具有控释特征的装载肽的PLGA微球体的制备的制作方法

本发明涉及包含肽活性药用成分的可生物降解的聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)“PLGA”微球体的制备，以及如何实现控释特征。具体地，本发明涉及乳液溶剂萃取/蒸发方法，其中肽从聚合物基质的释放由溶剂蒸发步骤期间的温度特性(曲线，profile)控制。

发明背景

肽类药物通常全身给药，例如肠胃外给药，因其差的口服吸收和在胃液中高度不稳定性。然而，肠胃外给药可能痛苦且引起不适，尤其重复每日给药。为了使患者注射次数最小化，将药物物质作为贮库(depot)制剂来有利地施用。作为可生物降解的聚合物中贮库制剂——例如作为微球体或植入物——的肽类药物的肠胃外给药已经被提出在聚合物内的停留时间后能够使肽类药物缓释(持续释放，sustained release)，所述聚合物保护肽免受生物介质的酶促和水解影响。可注射的贮库制剂的共同缺点是血浆水平的波动，如高峰值水平，其在整个释放期内导致意外药理副反应和接近零的血浆水平。治疗相关的血液水平在长时间内是难以实现的，令人满意的肽释放特性实际上仅在极少数情况下得到。

控制处于PLGA微球体形式的肠胃外贮库的肽释放特征的确定因素包括肽形式(即游离的肽、盐形式)、聚合物类型(即，分子量、丙交酯和乙交酯的比例、直链或支链的结构、末端基团)、载药量、颗粒尺寸和颗粒孔隙率和药物在聚合物基质内的分布(US 5,538,739)。

少数商业长效释放药物微球体制剂可在市场购买。SANDOSTATIN 是市售的肠胃外贮库制剂，包括醋酸奥曲肽活性肽。其尤其适用于肢端肥大症患者的长期维持治疗、和与恶性类癌瘤和血管活性肠肽瘤(vipoma肿瘤)相关联的严重腹泻和潮红(flushing)的治疗。批准剂量为10、20和30mg(和对于某些国家，如美国和日本的肢端肥大症患者，高达40mg)的SANDOSTATIN 允许每月一次臀肌注射。SANDOSTATIN 注射后的奥曲肽药代动力学特性反映了从聚合物基质的释放特性和其生物降解。在人的单次肌肉内注射后，奥曲肽浓度达到给药后1小时内短暂初始峰值，随后在24小时内逐渐减小到低的不可检测的水平。第1天该初始释放后，奥曲肽在随后7天保持大多数患者内的亚治疗(sub-therapeutic)水平。此后，奥曲肽浓度再次增加，并且在大约第14天(大约注射后2-3周)达到稳定水平，稳定水平保持在随后3到4周期间，然后在后6周期间下降(用于肌内注射的悬浮液的SANDOSTATIN 10mg、20mg或30mg的粉末和溶剂的产品特征的概述，2013)。与上述一致并且根据现有的文献数据，大鼠内SANDOSTATIN LAR的预期释放特性遵循相同的模式(AAPS PharmSciTech，Vol.12，No 4(2011))。

有许多用于肽在PLGA微球体内的微囊包封技术。实验室规模和商业生产中最广泛使用的技术包括相分离/凝聚技术、喷雾干燥和单或双乳液/溶剂蒸发技术(PDA J Pharm Sci and Tech 2008，62 125-154；Microencapsulation Methods and Industrial Applications Second Edition)。

1.在相分离或凝聚技术中，肽/蛋白质的水溶液被乳化，或可替代地，肽/蛋白质以固体形式分散在含有二氯甲烷和PLGA的溶液中。硅油以限定的速率加入到该分散体，减少了聚合物在其溶剂中的溶解性。富聚合物液相(凝聚层)包封分散的肽/蛋白质分子，并且初期(embryonic)的微球体经受硬化并用庚烷洗涤。这个过程对聚合物性质相当敏感，并且残留溶剂也是重要的问题。

2.在喷雾干燥技术中，聚合物溶解在挥发性有机溶剂如二氯甲烷或丙酮中。蛋白质通过均化作为固体悬浮在该有机溶液中或作为水溶液在该有机溶液中被乳化。在此之后，将所得到的分散体通过(加热)喷嘴雾化成加热的空气流。有机溶剂蒸发，从而形成具有通常尺寸为1-100m的微球体。微球体收集在旋风分离器中。为了彻底清除有机溶剂，真空干燥或冷冻干燥步骤可在下游进行。所得的聚合物微球体的内部结构取决于喷雾干燥之前聚合物中的肽/蛋白质的溶解度，导致储器(reservoir)或基质类型产物的形成。当初始分散体是溶液时，喷雾干燥之后得到的最终产物是基质或整体类型，即，具有溶解或分散性质的活性成分的聚合物颗粒(限定为微球体)。相反，当初始分散体处于悬浮时，得到的产物是储器类型，即，包封溶解的活性成分的液核的不同聚合物外壳(envelope)/壳(shell)(限定为微胶囊)。

3.水包油(O/W)和水包油包水(W/O/W)是表示分别微球体制备期间单和双乳液形成的两个水合技术。在这些过程中，肽/蛋白质分别溶解在有机溶剂(如醇)或水溶液中，然后与聚合物的有机溶液(不可与水混溶)混合或乳化以形成溶液或油包水(W/O)乳液。二氯甲烷用作PLGA的有机溶剂并且O/W主乳液利用高剪切均化或超声破碎形成。该主乳液然后迅速转移至含有通常为聚乙烯醇(PVA)的稳定剂的过量水介质中。再次均化或剧烈搅拌对于初步形成W/O/W双乳液是必要的。随后通过热、真空、或二者除去(通过蒸发)有机溶剂引起聚合物和核的相分离以产生微球体。代替溶剂蒸发，用含有或不含有稳定剂的大量水进行的溶剂提取也可被施用以得到含有肽/蛋白质的微球体。虽然将W/O/W微囊包封技术似乎在概念上可简单地施用，但是颗粒形成过程是相当复杂的，并且许多工艺参数正在对装载肽/蛋白质的PLGA微球体的性质具有影响或影响装载肽/蛋白质的PLGA微球体的性质。

到现在为止，在乳液/溶剂蒸发技术的蒸发步骤期间施用的温度特性还没有被认定为影响肽从聚合物基质释放的特征的关键工艺参数。相反，通常施用略高于有机溶剂沸点的恒温下的处理(或当减压/真空用于加速溶剂蒸发时略高于溶剂的蒸气压)。

这些类型的制剂的典型释放机制包括三个阶段，其一般可表示为初始释放阶段(阶段1)、水合阶段(阶段2)和主要释放阶段(阶段3)，主要释放阶段是扩散控制的，但是由聚合物基质侵蚀所促进。当聚合物分子量低于临界值，并因此可发生质量损失时，药物释放在滞后时间后开始(Faisant N，Siepmann J，Benoit JP.PLGA-based microspheres：elucidation of mechanisms and a new，simple mathematical model quantifying drug release.Eur J Pharm Sci.2002May；15(4)：355-66；Korber M.PLGA erosion：solubility-or diffusion-controlled？Pharm Res.2010Nov；27(11)：2414-20)。本领域需要改进的制备方法以控制肽类药物物质从微球体的聚合物基质的释放特性。

技术实现要素：

本发明涉及单或双乳液/溶剂蒸发技术，用于包含肽类药物——特别是奥曲肽——的缓释PLGA微球体的制备，其中肽从聚合物基质的释放是通过在溶剂蒸发步骤期间施用的温度特性来控制。其他肽包括：艾塞那肽(exenatide)、亮丙瑞林(leuporelin)、戈舍瑞林(goserelin)、利拉鲁肽(liraglutide)和替度鲁肽(teduglutide)。

在一方面中，本发明涉及其中溶剂蒸发步骤是在受控温度下进行，在蒸发步骤期间受控温度升高以引起微球体的凝固的方法。所得到的微球体通过筛分收集、洗涤、并在过滤干燥器中在真空下最后干燥，以提供自由流动的粉末。

我们提出作为本发明特征的用于制备肽的聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物微球体的方法，其中肽也可处于药学上可接受的盐的形式，所述方法包含：

a.将肽、或其盐溶解在可混溶于水并且任选地也含有水的至少一种有机溶剂中，以形成水相；

b.在合适的油相中形成水包油或水包油包水的乳液，所述油相包含聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物的有机溶液，溶液与水相不可混溶；

c.通过控制蒸发步骤期间的温度和提高蒸发步骤期间的温度以从乳液蒸发a中所使用的至少一种有机溶剂以形成微球体。

在进一步的方面中，如通过体外和体内数据证实的微球体的释放特征由在溶剂蒸发期间温度增加的程度控制。更具体地说，溶剂蒸发期间的温度通过从15至25℃的起始温度，优选约20℃而增加温度。优选达到的最高温度高达38℃或38°。温度经过20分钟到3个小时的时间升高。在温度升高的时间后干燥可以长时间持续。优选温度增加的速率为0.1℃/min-1℃/min。温度上升可以在该期间是恒定的或可以是分阶段的。分阶段指的是每个变化是温度的阶跃变化，然后该温度在下一个变化前保持一段时间。此外，在蒸发阶段期间也会有分阶段和恒定的温度变化的混合。

术语“释放特征”是指在方法中的制剂的溶解特性，其与单次肌内注射后大鼠内制剂的体内PK特性相关联。在一个方面中，在体外溶解特性和通过施用一室模型从大鼠的血浆浓度曲线的反褶积计算出的体内释放特性之间的A型体内体外相关性已经确定。

更具体地说，“溶解特性”指的是作为时间函数在37℃下1mM pH4.0醋酸盐缓冲液中从微球体释放的奥曲肽的量或数量。

释放特征由初始突发(burst)(阶段1)、滞后时间(阶段2)和主要释放阶段(阶段3)的持续时间和斜率表示。更具体地说，溶解特性由其中常数y₀反映初始突发的以下方程拟合，常数x₀反映滞后时间并且常数a和b描述主要释放阶段。

本发明涉及用于包含药用活性肽的PLGA微球体制备的乳液(单或双)/溶剂蒸发法，其中溶剂蒸发步骤期间温度增加的速率用于控制包封的肽的释放特征。更具体地，溶剂蒸发阶段期间温度增加的速率用于控制肽释放特性的滞后时间，肽释放特性的滞后时间通过计算的微球体的溶解特性的x₀常数表示。所得到的微球体的释放特性的滞后时间在37℃下1mM pH4.0醋酸盐缓冲液中进行测试。

更具体地说，单乳液/溶剂蒸发技术包括以下步骤(图1)：

i.奥曲肽溶于适量的合适的溶剂(优选甲醇)中。

ii.聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物溶解在二氯甲烷中，并且溶液冷却至10℃或以下，优选5℃或以下。

iii.将两种溶液在剧烈搅拌下混合在一起以形成分散的所述油相。

iv.含水的所述连续相通过将磷酸氢二钠和磷酸二氢钾在PVA溶液中溶解制成，并冷却至10℃或以下，优选5℃或以下。

v.将分散相和连续相混合在一起，优选使用在线高剪切分散器，形成所需粒度分布的半固体微球体。连续相的流动通过蠕动泵实现，而连续比率的流动通过注射泵实现。

vi.所形成的微球体在搅拌下从出口转移至控制在15和25℃之间——优选约20℃——的合适的容器中。

vii.如本文描述，微球体的硬化是通过逐渐增加而实现。

viii.在总干燥几个小时(约4小时)后，干燥的微球体转移到过滤干燥器。

ix.颗粒在过滤干燥器中用水洗涤，优选在室温下，并且在排水之后将微球体放置以干燥至少12小时，优选24小时，优选在10毫巴真空下并轻轻搅拌。

相应地，双乳液/溶剂蒸发技术包括以下步骤(图2)：

i.奥曲肽溶解在适量水中

ii.聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物溶解在二氯甲烷中，溶液冷却至10℃或以下，优选5℃或以下。

iii.两种溶液优选用数字T25 ULTRA-TURRAX顶部安装的分散器在20.000rpm下乳化1分钟，形成分散的所述油相，并冷却至10℃或以下，优选5℃或以下。

iv.含水连续相通过将磷酸氢二钠和磷酸二氢钾溶解在PVA溶液中制成，并冷却至10℃或以下，优选5℃或以下。

v.将分散相和连续相混合在一起，优选使用在线高剪切分散器，形成所需粒度分布的半固体微球体。连续相的流动通过蠕动泵实现，而连续比率的流动通过注射泵实现。

vi.所形成的微球体在搅拌下从出口转移至控制在15和25℃之间——优选约20℃——的反应容器中。

vii.如本文描述，微球体的硬化是通过逐渐增加而实现。

viii.在总干燥几个小时(约4小时)后，干燥的微球体转移到过滤干燥器。

ix.颗粒在过滤干燥器中用水洗涤，优选在室温下，并且在排水之后将微球体放置以干燥至少12小时，优选24小时，优选在10毫巴真空下并轻轻搅拌。

附图说明

图1a：双乳化方法示意图

图1b：单乳化方法示意图

图2a：制剂1a-1c粒度分布图

图2b：制剂2a-2c粒径分布图

图3a：制剂1a-1c的SEM和横截面SEM图像

图3b：制剂2a-2c的SEM和横截面SEM图像

图4a：Sandostatin LAR和制剂1a-1c的比较溶解特性

图4a：Sandostatin LAR和制剂2a-2c的比较溶解特性

图5：Sandostatin LAR与制剂1a和2c在大鼠内的血浆浓度特性

图6a：体内观察到的和反向计算(back-calculated)的Sandostatin LAR血浆浓度比较

图6b：体内观察到的和反向计算的制剂1a血浆浓度比较

图6c：观察到的和预测的制剂2c血浆浓度之间的比较

发明详述

本发明提供了醋酸奥曲肽的缓释制剂，释放特征通过在制备过程的溶剂蒸发步骤期间控制和提高温度来控制。

奥曲肽(也称为(4R，7S，10S，13R，16S，19R)-19-[(2R)-2-氨基-3-苯基丙烷酰胺基]-10-(4-氨基丁基)-16-苄基-N-[(2R，3R)-1，3-二羟基丁-2-基]-7-(1-羟乙基)-13-(1H-吲哚-3-基甲基)-6，9，12，15，18-五氧杂-1，2二硫杂-5，8，11，14，17-五氮杂环二十碳烷-4-甲酰胺，优选处于醋酸盐(或任何其它药学上可接受的盐)的形式，或者也被称为4D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-N-((1R，2R)-2-羟基-1-(羟甲基)丙基)-L-半胱氨酰胺环(2-7)-二硫化物醋酸酯(盐)或L-半胱氨酰胺-D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-N-(2-羟基-1-(羟基甲基)丙基)-环(2-7)-二硫化物(R-(R^*，R^*))，醋酸酯(盐))是天然存在的激素生长抑素的合成的八肽(DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-醇)类似物，并且被批准用于在神经内分泌紊乱如肢端肥大症和胃肠胰神经内分泌肿瘤中的肿瘤控制。醋酸奥曲肽的化学结构如下所示：

用于制备根据本发明PLGA微球体的合适的市场上可获得的聚合物包括，但不限于Evonik Industries AG的和LAKESHORE BIOMATERIALS、PCAS.的PURAC Biochem BV的本发明中所用的PLGA聚合物可具有在约50∶50至约65∶35范围内的乳酸和乙醇酸比率和在10,000至70,000范围内的重均分子量(Mw)。优选地，本发明使用具有50∶50的单体比率和在30,000-50,000范围内的重均分子量的PLGA。

可用于本发明的PLGA的有机溶剂包括但不限于乙酸乙酯、四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷、六氟异丙醇、氯仿和丙酮。更优选地，在本发明中使用二氯甲烷。有机溶剂中的聚合物浓度为10-40％wt.，最优选20-30％wt.。

在本发明中，醋酸奥曲肽溶于注射用水以产生10-40％wt.和更优选25-35％wt.的浓度。或者，醋酸奥曲肽溶于可混溶于水的合适的有机溶剂，优选甲醇，以产生5-20％wt.，更优选10％wt.的浓度。任选地使用具有水的可混溶于水的有机溶剂。

对于分散相的制备，通过使用以15,000-30,000s^-1的剪切速率操作的分批模式高剪切分散器将醋酸奥曲肽溶液分散在聚合物溶液中。更优选地，施用20,000-25,000s^-1的剪切速率。或者，在搅拌下将甲醇中的醋酸奥曲肽溶液添加在聚合物溶液中。分散相控制在低于20℃，更优选为5-10℃的温度下。

在本发明中，连续相由具有表面活性剂——更优选为聚乙烯醇(PVA)——的水溶液构成。可任选施用的其它表面活性剂的实例包括下列中的一种或多种：阴离子表面活性剂(如油酸钠、硬脂酸钠或月桂硫酸酯钠)、非离子表面活性剂(如泊洛沙姆、吐温类)、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素钠和明胶，其被单独或组合使用。PVA优选具有约10,000至约150,000Da的重均分子量，其对应于当作为4％水溶液在20℃下被测量时的3-9cP的粘度范围、85-89％水解度和130-150的酯化值。在本发明中使用的选定的PVA等级包括通过Merck KGaA可购得的Emprove PVA 4-88(Mw 25,000-30,000；水中4％的粘度：3.4-4.6cPs)、PVA8-88(Mw为约65,000；水中4％的粘度：6.8-9.2cPs)和PVA 18-88(Mw为约130,000；水中4％的粘度)。加入到水相的表面活性剂的量相对于水溶液的重量优选为多达5.0％(W/W)。更优选地，表面活性剂的量(最佳的PVA量)为约0.5至约2.5％W/W。连续相在低于20℃，更优选5-10℃的温度下是恒温的。

在本发明中，水相在连续油相中的乳化通过以下方式之一进行：i)机械搅拌、ii)分批分散器、iii)在线分散器。优选地，乳化过程通过以5,000-20,000s^-1，最优选10,000-15,000s^-1范围内剪切速率操作的通过Kinematica购得的在线分散器MT-3000发生，以导致10-250μm，最优选为20-100μm微球体的形成。分散相和连续相之间的重量比为1∶20-1∶150，更优选为1∶75-1∶100。

所形成的微球体悬浮液(从在线分散器出口)转移到最初控制在15℃以上，优选约20℃的合适的容器(优选地为绝缘的以有助于温度控制)中。溶剂蒸发期间的温度从15至25℃，优选约20℃的起始温度增加。优选达到的最高温度高达35℃或38℃。温度经过20分钟到3个小时的时间升高。在温度升高的期间后干燥可以长时间持续。优选温度增加的速率为0.1℃/min-1℃/min。温度上升可以在该期间是恒定的或可以是分阶段的。分阶段指的是每个变化是温度的阶跃变化，然后该温度在下一个变化前保持一段时间。此外，在蒸发阶段期间也会有分阶段和恒定的温度变化的混合。

溶剂从微球体的蒸发根据应用的温度特性在搅拌和部分真空下发生，优选地部分真空略低于二氯甲烷的蒸气压。

溶剂蒸发后，硬化的颗粒在低搅拌下从过滤干燥器中的悬浮液收集。优选地，使用来自PSL(Powder System Limited)的过滤干燥器。所收集的颗粒用水洗涤，然后通过施用约10毫巴真空在过滤干燥器中干燥。

如下所述，分析最终微球体的粒度、载药量、聚合物分子量、残留溶剂和体外释放。结果总结在表1和2以及图3-4中。选定的制剂(即1a和2c)以及参照产品Sandostatin LAR已经在大鼠内进行测试以建立体外体内相关性模型。以下提供PK研究和开发所应用的方法以及外部的细节。体内结果提供在图5-6中。

粒度分布(PSD)分析

粒度分布通过使用Malvern Master Sizer 2000 Hydro2000S进行激光衍射而测定。平均粒度由体积平均微米直径表示。

载药量的测定

约50mg的微球体完全溶解在10ml二氯甲烷中(30分钟声处理)。将20ml 0.1M醋酸盐缓冲液(pH 4.0)加入到溶液以将奥曲肽萃取到水相中。两相通过涡旋5分钟完全混合，然后在4000rpm下离心5分钟而被分离。对水相取样以进行HPLC分析以测量奥曲肽的含量。样品在分析前用0.45μm注射过滤器过滤。HPLC条件如下：用Inertsil ODS3柱(4.6×250mm，粒度5μm)进行梯度分离；流动相由蒸馏水中的0.1％三氟乙酸(TFA)(洗脱液A)和乙腈中的0.1％TFA(洗脱液B)组成并且用线性梯度为20％至35％的洗脱液B运行18分钟。流速为1.0ml/min，注射体积为10μl并且检测波长为210nm。

平均分子量测量

微球体的分子量通过使用装有串联的2柱PLgel 5μm混合-D 300×7.5mm和折射指数(RI)检测器的Agilent Model GPC 50Plus系统的凝胶渗透色谱法(GPC)测定。流动相是流速为1ml/min的THF并且柱的温度为30℃。对于样品分析，10-15mg微球体溶解于5mL THF中并且将溶液在搅拌下放置过夜。抽取2mi，将其通过40μm PTFE过滤器过滤并进行分析。注射体积为100μL。使用Cirrus软件进行数据收集和分析。MW范围在162和371100之间的聚苯乙烯标准用于校准。

体外释放方法

约150mg配制的微球体置于100ml的瓶中，并且在37℃下振荡浴(85rpm)中30ml醋酸盐缓冲液(1mM，pH 4.0)中温育。在不同时间点对释放介质进行取样，将其通过0.45μm注射过滤器过滤，并通过HPLC进行分析。HPLC条件如下：用Inertsil ODS3柱(4.6×250mm，粒度5μm)进行梯度分离；流动相由蒸馏水中的0.1％三氟乙酸(TFA)(洗脱液A)和乙腈中的0.1％TFA(洗脱液B)组成并且用线性梯度为25％至35％的洗脱液B运行25分钟。流速为1.0ml/min，注射体积为10μl并且检测波长为210nm。

残留溶剂(二氯甲烷)

研究乙醇和/或二氯甲烷是否从奥曲肽微颗粒中除去。微粒完全溶解在二甲基亚砜(DMSO)中。因此，有机溶液中的乙醇与二氯甲烷的浓度通过气相色谱(GC)定量。在顶空GC分析之前，90mg量的新鲜的微粒在GC小瓶中溶解于5mL二甲亚砜中。残留溶剂蒸发通过在GC烘箱中100℃下温育样品30分钟而实现。用GC-2010plus(Shimadzu，Japan)进行GC分析。使用将Crossbond 5％二苯基/95％二甲基聚硅氧烷用作固定相的RTX-5(RESTEK，USA)分析柱。使用校准曲线标准测量溶剂的量。二氯甲烷的保留时间是5.75分钟。

动物研究

在与晶体甘露醇(即，相对于总重量的17％甘露醇)混合后，微球体制剂经过利用6瓦UV光源进行的365nm UV辐射的杀菌180分钟，以用于雄性Sprague-Dawley大鼠内的药代动力学研究。重约240-250克和年龄为8-12周的大鼠(每组6个)用测试制剂注射。在注射前，将干粉末样品悬浮在由注射用水、0.5％wt.羧甲基纤维素钠和0.6％wt.甘露醇组成的无菌溶剂(载体)中。动物通过以约60mg奥曲肽制剂(微球体)/大鼠的固定剂量单次肌内注射到单一位点来对动物进行给药，所述固定剂量对应于载体的0.25ml/大鼠的体积的3mg奥曲肽活性物质/大鼠。悬浮液通过26G皮下注射针肌肉内给药至位于股骨的颅方位(cranial aspect)上的大鼠四头肌。在给药前和随后在预定时间点——包括给药后0.5小时、1小时、2小时、6小时、24小时、3天、7天、14天、18天、21天、28天、35天、42天、49天、56天和70天——收集大鼠血液样品。在每个时间点，在轻度异氟烷麻醉下从后眼窝丛(retro-orbital plexus)抽取约0.5ml血液并转移到含有作为抗凝血剂的200mM K₂EDTA的标记管，并且通过手动倒转4-5次而混合。将血液样品一直保持在湿冰上并且在样品收集的1小时内通过离心分离血浆。血浆样品储存在-60℃以下直至使用验证的LC-MS/MS方法进行生物分析。

体外体内相关性

对于IVIVC模型的开发，步骤如下：(1)选择具有不同释放速率的制剂，包括SANDOSTATIN LAR、制剂1a和制剂2c，(2)通过各种溶解方法进行体外溶解特性的测量，(3)在大鼠单次肌内给药后测量制剂(即，SANDOSTATIN LA、制剂1a和制剂2c)的PK体内血浆浓度特性，(4)使用Wagner-Nelson(一室模型)解卷积技术通过测得的血浆浓度特性估计体内释放特性，(5)利用SANDOSTATIN LAR和制剂1a的汇总数据进行解卷积的体内释放特性和体外溶解特性之间的相关性计算，(6)与体内数据较高度相关的适宜的溶解方法的选定和通过施用线性回归分析建立IVIVC，(6)使用制剂SANDOSTATIN LAR和制剂1a的Wagner-Nelson卷积模型通过比较反向计算的血浆浓度特性进行建立的模型的内部验证和(7)通过比较由制剂2c的体外溶解特性和所建立的模型计算的预测血浆浓度和制剂2c观察到的体内血浆浓度特性进行建立的模型的外部验证。

实施例1a-c(单乳液)

4g购自PURAC的名称为PURASORB 5004A的摩尔比为50∶50(Mw＝41,000和多分散性大约1.65)的聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)用磁力搅拌溶解于30g二氯甲烷中。将聚合物溶液冷却至5℃。0.2941g醋酸奥曲肽通过混合溶于0.5882克注射用水。醋酸奥曲肽溶液添加到聚合物溶液，并且通过Ultra 在20,000rpm下乳化1分钟，以形成第一乳液(DP-分散相)。11.5gMerck的聚(乙烯醇)18-88在80℃下溶于2307g注射用水，然后加入17.46g磷酸氢二钠和4.18g磷酸二氢钾。将溶液冷却至5℃，形成连续相(CP)。通过以2.3L/min将CP和以15.6mL/min将DP递送到在线Kinematica MT 3000分散器内来制备所需粒度分布的微球体。微球体悬浮液接收在双夹套玻璃反应器容器中，控制在20℃下并剧烈搅拌，以除去溶剂。按照如下表(表1)中提出的预定时间间隔将容器内的温度升高到38℃。4小时后，微球体转移至玻璃过滤干燥器，用过量的水在室温下洗涤并置于10毫巴真空下，并缓慢搅拌24小时以进行干燥。

表1.制剂1a-1c的性质

实施例2a-c(双乳液)

4g购自PURAC的名称为PURASORB 5004A的摩尔比为50∶50(Mw＝41,000和多分散性大约1.65)的聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)用磁力搅拌溶解于30g二氯甲烷中。将聚合物溶液冷却至5℃。聚合物溶液通过注射过滤器过滤灭菌并冷却至5℃。0.2941g醋酸奥曲肽通过混合溶于2.941g甲醇。醋酸奥曲肽溶液添加到聚合物溶液，并且通过搅拌混合以形成油相(DP-分散相)。11.5g Merck的聚(乙烯醇)18-88在80℃下溶于2307g注射用水，然后加入17.46g磷酸氢二钠和4.18g磷酸二氢钾。将溶液冷却至5℃，形成连续相(CP)。通过以2.3L/min将CP和以18.7mL/min将DP递送到在线Kinematica MT 3000分散器内来制备所需粒度分布的微球体。微球体悬浮液接收在双夹套玻璃反应器容器中，控制在20℃下并剧烈搅拌，以除去溶剂。按照如下表(表2)中提出的预定时间间隔将容器内的温度升高到38℃。4小时后，微球体转移至玻璃过滤干燥器，用过量的水在室温下洗涤并置于10毫巴真空下，并缓慢搅拌24小时以进行干燥。

表2.制剂2a-2c的性质