专利名称：8(9)－脱氢雌二醇衍生物的制作方法
技术领域：
本发明背景使用自然界中存在的纯度大且毒性低的雌激素组合物如PREMARIN(马的雌激素轭合物)已成为优选的用于缓解绝综合征、缺乏雌激素妇女的骨质疏松/骨质减少以及其它有关激素紊乱症的医治方法。已证实自然界中存在的雌激素组合物的雌激素组分一般为雌甾酮、马烯雌甾酮、马萘雌甾酮、17-β-雌二醇、二氢马萘雌甾酮和17-β-二氢马萘雌甾酮的硫酸酯(美国专利2,834,712)。通常将该类雌激素组合物用有机或无机酸的碱金属盐在约6.5-7.5的基本中性的pH下缓冲或稳定。也用脲作为稳定剂(美国专利3,608,077)。美国专利4,154,820中讨论了加入抗氧化剂来稳定合成的雌激素轭合物及用三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)无法控制pH以抑制水解。
8，9-脱氢雌甾酮是通过异构化成9，11-不饱和物的合成雌甾酮的过程中用作中间体(美国专利3,394,153)以及在该激素的3-环戊基氧基-17-乙炔基衍生物的生产中用作中间体(美国专利3,649,621)的熟知的化合物。另外，已知8，9-脱氢雌甾酮具有雌激素活性而且能降低血脂的水平(美国专利3,391,169)。8，9-脱氢雌甾酮的碱金属盐、8，9-脱氢雌甾酮-3-硫酸酯及其碱金属盐，以及它们在雌激素替代疗法、动脉粥样硬化及老年骨质疏松上的用途在美国专利5,210,081和5,288,717中公开。
本发明详述本发明提供了17-α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐，和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。它们共同被称为本发明的化合物。17α，Δ8，9-脱氢雌二醇和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的结构分别见以下所示的化合物I和II。
本发明化合物依据使用的命名系统也可命名为17α，Δ8，9-脱氢雌甾酮和17β，Δ8，9-脱氢雌甾酮；及17α-雌-1，3，5，(10)，8-四烯-3，17-二醇和17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇。
17α，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯或17β，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯的药学上可接受的盐包括，但不限于碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、含有1-6个碳原子的烷基铵盐或每个烷基都含有1-6个碳原子的二烷基铵盐以及每个烷基都含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
17α，Δ8，9-脱氢雌二醇-3-硫酸钠和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇-3-硫酸钠是Δ8，9-脱氢雌甾酮给药后形成的Δ8，9-脱氢雌甾酮的代谢物。因此本发明还提供高于百分之一纯度的17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐，及高于百分之一纯度的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
本发明所用的治疗包括治疗存在的症状、改善症状、或减轻症状和抑制包括抑制或阻止症状的进展或发展。
本发明的化合物或者可通过如实施例5中所示的体内Δ8，9-脱氢雌甾酮的代谢而制备，或者可通过如方案I和II中所列的由Δ8，9-脱氢雌甾酮合成而制备。
方案I概括描述了17α，Δ8，9-脱氢雌二醇及其3-硫酸酯的盐的制备，它是将Δ8，9-脱氢雌甾酮的17-酮用适当的还原剂如硼氢化钠还原来制备17β-Δ8，9-脱氢雌二醇开始的。可使用其它的氢化物还原剂如氰基硼氢化钠或氢化铝锂。其3-羟基可用适当的酰基化试剂如苯甲酰氯或乙酰氯来选择性酰化。其17-位上的立体化学转变可应用Mitsunobu反应来实现。酰基部分用适当的碱水溶液如氢氧化钠水解得到17α，Δ8，9-脱氢雌二醇。要生成3-硫酸酯可将该二醇用适当的酰基化试剂如乙酸酐酰化，再用温和的碱性条件如碳酸钾的甲醇液将3-酰基选择性裂解。3-硫酸酯的生成可用三氧化硫-氨、-烷基胺、-二烷基胺或-三烷基胺试剂如三氧化硫-三乙胺或三氧化硫-吡啶来完成。将得到的3-硫酸酯的铵、单烷基铵、二烷基铵或三烷基铵盐通过阳离子交换，可任选通过酸，来转化成另外的盐。例如，用一金属的氢氧化物溶液来完成3-硫酸酯金属盐的转化。实施例1中提供了17α，Δ8，9-脱氢雌二醇和其3-硫酸酯的钠盐及三乙铵盐的制备方法。
方案I
类似地，可按方案II所示以Δ8，9-脱氢雌甾酮起始来制备17β，Δ8，9-脱氢雌二醇及其3-硫酸酯的盐，但不需要17-位立体化学的转变。用方案II中所列的方法制得17β，Δ8，9-脱氢雌二醇及其3-硫酸酯的钠盐和三乙铵盐。该3-硫酸酯的其它盐可通过改变所用的碱来生成。实施例2中提供了17β，Δ8，9-脱氢雌二醇及其3-硫酸酯的钠盐和三乙铵盐的制备方法。
方案II
已发现实施例1和3的化合物随放置时间增加而降解。TRIS稳定的实施例1和3化合物的配合物的制备方法分别在实施例2和4中说明。
本发明化合物为雌激素，如体内标准药理实验方法所示，该方法测定雌性幼鼠及施行了卵巢切除术的大鼠的子宫的生长作为对动情性的评估。将17α，Δ8，9-脱氢雌二醇-3-硫酸钠和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇-3-硫酸钠作为本发明的代表化合物来评估。为进行对照也对雌甾酮和Δ8，9-脱氢雌甾酮进行评估。将待评估的化合物制成玉米油混悬液。也单独用玉米油作为空白对照。
下列方法详述对幼鼠的动情性的评估。使用完整的Charles RiverCD雌性幼鼠(出生后23天)。将待测化合物以3日总共皮下注射1-1000μg和口服3-1000μg的给药剂量皮下或口服给药。雌甾酮以3日总共0.03-1μg的剂量皮下给药。在最后一次给药后约24小时将小鼠处死，取出子宫，称重。将得到的结果概括于下表中。
雌激素活性-小鼠子宫生长治疗物a途径最小有效剂量b加倍剂量c雌甾酮 皮下0.06—0.1 0.1—0.2Δ8，9 皮下 6.2 14.817α 皮下 1.75 7.6117β 皮下 0.24 5.0雌甾酮 口服 5.9 25.9Δ8，9口服 2.626.717α 口服 2.84 6.67*17β 口服 3.018.8aΔ8，9＝Δ8，9-脱氢雌甾酮；17α＝17α，Δ8，9-脱氢雌二醇；17β＝17β，Δ8，9-脱氢雌二醇b与溶媒相比，给药三天后子宫重量产生明显增加所需要的最小有效剂量。c与溶媒相比，给药三天后子宫重量产生100％增加所需要的总剂量。*如果排除得自个别的子宫对10μg剂量的强烈反映的结果，将得到16.6μg的剂量值。
下列方法详述对卵巢切除术的大鼠的动情性的评估。将CharlesRiver CD幼鼠在出生后30天切除卵巢，让子宫退化12天。卵巢切除后13天开始将待测的化合物给药，持续7天。将待测化合物以每日每只鼠3-1000μg的剂量每日皮下或口服给药。在最后一次给药后约24小时将大鼠处死。取出子宫，称重。将得到的结果概括于下表中。
雌激素活性-小鼠子宫生长治疗物a途径最小有效剂量b加倍剂量c雌甾酮 皮下 0.05—0.1 0.12—0.7Δ8,9 皮下0.3 1.217α 皮下10.4 171.417β 皮下0.8 2.9雌甾酮 口服10.6 22Δ8,9 口服3.3 21.517α 口服67.1 11617β 口服12.0 14.5aΔ8，9＝Δ8，9-脱氢雌甾酮；17α＝17α，Δ8，9-脱氢雌二醇；17β＝17β，Δ8，9-脱氢雌二醇b与溶媒相比，给药七天后子宫重量产生明显增加所需要的最小有效剂量。c与溶媒相比，给药七天后子宫重量产生100％增加所需要的总剂量。
本发明化合物是抗氧剂。17α，Δ8，9-脱氢雌二醇和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的抗氧剂性质按标准药理实验方法测定，上述方法通过用于分析游离醛的TBARS(硫代巴比妥酸活性物质)方法(YagiK.，Biochem Med 15212-216(1976))来测定其抑制由暴露于Cu++离子或被培养的内皮细胞(Parthasarathy S，Proc Natl Acad Sci USA861046-1050(1989))中所诱发的氧化性改变的低密度脂蛋白(LDL)的形成的能力。
从该标准药理实验方法中得到的结果表明17α，Δ8，9-脱氢雌二醇和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇是LDL氧化的有效抑制剂，其抑制该过程高达96％。在Cu++介导的氧化中，17α，Δ8，9-脱氢雌二醇和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的IC50值皆为0.19μM。在介导氧化的猪主动脉内皮细胞中分别得到了0.26μM和0.17μM的IC50值。经对照，在介导氧化试验方法的猪主动脉内皮细胞中得到雌甾酮的IC50值为0.56μM。
为进一步证明17α，Δ8，9-脱氢雌二醇和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的抗氧化性质，用培养细胞进行了两个另外的标准药理实验过程。在第一个实验方法中，在17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的存在和不存在下，通过暴露于Cu++改变放射性标记的-LDL(125I-LDL)(McFarlane AS，InMunro HN，Allison JB，eds.Mammalian Prolein metabolism,Vol.1.New YorkAcademic Press297-341(1964))。其次，将J774巨噬细胞暴露于处理过的125I-LDL中，所述巨噬细胞表达氧化性结合改性-LDL的清除剂脂蛋白受体。该实验结果表明在2.5μM浓度的17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的存在下，被氧化的LDL的结合分别被降低48％及54％，在0.25μM浓度下分别被降低34％及28％。经对照，相同浓度的雌甾酮降低被氧化的LDL的结合分别为39％及0％。由于认为由巨噬细胞所导致的被氧化的LDL的结合及代谢主要归因于形成泡沫细胞，进一步形成动脉粥样斑块，所以降低LDL的氧化及与清除剂受体的随后结合被认为是非常有益的。
在第二个实验方法中，将猪主动脉内皮细胞(PAEC)暴露于如上已改性的LDL中，即在17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的存在和不存在下将LDL暴露于Cu++中。已证实被氧化的LDL对内皮细胞具有细胞毒性，而且该过程还影响动脉粥样硬化的过程。用处理过的LDL连续24小时进行细胞孵育，进行MTT试验来确定细胞毒性(Hansen MB，J Immu Methods 119203-210(1989))。该实验方法确定了所给试验中成活细胞的百分率。在实验中，在不存在化合物下，暴露于25μg/ml的被氧化的LDL后，只有2％的细胞成活。相反，在17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或17β，Δ8，9-脱氢雌二醇(2.5μM)存在下，暴露于经Cu++处理的LDL中，细胞成活率为100％或更高。在相同的该试验中，其它所测的化合物对PACE具有很弱的保护作用(17β-雌二醇＝11％成活率；马烯雌甾酮＝4％成活率；雌甾酮＝37％成活率)。该实验结果表明在17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或17β，Δ8，9-脱氢雌二醇存在下，被改性的LDL不具细胞毒性，因此，与以上的TBARS方法所证实的相同，该数据与17α，Δ8，9-脱氢雌二醇和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇对氧化改性的抑制一致。
从这些标准药理实验方法的结果可知，17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐和17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐可用于雌激素缺乏症的替代疗法中。因此本发明化合物用于在卵巢切除后或绝经后提供雌激素替代治疗，以及用于解除与雌激素缺乏有关的疾病，包括血管舒缩综合症如热潮红，以及其它与绝经有关的症状，如阴道萎缩、阴道炎和下尿道的萎缩而可能引起的尿频、尿失禁及排尿困难的增加。本发明化合物可用于阻止骨损失及抑制或治疗骨质疏松症。本发明化合物具有心脏保护作用，可用于治疗动脉粥样硬化症。这些心血管的保护性质在当用雌激素预防绝经后患者骨质疏松症以及男性需要雌激素治疗时非常重要。本发明化合物还是抗氧剂，因此可用于治疗或抑制自由基诱发的疾病。允许使用抗氧剂的特殊情况包括癌症、中枢神经系统疾病、Alzheimer氏疾病、骨病、衰老、炎症疾病、外周血管疾病、类风湿性关节炎、自体免疫疾病、呼吸窘迫、肺气肿、再灌注损伤的预防、病毒性肝炎、慢性活动性肝炎、结核病、牛皮癣、全身性红斑狼疮、成人呼吸窘迫征、中枢神经系统创伤和休克。另外，本发明化合物可用于抑制泌乳以及预防和治疗腮腺炎性睾丸炎。
本发明化合物可单独制成制剂。更优选制成含有本发明化合物与药学上可接受的载体结合的药用组合物。药用载体的比例可根据化合物的溶解性和化学性质、所选的给药途径以及标准药理实践来决定。该药用载体可以是固体或液体。
固体载体可包括一或多种物质，可作为矫味剂、润滑剂、加溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、压片助剂、粘合剂或片剂崩解剂；它还可用作包囊材料。在粉末剂中，载体是与分散较好的活性物质相混合的分散均匀的固体。对于片剂，是将活性组分与适当比例的具有必需压制性质的载体混合，然后压制成所要求的形状和大小。粉末剂和片剂优选含有高达99％的活性组分。适当的固体载体包括，例如，磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、蔗糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜂蜡和离子交换树脂。
液体载体用于制备溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、酏剂和加压组合物。可将活性组分溶解或混悬于药学上可接受的液体载体中，如水、有机溶剂、两者的混合液或药学上可接受的油或脂肪。液体载体可含有适当的其它的药用添加剂如加溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、矫味剂、混悬剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。用于口服和非肠道给药的适当液体载体的实例包括水(部分含有以上添加剂如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇类(包括一元醇和多元醇，如二元醇)和其衍生物、lethicins及油类(如精馏的椰子油和花生油)。对于非肠道给药，载体也可以是油的酯如油酸乙酯及十四烷酸异丙酯。无菌液体载体用于供非肠道给药的无菌液体形式的组合物。加压组合物的液体载体可以是卤化的碳氢化合物或其它药学上可接受的抛射剂。
可利用为无菌溶液或混悬液的液体药用组合物进行例如肌内、腹膜内或皮下注射。无菌溶液也可静脉内给药。本发明化合物还可以以液体或固体组合物的形式口服给药。
本发明化合物可以以常用的栓剂形式直肠或阴道给药。对于鼻腔内或支气管内吸入或吹入给药，可将本发明化合物制成水溶液或部分水溶液，然后以气雾剂的形式给药。本发明化合物也可通过利用含有活性化合物和载体的透皮贴片透皮给药，该载体对活性化合物为惰性，对皮肤无毒，而且允许将供全身吸收的药物通过皮肤转运到血液中。该载体可采用许多形式如乳膏剂和软膏剂、糊剂、凝胶剂及包藏装置。该乳膏剂和软膏剂可以是水包油或油包水型的粘性液体或半固体乳剂。由分散在含有活性组分的石油或亲水性石油中的吸收性粉末组成的糊剂也可适用。可使用多种包藏装置以将活性组分释放到血液中，例如覆盖含有活性组分及有或无载体的储库的半透膜，或含有活性组分的基质。其它包藏装置在文献中已报道。
另外，可将本发明化合物与药学上可接受的溶媒制成含有0.1-5％，优选2％活性化合物的溶液剂、乳膏剂或洗剂，用于真菌感染区域的给药。
所需的剂量随所用的特定的组合物、给药途径、所呈现症状的严重程度以及所治疗的特定的个体而变化。根据标准药理实验过程中得到的结果，设计出活性化合物的每日剂量是0.02μg/kg-500μg/kg。治疗一般从低于该化合物的最适剂量的小剂量开始。然后在允许的情况下，增加剂量直到达最适效果；口服、非肠道、鼻腔或支气管内给药的精确剂量由给药的医生根据对所治疗个体的经验来决定。优选单位剂型的药用组合物，如片剂或胶囊。在这种剂型中，将该组合物再分成含有适量活性组分的单位剂量；可将组合物包装成单位剂型，例如，袋装的粉末、含有液体的管制瓶、安瓿、预装满的注射器或小药囊。单位剂型可以是如片剂或胶囊本身，或者可以是适当数量的任何这些组合物的包装形式。
下面提供本发明的代表性化合物的制备方法。
实施例117α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯钠盐A.17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇向搅拌的3-羟基雌-1，3，5(10)，8-四烯-17-酮(24.13g)、甲醇(185mL)及二氯甲烷(138mL)的混悬液中在25分钟内分次加入硼氢化钠(6.92g)，同时保持温度在28-30℃间。向该轻微混浊的溶液中分等份加入蒸馏水(555mL)。温度升至30-31℃。将得到的浆状液在25-30℃间搅拌0.5小时，然后冷至0.5℃。过滤收集产物，用水(40×40mL)洗涤。在真空干燥器内用五氧化二磷将初为白色的湿滤饼(29.66g)干燥4天，得到23.54g(96.83％)具有适当光谱(红外和质子核磁共振)数据的黄色产物。
B.17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-苯甲酸酯给一个2L多颈烧瓶安装机械搅拌器、带有氮气入口的冷凝管、均等压力的刻度加料漏斗及一温度计。在烧瓶中加入17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇(60.00g，0.2219mol)、四氢呋喃(500mL)和三乙胺(46.4mL，0.3329mol，1.5摩尔过量)，将混合物在通氮气下搅拌至得到溶液。在加料漏斗中加入苯甲酰氯(30.98mL，0.2669mol，1.203摩尔过量)和四氢呋喃至100mL刻度。在25分钟内在氮气下滴加苯甲酰氯溶液，在此期间用水/冰浴保持反应温度在15-20℃之间。移去冷浴，将搅拌的混悬液(Et3N.HCl沉淀)升至室温(23℃)。滴加完苯甲酰氯溶液3.5小时后，将反应混合液在冰中冷却，快速加入饱和盐水(204mL)、水(68mL)和浓盐酸(34mL)的混合液。温度从23℃升至26℃。搅拌5分钟后，固体在下层沉淀。从有机相中分出水层，用四氢呋喃提取(1×200mL和1×100mL)。将合并的有机相用饱和盐水(2×100mL)洗涤，再用饱和盐水(70mL)和5％的碳酸氢钠(30mL)的混合液洗涤三次。再用饱和盐水(100mL)洗涤也不能完全除去残留的苯甲酰氯，所以在磁力搅拌下，将该溶液用无水硫酸镁干燥15分钟。过滤除去干燥剂，滤饼用四氢呋喃洗涤。将滤液和洗液在30℃下蒸发得干燥固体。将该固体与庚烷(400mL)一起经磁力搅拌3.5小时。过滤收集得到的白色固体，用冷却的庚烷(0-5℃，2×75mL，1×100mL)洗涤。将湿滤饼(108.09g)在真空干燥箱中室温干燥3天得到定量收率(83.35g，100.3％)的粗品17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-苯甲酸酯。该物质适用于下一步骤。
将粗品苯甲酸酯(5.0g)在95％乙醇(65ml)中搅拌和加热得到溶液，将该溶液通过带有槽纹的快速滤纸过滤。将滤器用95％的热乙醇漂洗，再将该溶液蒸馏至50mL体积。冷却上述溶液，将得到的结晶的浆状液冷冻。冷至-10℃后过滤收集产物，用95％的冷(-10℃)乙醇洗涤。在65℃真空干燥箱中干燥过夜得纯品产物(3.82g，76.40％)。光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据适当，元素分析可以接受。
C.17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-苯甲酸酯17-(3，5-二硝基苯甲酸酯)在通氮气下，向一个装有机械搅拌器、带有氮气入口的回流冷凝管及温度计的1L多颈烧瓶中加入17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-苯甲酸酯(73.42g，0.1961mol)、三苯膦(66.85g，0.2549mol)、3，5-二硝基苯甲酸(54.06g，0.2549mol)和甲苯(530mL)。在该搅拌的混悬液中在7分钟内从50mL等压的滴液漏斗中加入偶氮二羧酸二乙酯(40mL，0.2549mol)和甲苯(10mL)的溶液。用10mL甲苯漂洗完成加料(共计甲苯550mL)。将该搅拌的混悬液缓缓加热到70℃并在此温度下保持2.5小时。(在70℃加热1/2小时后开始结晶。)
将结晶的浆状液冷却至43℃然后再冷至-10℃。过滤收集结晶，用冷(-10℃)甲苯(2×80mL)、冷(-10℃)庚烷-甲苯(7∶3)和冷(-10℃)庚烷(2×80L)洗涤。将湿滤饼(118.79g)在真空干燥箱中室温干燥过夜得到107.56g混有1，2-二乙酯基肼的粗品。
向1L锥形瓶中加入该粗品(107.56g)和甲醇(310mL)。将该混合物磁力搅拌5分钟，过滤收集产物。用甲醇(2×60mL)洗涤后，将湿滤饼(83.23g)在65℃真空干燥箱中干燥过夜。黄色结晶产物(75.65g，67.87％)具有适当的光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据和可接受的元素分析。
D.17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3，17-二乙酸酯在装有17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-苯甲酸酯17-(3，5-二硝基苯甲酸酯)(71.00g，0.1249mol)的3L多颈瓶中加入四氢呋喃(630mL)和320mL2N的氢氧化钠。将混合液在室温(23-27℃)、氮气下搅拌24小时。快速加入2N盐酸(196mL)和乙酸乙酯(880mL)。所得溶液分层。下面的水相用乙酸乙酯(3×200mL)洗涤。将合并的有机提取液用饱和盐水洗涤(2×300mL，最后洗至pH7)。在磁力搅拌下，将该溶液用无水硫酸镁干燥15分钟。
蒸发得到红色固体(54.08g)，并将其用油泵真空抽气数分钟。加入吡啶(250mL)和乙酸酐(250mL)，将塞好的反应瓶摇荡以得到溶液。将溶液室温下放置过夜，倒入冰中。加水至2.5L，将得到的混悬液搅拌直到获得易处理的红色固体。过滤收集固体，再与300mL水混合。收集产物，滤饼用水(共计约2L)洗涤。在真空干燥器中用五氧化二磷干燥过周末得粉色固体(44.23g)。在甲醇(100mL)中用磁力搅拌数分钟，过滤收集。将滤饼用甲醇(共50mL)洗涤三次，室温下在真空干燥箱中干燥过夜。粉色物质重38.60g(87.21％)。
将产物(38.60g)溶于热甲醇(120mL)中，将上述热溶液与活性炭下起短时间加热。通过硅藻土过滤除去活性炭，滤垫用热甲醇洗涤。产物开始在滤液中结晶。再将滤液和洗液加热以溶解产物，将溶液蒸馏至约120mL体积。将溶液冷却至近室温，再将得到的结晶浆状液冷却到0-5℃。过滤收集结晶，用冷(0-5℃)甲醇(2×35mL)洗涤。室温下在真空干燥箱中干燥得标题化合物(31.86g，82.39％)。
E.17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇17-乙酸酯向在0℃的17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3，17-二乙酸酯(30.00g)的二氯甲烷(67mL)和甲醇(182mL)溶液中，通氮气下滴加饱和的碳酸钾甲醇溶液(136mL)，保持温度0℃或以下。将反应混合液在用恒温冷浴冷至0℃(内温)下搅拌1.25小时，然后在硅胶薄层板上用二氯甲烷-乙酸乙酯(19∶1)展开检查。没有发现起始原料。将反应混合液在保持反应瓶于冷浴下用油泵真空蒸馏。它使内温明显低于0℃(如-7至-10℃)。向得到的稠膏中快速加入430mL的5％乙酸(v/v)水溶液，搅拌混合液直至得到可过滤的固体。过滤收集固体，然后与70mL 5％乙酸和适当体积的水在混合机中混合。过滤收集粗品产物，用水充分洗涤。在真空干燥器中用五氧化二磷干燥3天得到26.19g(99.04％)粗品。
将粗品产物(26.19g)在含有几滴冰醋酸的甲醇液(270mL)(溶液pH＝4)中经磁力搅拌，并加热以得到溶液。将该溶液通过带有槽纹的快速滤纸过滤，用20mL热甲醇漂洗。将溶液蒸馏至175mL体积，放冷。用冰冷却，刮壁以增加结晶。在冷却器中(-20℃)冷却1小时后，过滤收集结晶，用冷(-20℃)甲醇(3×20mL)洗涤。在真空干燥箱中60℃干燥得到纯品(22.72g，86.75％)，其具有适当的光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据和可接受的元素(C&H)分析。
从母液中得到第二批产物(172g，6.57％)。将其与第一批产物(22.27)余下的物质合并，将总产物(22.99g)在甲醇(230mL)中磁力搅拌并加热而得到黄色溶液。将该溶液通过带有槽纹的快速滤纸过滤，用20mL热甲醇漂洗。将溶液蒸馏至125mL体积，放冷至室温，再冰冻。过滤收集所得结晶，用冷(0℃)甲醇(3×15mL)洗涤。在60℃真空干燥箱中干燥20小时得白色产物18.79g，(重结晶步骤计算86.75％，总的71.06％)，其具有适当的光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据和可接受的元素(C&H)分析。
F.17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯17-乙酸酯，三乙铵盐向在室温、搅拌下的17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3，17-乙酸酯(17.50g，0.0560mol)的四氢呋喃(204mL)溶液中，通氮气下加入三乙胺-三氧化硫复合物(20.30g，0.1120mol，2摩尔过量)。固体迅速溶解，将该溶液在室温、通氮气下搅拌4小时。3.75小时后在硅胶薄层板上用二氯甲烷-乙酸乙酯(19∶1)展开检查没有发现起始原料。加入无水乙醚(612mL)，形成油状物。稍后，该油状物结晶。将混合液再搅拌1/2小时，过滤收集结晶。将结晶用乙醚(2×125mL)洗涤。将湿结晶(43.31g)在室温下于真空干燥箱中干燥过夜得到含有过量试剂的产物28.90g(104.51％)。
在搅拌的该粗品(28.90g)的甲醇(70mL)溶液中小心加入三乙胺(2-3mL)使pH为7-8。分等份快速加入乙醚(800mL)。又形成油状物，该油状物迅速结晶。继续搅拌15分钟，将结晶的浆状液冷却至-15℃。过滤收集结晶，用乙醚(3×80mL)洗涤。在室温下于真空干燥箱中干燥过夜得到25.09g(90.74％)含有一些固体块状物的白色物质。
在搅拌的以上物质(25.09g)的甲醇(40mL)溶液中，于室温下小心加入三乙胺(几滴)调节pH至7。将该溶液过滤到1L的多颈瓶中，用甲醇(20mL)冲洗滤器。在该磁力搅拌下的溶液中加入乙醚(600mL)。再一次产物又形成油状物，其迅速结晶。将混合液剧烈搅拌1/2小时，再冷却至-10℃。过滤收集白色结晶产物，用乙醚(3×60mL)洗涤。在室温下于真空干燥箱中干燥得到标题产物(23.64g，94.22％和85.49％总收率)，其具有适当的光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据和可接受的元素(C，H&N)分析。
G.17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯钠盐向17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯17-乙酸酯三乙铵盐(22.50g，0.04558mol)的甲醇(144mL)溶液中，通氮气下加入144mL 1.6N的氢氧化钠，将混合液经磁力搅拌4.5小时。室温下蒸发得到黄色溶液直至收集到150mL馏出液。加入正丁醇(450mL)，搅拌该混合液至粘性白色结晶溶解，得到两相。将混合液转移至装有20mL正丁醇、10mL饱和盐水和10mL水的混合液的分液漏斗中。慢慢分层。将有机相上层用饱和盐水(120mL，2×100mL，3×75mL和1×50mL)连续洗涤直至最终洗液pH为7。将浑浊有机层在7cm布氏漏斗中通过一小的solka Floc垫(用正丁醇预先洗过)过滤，再用正丁醇(2×25mL)漂洗。将该溶液转移至一装有50mL正丁醇漂洗液的2L圆底烧瓶中。在35-40℃下用油泵真空蒸发该溶液直至得到结晶的稠浆状液，收集到300mL馏出液。加入乙醚(500mL)，与浆状液混合。在10cm滤器上收集白色结晶，用乙醚(4×80mL)洗涤。将滤饼转移至1L锥形瓶中，与400mL乙醚一起经磁力搅拌5分钟。再收集结晶，用乙醚(5×70mL)洗涤。将湿滤饼在真空干燥箱中通氮气干燥6天得到17.17g(96.49％以一水合物计)白色固体。
将以上的粗品产物(17.17g)在美国药典标准的乙醇(400mL)中经磁力搅拌至几乎所有的固体都溶解。过滤混合液，将滤液转移至装有20mL美国药典标准的乙醇的5L多颈瓶中。将溶液磁力搅拌，加入乙醚(1.4L)以产生结晶。再加入1.9L乙醚来完成此过程。将结晶浆状液冷却至-10℃，过滤收集结晶。将滤饼用乙醚(2×100mL)洗涤。在室温下于真空干燥箱中干燥二天得到结晶的标题产物(17.67g，86.34％以MW＝448.989计)。
分析计算值C18H21O5NaS.0.9C2H5OH.1.3H2O.0.2NaCl(448.989)C，52.97；H，6.51；Na，6.14；Cl，1.58；EtOH，9.23；H2O，5.22实测值C，52.78；H，6.27；Na，6.17；Cl，1.70；EtOH，9.12；H2O，4.01实施例2用三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS)制备17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯，钠盐在三(羟甲基)氨基甲烷(8.48g)的蒸馏水(1400mL)溶液中加入17α-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17α-二醇3-硫酸酯钠盐(14.69g，MWW-7332-3，P.R.215-20)，将混合液经磁力搅拌以溶解该甾体化合物。过滤溶液，滤器用水(100L)洗涤。将溶液转移至托盘中置于-40℃大Virtis冷冻干燥机中，并用500mL水漂洗。溶液冰冻，将固体冷冻干燥5日。将得到的白色、松软、片状物质压制、碾碎并在瓶中混合均匀。在室温下再在冷冻干燥机中将该物质干燥4日。白色产物重20.93g(98.54％)。
实施例3A.17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇在搅拌的3-羟基雌-1，3，5(10)，8-四烯-17-酮(24.13g)、甲醇(185mL)及二氯甲烷(138mL)的混悬液中，在25分钟内分次加入硼氢化钠(6.92g)，同时保持温度在28-30℃间。在该轻微浑浊溶液中分等份加入蒸馏水(555mL)。温度升至30-31℃。将得到的浆状液在25-30℃间搅拌0.5小时，然后冷至0.5℃。过滤收集产物，用水(40×40mL)洗涤。在真空干燥器内用五氧化二磷将初为白色的湿滤饼(29.66g)干燥4天得到23.54g(96.83％)具有适当光谱(红外和质子核磁共振)数据的黄色产物。
B.17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3，17-二乙酸酯将17β-雌1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇(23.09g)与乙酸酐(120mL)和吡啶(120mL)的混合液在塞紧的500mL烧瓶中振摇。将得到的黄色溶液室温下放置过夜。将溶液加入到碎冰(约600mL)中。生成白色沉淀。磁力搅拌该浆状液，加入水(220mL)。继续搅拌，使温度升至18-20℃。过滤收集产物，用水(100mL)洗涤。在真空干燥器内用五氧化二磷将湿滤饼(90.65g)干燥得到28.19g(93.13％)灰白色粗品产物。
向一个装有机械搅拌器、温度计和一套蒸馏装置的2L多颈烧瓶中，通氮气下加入粗品17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3，17-二乙酸酯(28.19g)和甲醇(675mL)。将浆状液加热，再加入200mL甲醇后产物在59-60℃溶解。将溶液蒸馏约至500m L，收集404mL馏分。将得到的晶体浆状液放冷至35℃，然后冷却至-10℃。过滤收集结晶，用冷(-10℃)甲醇(3×50mL)洗涤。将湿晶体(30.14g)在65℃真空干燥炉内干燥4日得到25.15g(89.24％)白色结晶3，17β-二乙酸酯，具有一致的光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据和可接受的元素(C&H)分析。
C.17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇17-乙酸酯在通氮气下，向用恒温外浴冷至-5℃的搅拌的17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3，17-二乙酸酯(24.16g，0.0682mol)的甲醇(150mL)和二氯甲烷(56mL)混悬液中，在45分钟内加入113mL饱和的碳酸钾的甲醇溶液。(加料过程中反应温度在-3℃到-5℃之间)。在-5℃通氮气下继续搅拌，总时间22.5小时。在1小时45分钟后形成沉淀(产物)。用二氯甲烷-乙酸乙酯(9.5∶0.5)为展开剂在硅胶上用TLC判断反应完成。为反应瓶安装一套蒸馏装置。在保持反应瓶在-5℃恒温外浴中，减压下(先用抽气机后用油泵)蒸馏除去所有溶剂。迅速加入5％乙酸(350mL)至干燥固体中，将得到的浆状液在-5℃至0℃间搅拌2小时。得到的pH为4.5。过滤收集粗品，用4×50mL水洗涤。将白色粗品与300mL水一起磁力搅拌，再过滤收集。用水(9×40mL)洗涤除去微量酸，最后洗液为pH5.5。在真空干燥器内用五氧化二磷将湿滤饼(37.06g)干燥过夜得到20.02g(94.03％)17β-单乙酸酯粗品产物。
向一个装有机械搅拌器、温度计和一套蒸馏装置的500mL圆底多颈烧瓶中，通氮气下加入粗品(20.02g)、甲醇(100mL)和二氯甲烷(200mL)。溶液的pH(沾湿pH试纸)为8；加入5滴冰醋酸使pH为5。将上述溶液在大气压下蒸馏至得到大量结晶(馏出液体积220mL)。将浆状液冷至40℃，再用干冰-丙酮浴冷却至-10℃。过滤收集产物，用冷(-10℃)甲醇(3×25)洗涤。将湿滤饼(21.65g)在70℃真空干燥炉内干燥过夜，再在85℃真空干燥炉内干燥5.5小时。得到具有适当光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据的白色结晶物质(18.07g，90.25％)。
D.17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯17-乙酸酯三乙铵盐向17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇17-乙酸酯(17.18g，0.05499mol)的四氢呋喃(200mL)溶液中，通氮气下加入三氧化硫-三乙胺(19.93g，0.110mol)，将该溶液在室温下搅拌4小时。在硅胶薄层板上用CH2Cl2∶EtOAc∶MeOH∶NEt3(3∶3∶1.5∶2.5)展开，来判断反应完成。加入乙醚(600mL)，将得到的浆状液室温下搅拌30分钟。过滤收集粗品产物，用乙醚(3×27mL)洗涤。将湿滤饼(36.50g)在室温下于真空干燥箱中干燥2天得到含有过量试剂的白色粗产物30.13g(100.98％)。
在一个装有机械搅拌器、带有氮气入口的回流冷凝管及温度计的1L多颈烧瓶中，通氮气下加入粗品产物(30.13g)和甲醇(80mL)。温度由26℃降至20℃，因此使用温水浴使温度在25-25℃。再加入50mL甲醇使在此温度下得到溶液。溶液的pH(沾湿pH试纸)为3。加入三乙胺(2.5mL)小心将pH调至7-8。
在该澄清溶液中立即加入乙醚(1L)。将得到的浆状液用乙醚(2×75mL)转移到一个2L锥形瓶中，磁力搅拌。再加入50mL乙醚(共计1,200mL)，将得到的浆状液室温下搅拌10分钟。然后用丙酮-干冰浴冷至-10℃。过滤收集产物，用乙醚(3×30mL)洗涤。将湿滤饼(32.63g)在室温下于真空干燥箱中干燥过夜得到23.25g(85.64％)具有适当的光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据和可接受的元素(C，H和N)分析的纯产物。
E.17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯钠盐在17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯17-乙酸酯(二酯)三乙铵盐(22.27g，0.09511mol)的甲醇(145mL)溶液中，加入145mL 1.6N的氢氧化钠，将混合液于室温(25℃)下搅拌直至收集到140mL馏出液。将该白色、粘性固体(蒸发过程中沉淀出)通氮气下用正丁醇(150mL)搅拌30分钟溶解。将混合液转移至装有20mL正丁醇、10mL饱和盐水和10mL水的分液漏斗中。分层缓慢，所以再加入60mL盐水。分出下层水溶液(约126mL)，将有机相用饱和盐水(1×40mL，再用3×30mL，最终洗到pH13-14)洗涤。开始形成固体。加入正丁醇(500mL)、饱和盐水(100mL)和水(20mL)。产物在混合后再溶解，洗液pH为12。有机相再用饱和盐水(6×100mL)洗涤直至最终洗液pH7-8。将稍微浑浊的有机层通过solka Floc过滤，将滤垫用正丁醇(50mL)洗涤。将该溶液用50mL正丁醇转移至一圆底烧瓶中，在35-38℃下用油泵真空蒸发该溶液直至出现结晶(浓缩后体积为208mL，630mL留出液)。在该搅拌的浆状液中加入乙醚(700mL)，将该浆状液室温下搅拌5分钟。过滤收集产物，用乙醚(4×100mL)洗涤。将湿滤饼(39.99g)在真空干燥箱中室温(25℃)干燥得到16.83g灰白色粗品产物。
向以上的粗产物(16.83g)中加入95％乙醇(165mL)，将混合液搅拌10分钟得到浑浊溶液。过滤溶液。向磁力搅拌下的澄清滤液中加入乙醚(1，500mL)(在加入500mL后结晶明显)。
将得到的浆状液室温下搅拌10分钟，过滤。将滤饼用乙醚(5×100mL)洗涤。得到的白色粉末状固体(17.28g)还有乙醇味道，所以将其与乙醚(300mL)一起磁力搅拌10分钟，再过滤收集。将滤饼用乙醚(4×50mL)洗涤，将湿滤饼(25.18g)在真空干燥箱中室温下干燥过夜。该白色产物(15.50g，86.51％)具有适当的光谱(红外，质子核磁共振和质谱)数据。
实施例4用三(羟甲基)胺基甲烷(TRIS)制备17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯钠盐向搅拌的17β-雌-1，3，5(10)，8-四烯-3，17-二醇3-硫酸酯钠盐(13.11g)的蒸馏水(1,400mL)溶液中加入TRIS(7.56g)，过滤该溶液。滤器用100mL蒸馏水洗涤。将滤液和洗液用500mL蒸馏水转移至-40℃托盘中。将冰冻溶液冷冻干燥4日。将得到的白色有光泽物质(20.92g)压制、混合，置于预先称重的瓶中，于室温(23℃)下在冷冻干燥器中干燥4日。产物重19.69g(97.55％)。
实施例5通过体内Δ8，9-脱氢雌甾酮的代谢制备17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或17β，Δ8，9-脱氢雌二醇A.给药剂量及样本收集将四只重9-13kg的雌性狗以1mg/kg的剂量口服Δ8，9-脱氢雌甾酮胶囊。研究期间将狗放在室内单个的不锈钢代谢笼内。给药前给狗禁食一夜，给药后4小时恢复进食。研究期间随意给水。给药后在0，0.5，1，2，4，6和8小时收集血液(8mL)，得血浆。在干冰上收集给药后24小时的尿液。
B.HPLC测定代谢模式1.尿代谢模式通过分析酶水解后0-24小时的样本测定尿的代谢。为了水解轭合物，将一份尿(1ml)与1ml pH5.0的0.05M的醋酸钠缓冲液混合，在37℃下与2000单位的蜗牛酶(Glusulase)(Helix Pomatia，DuPont)一起培养。将水解后的样本以2500rpm的速度离心10min。将水解后的尿样的上清液用C-18/N+柱(来源于Chemical Separations，PA的含有C-18和季铵吸附剂的双功能柱)提取。该柱提取是在抽真空下进行(Speed Mate 30 Applied Separation)。首先将C-18/N+柱用2×1mL丙酮、2×1mL甲醇、2×1mL 0.1N乙酸和2×1mL H2O调节。将样本(上清液)上柱，将该柱用2×1mLH2O、2×1mL 0.1N乙酸、2×1mL H2O和2×1mL己烷冲洗。然后在2×1mL丙酮中洗脱代谢物。将提取液在氮气下干燥，再在1ml流动相[60％缓冲液(0.05M KH2PO4，pH3.0)和40％有机液(2∶1乙腈∶甲醇)]中复制。将每份提取液的25微升用SP8780自动进样器(Spectra-Physics)注射到C-65μHPLC柱(Alltech)上，用ESA-420泵以1ml/min流速洗脱。用电化学检测器(Coulochem II-ESA)检测代谢物。将检测器的电位设在0.75V(屏蔽元件)、0.35V(电极1)和0.70V(电极2)，在图表记录仪上(Kipp和Zonen BD40)记录电极2的信号。
2.血浆代谢模式血浆样本也在水解后用HPLC分析。轭合物的水解通过按以上尿样说明的方法将样本与蜗牛酶培养来实现。离心后，按以上说明的方法用C-18/N+柱提取血浆样本，通过HPLC-电化学检测进行分析。
3.在酶抑制剂存在下水解血浆及尿样本中存在的轭合物类型通过将所有样本在200μM葡糖二酸单内酯(一种β-葡糖醛酸酶抑制剂)的存在或不存在下进行水解而确定。水解、提取和HPLC分析按以上说明的方法进行。
C.通过对水解的尿及血浆样本的GC/MS分析鉴定代谢物通过对水解的尿及血浆样本的提取物的TMS衍生物的EI-GC/MS分析鉴定代谢物的结构。经过分析及与可靠的参考标准进行质谱对比确证代谢物的结构。
1.水解的尿样本的GC/MS分析将一只狗的0-24hr尿的5ml与5ml pH5.0的醋酸钠缓冲液(0.05M)和10,000单位的蜗牛酶混合。将混合物在振摇的水浴(PrecisionScientific)中于37℃下培养过夜。次日清晨，将水解液在2500rpm速度下离心10分钟。如前所述进行C-18/N+柱提取。用丙酮洗脱代谢物后，使用氮气干燥提取液。然后将每个提取物或参比标准在80μl甲苯中复制；然后加入10μl BSTFA和5μl吡啶，在65℃反应1小时形成代谢物的TMS衍生物。将衍生化后的样本用直接接合Varian 3400气相色谱仪的Finnigan-MAT 8230高分辨质谱仪分析。在SS-300数据系统上获得数据并在Printronix上打印。源离子化方式为正电子撞击。所用的柱是J&W DB-5MS 30M×0.32mm ID。初柱温80℃，持续约1分钟，再以10℃/min程序升至260℃。注射温度为250℃。注射体积为2μl。
2.水解的血浆样本的GC/MS分析将2ml血浆与2ml pH5.0的醋酸钠缓冲液(0.05M)混合，再用2000单位的蜗牛酶(DuPont)水解。将混合物在振摇的水浴中37℃下培养过夜，如前所述提取。按以上所述分析实验样本、对照血浆和含有合成标准物的对照血浆。
D.代谢模式1.尿酶水解的0-24小时尿的HPLC色谱中出现三个在对照狗尿提取液的色谱中不存在的峰。第三洗脱峰的保留时间与Δ8，9-脱氢雌甾酮的相同。峰1和2具有与17β，Δ8，9-脱氢雌二醇和17α，Δ8，9-脱氢雌二醇相同的保留时间(分别是17.4min和19.3min)，。与参考标准物的共色谱也清楚表明分别作为峰1和2的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇和17α，Δ8，9-脱氢雌二醇存在。水解前提取的样本的分析未呈现任何代谢物，表明极少代谢物以非轭合物的形式存在。所有狗的样本都得到类似的代谢模式。
2.血浆水解后血浆样本的分析也表明在所有测定的时间点上存在与所述尿样中相同的三个峰。在尿和血浆样本中，加入葡糖二酸单内酯抑制了轭合物的水解，其表明大多数代谢物都是葡糖苷酸形式。
E.17α，Δ8，9-脱氢雌二醇的鉴定GC/MS谱中峰2的质谱呈现一分子离子m/z414，表明它是二醇。弱的M+离子和在m/z309[M-105(CH3，TMS OH)]处的基峰是17α-二氢环-B不饱和雌激素的特征。在m/z399[M-15(CH3)]、324[M-90(TMS)]和283[M-131]处的其它碎片也是17-羟基雌激素的特征。峰2的质谱与标准参比物17α，Δ8，9-脱氢雌二醇的相同。根据这些数据证明该代谢物的结构是17α，Δ8，9-脱氢雌二醇。
F.17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的鉴定GC/MS谱中峰1的质谱呈现一分子离子m/z414和在m/z399[M-15(CH3)]、324[M-90(TMS)]、309[M-105(CH3，TMS)]和283[M-131]处的碎片离子，它们都是环-B不饱和雌激素二醇的特征。不同于17α，Δ8，9-脱氢雌二醇，此化合物给出具有相对丰度约95％的强分子离子，它是17β-二氢环-B不饱和雌激素的特征。峰3的质谱与标准参比物17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的相同。根据这些数据证明该代谢物的结构是17β，Δ8，9-脱氢雌二醇。
权利要求
1.化合物，其为17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
2.权利要求1的化合物，其中所述其3-硫酸酯的药学上可接受的盐是碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、含1-6个碳原子的烷基铵盐或每个烷基都含有1-6个碳原子的二烷基铵盐或每个烷基都含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
3.权利要求1的化合物，其为17α，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯钠盐。
4.权利要求1的化合物，其为17α，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯三乙铵盐。
5.化合物，其为17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
6.权利要求5的化合物，其中所述其3-硫酸酯的药学上可接受的盐是碱金属盐、碱土金属盐、铵盐、含1-6个碳原子的烷基铵盐或每个烷基都含有1-6个碳原子的二烷基铵盐或每个烷基都含有1-6个碳原子的三烷基铵盐。
7.权利要求5的化合物，其为17β，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯钠盐。
8.权利要求5的化合物，其为17β，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯三乙铵盐。
9.通过给予需要此治疗的哺乳动物抗氧化剂量的17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐来抑制或治疗自由基诱发的疾病的方法。
10.抑制内源性自由基所涉及的疾病的方法，上述疾病包括癌症、中枢神经系统疾病、Alzheimer氏疾病、骨病、衰老、炎症疾病、外周血管疾病、类风湿性关节炎、自体免疫疾病、呼吸窘迫、肺气肿、再灌注损伤的预防、病毒性肝炎、慢性活动性肝炎、结核病、牛皮癣、全身性红斑狼疮、成人呼吸窘迫综合征、中枢神经系统创伤和休克或再灌注过程中的损伤，该方法包括给予需要此治疗的哺乳动物17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
11.通过给予需要此治疗的哺乳动物抗氧化剂量的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐来抑制或治疗自由基诱发的疾病的方法。
12.抑制内源性自由基所涉及的疾病的方法，上述疾病包括癌症、中枢神经系统疾病、Alzheimer氏疾病、骨病、衰老、炎症疾病、外周血管疾病、类风湿性关节炎、自体免疫疾病、呼吸窘迫、肺气肿、再灌注损伤的预防、病毒性肝炎、慢性活动性肝炎、结核病、牛皮癣、全身性红斑狼疮、成人呼吸窘迫综合征、中枢神经系统创伤和休克或再灌注过程中的损伤，该方法包括给予需要此治疗的哺乳动物17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
13.为需要此治疗的哺乳动物提供雌激素替代治疗或治疗雌激素缺乏症的方法，它包括给予该哺乳动物雌激素量的17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
14.为需要此治疗的哺乳动物提供雌激素替代治疗或治疗雌激素缺乏症的方法，它包括给予该哺乳动物雌激素量的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
15.治疗需要此治疗的哺乳动物的与雌激素缺乏有关的血管舒缩综合症(vasomotor symptoms)的方法，它包括给予该哺乳动物17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
16.权利要求15的方法，其中所述血管舒缩综合症是热潮红。
17.治疗需要此治疗的哺乳动物的与雌激素缺乏有关的血管舒缩综合症的方法，其包括给予该哺乳动物17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
18.权利要求17的方法，其中所述血管舒缩综合症是热潮红。
19.治疗或抑制需要此治疗的哺乳动物的骨质疏松症的方法，它包括给予该哺乳动物抗骨质疏松有效量的17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
20.治疗或抑制需要此治疗的哺乳动物的骨质疏松症的方法，它包括给予该哺乳动物抗骨质疏松有效量的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
21.治疗或抑制需要此治疗的哺乳动物的动脉粥样硬化症的方法，它包括给予该哺乳动物抗动脉粥样硬化有效量的17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
22.治疗或抑制需要此治疗的哺乳动物的动脉粥样硬化症的方法，它包括给予该哺乳动物抗动脉粥样硬化有效量的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐。
23.药用组合物，其包含17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐及药用载体。
24.药用组合物，其包含17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐及药用载体。
25.17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐，其纯度至少是1％。
26.17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐，其纯度至少是1％。
27.制备17α，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐的方法，其包括(a)将Δ8，9-脱氢雌甾酮的17-酮用氢化物还原剂还原得到17β，Δ8，9-脱氢雌二醇；(b)将17β，Δ8，9-脱氢雌二醇的3-羟基用适当的酰化剂酰化生成3-酰化的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇；(c)使3-酰化的17β，Δ8，9-脱氢雌二醇与3，5-二硝基苯甲酸和三苯膦反应得到3-酰化的17-(3，5-二硝基苯甲酰基)17α，Δ8，9-脱氢雌二醇；及(d)将3-酰化的17-(3，5-二硝基苯甲酰基)17α，Δ8，9-脱氢雌二醇用碱性水溶液处理得到17α，Δ8，9-脱氢雌二醇。
28.权利要求27的方法，其还包括(a)将17α，Δ8，9-脱氢雌二醇用适当的酰化剂酰化得到3，17-二酰基17α，Δ8，9-脱氢雌二醇；(b)将该3-酰基用温和碱水解得到17-酰基17α，Δ8，9-脱氢雌二醇；及(c)将该3-羟基用三氧化硫-氨、-烷基胺、-二烷基胺或-三烷基胺试剂硫酸酯化得到17α，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯的铵盐、烷基铵盐、二烷基铵盐或三烷基铵盐。
29.权利要求28的方法，其还包括将17α，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯的铵盐、烷基铵盐、二烷基铵盐或三烷基铵盐用适当的金属的氢氧化物碱处理得到17α，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯金属盐。
30.制备17β，Δ8，9-脱氢雌二醇或其3-硫酸酯的药学上可接受的盐的方法，其包括将Δ8，9-脱氢雌甾酮的17-酮用氢化物还原剂还原得到17β，Δ8，9-脱氢雌二醇。
31.权利要求30的方法，其还包括(a)将17α，Δ8，9-脱氢雌二醇用适当的酰化剂酰化得到3，17-二酰基17α，Δ8，9-脱氢雌二醇；(b)将该3酰基用温和碱水解得到17-酰基17β，Δ8，9-脱氢雌二醇；及(c)将该3-羟基用三氧化硫-氨、-烷基胺、-二烷基胺或-三烷基胺试剂硫酸酯化得到17β，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯的铵盐、烷基铵盐、二烷基铵盐或三烷基铵盐。
32.权利要求31的方法，其还包括将17β，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯的铵盐、烷基铵盐、二烷基铵盐或三烷基铵盐用适当的金属的氢氧化物碱处理得到17β，Δ8，9-脱氢雌二醇3-硫酸酯金属盐。
全文摘要
本发明提供17α，△8，9－脱氢雌二醇或其3－硫酸酯的药学上可接受的盐，和17β，△8，9－脱氢雌二醇或其3－硫酸酯的药学上可接受的盐。
文档编号A61P5/00GK1239967SQ97180394
公开日1999年12月29日 申请日期1997年10月9日 优先权日1996年10月11日
发明者S·J·阿德尔曼, F·J·贝克斯, A·钱德拉瑟卡兰, D·H·普洛兹尔勒克, M·W·温克莱, P·拉维恩德拉纳斯 申请人:美国家用产品公司