专利名称：生产缓释制剂的方法
技术领域：
本发明涉及生产含有生理活性多肽的缓释制剂的方法。
背景技术：
我们知道，生理活性多肽或其衍生物能在体内表现出各种各样的药理活性。运用近期发展起来的基因工程和细胞学技术，通过使用大肠杆菌、酵母菌、动物细胞或宿主动物如山羊和仓鼠，有些生理活性多肽已经大量生产出来并用于医疗事业。但是，由于通常情况下生理活性多肽的生物半衰期很短，所以必须频繁给药。而反复注射会给病人带来很沉重的身体负担。
例如，生长激素(下文有时称GH)是一种最初产生并分泌于垂体前叶的典型激素，它是一种生理活性多肽，具有广泛而多样的生理活性如促进身体生长、葡萄糖和脂类的代谢、蛋白质的合成代谢以及细胞的增殖和分化。运用基因重组技术，通过利用大肠杆菌可大批量生产GH，并在全世界范围内用于临床医药事业。但是，由于GH的生物半衰期很短，所以为了维持有效的血液浓度，GH必须频繁给药。尤其当治疗垂体性侏儒时，对患病婴儿和年幼患者，长期每天进行皮下注射给药(时间从几个月到至少十年不等)是目前正在使用的方法。
为了解决这个问题，人们已经偿试了多种方法来发明含有生理活性多肽的缓释制剂。
JP-A 3055/1996(EP-A 633020)公开了一种生产缓释制剂的方法，包括在水溶液中将水溶性多肽渗入含有生物可降解聚合物和脂肪酸金属盐的生物可降解基质中，同时也公开了用这种方法制备的缓释微胶囊(下文有时称为MC)。
JP-A 217691/1996(WO 96/07399)公开了制备不溶于水或微溶于水的多价金属盐的方法，即利用生理活性物质的水溶性肽型和氯化锌等的水溶液来制备，同时还公开了制备含有这种盐和生物可降解聚合物的缓释制剂的方法。
WO 94/12158公开了制备含有人GH和生物可降解聚合物的缓释制剂的方法，即将聚合物侵蚀速率调节剂如氢氧化锌以0.1％-30％(重量比)的量加入到聚合物溶液中，其中所说的重量百分比是相对于聚合物的量而言。此公开文件还进一步公开了制备MC如多孔颗粒的方法，即将人GH和聚合物在有机溶剂中的溶液喷入液氮，同时保持其生物活性。
WO 92/17200和Nature Medicine，第2卷，p.795(1996)公开了用人GH的锌盐制备缓释制剂的方法。
WO 95/29664公开了制备MC的方法，其中包括下述步骤将金属盐如碳酸锌以固态形式分散到聚合物溶液中，加入生理活性物质如激素，然后将生理活性物质和金属阳离子组分分别分散到生物可降解聚合物中。
然而正如前文所提到的，虽然人们已经偿试了各种方法来生产生理活性多肽的生理活性仍能保持的缓释制剂，但仍未能生产出在临床上令人满意的制剂，其原因在于一些生理活性多肽存在许多问题，例如生理活性多肽在制剂中的包埋比率低，给药后初期过量释放，不能长时间内恒定释放，不能长时间内保持满意的血药浓度。此外，其制作方法在许多方面不适合目前条件下的大批量工业化生产。
本发明的公开为了解决上述问题，本申请的发明者们作了很努力的研究，他们发现被用作MC基质的乳酸/乙醇酸共聚物(下文有时称为PLGA)与氧化锌在有机溶剂中共存能出人意料地提供溶解氧化锌的作用，而氧化锌本身在有机溶剂中是不能溶解的，同时能有效地产生高含量的PLGA-氧化锌络合物，他们还发现将生理活性多肽直接分散在PLGA-氧化锌络合物在有机溶剂的溶液中以及随后的成模作用可产生具有优良性能的缓释制剂，例如能提高生理活性多肽的包埋比率，减少给药后最初阶段的过度释放，并保持优良的稳定释放。此外，本发明者们还发现这种生产方法减少了许多步骤，是一种很适合工业化的生产方法。经过进一步研究，发明者们发展了本发明。
换句话说，本发明涉及(1)生产缓释制剂的方法，包括将生理活性多肽分散到生物可降解聚合物和氧化锌在有机溶剂中的溶液中，然后除去有机溶剂；(2)根据上述(1)的方法，其中所述的生理活性多肽是生长激素；
(3)根据上述(1)的方法，其中所述的生物可降解聚合物是乳酸/乙醇酸共聚物；(4)根据上述(3)的方法，其中在乳酸/乙醇酸共聚物中，乳酸/乙醇酸的分子组成比例约为85/15-约50/50；(5)根据上述(3)的方法，其中乳酸/乙醇酸共聚物的重均分子量约为8000-约20000；(6)根据上述(1)的方法，其中在有机溶剂的溶液中，锌相对于可降解聚合物的含量约为0.001％-约2％重量比；(7)根据上述(1)的方法，其中缓释制剂的平均颗粒直径约为0.1-约300μm；(8)根据上述(1)的方法，其中所述的缓释制剂是注射剂；(9)根据上述(1)的方法，其中将油/水乳液进行水中干燥，所说的油/水乳液含有通过将生长激素分散到乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌在有机溶剂中的溶液中而制备的分散液作为油相；(10)根据上述(1)的方法，其中所述的制剂是微胶囊；(11)乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌在有机溶剂中的溶液；(12)可溶于有机溶剂的乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物，它是通过使乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌在有机溶剂中共存在而得到的；(13)通过将生理活性多肽分散到乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌的有机溶剂溶液中而制备到的分散液；(14)根据上述(13)的分散液，其中所述的生理活性多肽是生长激素；及(15)用依据上述(1)的方法制备的缓释制剂。
本发明所使用的生物可降解聚合物优选的实例包括，从一种或多种α-羟基羧酸(例如乙醇酸、乳酸)、羟基二羧酸(例如苹果酸)、羟基三羧酸(例如柠檬酸)等通过不含催化剂的脱水缩聚作用合成得到的并且含有游离末端羧基的聚合物，其混合物，聚-α-氰基丙烯酸酯，聚氨基酸(例如聚-γ-苄基-L-谷氨酸)和马来酸酐共聚物(例如苯乙烯-马来酸共聚物)。
聚合作用可以是无规型、嵌段型或接枝型。当上述α-羟基羧酸、羟基二羧酸和羟基三羧酸在其分子结构中有旋光中心时，它们可以是D-、L-、或DL-构型。
在这些聚合物中，具有游离末端羧基的生物可降解聚合物如从α-羟基羧酸(例如乙醇酸、乳酸)合成的聚合物(例如乳酸/乙醇酸共聚物)和聚-α-氰基丙烯酸酯是优选的。生物可降解聚合物更加优选从α-羟基羧酸合成的聚合物，特别优选乳酸/乙醇酸共聚物。
当使用的生物可降解聚合物是乳酸/乙醇酸共聚物或均聚物时，其组成比例(mol％)优选为约100/0-约40/60，更优选为约85/15-约50/50。
在本说明书中，乳酸/乙醇酸共聚物和均聚物如聚乳酸和聚乙醇酸有时简单地称为乳酸/乙醇酸聚合物。
上述乳酸/乙醇酸聚合物的重均分子量优选为约3000-约25000，更优选为约5000-约20000。
乳酸/乙醇酸聚合物的分散度(重均分子量/数均分子量)优选为约1.2-约4.0，更优选为约1.5-约3.5。
至于重均分子量和分散度，在本说明书中，前者是用凝胶渗透色谱法(GPC)依据聚苯乙烯来测定的，其中用9种重均分子量分别为120000、52000、22000、9200、5050、2950、1050、580和162的聚苯乙烯作为参照物，后者是从前者计算得到的。上述测定是用GPC柱KF804Lx2(由日本Showa Denko生产)和RI监视器L-3300(由日本Hitachi，Ltd.，生产)进行的，用氯仿作为流动相。
具有游离末端羧基的生物可降解聚合物是其中根据GPC测定的数均分子量和根据端基数量确定的数均分子量相互之间几乎相等的生物可降解聚合物。
根据端基数量的数均分子量是用如下方法计算的将约1-3g生物可降解聚合物溶于丙酮(25ml)和甲醇(5ml)的混合溶剂中，在室温(20℃)搅拌下，将溶液用0.05N的氢氧化钾醇溶液快速滴定，用酚酞作为指示剂以确定羧基的含量；根据端基数量的数均分子量是用下述等式计算的根据端基数量的数均分子量＝20000×A/BA生物可降解聚合物的重量(g)B达到滴定终点时，0.05 N的氢氧化钾醇溶液加入的量(ml)因为根据端基数量确定的数均分子量是绝对值，根据GPC测定的数均分子量是随不同的分析条件(例如流动相的种类、柱的种类、参照物质、选择的薄层宽度、选择的基线等因素)而变化的相对值；因此对这两个值很难用绝对的数值表示。然而，在从一种或多种α-羟基羧酸合成的聚合物中，根据GPC测定的数均分子量和根据端基数量确定的数均分子量几乎一致，例如，根据端基数量确定的数均分子量是根据GPC测定的数均分子量的0.5-2倍，优选0.7-1.5倍。
例如，当聚合物具有游离末端羧基并且是通过不用催化剂的脱水缩聚作用从一种或多种α-羟基羧酸合成的时，根据GPC测定的数均分子量和根据端基数量确定的数均分子量彼此之间几乎相等。相反，当聚合物基本上不含游离末端羧基并且是通过使用催化剂的开环聚合反应从环状二聚物合成的时，根据端基数量确定的数均分子量要比根据GPC测定的数均分子量高很多(约2倍或2倍以上)。
通过这种差异可清楚地区别开具有游离末端羧基的聚合物和不具有游离末端羧基的聚合物。
含有游离末端羧基的乳酸/乙醇酸聚合物可通过本身已知的方法如在JP-A 28512/1986中描述的方法(例如不使用催化剂的脱水缩聚反应或在固体无机酸催化剂存在下的脱水缩聚反应)制备。
根据组成比或重均分子量的不同，乳酸/乙醇酸聚合物的分解/消除速率可有很大的不同。因为分解/消除作用通常随着乙醇酸比例的下降而延迟，所以通过降低乙醇酸的比例或增加分子量，可延长药物释放的持续时间。相反，通过增加乙醇酸的比例或减少分子量，可缩短药物释放的持续时间。为了获得长效(例如1-4个月)缓释的制剂，优选使用组成比例和重均分子量在上述范围内的乳酸/乙醇酸聚合物。
因此，在本发明中，所用生物可降解聚合物的组成优选根据所需生物活性多肽的种类和需要的释放持续时间来选择。在一个具体的实施例中，例如当使用的生物活性多肽是GH时，乳酸/乙醇酸共聚物是优选使用的。在乳酸/乙醇酸共聚物中，乳酸/乙醇酸组成比例(mol％)优选为约85/15-约50/50，更优选为约75/25-约50/50。乳酸/乙醇酸共聚物的重均分子量优选为约8000-约20000，更优选为约10000-约20000。此外，乳酸/乙醇酸共聚物的分散度(重均分子量/数均分子量)优选为约1.2-约4.0，更优选为约1.5-约3.5。
所用的乳酸/乙醇酸共聚物可通过已知方法例如在上述出版物中描述的方法等来制备。优选的共聚物是通过不使用催化剂的脱水聚合反应制备的共聚物。优选使用根据端基数量确定的数均分子量与根据GPC测定的数均分子量彼此之间几乎相等的乳酸/乙醇酸共聚物(PLGA)。
此外，两种在组成比例以及重均分子量方面不同的乳酸/乙醇酸共聚物也可以以给定配比的混合物的形式使用。典型的实例是下面两种乳酸/乙醇酸共聚物的混合物一种其乳酸/乙醇酸的组成比例(mol％)约为75/25，重均分子量约为10000；另一种其乳酸/乙醇酸的组成比例(mol％)约为50/50，重均分子量约为12000。混合物中优选的重量比是约25/75-约75/25。
在本发明中，制备PLGA-氧化锌络合物制剂所用的氧化锌是微溶于水的锌化合物，并且其本身在有机溶剂如二氯甲烷中是不溶的或轻微溶解。令人很出乎意料的是，氧化锌与PLGA在有机溶剂如二氯甲烷中的共存有效地形成了PLGA-氧化锌络合物，并且随后络合物能在有机溶剂中溶解。这些操作只需向有机溶剂中加入PLGA和氧化锌就能简单地完成，不需要分离PLGA-氧化锌络合物的步骤。将生理活性多肽加入到由此获得的PLGA-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液中，可容易地制备出含有生理活性多肽的MC。此外，由此获得的MC可使生理活性多肽保持生物学稳定，并且能提供初期释放被降低以及具有优良缓释性能的缓释制剂。
本发明使用的生理活性多肽包括分子量优选为约1000-约50000、更优选为约5000-约40000的生理活性多肽。
生理活性多肽的典型活性是激素活性。生理活性多肽可以是天然产品、合成产品、半合成产品、以及其衍生物和类似物。生理活性多肽的作用方式可以是激动或拮抗。
本发明使用的生理活性多肽包括肽类激素、细胞因子、肽神经递质、生血因子、各种生长因子、酶、多肽抗生素以及止痛肽。
肽类激素的实例包括胰岛素、促生长素抑制素、促生长素抑制素衍生物(Sandostatin；参见美国专利4087390、4093574、4100117和4253998)、生长激素(GH)、利尿肽钠、胃泌素、促乳素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、ACTH衍生物(例如ebiratide)、促黑素细胞激素(MSH)、促甲状腺激素释放激素(TRH)和其盐及衍生物(参见JP-A 121273/1975和116465/1977)、促甲状腺激素(TSH)、促黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、人绒毛膜促性腺素(HCG)、胸腺素、促胃动素、血管加压素、血管加压素衍生物(desmopressin，参见Folia Endocrinologica Japonica，第54卷，No.5，第676-691页(1978))、催产素、降钙素、甲状旁腺激素(PTH)、胰高血糖素、促胰液素、促胰酶素、缩胆囊素、血管紧张素、以及人胎盘生乳素。肽类激素优选为胰岛素和生长激素。
细胞因子包括淋巴因子和单核因子。淋巴因子包括干扰素(α、β和γ干扰素)和白介素(IL-2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12)。单核因子包括白介素-1(IL-1)、和肿瘤坏死因子(TNF)。优选的细胞因子是淋巴因子，更优选干扰素。特别优选的细胞因子是α-干扰素。
肽神经递质包括P物质、5-羟色胺和GABA。
造血因子包括红细胞生成素(EPO)、集落刺激因子(G-CSF，GM-CSF，M-CSF)、血小板生成素(TPO)、血小板衍生生长因子、和巨核细胞增强子(popentiator)。
各种生长因子包括碱性和酸性成纤维细胞生长因子(FGF)和其家族(例如EGF、TGF-α、TGF-β、PDGF、酸性FGF、碱性FGF、FGF-9)、神经生长因子(NGF)和其家族(例如BDNF、NT-3、NT-4、CNTF、GDNF)、类胰岛素生长因子(例如IGF-1、IGF-2等)以及骨形态发生蛋白(BMP)和其家族。
酶包括超氧化物歧化酶(SOD)、尿激酶、组织纤溶酶原激活物(TPA)、天冬酰胺酶和激肽释放酶。
多肽抗生素包括多粘菌素B(polymixin B)、粘菌素、短杆菌肽和杆菌肽。
肽的类似物包括脑啡肽、脑啡肽衍生物(参见美国专利4277394和EP-A 31567)、内啡肽、和kyotorphin。
此外，生理活性多肽还包括胸腺生成素、强啡肽、铃蟾肽、雨蛙肽、胸腺刺激素(thymostimulin)、胸腺体液因子(THF)、血液胸腺因子(FTS)和其衍生物(参见美国专利4229438)、其它胸腺因子[Igaku no Ayumi，第125卷，No.10，第835-843页(1983)]、神经降压素、缓激肽、和内皮素-拮抗肽(参见EP-A 436189、457195和496452，JP-A94692/1991和130299/1991)。
特别优选的生物活性多肽包括生长激素和胰岛素。
在本发明中，当生物活性多肽含有金属时，金属的含量优选不超过0.1％，更优选不超过0.01％，最优选不超过0.001％。因此，基本上不含有金属的生理活性多肽是最适于本发明的。例如，结晶胰岛素通常含有少量的重金属如锌、镍、钴和镉。含有0.4％(重量/重量)锌的胰岛素以稳定的六聚物形式存在，并且在与生物可降解聚合物金属盐的相互作用方面表现出很强的惰性。
如果需要的话，可预先将生物活性多肽中存在的金属除去。采用已知的除去金属的方法。例如，将胰岛素的盐酸水溶液用水或醋酸铵水溶液透析，并且将透析液提供的含极微量金属的无定形胰岛素冷冻干燥。
生长激素可得自任何种属，优选从人中得到的生长激素。此外，虽然从垂体中提取的天然产品可用于本发明，但是优选基因重组型GH(JP-B 12996/1994，48987/1994)。更优选结构与天然型相同、在N-末端没有蛋氨酸的重组型人GH。这种GH可以金属盐的形式存在，并且基本上不含有金属的GH也可以使用。
本发明使用的有机溶剂优选沸点不超过120℃的溶剂。这些有机溶剂包括卤代烃(例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳等)、醇(例如乙醇、甲醇、1，4-丁二醇、1，5-戊二醇等)、乙酸乙酯、乙腈等。这些溶剂还能以给定比例的混合物的形式使用。优选的单独使用的有机溶剂包括，例如二氯甲烷和乙腈。
优选的以混合物形式使用的有机溶剂包括，例如卤代烃(例如二氯甲烷、氯仿)与醇(例如乙醇、甲醇、1，4-丁二醇、1，5-戊二醇)或乙腈的混合物。二氯甲烷与乙腈的混合物应用的尤其广泛。卤代烃相对于醇或乙腈的混合比(体积比)约为40∶1-约1∶1，优选约20∶1-约1∶1。卤代烃如二氯甲烷的单独使用是尤其优选的。
在本发明中，生产缓释制剂所用的氧化锌优选以细粉末的状态使用。虽然期望反应时间会随着直径的变小而缩短，但是同时又会出现操作方面的问题，因为易碎性(fryability)增加了。氧化锌的颗粒直径通常约为0.001μm-约10μm，优选为约0.005μm-约1μm，更优选为约0.01μm-约0.1μm。
在生物可降解聚合物和氧化锌的有机溶剂溶液中，锌(Zn)的含量(相对于生物可降解聚合物的重量比)优选为约0.001％-2％(重量/重量)，更优选为约0.01％-2％(重量/重量)，最优选为约0.1％-2％(重量/重量)。锌在生物可降解聚合物和氧化锌在有机溶剂中的溶液中的含量可通过已知的常规方法如原子吸收分析法测定。
在本说明书中，只要缓释制剂是以含有生理活性多肽和微胶囊基质(即生物可降解聚合物-氧化锌络合物)的细小颗粒的形式存在，它就没有限制。细小颗粒的实例包括，在每个颗粒中含有一个药物核的微胶囊，在每个颗粒中含有大量药物核的多核微胶囊，药物以分子形式溶于或分散在微胶囊基质中的微球。
本发明中的缓释制剂可这样制备，将生理活性多肽分散在生物可降解聚合物和氧化锌的有机溶剂溶液中，然后再除去有机溶剂。在本说明书中，由生物可降解聚合物和氧化锌生成的、在生物可降解聚合物和氧化锌溶解在有机溶剂中的澄清溶液中形成的产物称为“生物可降解聚合物-氧化锌络合物”。
生物可降解聚合物-氧化锌络合物可以是由分子间相互作用产生的化合物，例如正盐、络盐、复盐和有机金属化合物，或组合物。
生物可降解聚合物-氧化锌络合物具有的特征是，例如溶于有机溶剂，使作为最终产品的缓释制剂具有优良的缓释性。此外，当络合物中的生物可降解聚合物是PLGA时，此络合物称为“PLGA-氧化锌络合物”。
在本说明书中，“分散液”是指生物活性多肽在有机溶剂中的均匀分散液。生物活性多肽在有机溶剂中的溶液和悬浮液都包括在本发明的分散液中。
在本发明的方法中，除去有机溶剂的方法包括，例如，(a)水中干燥法(油/水法)，(b)相分离法(凝聚法)，(c)喷雾干燥法，和其变性。
下面介绍制备微胶囊缓释制剂的方法。
在本发明的方法中，先将生物可降解聚合物和氧化锌加入到有机溶剂中来制备生物可降解聚合物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。虽然生物可降解聚合物在溶液中的浓度根据其分子量和有机溶剂种类的不同而不同，但是其为，例如约0.1％-约80％(重量比)，优选为约1％-约70％(重量比)，更优选为约2％-约60％(重量比)。加入氧化锌的量根据有机溶剂种类的不同而不同，并且是例如约0.001％-约5％(重量比)，优选约0.01％-约2.5％(重量比)，更优选约0.1％-约2.5％(重量比)，其中重量比是基于生物可降解聚合物的量计算的。
至于生物可降解聚合物和氧化锌向有机溶剂中加入的顺序，可将以粉末状态或分散状态形式在有机溶剂中存在的氧化锌加入到生物可降解聚合物在有机溶剂的溶液中，相反，生物可降解聚合物在有机溶剂中的溶液可加到氧化锌在有机溶剂中的分散液中。此外，也可以在都以粉末状态存在的生物可降解聚合物和氧化锌混合后再加入有机溶剂。
用生物可降解聚合物和氧化锌制备生物可降解聚合物-氧化锌络合物例如PLGA-氧化锌络合物的条件可根据所用的生物可降解聚合物种类、氧化锌的颗粒直径、有机溶剂的种类、这些组分的不同而不同。例如，当PLGA被用作聚合物时，PLGA-氧化锌络合物可通过下面的反应条件获得，通常在约0℃-约30℃、优选约2℃-约25℃，反应约1-约168小时、优选约12-约96小时、更优选约24-约72小时。然而，反应时间并不限于上述范围，并且可用指示液通过肉眼观察反应状态来确定。在本发明中，PLGA-氧化锌络合物的制备可通过肉眼观察来证实，因为分散状态的氧化锌在加入时会溶解在有机溶剂中以形成澄清溶液。
虽然这一反应只是通过PLGA和氧化锌在有机溶剂中的共存来进行的，但是为了缩短反应时间，通过用适当的搅拌器或振摇器使反应在搅拌下或振摇下进行是有利的。此外，在超声下进行反应是同样优选的。当反应温度变高一些时，反应时间会缩短一些。然而较高的反应温度会伴有PLGA的迅速降解。
由此获得的生物可降解聚合物-氧化锌络合物优选以有机溶液的形式用于下一步骤，如果需要的话，除去有机溶剂以固体形式用于下一步骤。
然后，将生理活性多肽优选以粉末状态，以约0.1％-约50％(重量比)，优选以约1％-约20％(重量比)，更优选以约3％-约15％(重量比)的量，溶于或分散在生物可降解聚合物和氧化锌的有机溶液中，以制备生物可降解聚合物、氧化锌和生物活性多肽在有机溶剂中的分散液(下文将其简单地称为生理活性多肽分散液)。
如果生理活性多肽具有例如在生物可降解聚合物和氧化锌的有机溶液中不溶解、以粉末状态加入会产生浑浊、以及难以分散这样的特性，优选先将生理活性多肽分散在有机溶剂中。可向有机溶液中加入生理活性多肽的稳定剂(例如血清白蛋白、明胶、硫酸鱼精蛋白)。
为了将生理活性多肽均匀地分散在有机溶剂中，优选给予外部物理能量。这些方法包括，例如，超声、涡轮式搅拌器和匀化器。在这种情况下，生理活性多肽在有机溶剂中的粒径约为0.01-约200μm，优选约为0.05-约100μm，更优选约为0.1-约50μm。生理活性多肽在有机溶剂中的浓度约为1％-约50％，优选约为2％-约20％。这种处理使生理活性多肽在有机溶剂中的粒径具有均匀性，并且使生理活性多肽在生物可降解聚合物和氧化锌的有机溶液中能均匀地分散。
此外，可先将生理活性多肽独立于生物可降解聚合物-氧化锌络合物之外单独地分散在有机溶剂中。在这种情况下，使用的有机溶剂的组成与用于溶解生物可降解聚合物和氧化锌的有机溶剂的组成彼此之间可以相同，也可以不同。例如，可以将生物可降解聚合物-氧化锌络合物溶解在二氯甲烷中，将生理活性多肽分散在乙腈中，然后将两者混合。在这种情况下，生理活性多肽与生物可降解聚合物-氧化锌络合物之间的比例(体积比)为，例如，约1∶1000-约1∶1，优选约1∶200-约1∶5，特别优选约1∶100-约1∶5。
(a)水中干燥法(油/水法)向用上述方法制备的生理活性多肽的分散液中再加入水相以形成油/水乳剂。然后将油相中的溶剂挥发出去以形成微胶囊。在这种情况下，可向外部水相中加入乳化剂。所加的乳化剂可以是任何能提供稳定的油/水乳液的物质。这些乳化剂的实例包括阴离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂、聚氧化乙烯-蓖麻油衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羧甲基纤维、卵磷脂、明胶、透明质酸(hyaruronic acid)等。优选的乳化剂是聚乙烯醇。这些乳化剂可以单独使用，或两种或两种以上的乳化剂联合使用。乳化剂在外部水相中的浓度约为0.001％-约20％(重量比)，优选约为0.01％-约10％(重量比)，特别优选约为0.05％-约5％(重量比)。
将由此获得的微胶囊通过离心或过滤回收，用蒸馏水洗涤以除去乳化剂等附着在微胶囊上的物质，再分散在蒸馏水中，并且冷冻干燥。
然后，如果需要的话，通过进一步加热除去微胶囊中的水和有机溶剂。加热可在减压条件下进行。至于加热条件，加热和干燥是在不低于生物可降解聚合物的玻璃转化温度和不高到引起每一微胶囊颗粒聚集的温度下进行的。加热和干燥优选在生物可降解聚合物的玻璃转化温度到比生物可降解聚合物的玻璃转化温度高约30℃的温度之间的温度下进行。玻璃转化温度定义为，当温度以每分钟10℃-20℃的速度增加时，使用示差扫描量热仪所测定的中间玻璃化点。
(b)相分离法(凝聚法)当用此方法制备MC时，在搅拌下向上述生理活性多肽的分散液中逐渐加入凝聚剂以沉淀和固化MC。凝聚剂使用的量约为0.01-约1000倍体积，优选约为0.05-约500倍体积，特别优选约为0.1-约200倍体积。只要凝聚剂是聚合物、矿物油或植物油，可与用来溶解生物可降解聚合物的有机溶剂溶混并且不能溶解所用的生物可降解聚合物的化合物，那么它就可以使用。具体来说，这些凝聚剂的实例包括硅油、芝麻油、豆油、玉米油、棉子油、椰子油、亚麻子油、矿物油、正己烷和正庚烷。两种或多种这些凝聚剂可联合使用。
由此获得的MC可通过过滤回收，用庚烷等反复洗涤以除去凝聚剂。此外，再用与上述(a)相同的方式洗涤，然后冷冻干燥。
当用水中干燥法或凝聚法制备MC时，可在洗涤MC的步骤中加入抗聚集剂以防止颗粒的聚集。抗聚集剂的实例包括，例如，水溶性多糖如甘露糖醇、乳糖、葡萄糖，淀粉(例如玉米淀粉)、透明质酸和其碱金属盐；氨基酸例如甘氨酸和丙氨酸；蛋白例如纤维蛋白和胶原；和无机盐例如氯化钠以及磷酸氢二钠，等等。
(c)喷雾干燥法用此方法制备MC时，用喷嘴将生理活性多肽的分散液喷到喷雾干燥器的干燥腔内以使细小滴中的有机溶剂在很短时间内挥发出去来生成MC。喷嘴的实例包括，例如，二流喷嘴型、压力喷嘴型和旋转圆盘型。如果需要的话，将上述抗聚集剂经另一喷嘴进行喷雾以防止各个MC颗粒聚集，这也是有利的。
用与上述(a)相同的方式将由此获得的MC洗涤，如果需要的话，随后进行加热(如果需要的话在减压条件下加热)来除去水和有机溶剂。
在本发明中，当使用PLGA-氧化锌络合物作为微胶囊基质时，生理活性多肽如GH包埋进MC中的比例优选为至少50％。
生理活性多肽在本发明的缓释制剂中的含量是，例如约0.1％-约30％(重量比)，优选约0.2％-约20％(重量比)，更优选约0.5％-约10％(重量比)。
用细小颗粒作为原料，本发明的缓释制剂能以例如下述剂型给药细小颗粒例如如上所述微胶囊，或非口服制剂的多种剂型(例如肌肉内、皮下或内脏注射剂；不可留置(indwellable)制剂；鼻内、直肠或子宫透粘膜制剂等)，或口服制剂(例如，胶囊如硬胶囊和软胶囊等；固体制剂如粒剂和粉剂等；液体制剂如悬浮液等)。
这些剂型的制剂可用制药领域常用的已知方法生产。
本发明的缓释制剂优选制成注射剂的形式。为了用细小颗粒如通过上述方法制备的微胶囊制备注射剂，可将细小颗粒与分散剂(例如，表面活性剂如吐温80、HCO-60；多糖如羧甲基纤维素、藻酸钠、透明质酸钠；硫酸鱼精蛋白；聚乙二醇400等)、防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、等渗调节剂(例如氯化钠、甘露糖醇、山梨糖醇、葡萄糖等)、和局部麻醉剂(例如盐酸利多卡因、氯丁醇等)一起配制来制备水性悬浮液，或与植物油(例如芝麻油、玉米油等)一起分散、或其混合物与磷脂(例如卵磷脂)或中链脂肪酸甘油三酯(例如Miglyol 812)一起分散来制备油性悬浮液。
本发明的缓释制剂特别优选以细小颗粒的形式存在。制成可注射悬浮液的缓释制剂的颗粒直径可选自能满足注射所需的分散度和针头通过性的范围。例如，颗粒直径为约0.1-约300μm，优选为约1-约150μm，更优选为约2-约100μm，其中所述的颗粒直径是颗粒的平均直径。
将上述的细小颗粒制成无菌制剂的方法包括，但不限于，整个制备过程是在无菌条件下进行的方法，使用γ射线进行灭菌的方法，以及在制备过程加入抗菌剂的方法。
本发明的缓释制剂能以很低的毒性安全地用于哺乳动物(例如人、牛、猪、狗、猫、小鼠、大鼠、兔子等)。
本发明缓释制剂的适应征根据所用的生理活性多肽的不同而不同。当胰岛素被用作生理活性多肽时，缓释制剂能用于预防或治疗糖尿病；当使用α-干扰素时，缓释制剂能用于预防或治疗病毒性肝炎(例如丙型肝炎、HBe抗原阳性肝炎)和癌(例如肾癌、多发性骨髓瘤等)；当使用红细胞生成素时，缓释制剂能用于预防或治疗贫血(例如肾透析期间的贫血)；当使用G-CSF时，缓释制剂能用于预防或治疗嗜中性白血球减少症(例如在癌症治疗过程中发生的嗜中性白血球减少症)和感染；当使用IL-2时，缓释制剂能用于预防或治疗癌症(例如血管内皮瘤)；当使用FGF时，缓释制剂能用于预防或治疗骨折、创伤(例如褥疮)、牙周炎和胃肠道溃疡；当使用FGF-9时，缓释制剂能用于预防或治疗血小板减少症；当使用NGF时，缓释制剂能用于预防或治疗老年性痴呆和神经病；当使用TPA时，缓释制剂能用于预防或治疗血栓形成；当使用肿瘤坏死因子时，缓释制剂能用于预防或治疗癌症。
此外，基于GH的生长激素活性，含有GH的缓释制剂能用于治疗特纳氏综合征、慢性肾病、软骨发育不全、成人垂体机能减退以及垂体性侏儒。另外，据报道，GH在治疗例如Down综合征、Silver综合征、季肋发育不全、和青少年慢性关节炎方面具有优良的疗效。
虽然缓释制剂的剂量可根据生物活性多肽的种类和含量、释放时间、预治疗的疾病、受治疗动物的种类和其它因素的不同而变化，但是只要能维持生理活性多肽在体内的有效浓度，缓释制剂可以以任意水平的剂量施用。
例如，当缓释制剂是设计成释放一周的剂型时，生物活性多肽的剂量优选为约0.0001-约10mg/kg体重/成人，更优选为约0.0005-约1mg/kg体重/成人。，根据生理活性多肽的种类和含量、剂型、释放持续时间、预治疗的疾病、受治疗动物的种类和其它因素，缓释制剂优选的给药频率可以适当地选为每周1次、每两周1次等。
当缓释制剂中的活性组分生理活性多肽是例如胰岛素时，对糖尿病人每次给药的剂量通常是约0.001-约1mg/kg体重，优选约0.01-约0.2mg/kg体重。并且优选的给药频率是每周1次。
当缓释制剂中的活性组分生理活性多肽是GH时，虽然给药剂量根据GH的种类和含量、释放持续时间、预治疗的疾病、受治疗动物的种类和其它因素的不同而变化，但是只要能维持GH在体内的有效浓度，缓释制剂可以以任意水平的剂量施用。至于对上述疾病的治疗，当缓释制剂是设计成释放两周的剂型时，对于每个儿童或成人的安全给药，GH的剂量可以为约0.01-约5mg/kg体重，更优选为约0.05-约1mg/kg体重。根据GH的含量、剂型、释放持续时间、预治疗的疾病、受治疗动物的种类和其它因素，优选的给药频率可以适当地选为每周1次、每两周1次、每月1次等。
缓释制剂优选在常温下或阴凉处储存。缓释制剂更优选在阴凉处储存。“常温”和“阴凉处”在日本药典中作了定义。即，“常温”表示15℃-25℃，“阴凉处”表示温度不超过15℃。
实施本发明的最佳方式下面通过制备例和试验例来更详细地描述本发明，但不应解释为对本发明保护范围的限制。制备例1将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为10000)和6.6mg氧化锌加入到1.7ml二氯甲烷中，在25℃搅拌(60rpm)3天以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的澄清溶液。向此溶液中加入53.0mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用涡动搅拌器和小型匀化器将其混合。然后，进行超声处理，以得到人生长激素与乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。将此有机溶液倒入400ml预先在18℃调节过的0.1％(重量/体积)的聚乙烯醇(PVA)水溶液，然后用涡轮式均匀混合器乳化以得到油/水乳液。在室温下搅拌此油/水乳液以使二氯甲烷挥发出去。通过离心(约1500rpm)收集生成的微胶囊，将获得的沉淀用400ml蒸馏水洗涤2次，进行冷冻干燥，得到了521mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例2将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为10000)和13.1mg氧化锌溶于2.3ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.3mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了536mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例3将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为10000)和21.9mg氧化锌溶于2.8ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.8mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了589mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例4将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为12000)和5.1mg氧化锌溶于1.9ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入52.9mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了506mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例5将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为12000)和10.2mg氧化锌溶于2.5ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.2mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了568mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例6将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝65/35(mol％)，重均分子量为12000)和17.0mg氧化锌溶于3.0ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.5mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了561mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例7将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为15000)和4.5mg氧化锌溶于2.0ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入52.9mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了540mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例8将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为15000)和8.9mg氧化锌溶于2.6ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.1mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了559mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例9将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为15000)和14.9mg氧化锌溶于3.1ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.4mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了464mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例10将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为20000)和4.0mg氧化锌溶于2.5ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入52.8mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了595mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例11将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为20000)和7.9mg氧化锌溶于3.6ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.1mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了478mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例12将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为20000)和13.2mg氧化锌溶于5.2ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.3mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了534mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例13将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝75/25(mol％)，重均分子量为10500)和6.6mg氧化锌溶于3.0ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.0mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了521mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例14将1g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝85/15(mol％)，重均分子量为12000)和5.8mg氧化锌溶于2.0ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入53.0mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了503mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例15将1.89g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为10000)和10mg氧化锌溶于3.4ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了1.41g含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例16将1.89g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为12000)和10mg氧化锌溶于3.5ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了1.41g含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例17将1.89g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为14000)和10mg氧化锌溶于4.0ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了1.40g含有人生长激素的粉末状微胶囊。制备例18将1.89g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为16000)和10mg氧化锌溶于4.2ml二氯甲烷中，以得到乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了1.34g含有人生长激素的粉末状微胶囊。对比例1将乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为15000)溶于二氯甲烷中(950mg/ml)，以制备乳酸/乙醇酸共聚物在有机溶剂中的溶液。将1ml这种溶液与1ml人生长激素的冷冻干燥粉末在二氯甲烷中的溶液(50mg/ml)混合，用与制备例1相同的方式处理，得到了490mg含有人生长激素的粉末状微胶囊。对比例2将1.90g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为10000)溶于2.6ml二氯甲烷中，以制备乳酸/乙醇酸共聚物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了1.28g含有人生长激素的粉末状微胶囊。对比例3将1.90g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为12000)溶于2.8ml二氯甲烷中，以制备乳酸/乙醇酸共聚物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了1.18g含有人生长激素的粉末状微胶囊。对比例4将1.90g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为14000)溶于3.0ml二氯甲烷中，以制备乳酸/乙醇酸共聚物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了0.89g含有人生长激素的粉末状微胶囊。对比例5将1.90g乳酸/乙醇酸共聚物(乳酸/乙醇酸＝50/50(mol％)，重均分子量为16000)溶于3.2ml二氯甲烷中，以制备乳酸/乙醇酸共聚物在有机溶剂中的溶液。向此溶液中加入100mg人生长激素的冷冻干燥粉末，用与制备例1相同的方式处理，得到了1.26g含有人生长激素的粉末状微胶囊。试验例1将308mg在制备例7中制备的、含有人生长激素和PLGA-氧化锌络合物的微胶囊；351mg在制备例8中制备的、含有人生长激素和PLGA-氧化锌络合物的微胶囊；327mg在制备例9中制备的、含有人生长激素和PLGA-氧化锌络合物的微胶囊；和229mg在对比例1中制备的、含有人生长激素和PLGA的微胶囊；分别分散在2.25ml分散介质(分散介质的组成将甘露糖醇(5％)、羧甲基纤维素(0.5％)和吐温20(0.1％)溶于蒸馏水中，然后用乙酸将PH调至6.0)(以下使用相同的分散介质)、2.25ml分散介质、1.75ml分散介质、和1.75ml分散介质中。
将0.5ml由此获得的分散液(含有3mg人GH)皮下给药到用乙醚麻醉的大鼠的背部。随着时间的推移，经尾静脉采集血液并且分离血清。通过放射免疫分析(Ab Beads HGH，由Eiken Kagaku，Japan制造)测定获得的血清中人GH的浓度。测定结果列在表1中。
表1
与用从比较例1中获得的含有人生长激素和PLGA的微胶囊给药的试验组相比，在用从制备例7、8和9中获得的含有人生长激素和PLGA-氧化锌络合物的微胶囊给药的试验组中，人GH的浓度表现出相当高的值，此外，还表现出长时间的缓释效果。根据本发明的方法，可生产出优异释放效果的缓释制剂。试验例2将550mg、556mg、576mg和573mg分别在制备例15、16、17和18中制备的、含有人生长激素和PLGA-氧化锌络合物的微胶囊分别分散在3.38ml如试验例1所述的分散介质中。同时将548mg、548mg、567mg和560mg分别在比较例2、3、4和5中制备的、含有人生长激素和PLGA的微胶囊分别分散在3.38ml相同的分散介质中。
将0.75ml由此获得的分散液(含有6mg人GH)皮下给药到用乙醚麻醉的大鼠的背部。随着时间的推移，经尾静脉采集血液并且分离血清。通过如试验例1所述的放射免疫分析测定获得的血清中人GH的浓度。测定结果列在表2-5中。
表2
表3
表4
表5
与用从比较例2、3、4和5中获得的含有人生长激素和PLGA的微胶囊给药的试验组相比，在用从制备例15、16、17和18中获得的含有人生长激素和PLGA-氧化锌络合物的微胶囊给药的试验组中，人GH的浓度表现出相当高的值。工业实用性根据本发明，可提供其中生理活性多肽如生长激素具有高的包埋比例以及长时间恒定高的血液浓度水平的缓释制剂。
权利要求
1.生产缓释制剂的方法，包括将生理活性多肽分散到生物可降解聚合物与氧化锌在有机溶剂中的溶液中，然后除去有机溶剂。
2.根据权利要求1的方法，其中所述的生理活性多肽是生长激素。
3.根据权利要求1的方法，其中所述的生物可降解聚合物是乳酸/乙醇酸共聚物。
4.根据权利要求3的方法，其中在乳酸/乙醇酸共聚物中，乳酸/乙醇酸的分子组成比例是约85/15-约50/50。
5.根据权利要求3的方法，其中乳酸/乙醇酸共聚物的重均分子量是约8000-约20000。
6.根据权利要求1的方法，其中相对于生物可降解聚合物，锌在有机溶剂 溶液中的含量为约0.001％-约2％重量比。
7.根据权利要求1的方法，其中缓释制剂的平均颗粒直径是约0.1-约300μm。
8.根据权利要求1的方法，其中所述的缓释制剂是注射剂。
9.根据权利要求1的方法，其中将含有分散液作为油相的油/水乳剂进行水中干燥，所述的分散液是通过把生长激素分散在乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌在有机溶剂中的溶液中而制备的。
10.根据权利要求1的方法，其中所述的制剂是微胶囊。
11.一种溶液，是乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌在有机溶剂中的溶液。
12.乳酸/乙醇酸共聚物-氧化锌络合物，其中所述的络合物可溶于有机溶剂，并且是通过使乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌在有机溶剂中共存来制备的。
13.分散液，其是通过将生理活性多肽分散在乳酸/乙醇酸共聚物和氧化锌在有机溶剂中的溶液中而制备的。
14.根据权利要求13的分散液，其中所述的生理活性多肽是生长激素。
15.用根据权利要求1的方法制备的缓释制剂。
全文摘要
生产缓释微胶囊的方法,包括将生理活性多肽分散到生物可降解聚合物与氧化锌在有机溶剂中的溶液中,然后除去有机溶剂;本方法可提供其中生理活性多肽具有高的包埋比例以及长时间恒定高的血液浓度水平的缓释制剂。
文档编号A61K31/21GK1241139SQ9718084
公开日2000年1月12日 申请日期1997年12月18日 优先权日1997年12月18日
发明者山县丰, 御前雅文, 岩佐进 申请人:武田药品工业株式会社