本发明涉及疫苗制备技术领域，具体涉及一种猪蓝耳病灭活疫苗制备方法。
背景技术：
猪蓝耳病是一种高度接触性传染病，呈地方流行性。PRRSV只感染猪，各种品种、不同年龄和用途的猪均可感染，但以妊娠母猪和1月龄以内的仔猪最易感。患病猪和带毒猪是本病的重要传染源。主要传播途径是接触感染、空气传播和精液传播，也可通过胎盘垂直传播。易感猪可经口、鼻腔、肌肉、腹腔、静脉及子宫内接种等多种途径而感染病毒，猪感染病毒后2～14周均可通过接触将病毒传播给其他易感猪。从病猪的鼻腔、粪便及尿中均可检测到病毒。易感猪与带毒猪直接接触或与污染有PRRSV的运输工具、器械接触均可受到感染。感染猪的流动也是本病的重要传播方式。
疫苗是预防该病的主要方法之一。目前，我国商品化的莱利斯塔病毒疫苗生产工艺普遍是将收获的病毒液直接灭活，而后加入矿物油佐剂乳化而制成。这种方法由于直接以细胞繁殖的病毒液进行成品苗的生产，因此会受到细胞破碎产物、培养基成分、血清蛋白、细胞代谢产物等杂质的影响，致使疫苗免疫动物后易发生过敏反应，发热反应等副作用，同时还会影响免疫效果，而且矿物油佐剂疫苗普遍存在注射困难，注射部位易产生肿块。
技术实现要素：
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种猪蓝耳病灭活疫苗制备方法，以解决其副反应率高、免疫效果差、注射困难以及不易吸收的技术问题。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种猪蓝耳病灭活疫苗制备方法，包括病毒澄清、浓缩、分子筛层析、灭活、冻干并包括以下步骤：
1)对莱利斯塔病毒细胞培养液进行澄清；
2)通过横向切留超滤浓缩方式对初滤的莱利斯塔病毒液进行浓缩；
3)使用分子筛层析柱对莱利斯塔病毒液进行纯化；
4)使用β-丙内酯对莱利斯塔病毒液进行灭活；
5)将灭活的病毒液加入适宜的冻干保护剂进行冻干；
作为优选，步骤1)采用8层纱布过滤后，再采用0.5-2μm的双层滤膜进行过滤。
作为优选，步骤2)的浓缩倍数为20～50倍。
作为优选，步骤2)的横向切留超滤浓缩膜孔径为30K～50K。
作为优选，所述步骤3)所述分子筛层析柱选自下述的层析树脂：Sepharose 4Fast Flow(4FF)、Sepharose 6Fast Flow(6FF)、Sepharose CL-2B或Sepharose CL-4B。
利用本发明制备的PRRSV灭活冻干疫苗抗原含量高，免疫原性高；抗原纯度高，安全性好，副反应低；无佐剂，快速产生抗体保护；易注射，易吸收。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。
除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
一种猪蓝耳病灭活疫苗制备方法，包括病毒澄清、浓缩、分子筛层析、灭活、冻干并包括以下步骤：
1)对莱利斯塔病毒细胞培养液进行澄清；
2)通过横向切留超滤浓缩方式对初滤的莱利斯塔病毒液进行浓缩；
3)使用分子筛层析柱对莱利斯塔病毒液进行纯化；
4)使用β-丙内酯对莱利斯塔病毒液进行灭活；
5)将灭活的病毒液加入适宜的冻干保护剂进行冻干；
在以上技术方案的基础上，满足以下条件：
步骤1)采用8层纱布过滤后，再采用0.5μm的双层滤膜进行过滤。
步骤2)的浓缩倍数为20倍。
步骤2)的横向切留超滤浓缩膜孔径为30K。
步骤3)所述分子筛层析柱选自下述的层析树脂：Sepharose 4Fast Flow(4FF)、Sepharose 6Fast Flow(6FF)、Sepharose CL-2B或Sepharose CL-4B。
实施例2
一种猪蓝耳病灭活疫苗制备方法，包括病毒澄清、浓缩、分子筛层析、灭活、冻干并包括以下步骤：
1)对莱利斯塔病毒细胞培养液进行澄清；
2)通过横向切留超滤浓缩方式对初滤的莱利斯塔病毒液进行浓缩；
3)使用分子筛层析柱对莱利斯塔病毒液进行纯化；
4)使用β-丙内酯对莱利斯塔病毒液进行灭活；
5)将灭活的病毒液加入适宜的冻干保护剂进行冻干；
在以上技术方案的基础上，满足以下条件：
步骤1)采用8层纱布过滤后，再采用2μm的双层滤膜进行过滤。
步骤2)的浓缩倍数为50倍。
步骤2)的横向切留超滤浓缩膜孔径为50K。
步骤3)所述分子筛层析柱选自下述的层析树脂：Sepharose 4Fast Flow(4FF)、Sepharose 6Fast Flow(6FF)、Sepharose CL-2B或Sepharose CL-4B。
实施例3
一种猪蓝耳病灭活疫苗制备方法，包括病毒澄清、浓缩、分子筛层析、灭活、冻干并包括以下步骤：
1)对莱利斯塔病毒细胞培养液进行澄清；
2)通过横向切留超滤浓缩方式对初滤的莱利斯塔病毒液进行浓缩；
3)使用分子筛层析柱对莱利斯塔病毒液进行纯化；
4)使用β-丙内酯对莱利斯塔病毒液进行灭活；
5)将灭活的病毒液加入适宜的冻干保护剂进行冻干；
以上对本发明实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。