本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种抗菌和抗病毒的注射剂。
背景技术：
益生芽孢杆菌是一类对机体具有益生特性的、好氧或兼性厌氧、产芽孢的杆状细菌，为革兰氏染色阳性。益生芽孢杆菌包括：枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和需氧芽孢杆菌等。由于这类芽孢杆菌具有保护消化道、促进饲料转化等良好的益生特性，被广泛用于人医和畜禽、水产养殖中。目前还有人将活的厌氧芽孢杆菌制成针剂，直接注射到癌肿实体瘤内部，以治疗癌症(专利公开号：cn106474161a)。
以往我们研究发现将灭活的乳酸菌对小鼠、牛、猪、狗等动物静脉给药具有良好的抗菌、抗病毒和增强免疫功能等作用，并申报了国际和国家多项专利(专利申请号如下：pct/cn2016/09844，201610809584.6，201610811028.2，201610810757.6，201610810758.0，201610809345.0，201610809582.7，201610809583.1，201610809676.4，201610811285.6，201610811770.3)。基于以上的研究，我们推测将益生芽孢杆菌灭活制成注射剂对动物注射给药也应该具有抗菌和抗病毒等作用，通过文献和专利数据库查阅发现，目前尚无这样将益生芽孢杆菌灭活作为注射剂的报道，我们研究发现将益生芽孢杆菌灭活作为注射剂不仅安全性大大提高，而且静脉给药可以用于细菌病和病毒病的防治。该药物对动物用药还具有成本低、无药物残留等优势，特别对家畜疫病防控具有广阔的应用前景。
技术实现要素：
一种抗菌和抗病毒注射剂，该注射剂的主要成分为灭活益生芽孢杆菌完整形态菌体。
所述的注射剂每ml包含灭活益生芽孢杆菌数量为105—1012个。
所述的益生芽孢杆菌选自枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和需氧芽孢杆菌。
进一步，益生芽孢杆菌的灭活方法选自高温灭活、高温高压灭活、紫外线灭活、化学试剂灭活或辐射灭活中的任一种。
再进一步，所述的注射剂还包含药学上可接受的佐剂，佐剂中含有足够的盐或单糖以保证注射剂悬浮液与血液渗透压相同或相近。
用于本发明的制备灭活益生芽孢杆菌注射剂剂型包括：粉针剂、混悬注射剂等。所述的粉针剂通过喷雾干燥或冷冻干燥制成，应用时制成混悬液。
所述制剂为注射剂。
进一步，所述灭活益生芽孢杆菌为两种以上灭活益生芽孢杆菌混合物。利用高温高压灭活、紫外线灭活、化学试剂灭活或辐射灭活中的任一种灭活方法得到所述灭活益生芽孢杆菌。所述的益生芽孢杆菌选自枯草芽孢杆菌、地衣芽胞杆菌、蜡样芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和需氧芽孢杆菌。
所述的注射剂的佐剂选自辛苯氧基聚乙氧乙醇、四丁酚醛、山梨醇酐聚乙二醇单油酸酯、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯衍生物、吐温-80、聚烷基苯磺酸钠、月桂基硫酸酯钠、多糖硫酸酯碱金属盐、葡聚糖硫酸酯钠、磺基琥珀酸双辛酯、金合欢胶、阿拉伯乳胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚硅酸乙酯、乙醇、甘油、山梨醇、蜂蜜、琼脂、淀粉、右旋糖、果糖、麦芽浸膏、可可粉、酒石酸、枸橼酸、枸橼酸钠、角叉酸、海藻酸、海藻酸钠、鞣酸、环己烷氨基磺酸、矿物油、优卡林、糖精钠、印度树胶、刺梧桐树胶、西黄蓍胶、果胶、鹿角菜胶、明胶、羧甲基纤维素、硫酸纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、醋酸硫酸纤维素钠、羟乙基纤维素钠、甲基聚硅、山梨酸钾、高岭土、硅藻土、膨润土、硅酸铝、氢氧化铝、胶体氢氧化铝、硅酸镁铝、蒙脱土镁、三聚硅酸镁、硅酸铝镁钠、碳酸氢钠、碳酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、乙基香草醛、柠檬油、橙皮油、香草醛、干酪素等。
进一步研究发现，将灭活益生芽孢杆菌注射给药，可以有效地防治细菌病和病毒病。
本发明所述的灭活益生芽孢杆菌注射剂可用于人或动物的各种细菌性疾病、病毒性疾病的预防、治疗或辅助治疗。
此前没有人尝试用灭活益生芽孢杆菌注射给药用于抗菌和抗病毒的研究，可能主要考虑灭活益生芽孢杆菌注射给药存在安全性问题，与日常使用的水溶性静脉注射剂相比较，灭活益生芽孢杆菌注射剂呈颗粒性混悬液，将这样的颗粒性物质进行静脉给药，认为风险较高。但目前人医临床上已经有将有害菌的菌体进行注射给药的药物，如卡介苗，是结核活菌苗，可通过口服、皮下、腹腔或瘤内注射用于预防结核病和肿瘤的辅助治疗。短小棒状杆菌制剂，为短小棒状杆菌的死菌悬液，经皮下、肌肉、瘤内或静脉滴注等用于一些肿瘤的辅助治疗。此外，还有a群链球菌制剂、铜绿假单胞菌制剂、草分枝杆菌制剂等。另外，还有人将红球菌属、戈登氏菌属、诺卡氏菌属、迪茨氏菌属、冢村氏菌属和类诺卡氏菌属的完整细菌细胞注射给药作为免疫调节剂(专利公开号：cn1735431a)。
本发明经过研究发现，灭活益生芽孢杆菌静脉注射具有防治细菌病和病毒病的作用。益生芽孢杆菌作为一种益生菌将其灭活注射给药具有更安全的特性。注射灭活益生芽孢杆菌能够抗菌和抗病毒的机制可能与增强机体免疫功能有关，也可能是灭活益生芽孢杆菌注射给药后被机体分解代谢后产生的物质发挥作用。
附图说明
图1活的枯草芽孢杆菌革兰氏染色油镜观察照片
图2灭活枯草芽孢杆菌革兰氏染色油镜观察照片
具体实施方式
实施例1
将枯草芽孢杆菌(拉丁名称：bacillussubtilis，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心,保藏编号：cicc10012)接种于培养基(称取10g蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母粉，加水至1000ml，调ph至7.0，121℃灭菌20min制备)，于37℃恒温振荡器中以140r/min的转速培养18-24小时，然后3000转离心5分钟，去除上层培养液保留沉淀，加入无菌生理盐水清洗沉淀，离心5分钟，重复清洗3次后，加入无菌生理盐水，与沉淀混匀，制成混悬液。取一定量的枯草芽孢杆菌生理盐水混悬液，经过thoma细菌计数板进行细菌计数，使每ml混悬液含有1×109个枯草芽孢杆菌菌体。将配制好的枯草芽孢杆菌生理盐水混悬液于121℃、压力0.12mpa，灭活15min，得到灭活枯草芽孢杆菌注射剂。将活的枯草芽孢杆菌和灭活的枯草芽孢杆菌分别进行革兰氏染色，在油镜下观察菌体形态(参见附图1和附图2)，对比发现，灭活菌与活菌保持一致的菌体轮廓和形态,细菌计数发现灭活前后菌体数量未发生明显变化。对灭活枯草芽孢杆菌生理盐水混悬液进行离心，弃上清留沉淀，提取dna，采用pcr扩增16srdna，通过测序还可以进行益生芽孢杆菌种类鉴别。
实施例2
将地衣芽孢杆菌(地衣芽孢杆菌，拉丁名称：bacilluslicheniformis，购自中国工业微生物菌种保藏管理中心,保藏编号：cicc24236)接种于培养基(称取10g蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母粉，加水至1000ml，调ph至7.0，121℃灭菌20min制备)，于37℃恒温振荡器中以140r/min的转速培养18-24小时，然后3000转离心5分钟，去除上层培养液保留沉淀，加入无菌生理盐水清洗沉淀，离心5分钟，重复清洗3次后，加入无菌生理盐水，与沉淀混匀，制成混悬液。取一定量的地衣芽孢杆菌生理盐水混悬液，经过thoma细菌计数板进行细菌计数，使每ml混悬液含有1×109个地衣芽孢杆菌。将配制好的地衣芽孢杆菌生理盐水混悬液于121℃、压力0.12mpa，灭活15min，得到灭活地衣芽孢杆菌注射剂。
实施例3
检测实施例1制备的灭活枯草芽孢杆菌注射剂和实施例2制备的灭活地衣芽孢杆菌注射剂分别对沙门氏菌感染小鼠的防治作用。将体重为18-22g的清洁级昆明种小白鼠分为3组，即正常对照组、沙门氏菌组、灭活枯草芽孢杆菌注射剂组和灭活地衣芽孢杆菌注射剂组，每组30只小鼠，雌雄各半。正常对照组和沙门氏菌组的小鼠尾静脉注射无菌生理盐水，灭活枯草芽孢杆菌注射剂组和灭活地衣芽孢杆菌注射剂组分别尾静脉注射体积为0.1ml/10g的相应药物。给药1次后间隔24小时，沙门氏菌组、灭活枯草芽孢杆菌注射剂组和灭活地衣芽孢杆菌注射剂组的小鼠分别尾静脉注射肠炎沙门氏菌(购于中国兽医微生物菌种保藏管理中心，编号cvcc3377)。连续观察7天，记录小鼠每天的死亡数。采用spss11.5软件对实验数据进行卡方检验，结果见表1。由表1可知，与沙门氏菌对照组比较，灭活枯草芽孢杆菌注射剂组和灭活地衣芽孢杆菌注射剂组均极显著地降低了小鼠的死亡数。说明灭活枯草芽孢杆菌和灭活地衣芽孢杆菌静脉给药对沙门氏菌感染小鼠具有防治作用。
表1灭活枯草芽孢杆菌和灭活地衣芽孢杆菌静脉给药防治沙门氏菌对小鼠致死作用的结果
注：**表示与正常对照组比较差异极显著p＜0.01，*表示与正常对照常组比较差异显著p＜0.05；△△表示与沙门氏菌组比较差异极显著p＜0.01，△表示与沙门氏菌组比较差异显著p＜0.05。
实施例4
分别检测实施例1制备的灭活枯草芽孢杆菌注射剂和实施例2制备的灭活地衣芽孢杆菌注射剂对流感病毒pr8株感染小鼠死亡数的影响。实验选用18-22g清洁级昆明种小白鼠分为正常对照组、pr8株模型组(即流感病毒pr8株感染小鼠模型组)、灭活枯草芽孢杆菌注射剂组和灭活地衣芽孢杆菌注射剂组。每组30只小鼠，雌雄各半。正常对照组和pr8株模型组的小鼠尾静脉注射无菌生理盐水，灭活枯草芽孢杆菌注射剂组和灭活地衣芽孢杆菌注射剂组的小鼠分别尾静脉注射相应注射剂。各组给药体积均为0.1ml/10g。各组小鼠于给药1次后间隔24小时，除正常对照组外，其他各组小鼠在乙醚轻度麻醉下于鼻腔内接种含流感病毒pr8株的鸡胚尿囊液，每只0.05ml，使流感病毒pr8株感染小鼠。此后观察记录10天内各组小鼠死亡数。采用spss11.5软件对实验数据进行卡方检验，结果见表2。由表2可知，灭活枯草芽孢杆菌注射剂组与pr8株模型组比较，可以显著降低了小鼠死亡数，而灭活地衣芽孢杆菌注射剂组与pr8株模型组比较，可以极显著降低小鼠死亡数。以上说明灭活枯草芽孢杆菌和灭活地衣芽孢杆菌注射给药可以用于病毒性疾病防治。
表2灭活枯草芽孢杆菌和灭活地衣芽孢杆菌静脉给药对流感病毒pr8株感染小鼠影响结果
注：**表示与正常对照组比较差异极显著p＜0.01，*表示与正常对照常组比较差异显著p＜0.05；△△表示与pr8株模型组比较差异极显著p＜0.01，△表示与pr8株模型组比较差异显著p＜0.05。