本发明涉及一种牛舌草提取物的制备方法和用途，该提取物可用于制备提高或改善学习记忆力药物中的应用，属于中医药技术领域。
背景技术：
记忆障碍（memorydisorders），指个人处于一种不能记住或回忆信息或技能的状态，有可能是由于病理生理性的或情境性的原因引起的永久性或暂时性的记忆障碍。学习记忆障碍是指机体在一定诱因下出现学习和记忆能力下降的一种病理状态，根据其诱因不同可以将其分为两类。一类属于衰老性学习记忆障碍，主要诱因为器官或功能的衰退造成的学习和记忆功能的下降，常见的有衰老、更年期、老年痴呆、脑供血不足等；另一类属于疲倦性学习记忆障碍，主要是由于长期或缓慢的应激损害造成的学习和记忆功能的下降，常见得有亚健康，慢性疲劳，长期用脑过度等。近年来科学研究证明，自由基与记忆障碍有着密切相关，体内过多自由基在脑细胞中堆积，会引起记忆力减退或智力障碍，甚至出现老年痴呆。中枢胆碱能系统与学习、记忆密切相关，乙酰胆碱（acetylcholine，ach）是中枢胆碱能系统中重要的神经递质之一，其中主要功能是维持意识的清醒，在学习记忆中起着重要作用。而乙酰胆碱酯酶（acetylcholineesterase，ache）能使ach水解成胆碱和乙酸，引起中枢ach缺失，ach缺失导致认知功能丧失，记忆能力减退。但目前尚无有效的方法治疗记忆障碍，主要是找出原发病，针对原发病进行治疗，含卵磷脂食品、神经递质的前体、利他林、双氢麦角碱类的扩血管药等疗效难定。
牛舌草为紫草科植物意大利牛舌草anchusaitaliceretz.或琉璃苣borageofficinalesl.的地上部分。夏季花盛期，一般割取地上部分晒干。气微芳香，味淡，具粘性，是维吾尔医治疗心脑血管疾病的常用药材之一，维药名高孜万。此种药材多由巴基斯坦进口，现在新疆南疆喀什地区大量人工栽培。牛舌草具有生湿生热，调节异常黑胆质，生湿补脑，祛寒补心，爽心悦志，润燥消炎，止咳平喘等功效。主治干寒性或黑胆质性疾病，如平性脑虚，寒性心虚、心悸，抑郁症，干性脑膜炎、肺炎及结核疾病，寒性咳嗽、感冒、气喘等。全草经预试有皂昔，黄酮类，氨基酸，挥发油，勃液质，糖类和微量生物碱反应。
牛舌草属的植物在土耳其、印度和约旦民间用于治疗创伤，胃溃疡和尿路感染等疾患。土耳其的学者（helveticachimicaacta,93:457,2010）研究了牛舌草的化学成分，从中分离鉴定了11个化学成分，主要为三萜皂苷，黄酮类，脂肪酸和酚酸类化合物，并且发现其正丁醇萃取部位及一个黄酮类化合物quercetin3-（a-rhamnopyranosyl-β-glucopyranoside）和一个酚酸类化合物rosmarinicacid具有很强的抗dpph(2,2–diphenyl-l-picrylhydrazyl)自由基的作用。公开号为cn103463163a的中国发明专利文献公开了一种意大利牛舌草活性部位在具有抗氧化作用药物、化妆品和保健品中的应用，意大利牛舌草乙酸乙酯和正丁醇部位具有良好的抗氧化作用。
综合现有文献资料，未发现牛舌草及其提取物或其所含成分提高或改善学习记忆力活性的文献和专利报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种牛舌草提取物的制备方法和用途，用制备的牛舌草提取物加工成提高或改善学习记忆力药物和保健品，能够显著提高学习记忆力活性，改善或提高学习记忆力。
本发明提供的一种牛舌草提取物的制备方法，包括如下步骤：
（1）、取干燥、粉碎的牛舌草，加入质量比为1:10～15的75%的乙醇，浸泡8h，再加热回流提取2～4次，每次提取时间为2～3小时，合并提取液，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经减压浓缩至提取液无醇味，得到浓缩粗提液；
（2）、将步骤1得到的粗提液与石油醚体积比为1:3～5混合进行多次萃取与两相分离，直至石油醚层无色，弃去石油醚层，合并水层，减压浓缩，至0.25～1.0g生药/ml时备用。
（3）将步骤2中浓缩液加3倍量水稀释、静置12h后，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经浓缩至0.25～1.0g生药/ml时备用；
（4）、将步骤3中的浓缩液与ab-8大孔吸附树脂以1:5～10重量比实施吸附，树脂柱径高比为1:1～1:6，上样量为0.1mg/ml/毫升柱体积，吸附后先用水洗脱至流出液无色，将水洗脱液弃去后，再用体积分数为70%的乙醇水溶液洗脱，洗脱体积为3倍柱体积，洗脱流量均为1ml/min;得到的洗脱物进行减压浓缩，然后真空干燥，即得所述的牛舌草提取物。
一种牛舌草提取物的用途，所述的牛舌草提取物与一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂按比例混合，制成适用于临床上使用的不同剂型的药物组合物，再根据需要加入适当的稀释剂、分散剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、抗氧化剂、矫味剂等赋形剂，制成合适给药的剂型。
通过动物实验的结果表明本发明主要功效性作用如下：
可明显缩短小鼠在水迷宫中寻找平台的时间，增加小鼠经过平台的次数，小鼠学习记忆力明显提高;
可明显缩短小鼠在自主活动仪中站立和活动的次数，证明灌胃牛舌草提取物后的小鼠记忆学习能力有明显的提高;
本发明的积极效果在于：本发明的提取物由单味维药材提取制备而成，具有显著的提高或改善学习记忆力活性，而且相比多味药组方的中成药易于质量控制，同时制备工艺简单，适合工业化生产。
具体实施方式
实施例1：
牛舌草提取物的制备方法包括如下步骤：
取干燥、粉碎的牛舌草，加入质量比为1:10的75%的乙醇，浸泡8h，再加热回流提取3次，每次提取时间为2小时，合并提取液，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经减压浓缩至提取液无醇味，得到浓缩粗提液。将步骤1得到的粗提液与石油醚体积比为1:3混合进行多次萃取与两相分离，直至石油醚层无色，弃去石油醚层，合并水层，减压浓缩，至0.5g生药/ml时备用。将步骤2中浓缩液加3倍量水稀释、静置12h后，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经浓缩至0.5g生药/ml时备用；将步骤3中的浓缩液与ab-8大孔吸附树脂以1:5重量比实施吸附，树脂柱径高比为1:4，上样量为0.1mg/ml/毫升柱体积，吸附后先用水洗脱至流出液无色，将水洗脱液弃去后，再用体积分数为70%的乙醇水溶液洗脱，洗脱体积为3倍柱体积，洗脱流量均为1ml/min;得到的洗脱物进行减压浓缩，然后真空干燥，即得所述的牛舌草提取物。
实施例2：
牛舌草提取物的制备方法包括如下步骤：
取干燥、粉碎的牛舌草，加入质量比为1:12倍体积分数为75%的乙醇，浸泡8h，再加热回流提取3次，每次提取时间为2小时，合并提取液，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经减压浓缩至提取液无醇味，得到浓缩粗提液。将步骤1得到的粗提液与石油醚体积比为1:4混合进行多次萃取与两相分离，直至石油醚层无色，弃去石油醚层，合并水层，减压浓缩，至0.5g生药/ml时备用。将步骤2中浓缩液加3倍量水稀释、静置12h后，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经浓缩至1.0g生药/ml时备用；将步骤3中的浓缩液与ab-8大孔吸附树脂以1:6重量比实施吸附，树脂柱径高比为1:5，上样量为0.1mg/ml/毫升柱体积，吸附后先用水洗脱至流出液无色，将水洗脱液弃去后，再用体积分数为70%的乙醇水溶液洗脱，洗脱体积为3倍柱体积，洗脱流量均为1ml/min;得到的洗脱物进行减压浓缩，然后真空干燥，即得所述的牛舌草提取物。
实施例3：
牛舌草提取物的制备方法包括如下步骤：
取干燥、粉碎的牛舌草，加入质量比为1:15的75%的乙醇，浸泡8h，再加热回流提取2次，每次提取时间为2小时，合并提取液，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经减压浓缩至提取液无醇味，得到浓缩粗提液。将步骤1得到的粗提液与石油醚体积比为1:5混合进行多次萃取与两相分离，直至石油醚层无色，弃去石油醚层，合并水层，减压浓缩，至1.0g生药/ml时备用。将步骤2中浓缩液加3倍量水稀释、静置12h后，真空抽虑，除去不溶性物质，滤液经浓缩至1.0g生药/ml时备用；将步骤3中的浓缩液与ab-8大孔吸附树脂以1:4重量比实施吸附，树脂柱径高比为1:6，上样量为0.1mg/ml/毫升柱体积，吸附后先用水洗脱至流出液无色，将水洗脱液弃去后，再用体积分数为70%的乙醇水溶液洗脱，洗脱体积为3倍柱体积，洗脱流量均为1ml/min;得到的洗脱物进行减压浓缩，然后真空干燥，即得所述的牛舌草提取物。
本发明方法获取牛舌草提取物的行为学实验验证，具有显著的提高学习记忆力活性。
1）小鼠morris水迷宫实验
选用体重(18-22g)，昆明雄性小鼠分为5组，每组10只，分别为正常对照组、东莨菪碱模型组、牛舌草提取物高剂量组（6.0g/kg），中剂量组（4.0g/kg,）和低剂量组（2.0g/kg）、脑复康(100mg/kg)阳性对照组。连续灌服各受试药物七天后造模，正常对照组和东莨菪碱模型组每天灌服等剂量生理盐水。除正常对照组腹腔注射等剂量生理盐水外，其余4组小鼠腹腔注射东莨菪碱(1mg/1kg)建立痴呆模型，给予东莨菪碱30minn后进行morris水迷宫实验。morris水迷宫试验连续5天，分为定位航行试验和空间探索试验，前4天为定位航行试验。平台设于西南象限中心，小鼠每天从东北象限和西北象限入水，记录找到平台时间。如未找到平台潜伏期记录为120s。第5天进行空间探索试验，移去平台，小鼠从选定象限入水，记录小鼠穿越平台次数。
morris水迷宫实验结果显示，模型组小鼠在定位航行试验中找到平台潜伏期显著高于正常对照组，提示东莨菪碱所致痴呆小鼠模型复制成功。与模型组相比，牛舌草提取物低、高剂量组及脑复康组均可缩短痴呆小鼠找到平台潜伏期，其中牛舌草提取物高剂量组和脑复康组具有显著性差异（p<0.05）。空间探索实验中，与模型组小鼠相比，牛舌草提取物高、低剂量组可在一定程度上增加穿越平台次数，但未达到统计学差异。脑复康组可显著增加痴呆小鼠穿越平台次数（p<0.05），提示牛舌草提取物对东莨菪碱诱导的痴呆小鼠学习记忆损伤有一定的改善作用，见表1、2。
2）小鼠自主活动实验
选用体重(18-22g)，昆明小鼠分为4组，每组10只，分别为正常对照组、牛舌草提取物高剂量组（6.0g/kg），中剂量组（4.0g/kg,）和低剂量组（2.0g/kg），而空白对照组受试小鼠经口灌胃等体积的生理盐水，每天都灌胃给药，连续灌胃7天后，将小鼠置于自主活动箱中，仪器自动记录5min内小鼠的自主活动站立和活动的次数。
自主活动实验结果显示，牛舌草提取物的高、中、低剂量组小鼠在自主活动仪中的活动次数和站立次数与空白组相比有显著性的差异（p<0.05），这说明牛舌草提取物能够改善小鼠活动与站立的次数，使小鼠更加的熟悉并记住了自主活动仪黑暗的环境并无危险，说明牛舌草提取物具有提高记忆力的作用，见表3。
通过上述行为学实验验证，牛舌草提取物具有显著的提高学习记忆力活性，表明牛舌草提取物具有提高或改善学习记忆力药物的用途。所述的牛舌草提取物用于制备提高或改善学习记忆力的药物和保健品。