用于药妆应用的源自油棕植物液的植物提取物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种提取自棕榈油碾磨过程的植物液的植物提取物在用于改善皮肤健康状况的药妆混合物中的使用，其特征在于，所述药妆混合物制备成直接用于皮肤的形式或外用的皮肤病护理品及制剂，其中所述改善皮肤健康状况是由于弹性蛋白酶抑制、胶原蛋白酶抑制、抗氧活性、自由基清除、透明质酸酶抑制和消炎作用；所述酚类化合物的酪氨酸酶抑制活性提升皮肤美白。
【专利说明】用于药妆应用的源自油棕植物液的植物提取物
[0001] 本申请是申请日为2008年4月14日、申请号为200880017954. 6、发明创造名称为 "用于药妆应用的源自油棕植物液的植物提取物"的中国发明申请的分案申请。
【技术领域】
[0002] 本发明涉及具有抗氧性能的药妆混合物，并包括提取自植物材料的混合物。更具 体地说，本发明涉及用于皮肤保健的提取自油棕植物液的含有酚类化合物、果酸和果糖的 植物提取物。
【背景技术】
[0003] 皮肤占据身体的最大表面区域，并充当内部器官的保护层。它是氧化应激的主要 目标，并意图用作给予身体物理的和生化的保护，并具有大量的防御机制。皮肤结构相当复 杂，包括数层，每一层都发挥特定的作用并执行不同的功能。
[0004] 人们已经知道，缺乏适当的皮肤护理可导致各种皮肤问题，其中可能包括皮肤加 速老化、皮肤不适和皮肤病。据有关研究报道，导致这些常见皮肤问题的一个主要罪魁是活 性氧（reactive oxygen species)。相应地，常见的带电生物组分也可引起皮肤的氧化损 伤，因为皮肤容易受此类反应影响。目前也发现，当胶原蛋白变硬并与相邻胶原纤维形成 网状结构时，皮肤会发生老化，从而阻碍了胶原蛋白保持水分和膨胀，所以逐渐导致弹性减 弱。这种情形也可能引起皮肤变得失水，从而使皮下脂肪垫在一段时间后消失。
[0005] 除了以上所述，研究还显示，紫外辐射暴露除了引起皮肤胶原蛋白的降解和结缔 组织的改变外，还导致皮肤的一系列改变，包括起皱、皮肤松弛、色素不均、褐斑、皮革状表 面。
[0006] 随着来自下方脂肪垫和结缔组织给予的支撑的消失，皮肤开始松垂；它显得缺少 弹性并出现皱纹。虽然皱纹、细纹和老年斑随着变老的自然原因形成，但是一种避免它们提 前出现的方法就是避免阳光直晒。
[0007] 另外，过多地暴露于阳光下也有助于自由基的产生。基本上，自由基是在细胞的各 种代谢过程中自然产生的，并且只要在我们的体内有足够的用于处理体内产生的自由基的 抗氧剂，该抗氧剂就可使得自由基在细胞中失活。然而，有时靠机体自身可能无法产生足够 的抗氧剂来使全部产生的自由基失效，导致了细胞受损，进而皮肤老化。所以在这一点上， 人工合成抗氧剂和/或天然抗氧剂作为日常营养补充物是至关重要的。抗氧剂可从我们的 日常饮食中获得，另外常常还作为营养补充物进食。
[0008] 现有防止皮肤老化的方法包括将营养添加剂、抗炎剂混合到化妆品中。 US20040241254揭示了包含棕榈油并用于处理年龄相关的皮肤问题的化妆品配方。现已发 现，许多富于抗氧剂的天然物质在防止皮肤老化中发挥了作用。而且具有抗氧性能的天然 植物提取物代替合成抗氧剂的应用，目前发展地越来越快。
[0009] 依据本发明，来源于油棕植物液的提取物具有促进皮肤健康和减缓皮肤老化的功 能。
[0010] 油棕植物液提取物中的主要组分是酚类、果酸、果糖和甘油。所述酚类化合物具有 有助于最小化由代谢过程或环境暴露产生的体内自由基引起的破坏的抗氧性能。皮肤弹性 由于弹性蛋白酶的活跃下降，弹性蛋白酶是一种分解弹性蛋白的酶。因此对弹性蛋白酶的 抑制将延缓皮肤松垂。胶原蛋白和透明质酸也影响皮肤的弹性、保湿能力和柔软度。构成 皮肤真皮大约90%的胶原蛋白遍布于真皮各处，从而给予皮肤适当的弹性和强度。透明质 酸广泛分布于皮肤、韧带等，在皮肤细胞粘着、细胞保护、皮肤组织形成、组织保湿和柔软度 保持方面均起到了一定作用。胶原蛋白和透明质酸在体内分别被胶原蛋白酶和透明质酸酶 分解，导致水分损失、起皱和松垂。因此，对胶原蛋白酶和透明质酸酶的抑制也可提升皮肤 化学成分，延缓皮肤老化。
[0011] 所述油棕植物液提取物中的酚类化合物显著地抑制了弹性蛋白酶的活性。所述植 物液提取物也具有抑制胶原蛋白酶和透明质酸酶活性的功能。另外，所述提取物具有与皮 肤美白有关的酪氨酸酶抑制活性。
[0012] 因此，本发明的主要目的是提供一种基于从油棕植物液得到的酚类化合物的混合 物，所述混合物在促进皮肤健康并减轻皮肤问题上作用显著。
【发明内容】
[0013] 本发明涉及一种药妆混合物，包含提取自棕榈油碾磨过程的植物液的酚类化合 物，所述混合物能改善皮肤健康状况。
[0014] 本发明进一步涉及处理或减少皮肤皱纹和细纹的方法，包括将有效量的来自所述 混合物的生物活性酚类及其它化合物应用到皮肤上。
[0015] 本发明的详细说明
[0016] 本发明的目的在于，提出从油棕碾磨过程获得的油棕植物液的植物提取物的药妆 应用，其可用于提升皮肤健康状况和延缓皮肤老化。相应地，本发明还涉及从油棕榨油过程 中提取油棕植物液的抗氧剂的提取方法。油棕的加工过程产生了大量的富含酚类化合物、 果酸、果糖和甘油的植物液，所述的酚类化合物、果酸、果糖和甘油可以利用EP1398311中 简要公开的膜过滤技术进一步地富集。
[0017] 所述提取物含有酚类化合物、果酸、果糖和甘油，它们在抑制皮肤老化上具有很好 的整体效应。所述酚类通过多种机制延缓皮肤衰老，包括但不限于弹性蛋白酶抑制、胶原蛋 白酶抑制、抗氧活性、自由基清除、透明质酸酶抑制和消炎作用。所述酚类化合物的酪氨酸 酶抑制活性提升皮肤美白。炎症过程生成可导致疤和皱纹的微小疤痕。油棕酚类化合物的 消炎功能可以缓和、保护和复原肤色及皮肤完整性。油棕酚类化合物的抗菌性能在防止皮 肤感染和提高药妆的稳定性进而增长保质期方面发挥了作用。局部使用的润肤品用于滋养 和调和皮肤，油棕植物液提取物中的甘油和糖通过水合作用支撑皮肤结构。果酸用于通过 增强表皮剥落改善皮肤结构，并且在油棕植物液提取物中还有类似的酸存在。
【专利附图】
【附图说明】
[0018] 图1示出了油棕酚类的弹性蛋白酶抑制分析；
[0019] 图2示出了油棕酚类提取物对氧化的有力抑制。
【具体实施方式】
[0020] 结合实施例对依据本发明的药妆的制备进行了详细描述。但是，本发明不限于这 些实施例。
[0021] 在实施例中，发明人从来自棕榈油碾磨过程中的油棕植物液中离析出了包含酚类 化合物、果酸、果糖和甘油的植物提取物，并且制备含有这些提取物的配方（操作实例）和 不含有这些油棕酚类提取物的混合物（对照例）。
[0022] 本发明着重研究包含酚类化合物的药妆混合物，所述的酚类化合物是强抗氧剂， 且可防止皮肤老化。
[0023] 本发明也对含有如增白和去皱化妆品成分的合成物质的药妆混合物进行了说明， 其中的所述天然化合物与合成物质二者形成协同促进作用。
[0024] 用于本发明的油棕植物液的生物活性提取物可通过任意能够从植物液中提取 酚类化合物的方法制备，如利用标准提取工艺或在美国专利4, 232, 122、美国专利申请 US2003031740和W0/2006/090953中公开的技术。这些提取方法包括但不限于使用乙醇、甲 醇、丙酮、乙酸乙酯和丁醇。
[0025] 除了提取物的直接利用外，利用油棕酚类化合物的不同组分也是可行的。组成提 取物的有效量或有效部分依赖于提取物的纯度。例如，如果使用纯度大约为10%的含有酚 类的粗提取物，提取物的使用通常在混合物重量大约〇. 01?20%的浓度范围内。纯度越 高，达到相同的效果使用的百分比例越小。假设有大体上纯的酚类提取物，例如包含至少 80%活性酚类的提取物，使用水平应在混合物重量的大约0. 01?8%之间。
[0026] 大体上酚类纯的提取物可以任何适于局部应用的形式生产。这些形式包括溶液、 胶体分散系、水包油或油包水悬浮液、乳霜、凝胶、搽剂、凝胶、粉末、泡沫、摩丝等，用于不同 载体形式的药妆的方法是本领域公知的，可在任何标准化妆品文献中找到。
[0027] 大体上纯的酚类提取物也可以任何适于口服的形式生产。这些形式包括液体和粉 末。
[0028] 化妆品的类型并不具体限定，可以是，例如，个人护理产品如护肤霜、搽剂、润肤 水、面霜、清洁剂；化妆品如口红和粉底；或护发产品。所述化妆品可不受限制用于任何形 式。用于外用的皮肤制剂可以是，例如，药膏或各种皮肤病制剂。
[0029] 本发明的混合物可用于预防及处理皮肤中弹性蛋白酶的活性或弹性蛋白水平的 减少导致的问题。例如，所述混合物具有改善老化皮肤硬度和弹性及减少细纹和皱纹的作 用。所述混合物也可用于皮肤美白。而且，本发明的混合物具有一系列的治疗应用，如促进 创伤愈合。所述混合物也可以用于改善皮肤状况，如硬皮病。
[0030] 油棕中酚类化合物的含量
[0031] 100 μ 1的油棕提取物与(λ 2ml的福林-乔卡梯奥试剂（西格玛）、2ml的水和Iml 的15%的Na2CO3混合，并在室温下温育211后，在波长为76511111处测量其吸光度。标准曲线 利用不同浓度的没食子酸（GAE)绘制，总的酚酸含量用没食子酸当量（GAE)表示。
[0032] 下述非何限制性实施例对本发明的药妆及方法进行了说明。
[0033] 实施例
[0034] 除非特别指明，在以下实施例中，所述油棕酚类提取物是不含溶剂的粗提取物。
[0035] 弹件蛋白酶抑制活件
[0036] 弹性蛋白是皮肤结缔组织中的硬蛋白，皮肤弹性主要由其负责。在炎症和皮肤老 化过程中，弹性蛋白分解为可溶性的多肽，真皮中弹性蛋白的量减少。弹性蛋白酶负责弹性 蛋白的降解。因此，抑制弹性蛋白酶的活性可帮助维持皮肤蛋白水平和弹性。故进行分 析实验测定油棕酚类提取物对弹性蛋白酶的抑制。通过测量由胰弹性蛋白酶作用于底物 N-琥珀酰-丙胺酸-丙胺酸-丙胺酸-P-硝基苯胺产生的4-硝基苯胺（4-nitoanilide) 肽段的量，利用分光光度法评估弹性蛋白酶的活性。N-琥珀酰-丙胺酸-丙胺酸-丙胺 酸-P-硝基苯胺西格玛）和其它用于测试的物质在37 °C下预先温育，并通过酶（猪胰弹性 蛋白酶，罗氏）的加入启始反应。被释放的游离4-硝基苯胺的量在30分钟后通过测定波 长为410nm处的吸光度来测量。0. 2M的pH为8. 0的Tris-HCl缓冲液用作阴性对照。分析 基质中最终浓度为20ng/ml的弹性蛋白酶抑制剂作为阳性对照。油棕提取物在分析基质中 的最终浓度为4?20%，相当于60?300ppm的没食子酸当量（GAE)。下图显示了得到的 结果。阴性对照的吸光度最大。对弹性蛋白酶活性的抑制产生较少的4-硝基苯胺和相应 地较小的吸光度。油棕酚类显示出对弹性蛋白酶活性显著的剂量依赖式的抑制功能。所述 油棕酚类提取物表现出大约13%的抑制效应，而代表快速色谱纯化后的纯化滤液3和纯化 滤液4分别表现出了大约92%和98%的抑制效应。可以看出，油棕酚类抑制了弹性蛋白的 降解，并转化为对皮肤的有益效果，如弹性的维持和随之而来的抗老化效应。
[0037] 胶原蛋白酶抑制分析
[0038] 胶原蛋白酶（酶EC 3.4.24.3,5yg)单独或与提取物一起加入到含有PZ肽 (0. 5mg)的0. IM的Tris缓冲液（pH7. 4)中，使总体积为I. 7ml，PZ肽是胶原蛋白酶的底物。 混合物在37°C水浴中温育30min，然后加入Iml的25mM的柠檬酸溶液终止酶反应。加入 5ml的乙酸乙酯混合后，利用紫外分光光度计在波长为320nm处测量有机层的吸光度。胶原 蛋白酶抑制由以下公式计算：
[0039] 胶原蛋白酶抑制百分比=[(Ac-As)/Ac] X 100,其中，Ac表示（含有胶原蛋白酶 的对照的吸光度一不含胶原蛋白酶的对照的吸光度），as表示（含有胶原蛋白酶的样品的 吸光度一不含胶原蛋白酶的样品的吸光度）。
[0040] 与对照相比，油棕提取物表现出显著的胶原蛋白酶抑制活性。
[0041] 透明质酸（HAase)抑制分析
[0042] HAase溶液（7900单位/ml的0· IM的醋酸缓冲液，pH 3. 5)与100 μ 1的样品混合 后，在37°C的水浴温育器中温育20min。加入HAase催化剂（0. Iml的12. 5mM的CaCl2)后 再温育20min。为启始HAase反应，加入250 μ 1含透明质酸底物（I. 2mg/ml)的0. IM醋酸 缓冲液（pH 3. 5)后，在37°C的水浴温育器中温育40min。为终止HAase反应，加入0. Iml的 0. 4N的NaOH溶液和0. Iml的0. 4M的四硼酸钾溶液，然后在沸水中加热3min。待完全冷却 后，加入 3ml 的 DMAB 试剂（4g r_ 二甲基氛基苯甲醒（demethylaminobenaldehyde)、350ml 冰醋酸和50ml的IOM HC1)到反应物中，并在37°C水浴器中温育20min。利用紫外分光光度 计在波长为585nm处进测量HAase反应产物4-乙酰氨基葡萄糖（4-acetylglucosamine)。 HAase抑制活性用相比对照的减少表示；
[0043] 透明质酸酶抑制百分比=[(Ac - As)/Ac] X 100,其中，Ac和As分别是对照和样 品的吸光度。对照用1 %的DMSO溶液代替提取物。
[0044] 油棕提取物具有显著的HAase抑制活性。
[0045] 消炎活性
[0046] 消炎活性采用凯曼环氧化酶（COX)抑制剂检测分析试剂盒（目录No. 560101))按 照制造商的说明书进行测量。采用此试剂盒，观察到了弱的COX活性。
[0047] 抗氧活性分析
[0048] 采用了多种方法确定抗氧活性，其中两种如下所述：
[0049]自由基清除活性分析
[0050] 分析原理
[0051] DPPH'的自由基形式呈现出紫色，在波长为515nm处有最大吸收。抗氧剂如某些酚 类化合物，能够清除DPPH'自由基，从而使紫色的色饱和度降低，这可以通过分光光度法测 量。
[0052] 自由基清除分析
[0053] 将DPPH·的储备液用水稀释到0. 025mg/ml，并使最终溶液中含有50%的甲醇。制 备浓度为300ppm(300 μ g/ml)的没食子酸，用于测试的物质制备成浓度为300ppm GAE的水 溶液。
[0054] 在盛有975μ1的DPPH·溶液的试管中加入25μ1样品。使用分光光度法每隔 0. Imin测定在波长为515nm处的吸光度，连续监测2min。对照用水代替样品，并采用相同 的处理方式。空白含有50%的甲醇代替DPPH'，并用水代替样品。测试值要减掉空白值。
[0055] DPPH·在任意特定吸光度处的浓度均可利用下面的公式从DPPH·标准曲线中计算 得到：
[0056] Y = aX+b
[0057] 其中，Y =吸光度（波长为515nm处）
[0058] X = DPPH·的浓度（Dg/ml)
[0059] a=线性回归系数
[0060] b = y -截距
[0061] 因为标准曲线经过原点，所以b = 0。整理公式：
【权利要求】
1. 提取自棕榈油碾磨过程的植物液的植物提取物在用于改善皮肤健康状况的药妆混 合物中的使用，其特征在于，所述药妆混合物制备成直接用于皮肤的形式或外用的皮肤病 护理品及制剂，其中所述改善皮肤健康状况是由于弹性蛋白酶抑制、胶原蛋白酶抑制、抗氧 活性、自由基清除、透明质酸酶抑制和消炎作用。
2. 根据权利要求1所述的使用，其特征在于，所述植物提取物富含酚类化合物、果酸、 果糖和甘油。
3. 根据权利要求2所述的使用，其特征在于，所述酚类化合物通过弹性蛋白酶抑制、 胶原蛋白酶抑制、抗氧活性、自由基清除、透明质酸酶抑制和消炎作用延缓皮肤衰老；所述 酚类化合物的酪氨酸酶抑制活性提升皮肤美白；所述酚类化合物的消炎功能缓和、保护和 复原肤色及皮肤完整性；所述酚类化合物的抗菌性防止皮肤感染和提高药妆混合物的稳定 性。
4. 根据权利要求2所述的使用，其特征在于，所述甘油和果糖通过水合作用支撑皮肤 结构。
5. 根据权利要求2所述的使用，其特征在于，所述果酸用于通过增强表皮剥落改善皮 肤结构。
6. 根据权利要求1-5中任意一项权利要求所述的使用，所述药妆混合物富含抗氧剂。
7. 根据权利要求6所述的使用，其特征在于，所述药妆混合物制备成药浴品、凝胶、粉 末、汤剂和药膏的形式。
8. 提取自棕榈油碾磨过程的植物液的酚类化合物在用于改善皮肤健康状况的药妆混 合物中的使用，其特征在于，所述药妆混合物制备成直接用于皮肤的形式或外用的皮肤病 护理品及制剂；所述改善皮肤健康状况是由于弹性蛋白酶抑制、胶原蛋白酶抑制、抗氧活 性、自由基清除、透明质酸酶抑制和消炎作用；所述酚类化合物的酪氨酸酶抑制活性提升皮 肤美白。
9. 根据权利要求8所述的使用，其特征在于，所述酚类化合物通过弹性蛋白酶抑制、胶 原蛋白酶抑制、抗氧活性、自由基清除、透明质酸酶抑制和消炎作用延缓皮肤衰老；所述酚 类化合物的酪氨酸酶抑制活性提升皮肤美白；所述酚类化合物的消炎功能可以缓和、保护 和复原肤色及皮肤完整性；所述酚类化合物的抗菌性能防止皮肤感染和提高药妆混合物的 稳定性。
10. 根据权利要求9所述的使用，其特征在于，所述药妆混合物制备成药浴品、凝胶、粉 末、汤剂和药膏的形式。
【文档编号】A61K36/889GK104337965SQ201410363365
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2008年4月14日 优先权日:2007年4月12日
【发明者】拉维加德维·沙姆巴沙穆提, 谭友爱, 卡里亚纳·桑德拉姆·P.·马尼卡姆, 莫哈末·巴斯利·瓦西德 申请人:马来西亚棕榈油协会