本发明属于医药领域，具体涉及人尿激肽原酶的新用途及含有人尿激肽原酶的药物组合物。
背景技术：
：人尿激肽原酶(HumanUrinaryKallidinogenase)是从人尿液中提取的一种由238个氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶，其在体内的主要作用是将激肽原水解为激肽，从而行使一系列生理功能，具有扩张毛细血管、松弛血管平滑肌、改善微循环、增加血流量、抗凝、溶血栓、降低血液粘度和降血压等效果，是一种具有较高药用价值的蛋白酶。特发性肺纤维化(IdiopathicPulmonaryFibrosis,IPF)是一种慢性进行性发展，病变局限于肺部，组织病理学和高分辨率CT显示为普通型间质性肺炎型特征的疾病。引起特发性肺纤维化的原因有吸烟、环境职业因素暴露、微生物感染、胃食管反流及遗传因素等。目前治疗特发性肺纤维化的药物主要有糖皮质激素、秋水仙碱、环孢素A、乙酰半胱胺酸、抗凝剂、吡非尼酮、西地那非和伊马替尼等，但是，特发性肺纤维化患者对激素和上述各种药物的治疗反应普遍较差，无法解决特发性肺纤维化患者的痛苦。因此，研究一种可以有效治疗特发性肺纤维化疾病仍是目前亟需解决的问题。专利文献CN105078964A在2015年8月20日公开了一种青蒿琥酯在制备治疗特发性肺纤维化药物中的应用，所述青蒿琥酯是通过下调肺组织和原代细胞TIMP-1和TIMP-2的表达，上调MMP-2和MMP-9的表达，有助于IV型胶原和ECM的降解，从而达到治疗特发性肺纤维化的目的。专利文献CN101491515B在2009年3月6日公开了紫杉醇在制备防治特发性肺纤维化的药物中的应用，所述紫杉醇可以减轻博莱霉素A5导致的特发性肺纤维化早期肺泡炎症细胞渗出，同时还可以改善肺组织ECM过度沉积状态，抑制ERK1信号通路激活，对特发性肺纤维化疾病具有较好的治疗效果。然而，上述药物对特发性肺纤维化疾病的治疗效果不佳，仍不能满足现代社会的要求。盐酸艾司洛尔是一超短效的选择性β1肾上腺素能受体阻滞剂。目前，国内外已将盐酸艾司洛尔广泛用于治疗室上性快速性心律失常、急性冠脉综合征以及围手术期高血压、心动过速、心肌缺血等疾病。尤其对于伴有心动过缓或传导阻滞、低血压及新功能不全的患者远较其他长效的β-受体阻滞剂安全，是一种较为安全的心血管疾病药物。三七总皂苷是五加科人参属植物三七的主要活性成分，含有多种单体皂苷。三七总皂苷具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等药理作用。有大量的研究发现，三七总皂苷对高脂血症具有明显的预防和治疗作用；其还能显著改善体表心电图的缺血表现，缩小心肌梗塞范围，可逆转劳累型心绞痛病人的左室舒张功能障碍，甚至可使之恢复正常。是一种治疗效果显著，副作用小的心血管疾病药物。技术实现要素：为了解决现有技术中特发性肺纤维化疾病药物存在的治疗效果不佳，副作用较大的缺陷。本发明提供了人尿激肽原酶的新用途及含有人尿激肽原酶的药物组合物，具体涉及到人尿激肽原酶在制备治疗特发性肺纤维化药物中的用途，同时还提供了含有人尿激肽原酶的药物组合物。本发明提供了人尿激肽原酶在制备治疗特发性肺纤维化药物中的用途。进一步地，所述人尿激肽原酶为注射剂，所述注射剂还含有甘露醇、氯化钠、葡萄糖或聚乙二醇。进一步地，本发明还提供了一种治疗特发性肺纤维化的药物组合物，所述药物组合物包括人尿激肽原酶和盐酸艾司洛尔。进一步地，所述药物组合物中人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔的重量比为1:(0.1～1)，所述人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔的重量比优选为1:0.36。进一步地，所述药物组合物还包括三七总皂苷。进一步地，所述药物组合物中人尿激肽原酶与三七总皂苷的重量比为1:(0.1～0.4)，所述人尿激肽原酶与三七总皂苷的重量比优选为1:0.24。本发明提供的治疗特发性肺纤维化的药物组合物为注射剂，所述注射剂还含有甘露醇、氯化钠、葡萄糖或聚乙二醇。本发明提供含有人尿激肽原酶的组合物中的盐酸艾司洛尔的化学名称为：4-{[3-[(1-甲基乙基)氨基]-2-羟基]丙氧基}苯丙酸甲酯盐酸盐，分子式为C16H26ClNO4，分子量为331.15，CAS号为：81161-17-3。本发明的人尿激肽原酶的剂量为每计量单位中含有15～25μg的人尿激肽原酶和10～50mg的可药用辅料，即1PNA人尿激肽原酶等于15～25μg的人尿激肽原酶。本发明提供的含有人尿激肽原酶的组合物中的三七总皂苷分子式为C47H80O17，其可以通过常规手段提取或者市售得到。按中国药典方法鉴定，本品以高效液相色谱方法进行含量测定，本品按干燥品计算，含三七皂苷R1(C47H80O18)不得少于5.0％、人参皂苷Rg1(C42H72O14)不得少于25.0％、人参皂苷Re(C48H82O18)不得少于2.5％、人参皂苷Rb1(C54H92O23)不得少于30.0％、人参皂苷Rd(C48H82O18)不得少于5.0％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量不得低于75％。本发明提供的人尿激肽原酶对特发性肺纤维化模型大鼠具有明显的治疗效果。经试验发现，与模型组相比，本发明提供的人尿激肽原酶可以显著的降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数和血清层粘连蛋白(LN)含量，同时还可以显著的改善特发性肺纤维化模型大鼠的肺泡炎、巨噬细胞泡沫样改变、纤维细胞活化和胶原纤维增生等症状，其治疗效果与吡非尼酮的治疗接近，说明本发明提供的人尿激肽原酶对特发性肺纤维化具有一定的治疗效果。进一步地，本发明提供的人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔的组合物对特发性肺纤维化模型大鼠具有显著的治疗效果。经试验发现，与吡非尼酮组相比，人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔组合物可以显著的(P<0.05)降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数和LN含量，同时还可以显著的(P<0.05)改善特发性肺纤维化模型大鼠的肺泡炎、巨噬细胞泡沫样改变、纤维细胞活化和胶原纤维增生等症状，说明人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔在降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数和LN含量，改善肺部损坏组织方面具有良好的协同作用，对特发性肺纤维化模型大鼠具有很好的治疗效果。进一步地，本发明提供的人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔和三七总皂苷的组合物对特发性肺纤维化模型大鼠具有极显著的治疗效果。经试验发现，与吡非尼酮组相比，人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔和三七总皂苷的组合物可以极显著的(P<0.01)降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数和LN含量，同时还可以极显著的(P<0.01)改善特发性肺纤维化模型的肺泡炎、巨噬细胞泡沫样改变、纤维细胞活化和胶原纤维增生等症状，说明人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔和三七总皂苷在降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数和LN含量，改善肺部损坏组织方面显著的协同作用，对特发性肺纤维化模型大鼠具有极显著的治疗效果。总之，与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有以下优点：(1)本发明提供的人尿激肽原酶在制备治疗特发性肺纤维化药物中的用途，人尿激肽原酶可以延缓特发性肺纤维化的发病进程，为特发性肺纤维化患者提供了一种有效的治疗药物。(2)本发明提供的治疗特发性肺纤维化的药物组合物，该药物组合物包括人尿激肽原酶和盐酸艾司洛尔，所述药物组合物可以显著降低特发性肺纤维化患者的肺系数和LN含量，还可以有效的改善特发性肺纤维化患者的肺部组织，有利于特发性肺纤维化患者的康复。(3)本发明提供的治疗特发性肺纤维化的药物组合物，该药物组合物包括人尿激肽原酶和盐酸艾司洛尔，还包括三七总皂苷，所述药物组合物在降低特发性肺纤维化患者的肺系数和LN含量，还可以有效的改善特发性肺纤维化患者的肺部组织方面效果比人尿激肽原酶和盐酸艾司洛尔的药物组合物显著，可以大大改善特发性肺纤维化患者的生活质量，有效的减轻特发性肺纤维化患者的痛苦。具体实施方式：以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。实施例1、人尿激肽原酶注射剂取过滤灭菌的人尿激肽原酶3毫克，加入适量注射用水溶解，调节pH至中性，加注射用水至500毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。实施例2、人尿激肽原酶和盐酸艾司洛尔药物组合物的注射剂取过滤灭菌的人尿激肽原酶2毫克，加入适量注射用水溶解，再加入0.2毫克盐酸艾司洛尔溶解，调节pH至中性，加注射用水至500毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。实施例3、人尿激肽原酶和盐酸艾司洛尔药物组合物的注射剂取过滤灭菌的人尿激肽原酶2.5毫克，加入适量注射用水溶解，再加入0.9毫克盐酸艾司洛尔溶解，调节pH至中性，加注射用水至500毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。实施例4、人尿激肽原酶和盐酸艾司洛尔药物组合物的注射剂取过滤灭菌的人尿激肽原酶3.5毫克，加入适量注射用水溶解，再加入2.8毫克盐酸艾司洛尔溶解，调节pH至中性，加注射用水至500毫升，加聚乙二醇调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。实施例5、人尿激肽原酶、盐酸艾司洛尔和三七总皂苷药物组合物的注射剂取过滤灭菌的人尿激肽原酶2.5毫克，加入适量注射用水溶解，再加入0.9毫克盐酸艾司洛尔和0.75毫克三七总皂苷溶解，调节pH至中性，加注射用水至500毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。实施例6、人尿激肽原酶、盐酸艾司洛尔和三七总皂苷药物组合物的注射剂取过滤灭菌的人尿激肽原酶3毫克，加入适量注射用水溶解，再加入1.08毫克盐酸艾司洛尔和0.72毫克三七总皂苷溶解，调节pH至中性，加注射用水至500毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个安瓿中，即得。试验例一、人尿激肽原酶对特发性肺纤维化的影响试验1、试验对象：选取健康雄性SD大鼠80只，体重为260-280g，由中山大学实验动物中心提供。2、试验材料：吡非尼酮胶囊，购于北京康蒂尼药业有限公司，国药准字H20133376，盐酸艾司洛尔注射液购于山东齐鲁制药厂，国药准字(1999)X-31⑴号；血塞通注射液(三七总皂苷注射液)，购于黑龙江珍宝岛药业股份有限公司，国药准字Z23020787。3、特发性肺纤维化动物模型建立：将80只大鼠腹腔注射3％浓度为30mg/kg的戊巴比妥钠，麻醉后仰卧固定鼠台，颈部备皮后常规消毒铺巾，切开皮肤后逐层钝性分离暴露气管，以1mL的注射器斜行刺入气管内，向肺内快速注射博来霉素溶液0.2-0.3ml，立即竖起鼠板，左右摇晃2min后，再次消毒皮肤缝合伤口。4、试验方法：将建模成功的70只大鼠随机分为7组、每组10只，分别为模型组、吡非尼酮组、人尿激肽原酶组、盐酸艾司洛尔组、三七总皂苷组、人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组、人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组。各组大鼠的给药方式为后尾静脉注射，每日一次，连续4周，各分组给药量如下：模型组：注射等体积的生理盐水；吡非尼酮组：灌胃10mg/kg的吡非尼酮人尿激肽原酶组：注射0.25mg/kg的人尿激肽原酶注射液；盐酸艾司洛尔组：注射0.09mg/kg的盐酸艾司洛尔注射液；三七总皂苷组：注射0.06mg/kg的三七总皂苷注射液；人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组：注射人尿激肽原酶0.25mg/kg+盐酸艾司洛尔0.09mg/kg；人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组：注射人尿激肽原酶0.25mg/kg+盐酸艾司洛尔0.09mg/kg+三七总皂苷0.06mg/kg。试验期间大鼠自由饮水，进食(标准饮食)。每周测量大鼠体重一次。于试验开始给药后的第4周处死大鼠。采用股动脉放血法处死大鼠，戊巴比妥钠麻醉后，将大鼠仰卧固定于鼠台上，开胸显露心肺，取下肺脏后用生理盐水反复清洗，用电子天平称量体重和肺重，计算肺系数(肺脏重量/体重×100％)，使用试剂盒检测大鼠的血清层粘连蛋白(LN)含量。接着，使用4％甲醛固定右上肺、左下肺，常规脱水包埋，制成5μm厚石蜡切片，以备HE染色。特发性肺纤维化的病理半定量分析，肺泡炎和肺纤维化程度的评判标准如下：(1)肺泡炎分级：0级:无肺泡炎；1级:轻度肺泡炎，病变范围局限在全肺20％以下；2级:中度肺泡炎，病变范围占全肺20％-50％；3级:弥漫性肺泡炎，病变范围大于50％。(2)肺间质纤维化分级：0级:无肺间质纤维化；1级:轻度肺间质纤维化，病变范围局限在全肺20％以下；2级:中度肺间质纤维化，病变范围占全肺20％-50％；3级:重度肺间质纤维化，病变范围大于50％，肺泡融合，肺实质结构紊乱。利用显微图像分析系统，对病理切片进行肺泡炎和纤维化程度自动测量，将肺组织HE染色病理切片分成以下三个区域进行分析：无染区:为肺泡腔所占面积；深染区:为细胞核所占面积；浅染区:为肺间质纤维结缔组织所占面积。肺泡炎和肺纤维化的程度可由以上三个区域所占面积的不同进行确定。肺泡炎时肺间质炎性细胞浸润增加，表现为深染区面积增加，而肺间质纤维化时，肺泡大多塌陷或消失，间质出现大量胶原纤维，表现为无染区面积减少，浅染区面积增加。用深染区代表细胞核所占面积，即肺泡炎症面积，浅染区代表纤维结缔组织与胶原纤维所占面积，无染区代表肺泡腔面积。将病理切片置于图像分析仪显微镜下，在10x视野下，每张切片由左到右，由上到下依次选取10个视野进行图像分析。5、试验结果：5.1、人尿激肽原酶对特发性肺纤维化模型大鼠肺系数和LN含量的影响如表1所示。表1人尿激肽原酶对特发性肺纤维化模型大鼠肺系数和LN含量的影响组别肺系数LN含量(pg/mL)模型组0.59±0.06135.23±19.34吡非尼酮组0.45±0.04*96.24±12.52*人尿激肽原酶组0.48±0.04*104.78±15.18*盐酸艾司洛尔组0.57±0.05125.56±17.45三七总皂苷组0.58±0.06130±18.21人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组0.40±0.03**#84.45±12.37**#人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组0.34±0.02**##76.86±11.23**##与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与吡非尼酮组相比，#P<0.05，##P<0.01。由表1可知，与模型组相比，吡非尼酮组、人尿激肽原酶组、人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组和人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组均可以显著的(P<0.05)降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数，而且与吡非尼酮组相比，人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组可以显著的(P<0.05)降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数，而人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组可以极显著的(P<0.01)降低特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数。同时，与模型组相比，吡非尼酮组、人尿激肽原酶组、人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组和人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组均可以显著的(P<0.05)降低特发性肺纤维化模型大鼠的LN含量，而且与吡非尼酮组相比，人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组可以显著的(P<0.05)降低特发性肺纤维化模型大鼠的LN含量，而人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组均可以极显著的(P<0.01)降低特发性肺纤维化模型大鼠的LN含量。说明本发明提供的人尿激肽原酶对特发性肺纤维化具有明显的改善作用，同时，人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔组合物相互协调起增强改善特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数和LN含量，人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔和三七总皂苷的组合物对特发性肺纤维化模型大鼠的肺系数和LN含量具有显著的改善作用，说明本发明提供的人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔和三七总皂苷相互协调对特发性肺纤维化具有显著的治疗效果。5.2、人尿激肽原酶对肺组织病理的影响：与对照组相比，模型组大鼠呈现重度肺泡炎，局部有较多出血灶，肺泡隔增宽，炎性细胞浸润，巨噬细胞活化明显：体积增大，细胞内含有大量颗粒，大部分巨噬细胞呈泡沫样改变；片状聚集活化的成纤维细胞紧密相邻，肺泡隔及炎症区域见片状增生的胶原纤维，纤维化程度明显增加。与模型组相比，吡非尼酮组、人尿激肽原酶组、人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组和人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组均可以显著的(P<0.05)改善特发性肺纤维化模型大鼠的肺泡炎、巨噬细胞泡沫样改变、纤维细胞活化和胶原纤维增生等症状，而且与吡非尼酮组相比，人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔组可以显著的(P<0.05)改善特发性肺纤维化模型大鼠的肺泡炎、巨噬细胞泡沫样改变、纤维细胞活化和胶原纤维增生等症状，而人尿激肽原酶+盐酸艾司洛尔+三七总皂苷组可以极显著的(P<0.01)改善特发性肺纤维化模型大鼠的肺泡炎、巨噬细胞泡沫样改变、纤维细胞活化和胶原纤维增生等症状。说明本发明提供的人尿激肽原酶与盐酸艾司洛尔和三七总皂苷相互协调对特发性肺纤维化具有显著的治疗效果。当前第1页1 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