13如下结构式(13)所示,当Y为2,6-DAP,所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-14如下结构式(14)所示: HdAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFlAWLVKGRG Lys HdA HG 丁 FTSDVSSY LHGQA ΛΚ HF1 AWLVICCiRG (3) UdAHCiTFTSDVSSYLHCiQAAKHFlAWLVKCiRCi Oni i 1 IdAI-XJTFTSDVSSYl J-XJQAAK HFlAWLVK(jR(j (7) [IdA !·;( JTFTSOVSS Y LHC JQAA K HF1AWLVKC ? 1? ? 2,4-?)ΛΒ HdA !·:( HTTSD VSSY LHC ?〇Λ Λ K BF1 AWLVKCiRC ? (13) IldAKGTFTSDVSSYIJ£(i〇AAKHF!AWLVI<(lR(i i 2.6-DAP HdA HGTFTSD VSS Y LI-GQA AK E FI AWLVKO RG (14) 序列X为Seq ID No. 4时,当Y为Lys,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-4如下结构式 (4)所示,当Y为Orn,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-8如下结构式(8)所示,当Y为2, 4-DAB,所述的GLP-1衍生物为DLG3312-15如下结构式(15)所示,当Y为2,6-DAP,所述的 GLP-1衍生物为DLG3312-16如下结构式(16)所示: HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEF1AWLVKGRG 1 I Lys Om i 1 HVHcrri-TSDVssYLi-XiQAAKHMAWLVKiiRCi ιινι·:(Π?Γ:Β?)ν--γυ':(κ}ΑΑ?α':ι·?Α\ντνκ(Η?(ι (4) (Η) HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG H\'EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVK.GRG 1 I 2,4-DAB 2,6-DAP ! 1 HVEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRti HVEGTF 丁 SDVSSYLEGQAAKEHAWLVKGRG (15) (16)"
4. 一种如权利要求1-3所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法,其 特征在于,先将树脂置入多肽合成仪,将带保护基的二氨基羧酸Y与所述树脂结合,再 将带保护基的氨基酸单体按照权利要求1或2所述X序列,从C端向N端排列在多肽 合成仪中,合成带侧链保护基的多肽树脂,再经脱保护基、切断树脂、HPLC纯化、冷冻 干燥,得到所述的GLP-1衍生物DLG3312 ;其中,所述带保护基的二氨基羧酸Y包括: Fmoc-L-Lys (Fmoc)-〇H> Fmoc-L-〇rn (Fmoc)-〇H> Fmoc-2,4-DAB (Fmoc)-〇H> DI-Fmoc-2, 6-Diaminoheptanedioic Acid,所述带保护基的氨基酸单体包括:Fmoc-L-Ala-〇H、 Fmoc-D-Ala-〇H> Fmoc-L-Arg (Pbf) -〇H> Fmoc-L-Asp (OtBu)-〇H> Fmoc-L-Gln (Trt)-〇H> Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H> Fmoc-L-Gly-〇H> Fmoc-L-His(Trt)-〇H> Fmoc-L-I1e-〇H> Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-〇H 〇
5. 如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法,其特征在于,当序 列 X 为 Seq ID No. 1, 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Arg(Pbf)-〇H> Fmoc-L-Gly-〇H> Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H> Fmoc-L-Val-〇H> Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc_L-Phe-〇H、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H> Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H> Fmoc-L-Ala-〇H> Fmoc-L-Ala-〇H> Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-1 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-5 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-9 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Ala-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-10。
6.如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法,其特征在于,当序 列 X 为 Seq ID No. 2, 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-2 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-6 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-11 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-12。
7.如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法,其特征在于,当序 列 X 为 Seq ID No. 3, 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-3 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-7 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-13 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-D-Ala-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-14。
8.如权利要求4所述的GLP-1衍生物DLG3312的固相化学合成方法,其特征在于,当序 列 X 为 Seq ID No. 4, 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L_Lys (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-4 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc-L-〇rn (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-8 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:Fmoc_2,4-DAB (Fmoc) -OH、Fmoc-L-Gly-〇H、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、Fmoc-L-Phe-〇H、 Fmoc-L_Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L_Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、 Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、Fmoc-L-Val-OH、 Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-15 ; 所述带保护基的氨基酸单体依次为:DI-Fmoc_2,6-Diaminoheptanedioic Acid、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Arg(Pbf)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L_Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Leu-〇H、Fmoc-L_Trp-〇H、Fmoc-L_Ala-〇H、Fmoc-L_Ile-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Lys(Boc)-〇H、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Ala-OH、 Fmoc-L-Gln(Trt)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L_Tyr(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L_Asp(OtBu)-〇H、Fmoc-L_Ser(tBu)-〇H、Fmoc-L_Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Phe-OH、 Fmoc-L-Thr(tBu)-〇H、 Fmoc-L-Gly-OH、 Fmoc-L-Glu(OtBu)-〇H、 Fmoc-L-Val-〇H、Fmoc-L-His(Trt)-〇H 时,所得 GLP-1 衍生物为 DLG3312-16。
9. 一种药物组合物,其特征在于,包括如权利要求1-3所述GLP-1衍生物DLG3312和药 学上可接受的赋形剂。
10. 如权利要求1-3所述的GLP-1衍生物DLG3312在制备治疗糖尿病及肥胖症的药物 中的应用。
【文档编号】A61P3/10GK104098689SQ201310226925
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2013年6月7日 优先权日:2013年4月12日
【发明者】张金龙, 劳勋, 吴自荣, 黄静, 张利, 韦云平 申请人:华东师范大学
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1