一种pH敏感性同轴聚乳酸己内酯PLCL/明胶双载药纤维支架的应用的制作方法

本发明属于双载药纤维支架的应用领域，特别涉及一种ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架的应用。

背景技术：

癌症是一种严重危害人类健康和生命的疾病，其危害性仅次于心血管疾病。当今世界控制癌症的主要目标就是降低癌症的死亡率，提高生存率。经过近百年的努力，癌症从不治之症能达到如今治愈率达到l/3以上的成果，这些主要得力于现代医学的发展。目前，手术、放疗和化疗是治疗肿瘤的三大常规治疗方法，手术治疗为最常见的治疗方法，但是术后复发率较高。手术过程中可能引起各种感染，这可能会导致癌症的复发并且影响抗癌药物的疗效。世界卫生组织最新数据显示，到2020，全球癌症发病率将增加50％，换句话说，每年将新增癌症患者多达1500万人。此外，炎症和其他因素导致肿瘤的环境是酸性的，很多研究利用此特点，借助ph敏感材料达到药物的可控释放。

静电纺丝技术普遍应用于伤口敷料、组织工程支架、药物释放系统等。采用静电纺丝法所得的组织工程支架，接近于天然细胞外基质中纤维的尺寸。而同轴静电纺是在静电纺的基础上稍作改装，将传统的单喷丝头改造为含有两个针头的喷丝头，两种不同的纺丝液分从两个针头中喷出，在喷嘴处汇合形成复合射流，最终形成核壳结构的纤维。常规静电纺材料在药物缓释上效果不佳，利用同轴静电纺可将需要缓释的药物载在芯层，有壳层的包裹使得芯层药物释放缓慢。迄今为止，已经探索出多种用于制备芯-壳结构纤维的技术，比如自组装法、激光消融法和基于静电纺丝技术的tuft(tubesbyfibertemplates)法等。但是这些方法的制备过程和步骤相对静电纺比较复杂难于控制。

明胶是一种极性很强的生物高分子,含有大量的酞胺基，是天然蛋白质变性而来，生物相容性好，代谢的最终产物是水和二氧化碳，可通过正常的新陈代谢排除体外，而中间产物乳酸也是体内糖类正常代谢的产物，不会产生副作用和细胞毒性。在体内可降解，满足作为组织工程支架的要求。明胶属于亲水性材料，可溶于水，不能满足实验需要，在使用过程中，需要使用交联剂改善其性能。

聚乳酸己内醋(plcl)是一种脂肪族聚酯共聚物。物相容性好，在体内可完全降解且无毒副作用，力学性能强，可纺性高，能较好的应用在软骨组织、骨组织、血管、尿路上皮组织、心脏组织等组织工程。

碳酸氢钠(化学式：nahco3)，俗称小苏打、苏打粉、重曹、焙用碱等。易溶于水的白色碱性粉末，在与水结合后开始起作用释出二氧化碳co2，在酸性液体中反应更快，而随着环境温度升高，释出气体越快，水溶液呈弱碱性。

环丙沙星，白色粉末状，对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、支原体等都有很强的抗菌活性。它是典型的两性化合物，c‐3位含有羧酸基团，c‐7位含有哌嗪基团，属于a‐酮酸类物质，在酸性或碱性条件下加热均可发生脱羧反应。

盐酸阿霉素(doxouribicn)为两亲性蒽环类抗生素，抗肿瘤适应症较广。是一类作用效果强的抗肿瘤药物，适用于治疗白血病、恶性淋巴瘤、乳腺癌、肉瘤、肺癌、膀胱癌等。盐酸阿霉素的作用机理是通过对rna和dna合成的抑制(对rna的抑制作用极强)，可杀死各种生长周期的肿瘤细胞。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是提供一种ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架的应用，该方法实验原理简单，操作简单，所得纤维支架生物相容性好，可降解，力学性能好，ph敏感性使得药物释放实现可控性，具有消炎和抗癌的作用，且能起到抗癌药的缓释效果，在组织工程支架方面具有巨大应用潜能。

本发明的一种ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架的应用，ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架作为组织工程支架的应用。

ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架在交联剂中进行交联后用于组织工程支架；

其中ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架的制备，包括：

(1)将明胶溶于溶剂中，然后依次加入碳酸氢钠饱和溶液、抗菌药物，搅拌溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(2)将聚乳酸己内酯plcl溶于溶剂中，然后加入抗癌药物，搅拌溶解，得到芯层plcl纺丝液；

(3)将上述纺丝液进行同轴静电纺丝，得到ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架。

所述步骤(1)、(2)中溶剂均为六氟异丙醇hfip。

所述步骤(1)中抗菌药物为环丙沙星。

所述步骤(1)中壳层明胶浓度为14-16％(w/v)，抗菌药物相对于明胶的浓度为9-11％(w/w)。

所述步骤(2)中抗癌药物为抗癌药dox。

所述步骤(2)中芯层plcl纺丝液中plcl的浓度为4-6％(w/v)，抗癌药盐酸阿霉素(dox)在plcl中的质量百分比为4-6％(w/w)。

所述步骤(3)中同轴静电纺的工艺参数为：注射器规格为5ml；同轴针头内部直径约为0.6-0.7mm，外部直径约为1.4-1.4mm；喷出流速壳层为0.6-0.8ml/h，芯层为0.2-0.4ml/h；电压为15-20kv，接收距离为25-30cm，纺丝时间为5-9h，铝箔收集，并在铝箔上放置20个圆形载玻片收集；环境温度为25℃，湿度为30-40％。

步骤(3)得到的ph敏感性同轴聚乳酸己内酯plcl/明胶双载药纤维支架放在交联剂中进行交联，交联后的纤维进行接触角测试，力学性能测试，抗菌实验，药物释放，细胞毒性实验，降解实验。

所述交联剂为戊二醛，浓度为25％(g/ml)交联时间为8-10h。

力学测试，将纤维裁剪为1*5cm大小。

抗菌实验中：抗菌使用菌种是大肠杆菌(atcc29522)和金黄色葡萄球菌(atcc6538)。

药物释放的缓冲溶液，为磷酸盐缓冲溶液(ph7.4，血液ph)和醋酸盐缓冲液(ph5.0，肿瘤环境ph)。

细胞毒性实验所用细胞为纤维细胞(l929)和肝癌细胞(smmc-7721)；

细胞毒性实验培养纤维细胞用的是dmem高糖培养基培养基，培养肝癌细胞用的是rpmi1640不完全培养基。

本发明中壳层药物为抗菌性药物环丙沙星，芯层药物为抗癌药盐酸阿霉素(doxorubicinhydrochloride)；另外，在壳层加入碳酸氢钠，使得纤维支架具有ph敏感性，在酸性条件下释药快，碱性或中性条件下释药慢。载药纤维支架可置于肿瘤的手术切除后的部位，抗菌药用于消除手术过程中的感染，抗癌药用于癌症治疗及防治癌症复发。本发明具有药物控释功能的纤维支架，该支架生物相容性好，可降解，具有ph敏感性，力学性能好，可起到消炎和抗癌的作用。

有益效果

(1)本发明实验原理简单，操作简单；

(2)本发明所使用的原材料较易得到；

(3)本发明所得纤维支架生物相容性好，可降解，较强的力学性能，具有抗癌疗效，可用于癌症治疗。

附图说明

图1为明胶、plcl和载药纤维支架的应力应变曲线；

图2载药前后纳米纤维的抗菌图；其中a为未载药纤维在大肠杆菌中的抑菌圈；b为载药纤维在大肠杆菌中的抑菌圈；c为未载药纤维在金黄色葡萄球菌的抑菌圈；d为载药纤维在金黄色葡萄球菌中的抑菌圈；

图3载药同轴纤维在醋酸和磷酸盐缓冲液中的环丙沙星释药图；

图4载药同轴纤维在醋酸和磷酸盐缓冲液中的dox释药图；

图5载药纤维对l929和smmc-7721的细胞毒性图；其中a是同轴纤维在l929上的细胞毒性实验图；b是同轴纤维在7721上的细胞毒性实验图；

图6载药纤维浸泡在醋酸和磷酸盐缓冲液中的sem图；其中a是同轴纤维在磷酸缓冲液中浸泡3天的sem图；b是同轴纤维在醋酸缓冲液中浸泡3天的sem；c是同轴纤维在磷酸缓冲液中浸泡两个月的sem；d是同轴纤维在醋酸缓冲液中浸泡两个月的sem，图中靶值为5μm。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

(1)秤取0.452g明胶溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中。

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.217ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0453g环丙沙星，用磁力搅拌器搅拌27h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.154gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中，后加入0.0752gdox，用磁力搅拌器搅拌28h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液；

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.7ml/h，芯层为0.4ml/h，静电压为17kv，接收距离为28cm，接收装置为铝箔，并在铝箔上放20个圆形玻片，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为7.5h。(5)依照以上步骤将得到载药的同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，放在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联8小时，放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)将玻片剪下剥去铝箔，用接触角分析仪(322w,thermocahnco.,usa)对纤维的接触角进行测试。将2μl的小液滴，滴在纤维表面，在5s的时间内记录接触角值，实验反复5次，取平均值。得到纤维的接触角数据，正如文献所述，明胶为亲水性的，接触角为32±3.6°，plcl为疏水性的，接触角为124±2.7°，而未载药同轴纤维支架的接触角为23±4.2°，载药同轴纤维支架的接触角为12±0.2°，因碳酸氢钠是亲水性的，所载药物也是亲水性的，使得载药纤维亲水性较好。

表1

实施例2

(1)秤取0.450g明胶溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中；

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.219ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，用磁力搅拌器搅拌27h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到纯明胶纺丝液；

(3)用5ml注射器抽取上述纺丝液，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速为0.8ml/h，静电压为15kv，接收距离为25cm，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为5h。

(5)依照以上步骤将得到纯明胶纤维支架，放在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维放入25％戊二醛蒸汽中，交联8小时，放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)将纤维裁剪为1*5cm大小，固定在力学测试仪上(hy-9940fs,china)进行测试，实验反复5次取平均值，得纯明胶纤维支架的应力应变曲线，如图1，明胶断裂应力为1.483±0.2mpa，断裂伸长率为22.52％±1.1，明胶的力学性能不佳。

实施例3

(1)秤取0.156gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中，用磁力搅拌器搅拌26h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到plcl纺丝液。

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速为0.4ml/h，静电压为17kv，接收距离为27cm，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为6h。

(5)依照以上步骤将得到聚乳酸己内酯(plcl)纤维支架，放在真空干燥箱中干燥24h，将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联9小时，放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)将纤维裁剪为1*5cm大小，固定在力学测试仪上(hy-9940fs,china)进行测试，实验反复5次取平均值，得plcl纤维支架的应力应变曲线，如图1，plcl断裂应力为3.025±0.5mpa，断裂伸长率为6.09±1.3％，plcl的力学性能较好。

实施例4

(1)秤取0.450g明胶溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中；

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.219ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0454g环丙沙星，用磁力搅拌器搅拌29h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.155gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中，后加入0.0751gdox，用磁力搅拌器搅拌30h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液。

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.8ml/h，芯层为0.3ml/h，静电压为19kv，接收距离为28cm，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为9h。

(5)依照以上步骤将得到载药的同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，放在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联9小时，再放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)将纤维裁剪为1*5cm大小，固定在力学测试仪上(hy-9940fs,china)进行测试，实验反复5次取平均值，得载药纤维支架的应力应变曲线，如图1，断裂应力为2.001±0.3mpa，断裂伸长率为25.75±1.7％，纤维支架的力学性能因plcl的加入较好，满足组织工程支架的要求。

实施例5

(1)秤取0.453g明胶溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中。

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.214ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，用磁力搅拌器搅拌28h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.156gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中，用磁力搅拌器搅拌28h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液；

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.6ml/h，芯层为0.3ml/h，静电压为18kv，接收距离为29cm，接收装置为铝箔，并在铝箔上放置20个圆形玻片，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为9h。

(5)依照以上步骤将得到未载药的同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，放在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联8小时，再放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)剪取6个带有纤维支架的圆形玻片，将铝箔揭去，放在预先配置好的分别含有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的固体培养基上，每组三个平行样，置于恒温培养箱中培养24h，如图2a为大肠杆菌，2b为金黄色葡萄球菌，图中可见并没有抑菌圈出现，说明纤维本身没有抗菌性。

实施例6

(1)秤取0.451g明胶溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中。

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.216ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0452g环丙沙星，用磁力搅拌器搅拌27h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.155gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中，后加入0.0753gdox，用磁力搅拌器搅拌28h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液；

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.6ml/h，芯层为0.4ml/h，静电压为18kv，接收距离为27cm，接收装置为铝箔，并在铝箔上放置15个圆形玻片，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为7.5h。

(5)依照以上步骤将得到载药的同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，放在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联8小时，再放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)剪取6个带有纤维支架的圆形玻片，将铝箔揭去，放在预先配置好的分别含有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的固体培养基上，置于恒温培养箱中培养24h，如图2c为大肠杆菌，2d为金黄色葡萄球菌，图中可见两种菌均具有明显的抑菌圈，载药纤维膜对金黄色葡萄球菌的抗菌效果与其对大肠杆菌的抗菌效果具有相同的规律，均出现明显的抑菌圈，抑菌圈大小34±3.9mm，说明所得到的载药纤维支架具有良好的抗菌效果。

实施例7

(1)秤取0.752g明胶溶于5ml六氟异丙醇(hfip)中；

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.363ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，后加入0.075g环丙沙星，用磁力搅拌器搅拌28h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.203gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于4ml六氟异丙醇(hfip)中，后加入0.012dox，用磁力搅拌器搅拌29h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液。

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.8ml/h，芯层为0.4ml/h，静电压为19kv，接收距离为27cm，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为10h。

(5)依照以上步骤所得到同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联8小时，放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)将纤维从铝箔上揭下，称取0.091g，分别放在20ml磷酸盐和醋酸盐缓冲液中，设置三个平行实验，均置于37℃、100次/min的恒温震荡器中。

(7)第一天每隔1h取样，第二天每隔4h取样，第3-7天每隔8h取样，之后每24h取一次样，取样时间为40天，且每次取1ml介质溶液，同时加入1ml新鲜的缓冲溶液，以保持介质溶液的体积不变。

(8)将所取样品用uv-1800型紫外分光光度计(uv-1800,shjhcompany)，在环丙沙星的最大吸收波长277nm处，分别测定所取样品的吸光度，根据环丙沙星标准释放曲线，绘制出其释放曲线如图3，在醋酸盐缓冲液中总释放量较大达81％，在磷酸盐缓冲液中总释放量达43％，可见环丙沙星的释放有着明显的ph敏感性，在酸性条件下释药多。在酸性条件下，碳酸氢钠和氢离子反应生产二氧化碳，二氧化碳溢出使纤维表面出现孔洞，促进环丙沙星的释放。

实施例8

(1)秤取0.753g明胶溶于5ml六氟异丙醇(hfip)中；

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.364ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，后加入0.074g环丙沙星，用磁力搅拌器搅拌28h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.204gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于4ml六氟异丙醇(hfip)中，后加入0.014dox，用磁力搅拌器搅拌29h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液。

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.7ml/h，芯层为0.4ml/h，静电压为19kv，接收距离为29cm，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为9h。

(5)依照以上步骤所得到同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联9小时，放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)将纤维从铝箔上揭下，称取0.010g，分别放在20ml磷酸盐和醋酸盐缓冲液中，设置三个平行实验，均置于37℃、100次/min的恒温震荡器中。

(7)第一天每隔1h取样，第二天每隔4h取样，第3-7天每隔8h取样，之后每24h取一次样，取样时间为40天，且每次取1ml介质溶液，同时加入1ml新鲜的缓冲溶液，以保持介质溶液的体积不变。

(8)将所取样品用uv-1800型紫外分光光度计(uv-1800,shjhcompany)，在dox的最大吸收波长488nm处，分别测定所取样品的吸光度，根据dox标准释放曲线，绘制出其释放曲线如图4，在醋酸盐缓冲液中总释放量较大达64％，在磷酸盐缓冲液中总释放量达38％，而dox也有着明显的ph敏感性。因壳层的包裹，dox释药时间延长，达30天左右，起到药物缓释的效果。

实施例9

(1)秤取0.454g明胶溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中。

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.219ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0455g环丙沙星，用磁力搅拌器搅拌27h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.155gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟异丙醇(hfip)中，后加入0.0754gdox，用磁力搅拌器搅拌29h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液；

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.7ml/h，芯层为0.3ml/h，静电压为17kv，接收距离为27cm，接收装置为铝箔，并在铝箔上放20个圆形玻片，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为8h。(5)依照以上步骤将得到载药的同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，放在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联8小时，将玻片剪下剥去铝箔。

(6)将有纤维的玻片放在酒精蒸汽里2天，再在紫外灯下照24h灭菌，放入24孔板里，同时设置三个空白对照。在样品和空白对照的孔里，加400μl的dmem高糖培养基培养基，预培养2h。加入400μl的l929纤维细胞悬浮液(已知细胞浓度)，分别培养一天，三天，五天。

(7)将有纤维的玻片放在酒精蒸汽里2天，再在紫外灯下照24h灭菌，放入24孔板里，同时设置三个空白对照。在样品和空白对照的孔里，加400μl的rpmi1640不完全培养基，预培养2h。加入400μl的smmc-7721细胞悬浮液(已知细胞浓度)，分别培养一天，三天，五天。

(8)其中，培养时间满一天时，吸出培养基，加40μl噻唑蓝(mtt)和360μldmem/rpmi1640，用铝箔包好，放37℃摇床静置4h。然后吸去液体，用pbs冲洗一次，然后加入400μl二甲基亚砜(dmso)，用铝箔包好，放37℃、100次/min的摇床，15min-60min后，用酶标仪(multiskan,thermo-fisher,usa)，在450nm处，检测吸光度得第一天数据。第三、五天做法同第一天。

(9)利用origin软件处理纤维细胞的一、三、五天数据，得图5a，图中可见纤维细胞长势良好，因药物释放的孔洞可促进细胞的粘附增值，刺激细胞生长，因而纤维支架上的细胞比空白对照上的多，说明纤维支架具有优良的生物相容性。

(10)利用origin软件处理癌细胞的一、三、五天数据，得图5b，图中可见癌细胞在空白对照中生长迅速，而在纤维支架上，因抗癌药dox的存在，癌细胞生长受阻，在第五天可见明显的下降趋势。因而，本纤维支架有望应用在癌症的治疗方面。

实施例10

(1)秤取0.753g明胶溶于5ml六氟异丙醇(hfip)中；

(2)将碳酸氢钠配制为饱和溶液，量取0.363ml碳酸氢钠饱和溶液，加入上述溶液中，后加入0.076g环丙沙星，用磁力搅拌器搅拌28h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到壳层明胶纺丝液；

(3)秤取0.202gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于4ml六氟异丙醇(hfip)中，后加入0.013dox，用磁力搅拌器搅拌29h，直至溶质在溶剂中完全溶解，得到芯层plcl纺丝液。

(4)用5ml注射器抽取上述纺丝液，固定在同轴静电纺装置上，调节纺丝参数进行电纺，喷出流速壳层为0.7.ml/h，芯层为0.4ml/h，静电压为19kv，接收距离为27cm，所处环境温度为25℃，湿度为30-40％，纺丝时间为10h。

(5)依照以上步骤所得到同轴聚乳酸己内酯(plcl)/明胶双载药纤维支架，在真空干燥箱中干燥24h。将干燥的纤维支架放入25％戊二醛蒸汽中，交联8小时，放通风处使戊二醛完全挥发。

(6)将纤维从铝箔上揭下，称取0.091g，分别放在20ml磷酸盐和醋酸盐缓冲液中，设置三个平行实验，均置于37℃、100次/min的恒温震荡器中。

(7)分别在第三天，一个月，两个月的时候取样，每次取样都用扫描电镜(sem；jsm-5600,joel,japan)拍照。6a为纤维支架浸泡在磷酸缓冲液中三天，6b为浸泡在醋酸缓冲液三天，6c为浸泡在磷酸缓冲液两个月，6d是在醋酸缓冲液两个月的电镜图，图中可见，在第三天的时候纤维表面出现颗粒状物质，为释放出的药物，尤其在醋酸缓冲液中浸泡的纤维表面颗粒状物质更多，这与释药的结论相符合。一个月的时候出现些许降解，而在两个月的时候出现大面积降解，说明此纤维支架是可降解的，满足组织工程支架的需要。