专利名称：甘氨酸传递抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及抑制甘氨酸传递的[4，4-双-(4-氟代苯基)丁基]-1-(哌嗪基和哌啶基)衍生物在制备用于治疗中枢和外周神经系统紊乱的药物中的用途，特别是用于治疗精神病、疼痛、癫痫、神经退化性疾病(Alzheimer氏病)、中风、脑损伤、多发性硬化症等的用途。本发明还进一步地包括了新化合物的制备及其药物剂型。-1-(哌嗪和哌啶基)衍生物是众所周知的组胺和5-羟色胺拮抗剂。这些化合物的活性及其制备公开于EP-A-0，151，826和GB-1，055，100。
本发明涉及抑制甘氨酸传递的化合物在制备用于治疗中枢和外周神经系统紊乱的药物中的用途，所述化合物具有的结构式为 其N-氧化物、立体化学异构体以及药学上可接受的加成盐，其中X表示CH或N；L表示下式的基团 其中n为0或1；m为0或1；Alk表示C1-6烷二基(alkanediyl)；A表示N或CH；B1表示CH2或NH；-a1=a2-a3=a4-表示下式的二价基团-CH=CH-CH=CH-(a-1)；或-N=CH-CH=CH-(a-2)；R1表示由C1-4烷氧基、吡啶基、芳基、芳基羰基、噻吩基、呋喃基、咪唑基[1，2-a]吡啶基、噻唑基任选取代的C1-4烷基；R2表示氢或芳基；R3表示氢、C1-6烷基或C3-7环烷基；R4表示噻吩基、呋喃基、芳基氨基或下式的基团 其中R5为氢原子或芳基；芳基表示选自C1-4烷基、卤代、羟基、C1-4烷氧基中的1或2个取代基任选取代的苯基。
本发明还涉及治疗患中枢和外周神经系统紊乱疾病温血动物的方法，特别是对于精神病、疼痛、癫痫、神经退化性疾病(Alzheimer氏病)、中风、脑损伤、多发性硬化症等。所述治疗方法包括服用一定有效治疗量的由具结构式(Ⅰ)的化合物或其N-氧化物形式、药学上可接受的酸或碱的加成盐、或其立体化学异构体与药用载体形成的混合物。
如在前文和下文中涉及到的，卤代的类别有氟代、氯代、溴代和碘代；C3-7环烷基的类型包括环丙基、环丁基、环戊基、环已基和环庚基；C1-4烷基指具1-4个碳原子的直链和支链饱和烃基，如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基乙基、2-甲基丙基、2，2-二甲基乙基等；C1-6烷基包括C1-4烷基和其具有5或6个碳原子的更高级的同系物，如戊基、2-甲基丁基、庚基、2-甲基戊基等；C1-6烷二基指具1-6个碳原子的二价直链和支链饱和烃基，如1，1-甲二基，1，2-乙二基，1，3-丙二基，1，4-丁二基，1，5-戊二基，1，6-己二基，1，2-丙二基，2，3-丁二基等。
上文中提到的药学上可接受的加成盐意指包含由式(Ⅰ)化合物能形成的、具治疗活性的、无毒的碱和酸加成盐。式(Ⅰ)化合物的酸加成盐形式可以通过采用适宜的酸处理所述游离的碱而获得，可选用无机酸，如氢卤酸(如盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸、磷酸等类型的酸；也可选用有机酸，如乙酸、羟基乙酸、丙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸、环乙烷氨基磺酸、水杨酸、p-氨基水杨酸、pamoic等类型的酸。
包含酸性质子的式(Ⅰ)化合物可转化为其有治疗活性的无毒的碱(如金属或胺)的加成盐形式，方法是以适宜的有机或无机碱处理它们。适当的碱盐形式包括，如铵盐、碱金属和碱土金属盐(如锂、钠、钾、镁、钙盐等)、有机碱盐(如N，N’-双苄基乙撑二胺(benzatzhine)、N-甲基-D-还原葡萄糖胺、哈胺青霉素盐)、以及与氨基酸(如精氨酸、赖氨酸等)所成的盐。
反过来，所述的盐形式也能通过以适宜的碱或酸处理而转化为游离的形式。
上文中用到的加成盐一词也包括由式(Ⅰ)化合物及它们的盐所能形成的溶剂化物，这些溶剂化物是如水合物、乙醇化物等类型的化合物。
式(Ⅰ)化合物的N-氧化物形式指的是式(Ⅰ)化合物中一个或几个氮原子被氧化为所谓的N-氧化物的式(Ⅰ)化合物。
前文及后文中用到的术语“立体光学异构体”包括其中式(Ⅰ)化合物可生成的所有可能的立体异构体。若未特别提及或说明，化合物即指所有可能的立体化学异构体的混合物，具体地讲是外消旋混合物。所述混合物包含化合物基本结构的所有非对映体和对映体。
结构式(Ⅰ)显然包括式(Ⅰ)化合物的立体化学异构体和这些异构体的混合物。
具体地讲，式(Ⅰ)化合物以及此后的一些中间体在它们的结构中至少有一个固体相中心。此固体相中心可以以R或S构型存在，所述R和S标志的使用规则与纯应用化学(1976，45，11-30)中描述的一致。
式(Ⅰ)的一些化合物也可以它们互变异构体的形式存在。这种形式虽未明确显示于上述结构式中，但也包含于本发明的范围之内。
在后文中，式(Ⅰ)化合物这一术语中都包含其N-氧化物、其药学上可接受的加成盐及其所有的立体异构体。
在具备下列前提条件时，本发明的式(Ⅰ)化合物可认为是新的-当X表示CH；L为式(a)其中B1表示-CH2-，R1为吡啶-2-基甲基，噻吩-2-基甲基，呋喃-2-基甲基，苯甲基或4-氟苯甲基时，则-a1=a2-a3=a4-不表示-N=CH-CH=CH-；-当X表示CH；L表示式(a)其中B1表示-CH2-，R1表示4-甲氧苯基甲基或噻唑-4-基甲基时，则-a1=a2-a3=a4-不表示-CH=CH-CH=CH-；
-当X表示N；L表示式(a)其中Alk表示1，3-丙二基时，则R4不表示苯基。
本发明还涉及上文中提到的、用作药物的新的式(Ⅰ)化合物。
一类重要的化合物是式(Ⅰ)化合物其中n=0，m=1；R1为任选由C1-4烷氧基、芳基羰基或咪唑并[1，2-a]吡啶基取代的C1-4烷基；R4为噻吩基、呋喃基或式(d-1)所示的基团。
优选的化合物是式(Ⅰ)化合物其中L表示式(a)或(b)的基团。
总的来说，式(Ⅰ)化合物可按照EP-A-O，151，826和GB-1，055，100中所描述的反应步骤而制得，更具体地讲，是通过式(Ⅱ)的中间体(其中W1表示适当的离去基团如卤素)与式(Ⅲ)的中间体反应而得。 所述反应可在惰性溶剂如甲基异丁基酮、N，N-二甲基乙酰胺或N，N-二甲基甲酰胺中，在适宜的碱如碳酸钠、碳酸氢钠或三乙基胺存在下，以及任选在碘化钾存在下进行。
在此项制备以及后文的制备中，如果必要的话，可以把反应产物从反应介质中分离纯化出来。进一步纯化的方法可根据本领域普遍已知的方法学，例如提取法、结晶法、蒸馏法、研磨法和色层分离法。
此外，式(Ⅰ)化合物也能通过还原的烷化反应而制得。然后，使式(Ⅳ)的中间体与式(Ⅲ)的中间体于反应惰性溶剂如甲醇中，在如氢的还原剂存在下，在适宜的催化剂如附载于活性炭上的钯存在下反应，然后在方便的时候将噻吩加入反应混合物中。 其中X表示N的式(Ⅰ)化合物，且所述化合物以结构式(Ⅰ-a)表示时，可以使式(Ⅴ)的中间体与式为(Ⅵ)的中间体反应而制得，其中W1为适宜的离去基团，例如卤素。 所述反应可在反应惰性溶剂如甲基异丁基酮、N，N-二甲基乙酰胺或N，N-二甲基甲酰胺中，在适宜的碱，如碳酸钠、碳酸氢钠或三乙基胺存在下，及任选在碘化钾存在下进行。
其中L表示式(b)的基团的式(Ⅰ)化合物，所述化合物可以由式(Ⅰ-b)表示，可通过式(Ⅶ)的中间体与式(Ⅷ)的异氰酸基衍生物反应而获得。 所述反应可在反应惰性溶剂如二异丙基醚中进行。
式(Ⅰ)化合物也能根据领域已知的功能基团转化方法而相互转化。
采用领域已知的把三价的氮转化为其N-氧化物形式的方法，式(Ⅰ)化合物也可转化为其相应的N-氧化物形式。所述的N-氧化物反应通常可通过把式(Ⅰ)的起始物与3-苯基-2-(苯磺酰基)oxaziridine或与适当的有机或无机过氧化物发生反应而制得。适当的无机过氧化物包含如过氧化氢、碱金属或碱土金属过氧化物(如过氧化钠、过氧化钾)；适当的有机过氧化物可包含过氧酸(如benzenecarboperoxoic酸、或卤代benzenecarboperoxoic酸如3-氯代benzenecarboperoxoic酸)、过氧化链烷酸(如过氧化醋酸)、烷基过氧化氢(如叔丁基过氧化氢)；适当的溶剂为如水、诸如乙醇等的低级链烷醇、碳水化合物(如甲苯、酮类如2-丁酮)、卤代碳水化合物如二氯甲烷、以及这些溶剂的混合物。
一些式(Ⅰ)化合物和一些本发明的中间体可包含不对称的碳原子。所述化合物和所述中间体的纯立体化学异构体形式能通过采用领域已知的方法而获得。例如，非对映异构体可通过物理方法分离开来，这些方法包括选择性结晶、或色层分离技术如逆流分配，液相色谱等方法。采用选择性结晶或色层分离技术如液相层析等方法，可首先将上述外消旋混合物与溶剂如手性酸转化为非对映异构体盐或化合物的混合物，而从外消旋混合物获得对映体；最后将上述分离出来的非对映异构体盐或化合物转化为相应的对映体。纯立体化学异构体形式也可由适宜的中间体和起始物的纯立体化学异构体形式而获得，条件是中间反应是立体特异性地发生的。
此外，分离式(Ⅰ)化合物和中间体的对映体的其它方法还包括液相层析，特别是使用手性固定相的液相层析。
一些中间体和原料是已知的化学物及可以通过市售获得或可以根据领域已知的方法制备。
甘氨酸是中枢和外周神经系统(抑制性和兴奋性突触)中的氨基酸神经递质。甘氨酸的这些明显的功能是通过两种类型的受体介导的，它们中的每一个都与不同的甘氨酸转运物(transporter)相联系。甘氨酸的抑制性作用是通过对能引起惊厥的生物碱--马钱子碱敏感的甘氨酸受体介导的，并因此而被称作”马钱子碱敏感性的”。马钱子碱敏感性的甘氨酸受体被发现主要存在于脊髓和脑干中。
甘氨酸是通过调节谷氨酸盐--神经系统中主要的兴奋性神经递质在兴奋性传递中的作用而发挥其功能的(Johnson and Ascher，自然，325，529-531(1987)；Fletcher等，甘氨酸传递．(Otterson and Storm-Mathisen，eds，1990)，pp．193-219)。具体地说，甘氨酸是谷氨酸受体--也称作N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体的专一共兴奋剂。NMDA受体广泛分布于脑中，在大脑皮层和海马结构中分布密度特别高。
转运物从突触中摄取神经递质，从而调节了突触中神经递质的浓度，这些共同决定了突触传递的强度；通过阻止神经递质往邻近突触的扩散，转运物保持了突触传递的精度(fidelity)；最后，转运物通过重摄取释放到突触前间隙的递质，使得递质得到再利用。神经递质转运取决于细胞膜内外钠离子和电位差。在特殊情况下，例如癫痫发作时，转运物可以发挥完全相反的作用，以钙不依赖性非细胞外的方式释放神经递质(Attwell等，神经元，11，401-407(1993))。神经递质转运物的调节作用提供了一种调节突触活动的方式，这为中枢和外周神经系统紊乱提供了有用的治疗方法。
分子克隆学已揭示出存在两种类型的甘氨酸转运物，分别称之为GlyT-1和GlyT-2。GlyT-1被发现主要存在于前脑，它的分布与glutamatergic pathways和NMDA受体的分布一致(Smith等，神经细胞8，927-935(1992))。现在知道至少三个GlyT-1的不同结合位点，分别称为GlyT-1a，GlyT-1b和GlyT-1c(Kim等，分子药理学，45，608-617(1994))，它们中的每一个在脑和外周神经组织中都展示出一种独特的分布。相反，GlyT-2被发现主要存在于脑干和脊柱中，且其分布与马钱子碱敏感性的甘氨酸受体的分布密切相关(Liu等，生物化学杂志，268，22802-22808(1993)；Jursky and Nelson，神经化学，64，1026-1033(1995))。由此，人们预测，通过调节甘氨酸的突触水平，GlyT-1和GlyT-2可以选择性地分别调节NMDA受体及对马钱子碱敏感的甘氨酸受体的活性。
因此人们期望应用抑制或激活甘氨酸转运物的化合物来改变受体的功能，从而对许多疾病提供治疗作用。因此，通过抑制GlyT-2，可增强甘氨酸的突触水平而减低具马钱子碱敏感性的甘氨酸受体的活性，从而减少与痛觉相关的(如感受伤害的)信息在脊柱中的传递，已揭示出这些作用过程是以这些受体介导的。Yaksh，疼痛，37，111-123(1989)。另外，利用脊髓中的马钱子碱敏感的甘氨酸受体增强抑制性的甘氨酸能传递可被用来降低肌肉过度活动，这对于治疗过强的肌肉收缩，如痉挛、肌阵挛和癫痫这类的疾病是有用的(Truong等，紊乱的活动，3，77-87(1988)；Becker，FASEB J，4，2767-2774(1990))。可通过调节甘氨酸受体而治疗的痉挛与癫痫、中风、脑损伤、多发性硬化症、脊柱损伤、肌张力障碍及其他神经系统的疾病和损伤的情况有关。
NMDA受体参与记忆和学习(Rison and Stanton，Neurosci．Biobehav．Rev．，19，533-552(1995)；Danysz等，行为药理学，6，455-474(1995))；由NMDA介导的神经传递功能的减弱似乎可导致精神分裂症状的出现(Olney and Farber，Archives General Psychiatry，52，998-1007(1996))。因此，抑制GlyT-1而增加NMDA受体的甘氨酸活性的物质可被用来作为精神病和抗痴呆的新药物，用于治疗认知过程损伤的疾病，如注意力不集中和器质性脑综合征。相反，NMDA受体的过度激活也与许多疾病有关，特别是与中风、脑损伤和可能与神经退化性疾病有关的神经细胞死亡，如Alzheimer’s病，多-梗塞性痴呆，AIDS痴呆，Huntington’s病，帕金森氏病，肌萎缩性侧硬化症或其他出现神经细胞死亡的疾病。Coyle＆Puttfarcken，科学，262，689-695(1993)；Lipton and Rosenberg，新英格兰医学杂志，330，613-622(1993)；choi，神经元，1，623-634(1988)。因此，增强GlyT-1活性的药物可降低NMDA受体的甘氨酸活性。这种作用可用于治疗上述的疾病及与这些疾病相关的疾病状态。同样，直接阻断NMDA受体上甘氨酸位点的药物也可用来治疗上述的疾病及与这些疾病相关的疾病状态。
为便于药物的服用，本文中所述的化合物可以配制成许多种药学组合物，其包含药学上可接受的载体和作为活性成分的、一定有效治疗量的式(Ⅰ)的新化合物。为制备本发明的药学组合物，可采用以加成盐或游离酸或游离碱的形式存在的、一定有效量的特殊化合物，作为活性成分与药学上可接受的载体紧密混合，其载体可以广泛的形式存在，这取决于制备的药物采用何种服用方式。这些药学组合物是较适合于制成单一剂型，优选的是口服、经皮、或不经肠的注射给药方式。例如，制备口服剂型的组合物，所有常见的药学媒介都可应用，如水、乙二醇、油、醇等，液态口服制剂形式包含如悬浮液、糖浆、酏剂以及溶液；以固体载体如淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，可用于粉末、丸、胶囊和片剂的情况下。片剂和胶囊是服用最方便的口服剂型，其中显然需要使用固体药学载体。对于不经肠给药的组合物，其载体通常包含消毒水，它至少在很大程度上可帮助溶解。也可制备通过其它成份注射的溶液，所用的载体包括盐溶液，例如，其中葡萄糖溶液或盐水和葡萄糖混合溶液。含有式(Ⅰ)化合物的可注射溶液可配制成油状以延长作用时间，为此可选用的适宜的油包括如花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油、大豆油、合成的长链脂肪酸甘油酯以及这些油与其他油组成的混合物。也可制备可注射的悬浮液，其中可应用适当的液态载体、悬浮剂等。在适于经皮给药的组合物中，载体可任选包含渗透增强剂和／或适当的润湿剂，它们以较小比例与各种适当的添加剂任选混合，且这些添加剂不对皮肤引起任何明显的有害作用。所述添加剂可促进皮肤的给药并／或有助于制备想获得的组合物，这些组合物可以有许多种给药途径，如透皮贴剂、a spot-on或软膏。由于(Ⅰ)的加成盐相对于它们相应的游离碱或游离酸形式而言水溶性增强，它们显然更适于用来制备液体组合物。
将上述药用组合物制备成单位和均匀的剂量形式以便于服用是特别有利的。用在本文的说明书和权利要求中的单位剂量形式这一术语指的是适合用作单位剂量的、物理上不连续的单位，每一单位都包含预先决定数量的、经计算可产生所需治疗作用的活性成分和与之混合的所需载体。这种单位剂量形式的实例如片剂(包括划痕片或包衣片)、胶囊、丸、袋装粉末、薄片、可注射的溶液或悬浮液、一汤匙量、一大汤匙的量等之类的形式，以及它们的分开的多剂量形式。
下面的实施例用来阐明本发明。
实验部分实施例A．1将1-氯-4，4-双(4-氟苯基)丁烷(5．6g)，4-(1，2，3，4-四氢-2-氧代-3-喹唑啉基)哌啶(3．5g)，碳酸钠(6．36g)，含少量的KI晶体的甲基异丁基酮混合物(160ml)搅拌并回流2天，冷却后加入水(250ml)，分离出的有机层经干燥、过滤、蒸发溶剂。残留物从甲基异丁基酮(80ml)中重结晶，得到3g的3-[1-[4，4-双(4-氟甲基)丁基]-4-哌啶基]-3，4-二氢-2(1H)-喹啉酮；mp．199-200．5℃(化合物1)。
类似物也可制备4-[2-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]乙酰基]-3，4-二氢-3-苯基-2(1H)-喹喔啉酮乙二酸酯(1∶1)；mp．190．8℃(化合物2)；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-1-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基甲基)-1H-苯并咪唑-2-胺；mp．160．1℃(化合物3)；2-[[4-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-1-哌嗪基]甲基]-3-(2-乙氧乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶乙二酸酯(1∶2)；mp．173．2℃(化合物4)；3-[1-[4，4-双(4-氟甲基)丁基]-4-哌啶基]-3，4-二氢-吡咯并[2，3-d]-2(1H)-嘧啶酮二氢氯化物；mp．220-222℃(化合物5)；实施例A．2将4-氟-γ-(4-氟苯基)苯丁醛(2．6g)，1-(4-氟苯基)-3-[2-(4-哌啶甲基)-1H-苯并咪唑-1-y1]-1-丙酮二溴化物一水合物(5．5g)，噻吩的3％乙醇溶液(1g)，醋酸钾(3g)和甲醇(200ml)的混合物在常压和50℃下用10％的附于木炭上的钯催化剂氢化(2g)。当经计算的量的氢被摄取后，滤去催化剂，蒸发掉滤液，将水加入到油状残余物，以氢氧化铵碱化，以4-甲基-2-戊酮提取产物，提取物经干燥、过滤和蒸发。油质残余物通过硅胶柱层析纯化，以三氯甲烷和甲醇(95∶5体积比)的混合物作为洗脱剂，油质残余物在乙腈和4-甲基-2-戊酮中转化为乙二酸酯盐。使该盐结晶出来，产物经滤过和干燥后，得到5g(63．3％)的3-[2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-1H-苯并咪唑-1-yl]-1-(氟苯基)-1-丙酮乙二酸酯(1∶2)；mp．156．4℃(化合物6)。
实施例A．3将1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-哌嗪(6．9g)，4-氯-1-(2-噻吩基)-丁酮(4．1g)，碳酸钠(3．18g)，含少量的KI的4-甲基-2-戊酮溶液(200ml)混合物经回流24小时，然后再加入第二部分的4-氯-1-(2-噻吩基)-丁酮(4．1g)，搅拌并回流另外36小时，冷却后加入水(100ml)。分离有机层，以碳酸钾干燥，再经过滤和蒸发。使油质残余物溶解于无水乙醚(480ml)，过滤溶液，并将氯化氢气体导入滤液，滤去沉淀盐，以2-丙醇(320ml)结晶，得到4-[4，4-二(4-氟代苯基)丁基]-1-哌嗪基]-1-(2-噻吩基)-丁酮；mp．227．5-230℃(化合物7)。
实施例A．4向搅拌1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-N-(4-甲氧苯基)-4-哌啶胺(6．75g)的2，2’-氧二丙烷(105ml)和四氢呋喃(45ml)的溶液滴加2-异氰基丙烷(1．36g)的2，2’-氧二丙烷(35ml)的溶液，加入完毕后，搅拌首先在室温下持续1天，然后在约50℃下搅拌一小时。蒸发反应混合物。
残余物从2，2’-氧二丙烷和2-丙醇的混合液中结晶出来，得到N-[1-4，4-双(4-氟苯基)丁基]-4-哌啶基]-N-(4-甲氧苯基)-N’-(1-甲基-乙基)脲(4．8g，59％)；mp．170．9℃(化合物8)。
类似物也可制备N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-丁基-N-(4-甲氧苯基)脲；mp．101．9℃(化合物9)；N-[1-4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N-(4-甲氧苯基)-N’-丙基-脲；mp．124．1℃(化合物10)；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-环已基-N-(4-甲氧苯基)脲；mp．128．2℃(化合物11)；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-乙基-N-(4-甲苯基)脲；mp．129．1℃(化合物12)；N-[1-[4，4-二(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-(1-甲基乙基)-N-(4-甲苯基)脲；mp．167．2℃(化合物13)；以及N-[1-[4，4-二(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N'-(4-氯苯基)-N’-(1-甲基乙基)脲；mp．157．4℃(化合物14)；药理学实施例实施例B．1GlyT1转运物的转运试验将分会合性的HEK293-GlyT1细胞(即稳定表达人甘氨酸转运物1的一个细胞系)植入Cytostar T板，每孔100μl DMEM培养基(Dulbecco氏改良Eagle培养基中补充以10％新生小牛血清，1mM丙酮酸钠，2mM谷氨酰胺，100u青霉素／ml和0．1mg／ml链霉素)中含50，000个细胞。细胞在37℃、5％CO2、95％湿度下培养48小时。
在第三天，采用TecanPW96微处理器控制的清洗器以uptake缓冲液(25mM Hepes，5．4mM葡萄糖酸钾，1．8mM葡萄糖酸钙，0．8mMMgSO4，140mMNaCl，5mM葡萄糖，5mM丙胺酸，以2Mtris液调pH至7．5)同时洗涤微培养板所有96孔的细胞，调节TecanPW96使洗涤细胞共5次，且每孔只剩75μl。测试化合物溶解于DMSO中形成不同的微摩尔级的浓度梯度。每孔加入1μl测试溶液，细胞在室温下培养5-10分钟，然后加入以uptake缓冲液稀释的25μl的30μM[U14C]甘氨酸。细胞在室温下培养1小时后，将平板密封，以Packard微培养板闪烁计数仪(Top Count)测定[U14C]甘氨酸的摄取。从不同浓度的每一测试药物所得的结果，可计算出甘氨酸摄取的50％抑制浓度(IC50)。本发明测试化合物的表示为pIC50(IC50的负log值)计算的数据见表1。
化合物15为2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-3-(2-吡啶甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶乙二酸酯(1∶2)；化合物16为2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-3-[(4-氟苯基)甲基]-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶乙二酸酯(1∶2)；化合物17为2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-3-(苯甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶乙二酸酯(1∶2)；化合物18为2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-3-(2-噻吩甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶乙二酸酯(1∶1)；化合物19为2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-3-(2-呋喃甲基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶乙二酸酯(1∶2)；化合物20为2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-3-[(4-甲氧基-苯基)甲基]-1H-苯并咪唑乙二酸酯(1∶2)；化合物21为2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-甲基]-3-(4-噻唑基-甲基)-1H-苯并咪唑乙二酸酯(1∶2)；如EP-A-0，151，826所揭示；且化合物22为1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-[3-[(苯胺基羰基)-丙基]-哌嗪二盐酸盐，如GB-1，055，100所揭示的，也被测试。
表1
C．组合物实施例下列处方举例说明了适合全身给药治疗本发明所述的患病动物和人的典型的药用组合物。
所有这些实施例中所使用到的”活性成分”(A．I．)指的是式(Ⅰ)化合物或它们的药学上可接受的加成盐。
实施例C．1薄膜衣片片芯的制备将100g的A．I．，570g的乳糖和200g淀粉的混合物充分混合，然后以5g十二烷基硫酸钠和10g聚乙烯吡咯烷酮溶解于约200ml水中所形成的溶液将混合物润湿。湿粉状的混合物经过筛、干燥、再次过筛，然后再加入100g微晶纤维素和15g氢化植物油，充分混和并压成片剂，得到10，000片，每片含10mg活性成分。
包衣向10g甲基纤维素的75ml变性乙醇溶液中加入5g乙基纤维素的150ml二氯甲烷溶液。然后再加入75ml二氯甲烷和2．5ml1，2，3-丙三醇。熔化10g聚乙二醇，然后溶于75ml二氯甲烷中。将后者溶液加入到前者，然后再加入2．5g十八烷酸镁，5g的聚乙烯吡咯烷酮和30ml浓缩的染料悬浮液。均匀混合后，便在包衣机中用由此获得的混合物进行片芯的包衣。
权利要求
1．抑制甘氨酸转运的化合物在制备用于治疗中枢和外周神经系统疾病的药物中的用途，上述化合物具有下式 其N-氧化物，立体化学异构体形式或其药学上可接受的加成盐，其中X表示CH或N；L表示一个下式基团 其中n为0或1；m为0或1；Alk表示C1-6烷二基；A表示N或CH；B1表示CH2或NH；-a1=a2-a3=a4-表示下式的二价基团-CH=CH-CH=CH-(a-1)；或-N=CH-CH=CH-(a-2)；R1表示任选由C1-4烷氧基、吡啶基、芳基、芳基羧基、噻吩基、呋喃基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、噻唑基取代的C1-4烷基；R2表示氢或芳基；R3表示氢、C1-6烷基或C3-7环烷基；R4表示噻吩基、呋喃基、烷基氨基或下式基团 其中R5为氢或芳基；芳基表示被从C1-4烷基、卤代、羟基、C1-4烷氧基中选择的1或2个取代基任选取代的苯基。
2．权利要求1的用途，其中L为式(a)或(b)的基团。
3．权利要求1的用途，其中的疾病指的是精神病(psychoses)、疼痛、癫痫、神经退化性疾病、中风、脑损伤或多发性硬化症。
4．权利要求1或2所定义的式(Ⅰ)化合物，条件是-当X表示CH；L表示式(a)的基团，其中B1表示-CH2-基团，R1表示吡啶-2-基甲基，噻吩-2-基甲基，呋喃-2-基甲基，苯甲基或4-氟代苄基时，则-a1=a2-a3=a4-不表示-N=CH-CH=CH-；-当X表示CH；L表示式(a)的基团，其中B1表示-CH2-基团，R1表示4-甲氧苯基或噻唑-4-基甲基时，则-a1=a2-a3=a4-不表示-CH=CH-CH=CH-的基团；-当X表示N；L表示式(a)的基团，其中Alk表示1，3-丙烷二基时，则R4不表示苯基氨基。
5．权利要求4中的化合物，其中n=0，m=1；R1表示被任选的C1-4烷氧基、芳香羰基或咪唑并[1，2-a]吡啶基所取代的C1-4烷基；R4表示噻吩基、呋喃基或式(d-1)基团。
6．权利要求4中的化合物，其中化合物为3-[1-[4，4-双(氟代甲基)丁基]-4-哌啶基]-3，4-二氢-2(1H)-喹啉酮；4-[2-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]乙酰基]-3，4-二氢-3-苯基-2(1H)-喹喔啉酮；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-1-(咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基甲基)-1H-苯并咪唑-2-胺；2-[[4-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-1-哌嗪基]甲基]-3-(2-乙氧乙基)-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶；3-[1-[4，4-双(4-氟甲基)丁基]-4-哌啶基]-3，4-二氢-吡啶并[2，3-d]-2(1H)-嘧啶酮；3-[2-[[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]甲基]-1H-苯并咪唑-1-基]-1-(4-氟苯基)-1-丙酮4-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-1-哌嗪基]-1-(2-噻吩基)-丁酮；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N-(4-甲氧苯基)-N’-(1-甲基-乙基)脲；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-丁基-N-(4-甲氧苯基)脲；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N-(4-甲氧苯基)-N’-丙基-脲；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-环已烷基-N-(4-甲氧苯基)脲；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-乙基-N-(4-甲基苯基)脲；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-(甲基乙基)-N-(4-甲苯基)脲；N-[1-[4，4-双(4-氟代苯基)丁基]-4-哌啶基]-N’-(4-氯苯基)-N’-(1-甲基乙基)脲；以及它们的N-氧化物、立体化学异构体形式或药学上可接受的加成盐。
7．药用组合物，其包含药学上可接受的载体和作为活性成分的、有效治疗剂量的权利要求4到6中的任一项的化合物。
8．制备权利要求7的用学组合物的方法，其特征在于，以有效治疗量的、权利要求4到6中任一项的化合物与药用载体充分混合。
9．权利要求4到6中任一项的化合物用作药物。
10．制备权利要求4的化合物的方法，其特征在于a)通过使式(Ⅱ)的中间体，其中W1表示适当的离去基团，与式(Ⅲ)的中间体在反应惰性溶剂中，在适宜的碱和任选在碘化钾存在下反应 b)使式(Ⅲ)的中间体与式(Ⅳ)的中间体在惰性溶剂中，在还原剂和任选在适宜的催化剂存在下进行还原性烷基化反应； c)通过式(Ⅴ)的中间体与式(Ⅵ)的中间体，其中W1为适当的离去基团，在惰性溶剂中反应，从而得到式(I-a)的化合物，反应在适当的碱和任选在碘化钾存在下进行 d)通过式(Ⅶ)的中间体与式(Ⅷ)的异氰酸基衍生物在惰性溶剂中发生反应，从而形成式(I-b)的化合物 并且如果需要，可通过用酸处理而将式(Ⅰ)化合物转化为酸加成盐，或通过用碱处理而转化为碱加成盐，或者反过来，通过用碱处理而将酸加成盐形式转化成游离碱，或通过用酸处理而将碱加成盐形式转化成为游离酸；而且，如果需要，可制备它们的N-氧化物和／或立体化学异构体形式。
全文摘要
本发明涉及甘氨酸传递抑制剂[4,4－双(4－氟代苯基)丁基]－1－(哌嗪和哌啶基)衍生物在制备治疗中枢和外周神经系统紊乱的药物,特别用于治疗精神病、疼痛、癫痫、神经退化性疾病(Alzheimer氏病)、中风、脑损伤、多发性硬化症等。本发明还进一步地包括新化合物,及其制备及它们的药用形式。
文档编号A61K31/497GK1292698SQ99803647
公开日2001年4月25日 申请日期1999年2月26日 优先权日1998年3月6日
发明者W·H·M·L·卢伊顿, F·E·贾森斯, L·E·J·肯尼斯 申请人:詹森药业有限公司