一种安普霉素脂质体及其制备方法
【专利摘要】一种安普霉素脂质体，所述安普霉素脂质体是安普霉素被脂质体膜材包封，形成的具有双层膜结构的球或椭球结构的组合物,制备方法包括以下步骤：1）将安普霉素和脂质体膜材用乙醇溶解得到混合溶液，混合溶液溶解于超临界CO2中得到超临界溶液，所述安普霉素与脂质体膜材的质量比为1:1～1:30，所述脂质体膜材为磷脂酰胆碱、或者磷脂酰胆碱与胆固醇的混合物；2）将稳定剂溶于水相介质，得到稳定剂溶液；3）将所述超临界溶液在膨胀压力15～30MPa、预膨胀温度323～343K下喷射至所述稳定剂溶液，经分散并沉析，获得安普霉素脂质体混悬液。
【专利说明】一种安普霉素脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种安普霉素脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]安普霉素是脂溶性物质，在体内溶出差，生物利用度低，造成给药时间短、面积小，影响了给药效果。因此，将其制成一种水溶性好、吸收快，并且具有肝靶向作用、长效、控制释放的新剂型是十分必要的。脂质体是由磷脂、胆固醇等为膜材，将药物包封于类脂质双分子层而制得的超细粒子药物载体制剂。脂质体具有靶向走位作用，进入体内优先被富含网状内皮细胞的组织如肝、脾、骨髓等所摄取。根据肝器官给药的特点，将安普霉素制备为脂质体，增加安普霉素在水中溶出度与生物利用度，使药物在肝组织中缓慢释放，提高安普霉素对局部给药效果，有利于制剂更好地发挥胃部给药的药效。更为关键的是，安普霉素脂质体增强渗透与滞留，通过毛细血管上皮细胞间隙进入组织，在肝部治疗中有很好的被动靶向作用。
[0003]脂质体采用的制备方法有薄膜分散法、薄膜-超声波分散法、熔融法、冻融法、注入法、逆相蒸发法、复乳法等。由于这些方法需要使用大量的有机溶剂，需要进行复杂的后处理，加之安普霉素在长时间的热处理过程中容易发生降解反应。按传统方法制备的安普霉素脂质体存在稳定性差、包埋率低小、易聚集、靶向性不强等问题。
[0004]超临界流体快速膨胀法是一种重要的超临界流体技术，其过程是先将药物溶解在SC-CO2中，再通过喷嘴雾化喷出，经快速膨胀减压后，溶质因过饱和而析出固体微粒。由于磷脂必须分散在水溶液中才能自发形成脂质体，常规过程不适用脂质体形成，限制了其在脂质体形成的应用。中国专利“药物靶向脂质体的制备方法”(CN 1218746C)先将SO药物形成W/0的乳浊液后，再利用超临界流体溶胀沉析药物。中国专利“化妆品脂质体制各方法”(CN1254550A)、“脂质体的生产工艺及设备”(CN148596A)都是将磷脂等原料等溶解在超临界CO2中后，释放压力之形成微粒后，在常压下加入分散液中以形成脂质体。上述专利尽管使用到了超临界CO2，但是脂质体膜材的溶解与分散是独立的两个步骤，未能充分利用超临界CO2高流动性的优势，反而使脂质体的制备过程更为复杂，过程因子更加难以控制。为充分发挥超临界流体制备脂质体的优势，实现超临界CO2介质中脂质体膜材、被包封药物的膨胀与分散一体化完成是十分必要的。而现阶段存在的问题是，由于CO2与水极性相差很大，两者分子间的作用力很小，直接在超临界CO2介质中将脂质体膜材分散在水中是很困难的，获得的脂质体粒径较大、易团聚。基于此，利用表面活性剂为稳定剂，采用超临界强制分散沉析新技术，将脂质体膜材与安普霉素溶解于超临界CO2 /乙醇中，溶液经膨胀后分散在含有表面活性剂作为稳定剂的溶液中，形成脂质体温悬液，为超临界CO2介质中的安普霉素脂质体的自组装和稳定化提供了一条新途径。
[0005]利用超临界流体技术制备安普霉素脂质体，相比于传统方法具有优势在于:A.使用化学惰性的CO2为溶剂，包封条件温和，防止安普霉素降解；B.超临界流体的快速质量传递性有利于超细、直至纳米级，粒度均匀的脂质体的形成；C.脂质体的载药性能与粒径分布可调节超临界参数来控制，表面活性剂对脂质体包封过程起到稳定化作用，能有效避免脂质体的团聚。该技术不使用有毒有机溶剂，所制备的安普霉素脂质体无溶剂残留，稳定性好，增加安普霉素在水中溶出度与生物利用度，提高了脂质体的安全性，具有技术与应用的新颖性和创造性。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种生物利用度好、稳定性高的安普霉素脂质体及其制备方法。
[0007]为实现上述目的，本发明采取的技术方案是，一种安普霉素脂质体，所述安普霉素脂质体是安普霉素被脂质体膜材包封，形成的具有双层膜结构的球或椭球结构的组合物。
[0008]所述安普霉素脂质体的制备方法，包括以下步骤:
1)将安普霉素和脂质体膜材用乙醇溶解得到混合溶液，混合溶液溶解于超临界CO2中得到超临界溶液，所述安普霉素与脂质体膜材的质量比为1:1~1:30，所述脂质体膜材为磷脂酰胆碱或者磷脂酰胆碱与胆固醇的混合物；
2)将稳定剂溶于水相介质，得到稳定剂溶液；
3)将所述超临界溶液在膨胀压力15~30MPa、预膨胀温度323~343K下喷射至所述稳定剂溶液，经分散并沉析，获得安普霉素脂质体混悬液。
[0009]上述安普霉素脂质体混悬液可以进一步进行常规的冷冻干燥制备成粉末。
[0010]优选的，所述安普霉素与脂质体膜材的质量比为1:10~1:20。
[0011]所述磷脂酰胆碱与胆固醇的`混合物中，胆固醇的质量不大于磷脂酰胆碱的质量。
[0012]优选的，所述磷脂酰胆碱与胆固醇的混合物中磷脂酰胆碱与胆固醇的质量比为5:1 ~3:1。
[0013]所述水相介质为磷酸盐缓冲液。
[0014]所述稳定剂为泊洛沙姆、吐温、烷基联苯醚磺酸盐(DAS)中的一种或几种。
[0015]所述稳定剂溶液中稳定剂的浓度以质量分数计为I~10%，优选为2%~5%。
[0016]优选的，所述稳定剂为泊洛沙姆188，或泊洛沙姆188与吐温80混合物，或者烷基联苯醚磺酸盐(DAS)与吐温80混合物，或者泊洛沙姆188与DAS混合物；所述泊洛沙姆188与吐温80混合物中，泊洛沙姆188与吐温80的质量比为1:1~5:1 ;所述烷基联苯醚磺酸盐(DAS)与吐温80混合物中，烷基联苯醚磺酸盐(DAS)与吐温80的质量比为1:1~5:1 ;所述泊洛沙姆188与烷基联苯醚磺酸盐(DAS)混合物中，泊洛沙姆188与DAS的质量比为1:1 ~5:1。
[0017]所述超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔数之比为1: 5~I: 20。
[0018]所述超临界溶液喷射至所述稳定剂溶液时的喷射速度为I~5L/min。
[0019]根据上述的安普霉素脂质体的制备方法制备的安普霉素脂质体混悬流液，所述安普霉素脂质体混悬液中安普霉素的含量以质量分数计为0.11~0.41%。
[0020]与现有技术相比，本发明的特点和优点在于:
I)利用表面活性剂为稳定剂，采用超临界CO2强制分散沉析的新过程(RESS)制备安普霉素脂质体。在此过程中，稳定剂的作用:一是可以降低收集器内混合液的表面张力，强化了雾滴与水溶液的混合传质作用，改善了通过喷嘴进行膨胀减压时的雾化效果；二是吸附在磷脂分子表面，起到稳定磷脂分子的作用，减小了脂质体之间的相互碰撞，促进磷脂分子在水溶液中自组装形成脂质体，解决了脂质膜材在缓冲液中不易扩散的问题，并显著改善脂质体团聚现象，获得了包封性能优越，粒度小且分布均匀的脂质体。
[0021]2)保证安普霉素的稳定性:采用超临界CO2流体技术制备安普霉素脂质体，安普霉素在化学惰性的CO2介质中完成脂质体包封过程，不使用氯仿等有毒有机溶剂，包封条件温和，能避免安普霉素的氧化，保持安普霉素的稳定性与生物洁性。
[0022]3)安普霉素脂质体制备过程中的稳定化作用:采用超临界CO2膨胀并分散至表面活性剂溶液的新过程制备安普霉素脂质体，在表面活性剂的稳定作用下，利用超临界流体的快速质量传递性，有利于形成超细、直至纳米级的粒度均匀的脂质体，克服了传统方法制各过程中脂质体容易团聚的缺陷，为利用安普霉素脂质体作为注射剂中间体创造了条件。
[0023]4)提高安普霉素脂质体的理化性质:所制备的安普霉素脂质体的包封率高，粒径小，粒度分布窄而均匀对于充分保证发挥安普霉素的生理功效，扩大安普霉素的临床与应用价值具有重要意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0024]图1为根据本发明实施例1中方法制备的安普霉素脂质体的微观结构的透射电镜(TEM)图。
【具体实施方式】
[0025]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。
[0026]实施例1
称取磷脂酰胆碱3.75·g，购自于上海伯奥生物工程公司，分析纯，批号BA20121206 ;胆固醇1.25g，上海伯奥生物工程公司提供，分析纯，批号BA20121125 ;安普霉素0.25g，郑州福瑞康化工产品有限公司，批号120115 ;将称取的磷脂酰胆碱、胆固醇和安普霉素溶解于13mL无水乙醇中，混合均匀得到混合溶液，将所得混合溶液置入CO2流体反应器中，封盖。
[0027]将泊洛沙姆188溶于pH7.2的PBS磷酸盐缓冲液中，配成泊洛沙姆188的质量浓度为5%的稳定剂溶液IOOmL,将制备得到的稳定剂溶液置入CO2流体收集器中，封盖。
[0028]打开CO2钢瓶，CO2气体经冷机冷却成液体后，由高压计量泵加压后进入CO2流体反应器，CO2流体反应器的温度由换热器控制，在预膨胀压力30MPa、预膨胀温度338K下，磷脂酰胆碱、胆固醇与安普霉素溶解在超临界CO2 /乙醇混合溶剂中得到超临界溶液，超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔数之比为1: 5，待体系达到平衡后，快速释放压力，脂质材料溶液经喷嘴以2L/min的流速喷射进CO2流体收集器，使脂质体均匀分散在稳定剂溶液中，CO2经转子流量计排空，收集制成的安普霉素脂质体混悬液。
[0029]安普霉素含量的测定:
仪器与条件:气相色谱仪，Angient6890 ;色谱柱:HP_5MS，石英毛细管柱(30m X 250MmX0.25 Mm);进样口温度:250°C;FID检测器温度:280 °C;柱温:80°C (Imin) — (12°C /min ) — 250 °C (5min);分流比 1:5。
[0030]测定方法:取本实施例的ImL上述安普霉素脂质体温悬液置于50mL量瓶中，加入IOmL 20% (质量分数)TritonXlOO的乙醇溶液破乳，并用无水乙醇定容至刻度，用GC (气相色谱)法测定安普霉素质量，得到混悬液中安普霉素的总含量为0.24%。
[0031]包封率的测定:
实验仪器:葡聚糖凝胶G-50柱(2 X80cm)；
测定方法:用空白脂质体预先饱和葡聚糖凝胶G50柱，取ImL上述脂质体混悬液上柱，以PBS缓冲液为洗脱液，流速控制在lmL/min，弃去脂质体的流出液约15mL，收集游离安普霉素的滤液约40mL，用正己烷萃取，测得游离安普霉素的质量，根据脂质体中安普霉素的质量，计算得到安普霉素脂质体的包封率为81.25 %。
[0032]形态观察与粒径测定
实验仪器:透射电镜JEM1230TEM，日本电子公司；动态激光纳米粒度分布仪:Malvernnanometer ,英国 Malvern 仪器公司；
粒径测定方法:取安普霉素脂质体适量，稀释后滴在铜网上，利用透射电镜对脂质体微观形态进行观察并拍照。将脂质体混悬液稀释至适当倍数，动态激光纳米粒度分布仪测定脂质体的粒径，经测定，脂质体的平均粒径为124nm。
[0033]根据本发明实施例1中方法制备的安普霉素脂质体的微观结构的透射电镜(TEM)图如图1所示。
[0034]实施例2
称取磷脂酰胆碱6g，购自于上海伯奥生物工程公司，分析纯，批号BA20121206 ;安普霉素0.2g，郑州福瑞康化工产品有限公司，批号120115 ;将称取的磷脂酰胆碱和安普霉素溶解于15mL乙醇(质量分数为20%的水溶液)中，混合均匀得到混合溶液，将所得混合溶液置入CO2流体反应器中，封盖。
[0035]将泊洛沙姆188、吐温80溶于pH7.2的PBS磷酸盐缓冲液中，配成稳定剂溶液IOOmL,稳定剂溶液中泊洛沙姆188、吐温80质量浓度均为5%，将制备得到的稳定剂溶液置入CO2流体收集器中，封盖。
[0036]打开CO2钢瓶，CO2气体经冷机冷却成液体后，由高压计量泵加压后进入CO2流体反应器，CCV流体反应器的温度由换热器控制，在预膨胀压力15MPa、预膨胀温度323K下，磷脂酰胆碱与安普霉素溶解在超临界CO2 /乙醇混合溶剂中得到超临界溶液，超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔数之比为1: 20，待体系达到平衡后，快速释放压力，脂质材料溶液经喷嘴以5L/min的流速喷射进CO2流体收集器中，使脂质体均匀分散在稳定剂溶液中，CO2经转子流量计排空，收集制成的安普霉素脂质体混悬液。
[0037]测定结果:安普霉素脂质体混悬液中安普霉素的总含量为0.41% ;安普霉素脂质体的包封率为85.25 %;脂质体的平均粒径为114nm。
[0038]实施例3
称取磷脂酰胆碱6g，购自于上海伯奥生物工程公司，分析纯，批号BA20121206 ;安普霉素0.6g，郑州福瑞康化工产品有限公司，批号120115 ;将称取的磷脂酰胆碱和安普霉素溶解于20mL乙醇(质量分数为90%的水溶液)中，混合均匀得到混合溶液，将所得混合溶液置入CO2流体反应器中，封盖。
[0039]将泊洛沙姆188、烷基联苯醚磺酸盐(DAS)溶于pH7.2的PBS磷酸盐缓冲液中，配成稳定剂溶液IOOmL,稳定剂溶液中泊洛沙姆188、烷基联苯醚磺酸盐(DAS)质量浓度均为5%，将制备得到的稳定剂溶液置入CO2流体收集器中，封盖。[0040]打开CO2钢瓶，CO2气体经冷机冷却成液体后，由高压计量泵加压后进入CO2流体反应器，CO2流体反应器的温度由换热器控制，在预膨胀压力20MPa、预膨胀温度343K下，磷脂酰胆碱与安普霉素溶解在超临界CO2 /乙醇混合溶剂中得到超临界溶液，超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔数之比为1: 10，待体系达到平衡后，快速释放压力，脂质材料溶液经喷嘴以lL/min的流速喷射进CO2流体收集器中，使脂质体均匀分散在稳定剂溶液中，CO2经转子流量计排空，收集制成的安普霉素脂质体混悬液。
[0041]测定结果:安普霉素脂质体混悬液中安普霉素的总含量为0.11% ;安普霉素脂质体的包封率为78.25 % ;脂质体的平均粒径为104nm。
[0042]实施例4
称取磷脂酰胆碱2g，购自于上海伯奥生物工程公司，分析纯，批号BA20121206 ;安普霉素2g，郑州福瑞康化工产品有限公司，批号120115 ;将称取的磷脂酰胆碱和安普霉素溶解于20mL乙醇(质量分数为50%的水溶液)中，混合均匀得到混合溶液，将所得混合溶液置入CO2流体反应器中，封盖。
[0043]将烷基联苯醚磺酸盐(DAS)、吐温80溶于pH7.2的PBS磷酸盐缓冲液中，配成稳定剂溶液IOOmL,稳定剂溶液中烷基联苯醚磺酸盐(DAS)、吐温80质量浓度均为5%，将制备得到的稳定剂溶液置入CO2流体收集器中，封盖。
[0044]打开CO2钢瓶，CO2气体经冷机冷却成液体后，由高压计量泵加压后进入CO2流体反应器，CO2流体反应器的温度由换热器控制，在预膨胀压力25MPa、预膨胀温度328K下，磷脂酰胆碱、胆固醇与安普霉素溶解在超临界CO2 /乙醇混合溶剂中得到超临界溶液，超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔 数之比为1: 15，待体系达到平衡后，快速释放压力，脂质材料溶液经喷嘴以3L/min的流速喷射进CO2流体收集器中，使脂质体均匀分散在稳定剂溶液中，CO2经转子流量计排空，收集制成的安普霉素脂质体混悬液。
[0045]将安普霉素脂质体混悬液进行冷冻干燥，制备得到安普霉素脂质体固体粉末。
[0046]实施例5
称取磷脂酰胆碱5g，购自于上海伯奥生物工程公司，分析纯，批号BA20121206 ;胆固醇Ig,上海伯奥生物工程公司提供，分析纯，批号BA20121125 ;安普霉素0.4g，郑州福瑞康化工产品有限公司，批号120115 ;将称取的磷脂酰胆碱、胆固醇和安普霉素溶解于16mL无水乙醇中，混合均匀得到混合溶液，将所得混合溶液置入CO2流体反应器中，封盖。
[0047]将泊洛沙姆188、吐温80溶于pH7.2的PBS磷酸盐缓冲液中，配成稳定剂溶液IOOmL,稳定剂溶液中泊洛沙姆188、吐温80质量浓度分别为2%、8%，将制备得到的稳定剂溶液置入CO2流体收集器中，封盖。
[0048]打开CO2钢瓶，CO2气体经冷机冷却成液体后，由高压计量泵加压后进入CO2流体反应器，CO2流体反应器的温度由换热器控制，在预膨胀压力26MPa、预膨胀温度333K下，磷脂酰胆碱、胆固醇与安普霉素溶解在超临界CO2 /乙醇混合溶剂中得到超临界溶液，超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔数之比为1: 12，待体系达到平衡后，快速释放压力，脂质材料溶液经喷嘴以4L/min的流速喷射进CO2流体收集器中，使脂质体均匀分散在稳定剂溶液中，CO2经转子流量计排空，收集制成的安普霉素脂质体混悬液。
[0049]将安普霉素脂质体混悬液进行冷冻干燥，制备得到安普霉素脂质体固体粉末。
[0050]实施例6称取磷脂酰胆碱4g，购自于上海伯奥生物工程公司，分析纯，批号BA20121206 ;胆固醇lg，上海伯奥生物工程公司提供，分析纯，批号BA20121125 ;安普霉素0.2g，郑州福瑞康化工产品有限公司，批号120115 ;将称取的磷脂酰胆碱、胆固醇和安普霉素溶解于16mL无水乙醇中，混合均匀得到混合溶液，将所得混合溶液置入CO2流体反应器中，封盖。
[0051]将烷基联苯醚磺酸盐(DAS)、吐温80溶于pH7.2的PBS磷酸盐缓冲液中，配成稳定剂溶液IOOmL,稳定剂溶液中烷基联苯醚磺酸盐(DAS)、吐温80质量浓度分别为7%、2%，将制备得到的稳定剂溶液置入CO2流体收集器中，封盖。
[0052] 打开CO2钢瓶，CO2气体经冷机冷却成液体后，由高压计量泵加压后进入CO2流体反应器，CO2流体反应器的温度由换热器控制，在预膨胀压力27MPa、预膨胀温度332K下，磷脂酰胆碱、胆固醇与安普霉素溶解在超临界CO2 /乙醇混合溶剂中得到超临界溶液，超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔数之比为1: 12，待体系达到平衡后，快速释放压力，脂质材料溶液经喷嘴以3.5L/min的流速喷射进CO2流体收集器中，使脂质体均匀分散在稳定剂溶液中，CO2经转子流量计排空，收集制成的安普霉素脂质体混悬液。
[0053]测定结果:安普霉素脂质体混悬液中安普霉素的总含量为0.3% ;安普霉素脂质体的包封率为80.2 % ;脂质体的平均粒径为112nm。
【权利要求】
1.一种安普霉素脂质体，其特征在于，所述安普霉素脂质体是安普霉素被脂质体膜材包封，形成的具有双层膜结构的球或椭球结构的组合物。
2.一种如权利要求1所述的安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤:1)将安普霉素和脂质体膜材用乙醇溶解得到混合溶液，混合溶液溶解于超临界CO2中得到超临界溶液，所述安普霉素与脂质体膜材的质量比为1:1~1:30，所述脂质体膜材为磷脂酰胆碱或者磷脂酰胆碱与胆固醇的混合物；2)将稳定剂溶于水相介质，得到稳定剂溶液；3)将所述超临界溶液在膨胀压力15~30MPa、预膨胀温度323~343K下喷射至所述稳定剂溶液，经分散并沉析，获得安普霉素脂质体混悬液；4)将安普霉素脂质体混悬液冷冻干燥，即得所述安普霉素脂质体。
3.如权利要求2所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述安普霉素与脂质体膜材的质量比为1:10~1:20。
4.如权利要求2所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述磷脂酰胆碱与胆固醇的混合物中，胆固醇的质量不大于磷脂酰胆碱的质量。
5.如权利要求4所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述磷脂酰胆碱与胆固醇的混合物中，磷脂酰胆碱与胆固醇的质量比为5:1~3:1。
6.如权利要求2所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述水相介质为磷酸盐缓冲液。
7.如权利要求2所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述稳定剂为泊洛沙姆、吐温、烷基联苯酶磺酸盐中的一种或几种。
8.如权利要求2所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述稳定剂在稳定剂溶液中的浓度以质量分数计为1~10%。
9.如权利要求2所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述超临界溶液中乙醇与CO2的摩尔数之比为1: 5~1: 20。
10.如权利要求2所述安普霉素脂质体的制备方法，其特征在于，所述超临界溶液喷射至所述稳定剂溶液时的喷射速度为1~5L/min。
【文档编号】A61K47/34GK103565746SQ201310584564
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】孙江宏, 管倩, 杨震豪 申请人:河南牧翔动物药业有限公司