一种hm-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途
【专利摘要】本发明公开了一种HM-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物用在制备实体瘤药物中的用途，属于治疗肿瘤的药物领域。铂类、紫杉醇类或他滨类抗代谢药物作为活性成分，并辅以可接受的药用载体制成各种药学上可接受的制剂。经过大量实验获知整合素阻断剂HM-3靶点明确，结合铂类、紫杉醇类或者他滨类合理使用，能够有效抑制肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌等在内的肿瘤增长。本发明联合用药作为药物使用可以有效治疗肿瘤，其联合用药科学、合理、可行有效，极大拓展了肿瘤治疗的治疗谱、降低了毒副作用，具有显著社会价值和市场价值。
【专利说明】一种HM-3和铂类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药物治疗肿瘤的用途，更具体的说是一种HM-3和钼类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途。。
【背景技术】
[0002]肿瘤是一种复杂的疾病，单独使用一种药物很难达到理想的治疗效果，目前临床上往往采用联合用药的方式进行治疗。肿瘤治疗中联合用药的优势在于增强疗效，减少不良反应的发生，防止肿瘤产生耐药性。根据抗肿瘤药的作用机制进行合理联合用药，是近年来化疗给药治疗肿瘤中的重要进展之一。不同作用机制的抗肿瘤药物合用，往往能能增强疗效。如将破坏DNA结构与功能的烷化剂(如环磷酰胺或卡莫斯汀)与阻止DNA修复的甲胺蝶呤合用，常可产生协同作用。另外从降低药物毒性考虑:骨髓抑制是多数抗肿瘤药共有的毒性。可联合应用一些对骨髓抑制作用小的抗肿瘤药，如肿瘤靶向药物，降低细胞毒类药物使用剂量，可以提高治疗效果的同时大大降低患者的痛苦。
[0003]虽然在先前的专利ZL200510040378.5公开了对黑色瘤有治疗效果的抑制剂RGD-ED，但并未公开对其他肿瘤有治疗效果。专利申请200610039484.6血管生成抑制剂HM-3及其制备方法和应用公开了具有整合素亲和性的高效血管生成抑制剂HM-3，该抑制剂含有血管生成抑制蛋白内皮抑素全部氨基酸序列，在其羧基端连接含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的多肽，是由18个氨基酸组成。前期研究表明HM-3可以有效抑制内皮细胞迁移和血管生成，从而抑制肿瘤生长。进一步分子机理研究表明，其作用靶点为肿瘤过高表达的整合素受体ανβ3，并通过ανβ3作用于胞内不同的信号通路，ΗΜ-3还能够直接抑制VEGF表达。ΗΜ-3靶点及作用机理明确，药效学研究表明其可以有效抑制包括肺癌、胃癌、肝癌、乳腺癌等在内的实体肿瘤的增长，有待开发成一类抗肿瘤新药。专利201110122070.0ΗΜ-3多肽冻干粉制剂及其制备方法公开了 ΗΜ_3多肽冻干粉制剂，该产品有很高的活性和纯度及良好的医用效果，但单一的制剂对于复杂的不同肿瘤共存的的针对性不强。
[0004]由于单一用药所存在的缺陷，越来越多的研究者关注联合用药。对于联合用药国内外大量的研究表明即使是同一组织类型、分化程度相同的肿瘤，对同一药物的敏感性也有可能不同，因此，不同肿瘤治疗中需要需要进行治疗药物的筛选。因为有些药物只对特定肿瘤细胞有效，对其他肿瘤是无效或低效，因此需要实验去摸索和验证其治疗效果。联合用药也是如此，并不是随便把几种化学药物放在一起都会对某些肿瘤有效。因为药物之间联用一方面因为机理不同，不一定能产生很好的效果；另外，药物之间存在相互作用，有的药物联用不但不会增效，还会产生相反的作用，比如拮抗。
[0005]近些年来，血管生成抑制剂类药物与化疗药物联合应用在癌症临床治疗上广泛应用，药物的联合应用也越来越受到药理学家的重视。在实践中，治疗用药的合并常可减少剂量、增强疗效、降低毒性，这种现象在医学或生物学上不仅有很大实用价值，且为理论上对作用机理及作用环节的探索提供极有意义的信息。但对于具体药物而言，由于药物的性质的复杂性，如何联合使用一直是本领域技术人员难以解决的问题。
[0006]对于治疗肿瘤的药物而言，因为肿瘤细胞具有很强的耐药性、发病机制又复杂，单独使用某一化学治疗药物很难达到有效抑制肿瘤的效果，需要机理不同的药物联合使用才能达到有效的治疗效果。但是药物之间存在相互作用，不同机理的药物联合使用时需要通过试验进行验证其是否可以达到最佳治疗效果，如果运用不当，不但作用效果不佳而且会产生更大的毒副作用。另外，不同肿瘤对某一药物的敏感程度也不同，也需要经过大量的试验筛选适合的联合用药种类。联合用药需要进行了大量试验来筛选药物组合，因为药物联合应用需要检测作用效果是否有增效作用或协同作用；同时使用剂量、给药顺序、给药周期、不同肿瘤适应症都需要通过试验来验证和发现。对于本领域技术人员而言，仅仅通过有效次的实验获得对于治疗某类疾病有很好效果的联合用药的具体选择是是非常困难的。
【发明内容】
[0007]1、发明目的
[0008]针对现有的实体瘤治疗中联合用药物的缺乏，本发明目的是提供一种HM-3和钼类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途，采用HM-3联合钼类、紫杉醇类、他滨类药物的方式应用于治疗高表达整合素受体的实体肿瘤的药物中，通过这种联合使用的药物，可以发挥共同的作用。
[0009]2、技术 方案
[0010]方案原理:
[0011]将整合素阻断剂多肽与钼类、紫杉醇类、抗代谢类药物联合使用，是根据这三个药物具有各自不同的作用机制，达到理想的抗肿瘤效果(加强作用++)、降低毒副反应。
[0012]首先，是HM-3是一种靶向多肽，具有整合素抑制作用及血管生成抑制作用。肿瘤血管生成是生殖、生长发育和修复的基础，绝大多数恶性实体肿瘤如肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌和乳腺癌等都是血管依赖性肿瘤。新生血管一方面为肿瘤生长提供营养和氧气，另一方面还是肿瘤转移的重要途径。因此，抑制肿瘤新生血管可以有效抑制肿瘤的发生、发展及转移。肿瘤新生血管受许多细胞因子调控，其中与肿瘤血管生成相关的重要肿瘤血管内皮细胞分子之一是整合素家族的部分成员。整合素是多种细胞外基质成分的受体，广泛存在于细胞表面，是一个相当大的受体家族。这类受体由一条α链和一条β链组成，在与配体的结合中都起作用，不同的α链和β链的组合决定了配体的特异性。到目前为止，已发现15种α链和9种β链。在肿瘤细胞中，整合素的组分发生了复杂的变化，大体上讲，参与组织结构的整合素数量下降，而与细胞迁移有关的整合素数量上升。整合素α5β1、ανβ5、ανβ3等都与血管新生和细胞迁移有关，其中α ν β 3可影响癌变中的几个非常重要的过程。它能与多种细胞外基质的糖蛋白结合，ανβ 3还能够与金属蛋白酶结合，降解细胞外基质，从而更有利于侵入；另外两个受α ν β 3影响的过程是细胞凋亡和血管新生，在参与血管新生的毛细血管内皮细胞上，α νβ3的表达量也升高。在肿瘤血管内皮细胞中，血管生长因子类与整合素的表达有着密切的关系，如VEGF、FGF都能够上调α ν β 3的表达。α ν β 3单克隆抗体能够抑制它的功能，因此能够促进凋亡和抑制血管新生。ΗΜ-3可以靶向于整合素α ν β 3，抑制VEGF表达，从而达到抗肿瘤的效果。[0013]钼类抗肿瘤化学治疗药物作用靶点是增殖细胞的DNA，有类似烷化剂双功能集团的作用，可以和细胞内的碱基结合，使DNA分子链内和链间交叉键联，因而失去功能不能复制。高浓度时也抑制RNA及蛋白质的合成。包括顺钼(DDP)、卡钼(CBP)、草酸钼(奥沙利钼，L-0HP)等。此类药物抗瘤谱广，适用于多数实体瘤，如乳腺癌、卵巢癌、肝癌等；还可以联合用药作为非小细胞肺癌、肝癌等首选药物。顺钼(DDP)主要不良反应为严重的消化道反应、肾脏毒性、其次还有骨髓移植、听神经毒性，均与使用剂量有关。
[0014]紫杉醇类药物包括多西他赛的作用机制是加强微管蛋白聚合作用和抑制微管解聚作用，导致形成稳定的非功能性维管束，因而破坏肿瘤细胞的有丝分裂。微管是真核细胞的一种组成成分，它是由两条类似的多肽(a和p)亚单位构成的微管二聚体形成的。在正常情况下，微管和微管蛋白二聚体之间存在动态平衡。紫杉醇可使二者之间失去这种动态平衡，诱导和促进微管蛋白聚合，防止解聚，稳定微管。这些作用导致细胞在进行有丝分裂时不能形成纺锤体和纺锤丝，抑制了细胞分裂和增殖，从而发挥抗肿瘤作用。
[0015]他滨类抗代谢药物如吉西他滨等是一种破坏细胞复制的二氟核苷类抗代谢物抗癌药，是去氧胞苷的水溶性类似物，对核糖核苷酸还原酶是一种抑制性的酶作用物的替代物，这种酶在DNA合成和修复过程中，对所需要的脱氧核苷酸的生成是至关重要的。本品可掺入核苷酸三磷酸，在伸长的DNA链末端进入DNA，然后再结合另一个脱氧核苷酸，产生一种掩蔽性的链终止作用、从而使DNA不能发生聚合反应。这种作用产生的细胞死亡具有预定程序化的细胞死亡或细胞凋亡(apoptosis)的形态学和生理学特征。
[0016]一种HM-3和钼类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途。
[0017]将所述钼类、紫杉醇类或他滨类药物作为活性成分，并辅以可接受的药用载体制成各种药学上可接受的 制剂。所述钼类为顺钼、锡钼、顺氯氨钼，奈达钼、依钼、卡钼、卡波钼、碳钼、洛钼、奥沙利钼、诺贝钼或赛特钼；紫杉醇类药物为紫杉醇，多西他赛，紫杉醇脂质体，白蛋白结合性紫杉醇；他滨类药物为卡培他滨，吉西他滨或地西他滨。所述实体瘤为高表达整合素受体ανβ3、α5β 1的实体瘤为肺癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胃癌或肠癌。在ΗΜ-3有效剂量下，而其他化学治疗药物减半或减少至临床推测剂量的1/4情况下联合使用。
[0018]采用裸鼠接种人的不同种肿瘤，建立肿瘤模型，当肿瘤体积达到100mm3左右时进行分组:分为阴性对照组，阳性对照组，单独用药组及联合用药组，进行给药；每组小鼠数目在6只以上，符合统计学要求数量，治疗14-21天后，解剖小鼠，计算瘤重，根据瘤重计算每组治疗后的肿瘤抑制率，采用金氏公式进行检验，达到加强作用的肿瘤治疗组写入本发明中。
[0019]3、有益效果
[0020]本发明公开了一种HM-3和钼类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途，将HM-3与奥沙利钼及多西他赛或者希罗达联合使用后，对肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌治疗起到了增效作用。
[0021]经过大量实验获知整合素阻断剂HM-3靶点明确，结合钼类、紫杉醇类或者他滨类合理使用，能够有效抑制肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肠癌等在内的肿瘤增长，集中药物联用可以达到增效的效果。本发明联合用药治疗肿瘤科学、合理、可行有效，能作为制备治疗人类实体肿瘤的治疗药物，极大拓展了肿瘤治疗的治疗谱、降低了毒副作用，具有显著社会价值和市场价值。
[0022](l)HM-3联合奥沙利钼、多西他赛应用对人肺癌H460裸鼠移植瘤的治疗中，单独使用HM-3抑瘤率为49.11%，奥沙利钼、多西他赛联用(比临床剂量推测减半的情况下)为抑瘤率为50.23%，三者联用则达到了协同的效果，抑瘤率为86.11%。
[0023](2)HM-3联合奥沙利钼、希罗达对人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的治疗中，单独使用HM-3抑瘤率为49.12%，奥沙利钼、希罗达联用(比临床剂量推测减半的情况下)为抑瘤率为48.19%，三者联用则达到了协同的效果，抑瘤率为86.89%。
[0024](3) HM-3联合多西他赛、奥沙利钼对人乳腺癌MDA_MB_231裸鼠移植瘤的治疗中，单独使用HM-3抑瘤率为50.38%，多西他赛及奥沙利钼联用(比临床剂量推测减半的情况下)为抑瘤率为49.33%，三者联用则达到了增强的效果，抑瘤率为86.99%。
[0025](4)HM-3联合多西他赛、奥沙利钼对宫颈癌Hela裸鼠移植瘤的治疗中，单独使用HM-3抑瘤率为50.01%,多西他赛及奥沙利钼联用(比临床剂量推测减半的情况下)为抑瘤率为47.11%，三者联用则达到了协同的效果，抑瘤率为83.98%。
[0026](5)奥沙利钼联合HM-3对人卵巢癌A2780裸鼠移植瘤的治疗中，单独使用HM_3抑瘤率为50.11%，奥沙利钼(比临床剂量推测减半的情况下)为抑瘤率为40.88%，二者联用则达到了协同的效果，抑瘤率为82.79%。
[0027](6)HM-3联合奥沙利钼、希罗达对人胃癌MGC-803裸鼠移植瘤的治疗中，单独使用HM-3抑瘤率为46.11%，奥沙利钼、希罗达联用(比临床剂量推测减半的情况下)为抑瘤率为 40.79%，三者联用则达到了增强的效果，抑瘤率为84.12%。
[0028](7)HM-3联合奥沙利钼(或希罗达)对人肠癌HT29裸鼠移植瘤的治疗中，单独使用HM-3抑瘤率为46.34%，奥沙利钼、希罗达联用(比临床剂量推测减半的情况下)为抑瘤率为
41.87%，三者联用则达到了协同的效果，抑瘤率为81.88%。
【专利附图】
【附图说明】
[0029]图1为HM-3联合奥沙利钼、多西他赛应用对人肺癌H460裸鼠移植瘤的抑制作用效果图；
[0030]图2为HM-3联合奥沙利钼、希罗达对人肝癌SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用效果图；
[0031]图3为HM-3联合多西他赛、奥沙利钼对人乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤的抑制作用效果图；
[0032]图4为HM-3联合多西他赛、奥沙利钼对宫颈癌Hela裸鼠移植瘤的体内抑制作用效果图；
[0033]图5为奥沙利钼联合HM-3对人卵巢癌A2780裸鼠移植瘤的抑制作用效果图；
[0034]图6为HM-3联合奥沙利钼、希罗达对人胃癌MGC-803裸鼠移植瘤的抑制作用效果图；
[0035]图7为HM-3联合奥沙利钼(或希罗达)对人肠癌HT29裸鼠移植瘤的抑制作用效果图；
[0036]其中，G2:HM-3 (高剂量)；G3:ΗΜ_3 (中剂量)；G4:化药(高剂量)；G5:化药(中剂量)；G6:联合组1 ;G7:联合组2 ；以上数据均通过SPSS软件T检验分析，以mean±SD表示各组平均瘤重,抑瘤率=(阴性组瘤重-治疗组瘤重)/阴性组瘤重X 100%。
【具体实施方式】
[0037]本发明中，HM-3为多肽分子，人体使用剂量范围是9-27毫克/m2，采用静脉滴注给药方式，每天静脉滴注一次，给药周期为14-21天；建议2-4个周期。
[0038]多西他赛，静脉注射，单药注射剂量为75-100mg/m2，国内使用75mg/m2，联合用药60-75mg/m2,静脉滴注1小时，每3周重复一次。
[0039]奥沙利钼在单独或联合用药时，推荐剂量为130mg/m2，加入250~500ml5%葡萄糖溶液中输注2-6小时。没有主要毒性出现时，每3周(21天)给药1次。调整剂量以安全性，尤其是神经学的安全性为依据。
[0040]希罗达推荐剂量每日2.5g/m2，连用2周，休息1周。每日总剂量分早晚2次于饭后半小时用水吞服。如病情继续恶化或产生不能耐受的毒性时应停止治疗。
[0041]在联合用药中，一种是以HM-3有效剂量与奥沙利钼、多西他塞、希罗达根据人体剂量推测小鼠用量减半剂量下使用，一种是以HM-3减半剂量及根据人体剂量推测小鼠其他化学药物用量减至1/4剂量下使用，在降低了药物使用剂量情况下，各组联合用药都达到了增强效果。
[0042]通常评价两种药物合用后作用强度是否增强而采用金氏公式进行检验，通过组间比较差异的显著性判断合用药物组作用是否强于单用。研究数据运用金氏公式表达式q=E (A+B)(实测合并效应)/EA+EB_EA*EB (预期合并效应)并通过判读q值来评价二药物在联合使用后的治疗效果是否优于单独给药。如果q在0.85-1.15之间为单纯相加(+)，在1.15-2.0之间为增强(++)，q>2.0为显著增强(+++)，在0.85-0.55之间为拮抗(―)，q〈0.55为明显拮抗()。根据生物实验大约有15%的误差，将效应相加的q值扩展为0.85-1.15。q>l.15即为协同作用。
[0043]采用裸鼠接种人的不同种肿瘤，建立肿瘤模型，当肿瘤体积达到100mm3左右时进行分组:分为阴性对照组，阳性对照组，单独用药组及联合用药组，进行给药；每组小鼠数目在6只以上，符合统计学要求数量，治疗14-21天后，解剖小鼠，计算瘤重，根据瘤重计算每组治疗后的肿瘤抑制率，采用金氏公式进行检验，达到加强作用的肿瘤治疗组写入。
[0044]实施例1HM-3联合奥沙利钼、多西他赛对人肺癌H460裸鼠移植瘤的抑制作用
[0045]取生长旺盛期的肺癌组织在无菌条件下碾磨，制备成1 X 107/mL胞悬液，以0.lmL种于小鼠右侧腋下。待肿瘤体积达100mm3左右用游标卡尺测量移植瘤直径，动态观察受试动物抗肿瘤的效应。以尾静脉注射或者皮下注射给药，给药方案见表1。肿瘤直径的测量次数为每隔一天测一次。给药体积为0.2ml/只。阴性对照尾静脉注射等量生理盐水。21天后，小鼠处死，手术剥取瘤块称重。肿瘤体积(tumor volume, TV)的计算公式为:
[0046]TV=l/2XaXb2
[0047]其中a、b分别表示长宽。
[0048]根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume, RTV),计算公式为其中N0为分笼给药时(即屯)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指 标为相对肿瘤增殖率T/C (%)，计算公式如下:[0049]
【权利要求】
1.一种HM-3和钼类、紫杉醇类或他滨类药物在制备实体瘤药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中将所述钼类、紫杉醇类或他滨类药物作为活性成分，并辅以可接受的药用载体制成各种药学上可接受的制剂。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述钼类为顺钼、锡钼、顺氯氨钼，奈达钼、依钼、卡钼、卡波钼、碳钼、洛钼、奥沙利钼、诺贝钼或赛特钼；紫杉醇类药物为紫杉醇，多西他赛，紫杉醇脂质体，白蛋白结合性紫杉醇；他滨类药物为卡培他滨，吉西他滨或地西他滨。
4.根据权利要求1或2所述的的用途，其中所述实体瘤为高表达整合素受体ανβ3、 α5β 1的实体瘤为肺癌、肝癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胃癌或肠癌。
【文档编号】A61P35/00GK103656615SQ201310674338
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月11日 优先权日:2013年12月11日
【发明者】徐寒梅 申请人:南京安吉生物科技有限公司