三叶青地上部分总黄酮的提纯方法
【专利摘要】一种三叶青地上部分总黄酮的提纯方法，包括预处理步骤、提取步骤和纯化步骤：取三叶青地上部分粉碎成粗粉，加入50～70％乙醇加热回流提取，提取液回收干燥得粗提物；将粗提物用蒸馏水配制成混悬液，调节混悬液的pH值后离心，取上清液，上样于大孔吸附树脂柱上；吸附完毕后静置，先用蒸馏水洗至无混浊后，再用40％～50％乙醇洗脱，收集0.5～2.0BV区间的洗脱液，浓缩，干燥，即得三叶青地上部分总黄酮。本发明操作简单、成本低、易于工业化生产、醇提与纯化效率及制备获得的三叶青地上部分总黄酮有效部位成分含量高，环境污染小。
【专利说明】三叶青地上部分总黄酮的提纯方法
【技术领域】
[0001]本发明具体涉及一种中草药三叶青地上部分总黄酮的提纯方法。
【背景技术】
[0002]三叶青是我国特有的珍稀药用植物，属于葡萄科崖爬藤属植物。三叶青即三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg.)，别名蛇附子、石抱子、三叶扁藤、金线吊葫芦、金丝吊葫芦、破石珠、三叶对等。三叶青以块根或全草入药，分布在浙江、江西、福建、台湾、湖北、广东、广西、四川、贵州、云南等地。据医书记载，三叶青有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功效，常用于治疗高热惊厥、肺炎、哮喘、肝炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬、痈疔疮疖等。
[0003]近年来，三叶青块根因其在抗肿瘤、保肝和免疫调节上的突出作用，大量被药用，与此同时，民间将三叶青地上部分的煎煮液用于辅助抗肿瘤抗炎效果良好，为充分利用三叶青资源，为深入开发利用三叶青地上部分的药用价值，我们对其进行了研宄，研宄结果表明:三叶青地上部分含有黄酮类成分等，药理实验证明，本发明的三叶青地上部分总黄酮提取物具有良好的抗炎解热镇痛作用。
[0004]因此，研宄三叶青地上部分总黄酮提取物制备工艺，对进一步开发安全、有效的三叶青抗炎解热镇痛制剂、充分利用珍稀药用植物三叶青地上部分中药资源具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题，在于提供一种中草药三叶青地上部分总黄酮的提纯方法，其操作简单、成本低、易于工业化生产、醇提与纯化效率及制备获得的三叶青地上部分总黄酮有效部位成分含量高，环境污染小。
[0006]本发明是这样实现的:一种三叶青地上部分总黄酮的提纯方法，包括以下步骤:
[0007](I)预处理:将干燥后的三叶青地上部分粉碎后，得三叶青地上部分粗粉；
[0008](2)提取:采用乙醇回流提取法对三叶青地上部分粗粉进行提取，获得粗提物；
[0009](3)纯化:将所述粗提物用蒸馏水配制成总黄酮含量为2.0?4.0mg/mL的混悬液，并调节混悬液的pH值为3.0?4.0 ;将混悬液离心，取上清液，以1.0?3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；吸附完毕后静置，然后按1.0?3.0BV/h的洗脱速度进行洗脱，先用蒸饱水洗至无混池后，再用3?5BV浓度为40%?50%乙醇洗脱，收集0.5?2.0BV区间的洗脱液，将所述洗脱液回收乙醇，得浸膏，将浸膏于40?60°C减压干燥至干，即得棕黄色粉末状的三叶青地上部分总黄酮。
[0010]进一步地，所述步骤(2)的具体操作方法如下:
[0011]以三叶青地上部分粗粉质量15?30倍的50%?70%乙醇为提取剂，回流提取3次，每次回流时间为2h，合并提取液并回收乙醇，将提取液于40?60°C下减压干燥，获得粗提物。
[0012]进一步地，所述步骤(3)的大孔吸附树脂柱为HPD-100大孔吸附树脂柱，HPD-100大孔吸附树脂柱的径高比为1:4?1:10，且上柱量中，所述三叶青地上部分粗粉与树脂量的比例为2:1?1:1。
[0013]本发明的优点在于:醇提与纯化效率较高，并且制得的总黄酮有效部位成分含量高；采用乙醇回流提取法及乙醇洗脱不仅对环境的污染小，而且价格低廉可回收，易于工业化生产；大孔吸附树脂柱可多次再生利用，再生方法简便易行，能够进一步降低成本；制备工艺简单，具有良好的稳定性和重现性，每批三叶青地上部分总黄酮含量均可达50%以上，且制得的三叶青地上部分总黄酮具有良好的抗炎解热镇痛作用，该制备工艺为三叶青地上部分总黄酮的工业化生产提供了科学依据。
【具体实施方式】
[0014]一种三叶青地上部分总黄酮的提纯方法，包括以下步骤:
[0015](I)预处理:将干燥后的三叶青地上部分粉碎后，得三叶青地上部分粗粉；
[0016](2)提取:采用乙醇回流提取法三叶青地上部分粗粉进行提取，获得粗提物；具体地:
[0017]以三叶青地上部分粗粉质量15?30倍(即w/v)的50%?70%乙醇为提取剂，回流提取3次，每次回流时间为2h，合并提取液并回收乙醇，将提取液于40?60°C下减压干燥，获得粗提物。
[0018](3)纯化:将所述粗提物用蒸馏水配制成总黄酮含量为2.0?4.0mg/mL的混悬液，并调节混悬液的pH值为3.0?4.0 ;将混悬液离心，取上清液，以1.0?3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；所述大孔吸附树脂柱为HPD-100大孔吸附树脂柱，HPD-100大孔吸附树脂柱的径高比为1:4?1:10，且上柱量中，三叶青地上部分粗粉与树脂量的比例为2:1?1:1 ;吸附完毕后静置过夜，然后按1.0?3.0BV/h的洗脱速度进行洗脱，先用蒸馏水洗至无混浊后，再用3?5BV浓度为40%?50%乙醇洗脱，收集0.5?2.0BV区间(即40%?50%乙醇溶液洗脱至0.5倍柱体积时开始收集，一直到2倍柱体积为止)的洗脱液，将所述洗脱液回收乙醇，得浸膏，将浸膏于40?60°C减压干燥至干，即得棕黄色粉末状的三叶青地上部分总黄酮。
[0019]实施例一
[0020]预处理:将干燥后的三叶青地上部分粉碎后，得三叶青地上部分粗粉。
[0021]提取:称取上述三叶青地上部分粗粉270g，加50%乙醇4050mL，回流提取3次，每次2h，合并提取液并回收乙醇，得浸膏粗提物，并置50°C下减压干燥，获得粗提物粉末52.90go
[0022]纯化:采用HPD-100大孔吸附树脂对上述所得的粗提物进行纯化，具体为:将上述获得的粗提物加蒸馏水混悬，使上柱药液的总黄酮含量约为3mg/mL，同时调节该混悬液的PH值为3，将混悬液进行离心，取上清液，以吸附速率为2.0BV/h上样于树脂柱径高比为1:8的HPD-100大孔吸附树脂柱上；吸附完毕静置过夜后进行洗脱，且在洗脱过程中，按2.0BV/h的洗脱速度，先用蒸馏水洗至无混浊后，再用4BV浓度为40%乙醇洗脱，收集
0.5?2.0BV区间洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得浸膏，并将浸膏置于50°C减压干燥至干，得呈棕黄色粉末状的三叶青地上部分总黄酮5.98g，测得其总黄酮含量为56.86%，收率为2.21% (其中收率是根据三叶青地上部分总黄酮与三叶青地上部分粗粉重量之间的比值关系计算的)。
[0023]实施例二
[0024]预处理:将干燥后的三叶青地上部分粉碎后，得三叶青地上部分粗粉。
[0025]提取:称取上述三叶青地上部分粗粉270g，采用乙醇回流提取法对其进行提取，具体为:加60%乙醇6750mL，回流提取3次，每次2h，合并提取液并回收乙醇，得浸膏粗提物，并置40°C下减压干燥，获得三叶青地上部分总黄酮提取物粉末即粗提物60.04go
[0026]纯化:采用HPD-100大孔吸附树脂对上述所得的三叶青地上部分粗提物进行纯化，具体为:将上述获得的粗提物加蒸馏水混悬，使上柱药液的总黄酮含量约为2mg/mL，同时调节该混悬液的PH值为4，将混悬液进行离心，取上清液，以吸附速率为1.0BV/h上样于树脂柱床径高比为1:4的HPD-100大孔吸附树脂柱上；吸附完毕静置过夜后进行洗脱，且在洗脱过程中，按3.0BV/h的洗脱速度，先用蒸馏水洗至无混浊后，再用3BV浓度为50%乙醇洗脱，收集0.5?2.0BV区间洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得浸膏，并将浸膏置于40°C减压干燥至干，得呈棕黄色粉末状的三叶青地上部分总黄酮6.31g，测得其总黄酮含量为55.01%，收率为 2.34%。
[0027]实施例三
[0028]预处理:将干燥后的三叶青地上部分粉碎后，得三叶青地上部分粗粉。
[0029]提取:称取上述三叶青地上部分粗粉270g，采用乙醇回流提取法对其进行提取，具体为:加70%乙醇8100mL，回流提取3次，每次2h，合并提取液并回收乙醇，得浸膏粗提物，并置60°C下减压干燥，获得三叶青地上部分总黄酮提取物粉末即粗提物52.65go
[0030]纯化:采用HPD-100大孔吸附树脂对上述所得的三叶青地上部分粗提物进行纯化，具体为:将上述粗提物加蒸馏水混悬，使上柱药液的总黄酮含量约为4mg/mL，同时调节该混悬液的pH值为3，将混悬液进行离心，取上清液，以吸附速率为3.0BV/h上样于树脂柱床径高比为1:10的HPD-100大孔吸附树脂柱上；吸附完毕静置过夜后进行洗脱，且在洗脱过程中，按1.0BV/h的洗脱速度，先用蒸馏水洗至无混浊后，再用5BV浓度为40%乙醇洗脱，收集0.5?2.0BV区间洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得浸膏，并将浸膏置于60°C减压干燥至干，得呈棕黄色粉末状的三叶青地上部分总黄酮5.46g，测得其总黄酮含量为58.00%，收率为2.02%o
[0031]本发明制备工艺简单，醇提与纯化效率及获得的总黄酮有效部位成分含量高；采用乙醇回流提取及乙醇洗脱纯化不仅对环境的污染小，而且价格低廉可回收，易于工业化生产；且HPD-100型大孔吸附树脂柱可多次再生利用，再生方法简便易行，能够进一步降低成本；另外，本发明具有良好的稳定性和重现性，每批三叶青地上部分总黄酮含量均可达50%以上，且提取物三叶青地上部分总黄酮经药理实验证实具有良好的抗炎解热镇痛作用，故本发明为三叶青地上部分总黄酮的工业化生产并进一步开发相关健康产品提供了科学依据。
【权利要求】
1.一种三叶青地上部分总黄酮的提纯方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)预处理:将干燥后的三叶青地上部分粉碎后，得三叶青地上部分粗粉； (2)提取:采用乙醇回流提取法对三叶青地上部分粗粉进行提取，获得粗提物； (3)纯化:将所述粗提物用蒸馏水配制成总黄酮含量为2.0?4.0mg/mL的混悬液，并调节混悬液的pH值为3.0?4.0 ;将混悬液离心，取上清液，以1.0?3.0BV/h的上样流速上样于大孔吸附树脂柱上；吸附完毕后静置，然后按1.0?3.0BV/h的洗脱速度进行洗脱，先用蒸馏水洗至无混浊后，再用3?5BV浓度为40%?50%乙醇洗脱，收集0.5?2.0BV区间的洗脱液，将所述洗脱液回收乙醇，得浸膏，将浸膏于40?60°C减压干燥至干，即得棕黄色粉末状的三叶青地上部分总黄酮。
2.如权利要求1所述的三叶青地上部分总黄酮的提纯方法，其特征在于:所述步骤(2)的具体操作方法如下: 以三叶青地上部分粗粉质量15?30倍的50%?70%乙醇为提取剂，回流提取3次，每次回流时间为2h，合并提取液并回收乙醇，将提取液于40?60°C下减压干燥，获得粗提物。
3.如权利要求1所述的三叶青地上部分总黄酮的提纯方法，其特征在于:所述步骤(3)的大孔吸附树脂柱为HPD-100大孔吸附树脂柱，HPD-100大孔吸附树脂柱的径高比为1:4?1:10，且上柱量中，所述三叶青地上部分粗粉与树脂量的比例为2:1?1:1。
【文档编号】A61P29/00GK104435401SQ201410648201
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月13日 优先权日:2014年11月13日
【发明者】陈丹, 蔡韦炜, 范世明 申请人:福建中医药大学