本发明属于化学医药领域，具体涉及一种双没食子酸酯衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的应用，以及一种可治疗高尿酸血症以及痛风的药物组合物。
背景技术：
在化学医药领域中，尿酸是人类嘌呤化合物的终末代谢产物。嘌呤代谢紊乱导致高尿酸血症。在正常嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/L，女性高于360μmol/L，即称为高尿酸血症(hyperuricemia)。本病患病率受到多种因素的影响，与遗传、性别、年龄、生活方式、饮食习惯、药物治疗和经济发展程度等有关。根据近年各地高尿酸血症患病率的报道，目前我国约有高尿酸血症者1.2亿，约占总人口的10％，高发年龄为中老年男性和绝经后女性，但近年来有年轻化趋势。随着人们饮食结构的改变和生活水平的提高，高尿酸血症的发病率逐年提高，据报道称，目前约有两成的成年男性处于高尿酸血症的状态。通常，单纯的处于高尿酸血症状态并没有自觉症状，但是如果长时间放任该状态，血液中的尿酸盐将发生结晶，结晶的尿酸盐将沉积在关节、皮下组织、肾脏等部位，进而出现痛风、关节炎、皮下痛风结石、肾脏结石或痛风性肾病等一系列临床表现。因此，适当控制血液中的尿酸值是预防、改善以痛风为代表的高尿酸血症的根本。目前，对血液中尿酸的控制主要是通过以下两种途径实现的：(1)抑制尿酸的生成。尿酸是由次黄嘌呤和黄嘌呤经黄嘌呤氧化酶的作用而生成的。黄嘌呤氧化酶是催化上述反应、进而生成尿酸所必须的酶，因此，抑制黄嘌呤氧化酶(xanthineoxidase,XO)活性可有效的抑制尿酸的形成，进而起到治疗痛风等症状的作用。目前常用的抑制尿酸生成的药物有别嘌呤醇、非布索坦等；(2)促进尿酸的排泄。目前常用的促进尿酸排泄的药物有丙磺舒、苯溴马龙等。上述两种方式均可起到降低血液中尿酸的作用，进而对高尿酸血症引发的痛风、关节炎、皮下痛风结石、肾脏结石或痛风性肾病等病症产生疗效，但是上述药物毒副作用通常较大，例如，别嘌呤醇可引发变态反应(发病率10-15％)、超敏综合症、骨髓抑制等严重的毒副作用；丙磺舒、苯溴马隆则具有刺激胃肠道、引发肾绞痛、激发痛风急性发作等副作用，在一定程度上限制了这些药物的临床应用。没食子酸是在植物中广泛存在的一种化合物，根据文献报道[化学世界，2009(5)，273-276]，没食子酸具有一定的黄嘌呤氧化酶抑制活性，但仅仅报道其体外抑制黄嘌呤氧化酶活性，没有进一步的动物实验数据。我们在后续的研究中，意外发现一系列没食子酸酯衍生物，它们在体外具有相同或者显著高于没食子酸的黄嘌呤氧化酶抑制活性，在体内动物实验中，这些衍生物具有明显高于没食子酸的降低动物血液尿酸的活性。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种双没食子酸酯衍生物及其药学上可接受的盐用于制备治疗高尿酸血症药物的用途，以及一种可治疗高尿酸血症和痛风的药物组合物。本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种具有如式(I)所示结构的双没食子酸酯衍生物及其药学上可接受的盐在制备治疗高尿酸血症药物中的用途，其中：X1、X2、X3、X4彼此独立的选自-H、-OH、-OR、-F、-Cl、-Br、-I、-N(R)2、-C(O)R、-C(O)OR、-CHO、-CN中的一种；R选自-H、取代或未取代的C1至C6的烷烃、环烷烃或者杂环烷烃中的一种；Y1、Y2彼此独立的选自C、P-OH、S或者S＝O中的一种；Z1、Z2彼此独立的选自CHRa、O、NH、NRa或者S中的一种；Ra选自-H或者C1-C8的烷烃、环烷烃中的一种；V单独选自或者V与Ra相连接形成取代或者未取代的C1至C18的烷烃、支链烷烃、取代或未取代的C3至C8环烷烃、-(CH2)m-Rc、苄基、芳香基中的一种；其中Rc为取代或未取代的C3至C8环烷烃或杂环烷烃，m的值为1-8。优选地，所述双没食子酸酯衍生物具有如式(II)所示结构：其中：R选自-H、取代或未取代的C1至C6的烷烃、环烷烃或者杂环烷烃中的一种；Y1、Y2彼此独立的选自C、P-OH、S或者S＝O中的一种；Z1、Z2彼此独立的选自CHRa、O、NH、NRa或者S中的一种；Ra选自-H或者C1-C8的烷烃、环烷烃中的一种；V单独选自或者V与Ra相连接形成取代或者未取代的C1至C18的烷烃、支链烷烃、取代或未取代的C3至C8环烷烃、-(CH2)m-Rc、苄基、芳香基中的一种；其中Rc为取代或未取代的C3至C8环烷烃或杂环烷烃，m的值为1-8。进一步优选地，所述双没食子酸酯衍生物具有如式(III)所示结构：其中：其中：Z1、Z2彼此独立的选自CHRa、O、NH、NRa或者S中的一种；Ra选自-H或者C1-C8的烷烃、环烷烃中的一种；V单独选自或者V与Ra相连接形成取代或者未取代的C1至C18的烷烃、支链烷烃、取代或未取代的C3至C8环烷烃、-(CH2)m-Rc、苄基、芳香基中的一种；其中Rc为取代或未取代的C3至C8环烷烃或杂环烷烃，m的值为1-8。更优选地，所述双没食子酸酯衍生物具有如下所示结构：所述药物还包括药学上可以接受的载体。所述药物添加常规辅料制成临床可接受的片剂、胶囊剂、口服液剂、散剂、滴丸剂、颗粒剂或注射剂。所述高尿酸血症包括高尿酸血症引起的痛风及痛风并发症。所述痛风并发症包括痛风性关节炎、痛风性肾病、尿路结石或心血管疾病。本发明还提供一种用于治疗高尿酸血症的药物组合物，所述药物组合物中含有本发明所述的双没食子酸酯衍生物及其药学上可接受的盐。本发明的优点在于：本发明所述双没食子酸酯衍生物不仅对黄嘌呤氧化酶显示出较强的体外抑制作用，还可明显降低患有高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，且呈现剂量依赖性，且无毒副作用、安全性高，因此可作为潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂和降尿酸药物用于高尿酸血症和高尿酸血症引起的痛风或痛风并发症的治疗。实验例本发明中使用的黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、别嘌呤醇、分析纯级的无水乙醇、氯仿、甲醇、乙酸乙酯、蒸馏水、二甲亚砜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾均为市售产品。本发明所用仪器包括Buchi中压制备液相、Ika搅拌器、Buchi真空旋转蒸发仪、涡旋振荡器、水浴锅、BiofugePrimoR多用途台式高速离心机、METTLERAE240电子天平、BECKMANCOULTERAU480生化分析仪。化合物1为本发明从相应的植物中分离制得；化合物2-8为将前体化合物经过化学转化获得，详情参见实施例1-8。实验例1：双没食子酸酯衍生物对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用溶液配制：磷酸盐缓冲溶液：称取19.48g的K2HPO4.3H2O和1.99g的KH2PO4溶于500mL蒸馏水中，配成浓度为0.2mmol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.5)；黄嘌呤底物溶液：称取黄嘌呤15.2mg，溶解于250mL蒸馏水中，配成浓度为0.4mmol/L的黄嘌呤底物溶液；黄嘌呤氧化酶溶液：取黄嘌呤氧化酶5U，用上述磷酸盐缓冲溶液稀释至160mL，配成浓度为80U/L的黄嘌呤氧化酶溶液，4℃保存；样品和阳性对照溶液：精密称取样品(化合物1-8)、没食子酸，别嘌呤醇(作为阳性对照)，分别用二甲亚砜溶解、蒸馏水稀释，配成浓度为0.01-2μmol/L的不同浓度的溶液进行测试(其中二甲亚砜的最终浓度小于1％)。抑制作用测试：样品组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、样品溶液(化合物1-8)100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，涡旋震荡5秒后置于25℃水浴锅中反应5分钟，反应完毕后加入1.5mL无水乙醇，涡旋震荡5秒终止反应。反应液经3500rpm离心5分钟，吸取200μL到1.5mL离心管中，用生化分析仪分别检测每个样品的UA值，每个样品平行操作三次取平均值。空白对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、磷酸盐缓冲溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，同法检测空白对照组的UA值，平行操作三次取平均值。阳性对照组测试：在2mL离心管中依次加入黄嘌呤底物溶液200μL、阳性对照溶液100μL和黄嘌呤氧化酶溶液200μL，同法检测阳性对照组的UA值，平行操作三次取平均值。测试结果：根据黄嘌呤氧化酶抑制率＝[(空白对照组UA值－样品组UA值)/空白对照组UA值]*100，计算抑制率；酶促反应中的药物浓度C＝C0*0.1/3.1(C0为样品溶液浓度)；将药物浓度与抑制率进行回归，得回归方程；根据回归方程计算抑制率为50％时的C值，即半数抑制浓度IC50，结果如表1所示。表1化合物1-8对黄嘌呤氧化酶的体外抑制作用(IC50，μmol/L)受试化合物IC50化合物10.15化合物20.13化合物30.22化合物40.25化合物50.31化合物60.19化合物70.31化合物80.72没食子酸0.32阳性对照0.07本发明所述双没食子酸酯衍生物对黄嘌呤氧化酶显示出较强的体外抑制作用，可作为潜在的黄嘌呤氧化酶抑制剂用于高尿酸血症的治疗。实验例2：双没食子酸酯衍生物对降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平试验动物及分组：健康雄性KM小鼠80只，体重为15-18g，由上海灵畅生物科技有限公司提供；按每笼5只进行分笼处理后，在苏州凯祥生物科技有限公司的屏障系统内适应性饲养4天，从80只小鼠中选取体重集中的70只小鼠按体重随机平均分为7组，每组10只，分别为空白对照组，高尿酸血症模型组，阳性对照组，没食子酸组，受试化合物组(分别为本发明化合物2、5、8)。高尿酸血症的造模：适应期过后随即对小鼠进行灌胃给药，每天上午灌胃1次，其中受试化合物组和没食子酸组用纯水进行混悬，按照20mg/kg进行灌胃；阳性对照非布司他用纯水进行混悬，按照2.5mg/kg进行灌胃；空白对照组和高尿酸血症模型组均用纯水灌胃进行对照，连续灌胃7天；在第7天上午灌胃0.5小时后对小鼠进行腹腔注射造模，其中空白对照组腹腔注射0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液；高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试化合物组注射氧嗪酸钾(OA)，用CMC-Na溶液进行溶解，注射量均为300mg/kg体重；腹腔注射1.5小时后摘除小鼠的眼球进行采血，采血容量不低于0.5mL，血样采集后于室温放置约1小时，待血液完全凝固后于3500rpm/4℃条件下离心10分钟，取血清在同等条件下复离5分钟，而后取0.2mL血清使用生化分析仪检测UA值；用Excel和SPSS对数据进行统计分析，计算平均数和SD，经单因素方差分析后比较各实验组的组间差异，与空白对照组相比，高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试化合物组小鼠的血清尿酸水平显著提高，有显著性差异，表明造模成功。表2化合物2、5、8对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响(μmol/L)注：**表示与高尿酸血症模型组相比，P<0.01(t-test检验)。本发明所述双没食子酸酯衍生物能够明显降低患有高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，与高尿酸血症模型组相比具有统计学意义，可作为潜在降尿酸药物用于高尿酸血症的治疗。实验例3：双没食子酸酯衍生物降低高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的量效关系研究试验动物及分组：健康雄性KM小鼠100只，体重为13-15g，由上海灵畅生物科技有限公司提供；按每笼5只进行分笼处理后，在苏州凯祥生物科技有限公司的屏障系统内适应性饲养4天，从100只小鼠中选取体重集中的90只小鼠按体重随机平均分9组，每组10只，分别为空白对照组，高尿酸血症模型组，阳性对照组非布司他，受试化合物组(共6组，分别为本发明化合物2、4，每个化合物分3种剂量)。高尿酸血症的造模：适应期过后随即对小鼠进行灌胃给药，每天上午灌胃1次，其中受试化合物组，化合物用纯水混悬，分别按照10mg/kg、50mg/kg、200mg/kg三种剂量进行灌胃；阳性对照组，非布司他用纯水混悬，按照2.5mg/kg进行灌胃；空白对照组和高尿酸血症模型组均用纯水灌胃进行对照，连续灌胃7天；在第7天上午灌胃0.5h后对小鼠进行腹腔注射造模，其中空白对照组腹腔注射0.5％CMC-Na溶液；高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试化合物组注射氧嗪酸钾(OA)，用CMC-Na溶液进行溶解，注射量均为300mg/kg；腹腔注射1.5h后摘除小鼠的眼球进行采血，采血容量不低于0.5mL，血样采集后于室温放置约1h，待血液完全凝固后于3500rpm/4℃条件下离心10min，取血清在同等条件下重复离心5min，而后取0.2mL血清使用生化分析仪检测UA值；用Excel和SPSS对数据进行统计分析，计算平均数和SD，经单因素方差分析后比较各实验组的组间差异，与空白对照组相比，高尿酸血症模型组、阳性对照组和受试化合物组小鼠的血清尿酸水平显著提高，有显著性差异，表明造模成功。表3不同剂量化合物对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平的影响注：*表示与高尿酸血症模型组相比，P<0.05；**表示与高尿酸血症模型组相比，P<0.01(t-test检验)。本发明所述双没食子酸酯衍生物能够明显降低患有高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，且呈现剂量依赖性，与高尿酸血症模型组相比具有统计学意义，可作为潜在降尿酸药物用于高尿酸血症的治疗。具体实施方式实施例1：本发明化合物1的提取与表征取余甘子药材5kg，粉碎，用5L水在保持微沸的状态下提取40min。将提取液真空浓缩至1L，浓缩液用DiaionHP-20大孔吸附树脂进行柱层析分离，分别用水、30％乙醇、60％乙醇、95％乙醇为洗脱液进行洗脱。取20g水洗脱的洗脱液用反相C18硅胶进行柱层析分离，用5％-10％的乙醇为洗脱液进行洗脱，即可得到本发明化合物1；对其进行检测及表征数据如下：化合物1：C20H20O14，分子量485[M+H]+1H-NMR(MeOH-d4,400MHz)δ:7.12(2H,s),7.06(2H,s),5.68(1H,d),4.54(1H,dd)4.39(1H),4.01(1H,m),3.70(1H,m),3.53(1H,m),.3.24(1H,m)；13C-NMR(MeOH-d4,100MHz)δ:168.0,166.6,146.1,146.1,140.1,139.5,139.5,120.9,120.9,120.2,120.2,110.2,109.8,109.8,,95.6,77.6,76.1,73.7,70.8,64.1。可见其结构正确。实施例2：本发明化合物2的制备与表征本发明化合物2-8可采用如下合成路线制备：本实施例中，按照以下的合成路线制备本发明的化合物2：具体操作如下:(1)3,4,5-三苄基苯甲酸的合成将17.0g没食子酸溶在800ml的二甲基甲酰胺(简称DMF，下同)中，并使用氮气保护，25℃下分批加入113g无水碳酸钾，搅拌1h后，升温到40℃，再将143ml苄溴在30min内滴加到反应体系中；滴加完毕后，将反应混合液在40℃下搅拌12h；利用TLC点板显示结果确定反应进行完全后，停止加热，使反应温度降至室温25℃；将400ml水和1L的乙酸乙酯加到反应体系中，分液萃取，有机相用500ml水洗涤三次，然后用无水硫酸钠干燥，真空浓缩至干；将干燥物溶于500ml乙醇和500ml的5M(即mol/L)氢氧化钠溶液的混合液中，回流搅拌10h，利用TLC显示结果确定水解完全后，将混合液冷却到室温，向其中加入500ml水，再用浓盐酸调节pH值到2，收集析出的固体。将所得固体在1L甲醇中重结晶，得到37.5克白色固体(产率85％)，即为3,4,5-三苄基苯甲酸(见合成路线中的化合物A)；(2)3,4,5-三苄基苯甲酰氯的合成取10g步骤1)中制备得到的3,4,5-三苄基苯甲酸，溶在20ml二氯亚砜中，并使用氮气保护，在65℃下搅拌3.5h，然后真空旋蒸除去多余未反应的二氯亚砜，将所得的油状物用100ml正己烷和100ml甲苯分别共蒸两次以彻底除去多余未反应的二氯亚砜，即得固体的3,4,5-三苄基苯甲酰氯(见合成路线中的化合物B)。(3)双(3,4,5-三苄基苯甲酸)乙二醇酯的合成分别取2g的4-二甲氨基吡啶(简称DMAP，下同)、3g乙二醇和10ml吡啶，溶于150ml二氯甲烷中，并使用氮气保护，在室温下搅拌；取步骤2)中制备得到的固体的3,4,5-三苄基苯甲酰氯，溶于100ml二氯甲烷中，并滴加到上述DMAP、乙二醇、吡啶、二氯甲烷构成的反应体系中，回流搅拌5h，然后将混合液浓缩，将残余物经硅胶柱纯化(sil-gel)，用石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱，即得19g的双(3,4,5-三苄基苯甲酸)乙二醇酯(见合成路线中的化合物C)；(4)双(3,4,5-三羟基苯甲酸)乙二醇酯的合成取10g步骤3)中制备得到的双(3,4,5-三苄基苯甲酸)乙二醇酯溶于200ml甲醇中，再将500ml的10％Pd-C催化剂缓慢的加入到反应体系中，再置换氢气，在氢气环境下搅拌4h，利用TLC显示结果确定反应完全后，过滤，滤液旋干，然后用硅胶柱纯化(silicagel)，用石油醚-乙酸乙酯体系梯度洗脱，得到3.5g白色固体，即得化合物2。对产物进行检测及表征数据如下:化合物2:C16H14O10，分子量367[M+H]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ6.91(s,4H),4.30(t,4H)；13CNMR(100MHz,CD3OD)δ165.1(C×2),146.4(C×4),141.5(C×2),120.9(C×2),109.6(C×4),64.5(C×2)。可见其结构正确。实施例3：本发明化合物3的制备与表征本实施例中，本发明化合物3采用与化合物2相同的合成路线以及合成方法制备，区别仅在于，将步骤3)中的乙二醇替换为哌嗪，即可得到本发明化合物3，对产物进行检测及表征数据如下：化合物3:C18H18O8N2，分子量391[M+H]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ6.91(s,4H),3.45(t,4H)；13CNMR(100MHz,CD3OD)δ168.1(C×2),146.4(C×4),137.1(C×2),130.4(C×2),108.7(C×4),48.9(C×4)可见其结构正确。实施例4：本发明化合物4的制备与表征本实施例中，本发明化合物4采用与化合物2相同的合成路线以及合成方法制备，区别仅在于，将步骤3)中的乙二醇替换为邻苯二酚，即可得到本发明化合物4，对产物进行检测及表征数据如下：化合物4:C20H14O10，分子量415[M+H]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.12(s,4H),7.45(d,2H),7.39(t,2H)；13CNMR(100MHz,CD3OD)δ166.7(C×2),146.7(C×4),145.3(C×2),140.9(C×2),126.1(C×2),125.4(C×2),120.1(C×2),109.7(C×4)。可见其结构正确。实施例5：本发明化合物5的制备与表征本实施例中，本发明化合物5采用与化合物2相同的合成路线以及合成方法制备，区别仅在于，将步骤3)中的乙二醇替换为对二苯甲醇，即可得到本发明化合物5，对产物进行检测及表征数据如下：化合物5:C22H18O10，分子量443[M+H]+，1HNMR(400MHz,CD3OD)δ6.95(s,4H),7.04(d,4H),5.18(s,4H)；13CNMR(100MHz,CD3OD)δ166.4(C×2),146.1(C×4),141.3(C×2),134.8(C×2),126.9(C×4),120.3(C×2),109.7(C×4),65.6(C×2)。可见其结构正确。实施例6：本发明化合物6的制备与表征本实施例中，本发明化合物6采用与化合物2相同的合成路线以及合成方法制备，区别仅在于，将步骤3)中的乙二醇替换为二聚乙二醇，即可得到本发明化合物6，对产物进行检测及表征数据如下：化合物6:C18H18O11，分子量411[M+H]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ6.97(s,4H),4.35(t,4H),3.94(t,4H)；13CNMR(100MHz,CD3OD)δ166.3(C×2),146.9(C×4),140.5(C×2),121.7(C×2),110.3(C×4),69.0(C×2),64.3(C×2)。可见其结构正确。实施例7：本发明化合物7的制备与表征本实施例中，本发明化合物7采用与化合物2相同的合成路线以及合成方法制备，区别仅在于，将步骤3)中的乙二醇替换为1,3丁二醇，即可得到本发明化合物7，对产物进行检测及表征数据如下：化合物7:C18H18O10，分子量395[M+H]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ6.96(s,4H),4.25(t,2H),4.13(m,1H),2.21(q,2H),1.37(d,3H)；13CNMR(100MHz,CD3OD)δ165.9(C×2),146.7(C×4),140.6(C×2),121.6(C×2),109.6(C×4),67.6,59.5,35.5,19.9。可见其结构正确。实施例8：本发明化合物8的制备与表征本实施例中，本发明化合物8采用与化合物2相同的合成路线以及合成方法制备，区别仅在于，将步骤3)中的乙二醇替换为姜黄素，即可得到本发明化合物8，对产物进行检测及表征数据如下：化合物8:C18H18O11，分子量411[M+H]+1HNMR(400MHz,CD3OD)δ7.60(d,2H),7.40(s,2H),7.36(d,2H),7.21(d,2H),7.12(s,4H),6.91(d,2H),4.59(s,2H),3.83(s,6H)；13CNMR(100MHz,CD3OD)δ198.9(C×2),165.2(C×2),151.5(C×2),146.1(C×4),142.8,(C×2),141.2(C×2),137.6(C×2),131.8(C×2),130.4(C×2),125.6(C×2),124.4(C×2),121.9(C×2),110.9(C×2),110.0(C×4),55.8(C×2),51.9。可见其结构正确。实施例9：本发明所述药物组合物片剂【处方】称取处方量的双没食子酸酯衍生物化合物2、淀粉和L-HPC，混合，过60目筛三次，混合均匀；加入10％的淀粉浆适量制软材，制粒，干燥，整粒后，加入微粉硅胶、硬脂酸镁混合均匀，压片，包薄膜衣，即得。实施例9：本发明所述药物组合物胶囊剂【处方】称取处方量的双没食子酸酯衍生物化合物5和上述辅料，过60目筛三次，混合均匀，装入胶囊即得。显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。