因子VII缀合物的制作方法

技术特征：

1.一种缀合物，其包含因子VII多肽、连接部分和肝素原聚合物，其中在所述因子VII多肽与所述肝素原聚合物之间的所述连接部分包含X，如下所示：

[肝素原聚合物]–[X]–[因子VII多肽]

其中X包含与根据以下式1的部分连接的唾液酸衍生物：

2.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述唾液酸衍生物是根据以下式2的唾液酸衍生物：

其中R1选自–COOH、-CONH₂、-COOMe、-COOEt、-COOPr，并且R2、R3、R4、R5、R6和R7独立地选自–H、–NH₂、-SH、-N3、-OH和-F。

3.根据权利要求1所述的缀合物，其中所述唾液酸衍生物是根据以下式3的甘氨酰基唾液酸：

其中式1的部分与式3的末端-NH柄连接。

4.根据权利要求1、2或3所述的缀合物，其中所述

[肝素原聚合物]–[X]–

包含根据以下式4的结构：

其中n为5至450的整数。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的缀合物，其中所述肝素原聚合物具有在5至100kDa、13至60kDa或27至45kDa范围内的分子量。

6.根据权利要求5所述的缀合物，其中所述肝素原聚合物的分子量为40kDa+/-10％。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的缀合物，其中所述因子VII多肽是相对于人因子VII的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)包含两个或更多个置换的因子VII变体，其中T293被Lys(K)、Arg(R)、Tyr(Y)或Phe(F)代替；并且L288被Phe(F)、Tyr(Y)、Asn(N)、Ala(A)或Trp W代替，和/或W201被Arg(R)、Met(M)或Lys(K)代替，和/或K337被Ala(A)或Gly(G)代替。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的缀合物，其中所述因子VII多肽包含T293到Lys(K)的置换和L288到Phe(F)的置换，T293到Lys(K)的置换和L288到Tyr(Y)的置换，T293到Arg(R)的置换和L288到Phe(F)的置换，T293到Arg(R)的置换和L288到Tyr(Y)的置换，或T293到Lys(K)的置换和W201到Arg(R)的置换。

9.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至8中任一项所述的缀合物。

10.与因子VII多肽缀合的肝素原聚合物用于减少基于aPTT的凝血试验中的试验间变异性的用途。

11.根据权利要求1至8中任一项所述的缀合物，其用作药物。

12.根据权利要求1至8中任一项所述的缀合物，其用于凝血病的治疗。

13.根据权利要求1至8中任一项所述的缀合物，其用于A型或B型血友病的预防性治疗或按需治疗。

14.一种将肝素原聚合物与因子VII多肽缀合的方法，其包括以下步骤：

a)使包含反应性胺的肝素原聚合物[HEP-NH]与激活的4-甲酰基苯甲酸反应，以产生以下式5的化合物，

其中所述[HEP-NH]是用末端伯胺官能化的HEP聚合物，

b)使式5的化合物与CMP激活的唾液酸衍生物在还原条件下反应，以及

c)将步骤b)中获得的化合物与所述因子VII多肽上的聚糖缀合。

15.使用根据权利要求14所述的方法能够获得的缀合物。