常，接种部位有一过性肿胀、发热等不 良反应，尤其在高剂量组表现更为明显。对于油佐剂苗，高剂量组小鼠，由于疫苗吸收较慢， 有轻度肉芽肿反应。
[0039] 与上述疫苗的实验方法类似，将纯化的小鼠可溶性IL-4R a (SIL-4R a )与 IL-4-T118S融合蛋白以及载体对照蛋白分低（0. 5yg)、中（5yg)、高（50yg)三个不同剂 量组，另设生理盐水对照组，每组5只BALB/c小鼠，于后腿肌肉或尾静脉注射。间隔3周， 分别进行第二次和第三次注射。注射后分别观察小鼠有无不良反应、过敏、死亡等现象。结 果表明：小鼠注射蛋白后发育良好，精神状态和食欲均正常，未发现明显不良反应。
[0040] 实施例4 :小鼠 IL-4、IL-4S、IL-4R a与IL-13基因重组疫苗、小鼠可溶性 IL_4Ra (sIL-4Ra)与IL-4-T118S融合蛋白增强小鼠抗肿瘤活性的试验
[0041] 按实施例1的方法，将纯化的IL-4、IL-4Ra蛋白或IL-4S、IL-13融合蛋白或载 体对照所表达的蛋白用生理盐水适当稀释后与铝胶佐剂按1:1的比例混合制备实验或对 照疫苗。要求每头份疫苗中IL-4、IL-4Ra蛋白或IL-4S、IL-13融合蛋白或载体对照蛋白 的量约为15-20 μ g ;每头份疫苗的体积约为0. lml。给实验小鼠分别于肿瘤细胞接种前3 周和1周腹腔（i. P.)接种实施例1所制备的IL-4、IL-4Ra蛋白与IL-4S、IL-13融合蛋白 基因重组铝胶疫苗，另设载体蛋白铝胶疫苗和PBS免疫对照组。瘤接种后每隔3天检查一 次肿瘤生长情况，实验60天结束。结果表明，IL-4、IL-4Ra蛋白与IL-4S、IL-13融合蛋白 基因重组疫苗均能够显著降低肿瘤的发生率（见表1)。
[0042] 对于小鼠可溶性IL-4Ra (sIL-4Ra )与IL-4-T118S融合蛋白治疗组，给实验小 鼠分别于肿瘤细胞接种当天和接种后每间隔4天于小鼠尾静脉注射5yg sIL_4Ra或 IL-4-T118S融合蛋白或融合蛋白对照。瘤接种后每隔3天检查一次肿瘤生长情况，实验60 天结束。结果表明，小鼠可溶性IL_4Ra (sIL-4Ra)与IL-4-T118S融合蛋白治疗组均能够 显著降低肿瘤的发生率（见表1)。
[0043] 表1 :小鼠（C57BL/6,早）IL-4、IL-4Ra蛋白与IL-4S、IL-13融合蛋白基因重组 疫苗组、小鼠 sIL-4Ra与IL-4-T118S融合蛋白治疗组均能增强小鼠抗肿瘤活性的试验结 果（每组10只，数据为存活率％ )
[0046] 实施例5 :小鼠 IL-4、IL-4S、IL-4R α与IL-13基因重组疫苗、小鼠可溶性 IL-4Ra (sIL-4Ra)与IL-4-T118S融合蛋白防治慢性结核病的试验
[0047] 按实施例1的方法，将纯化的IL-4、IL_4Ra蛋白或IL-4S、IL-13融合蛋白或载 体对照所表达的蛋白用生理盐水适当稀释后与铝胶佐剂按1:1的比例混合制备实验或对 照疫苗。要求每头份疫苗中IL-4、IL-4Ra蛋白或IL-4S、IL-13融合蛋白或载体对照蛋白 的量约为15-20 μ g ;每头份疫苗的体积约为0. lml。给实验小鼠分别于卡介苗（BCG)接种 前3周和1周腹腔（i. p.)接种实施例1所制备的IL-4、IL-4Ra蛋白与IL-4S、IL-13融合 蛋白基因重组铝胶疫苗，另设载体蛋白铝胶疫苗和PBS免疫对照组。
[0048] 对于小鼠可溶性IL-4Ra (sIL-4Ra )与IL-4-T118S融合蛋白治疗组，给实验小鼠 分别于卡介苗（BCG)接种当天和接种后每间隔4天于小鼠尾静脉注射5 yg sIL-4Ra或 IL-4-T118S融合蛋白或融合蛋白对照。
[0049] 适量卡介苗给小鼠皮下（s. c.)或静脉（i. V.)注射接种。接种后12~16周用高 剂量重组BCG攻击（i. V.接种），而后，10~12周取小鼠脾脏，研磨、过滤、离心，取适量单 细胞悬浮液铺到琼脂版上，置入37°C培养箱中培养约3周，计数每个平板上菌落数量。结果 表明，小鼠（C57BL/6,早）IL-4、IL-4Ra蛋白与IL-4S、IL-13融合蛋白基因重组疫苗组、小 鼠 sIL-4Ra与IL-4-T118S融合蛋白治疗组均能够显著降低BCG的感染（见表2)。
[0050] 表2 :小鼠（C57BL/6,早）IL-4、IL-4Ra蛋白与IL-4S、IL-13融合蛋白基因重组 疫苗组、小鼠 sIL-4Ra与IL-4-T118S融合蛋白治疗组均能增强小鼠预防慢性结核病的试 验结果（每组10只，数据为每个平板上菌落平均数）
[0051]
[0052] 实施例6 :抗小鼠与人IL-4、IL-4S、IL_4Ra和IL-13鸡卵黄抗体（蛋白粉）的制 备
[0053] 按实施例1的方法，分别将纯化的小鼠和人IL-4、IL_4Ra蛋白或IL-4S、IL-13 融合蛋白或载体对照所表达的蛋白用生理盐水适当稀释后与铝胶佐剂按1:1的比例混合 制备实验或对照疫苗，要求每头份疫苗中IL-4、IL-4Ra蛋白或IL-4S、IL-13融合蛋白或载 体对照蛋白的量约为30-40 μ g，每头份疫苗的体积约为0. 5ml。免疫程序如下：选择刚开产 的健康母鸡为实验动物，随机分组，每组50只。首免剂量为1头份/只；首免3周后二免， 剂量为2头份/只；首免6周后三免，剂量为3头份/只；二免和三免后20天各组分别随机 收集10枚蛋，测定卵黄抗体的效价，若ELISA效价高于1:15000判为合格；否则，继续进行 第4次免疫，免疫剂量为剂量为4头份/只；四免后20天各组分别随机收集10枚蛋，测定 卵黄抗体的效价，若ELISA效价高于1:15000判为合格。收集合格的鸡蛋，用低温冷冻干燥 或瞬间高温喷雾干燥法制备高免卵黄蛋白粉，放置在低温干燥处，备用。
[0054] 实施例7 :抗小鼠 IL-4、IL-4S、IL_4Ra与IL-13鸡卵黄抗体（蛋白粉）增强小鼠 防治肿瘤的试验
[0055] 给实验小鼠分别于肿瘤细胞接种前1周开始饮水应用实施例6制备的高免卵黄抗 体，按1 %稀释，自由饮水，至实验结束为止。瘤细胞接种后每隔3天检查一次肿瘤生长情 况，实验60天结束。结果表明，抗小鼠 IL-4、IL-4S、IL-4Ra与IL-13鸡卵黄抗体（蛋白 粉）均能够显著降低肿瘤的发生率（见表3)。
[0056] 表3 :抗IL-4、IL-4S、IL_4Ra与IL-13鸡高免卵黄抗体（蛋白粉）增强小鼠防治 肿瘤的试验结果（C57BL/6母鼠，每组10只，数据为存活率％ )
[0058] 实施例8 :抗人IL-4、IL-4S、IL_4Ra与IL-13鸡卵黄抗体（蛋白粉）防治慢性结 核病的试验
[0059] 给实验小鼠分别于卡介苗（BCG)接种前1周开始饮水应用实施例6制备的高免卵 黄抗体，按I %稀释，自由饮水，至实验结束为止。
[0060] 适量卡介苗给小鼠皮下（s. c.)或静脉（i. V.)注射接种。接种后12~16周用高 剂量重组BCG攻击（i.v.接种），而后，10~12周取小鼠脾脏，研磨、过滤、离心，取适量单 细胞悬浮液铺到琼脂版上，置入37°C培养箱中培养约3周，计数每个平板上菌落数量。结 果表明，抗小鼠 IL-4、IL-4S、IL-4Ra与IL-13鸡卵黄抗体（蛋白粉）均能够显著降低BCG 的感染（见表4)。
[0061] 表4:抗IL-4、IL-4S、IL-4Ra与IL-13鸡高免卵黄抗体（蛋白粉）增强小鼠防治 结核病的试验结果（母鼠，每组10只，数据为每个平板上菌落平均数）
【主权项】
1. 一种防治肿瘤和/或慢性结核病的Th2免疫反应抑制剂，其特征在于，是以Th2类细 胞因子的受体为抗原制成的疫苗、Th2类细胞因子的可溶性受体或失去生理活性但仍具有 与Th2类细胞因子受体结合活性的截短型Th2类细胞因子为有效成分； 所述Th2 类细胞因子为IL-4、IL-13、IL-5、IL-6 或IL-IO; 所述Th2类细胞因子的受体为IL-4Ra、alpha-l、alpha-2、IL-5受体、IL-6受体或IL-10受体。2. 根据权利要求1所述的Th2免疫反应抑制剂，其特征在于，所述Th2类细胞因子的可 溶性受体是指漂浮在宿主血液内具有与Th2类细胞因子结合活性的受体。3. 根据权利要求1所述的Th2免疫反应抑制剂，其特征在于，所述失去生理活性但仍具 有与Th2类细胞因子受体结合活性的截短型Th2类细胞因子，是指由存在基因序列缺失的 mRNA所编码的蛋白质。4. 权利要求1至3任一项所述的Th2免疫反应抑制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。5. 权利要求1至3任一项所述的Th2免疫反应抑制剂在制备抗结核药物中的应用。6. -种抗肿瘤的药物，其特征在于，以权利要求1至3任一项所述的Th2免疫反应抑制 剂为有效成分。7. -种治疗慢性结核病的药物，其特征在于，以权利要求1至3任一项所述的Th2免疫 反应抑制剂为有效成分。8. -种用于防治肿瘤和/或慢性结核病的卵黄抗体，其特征在于，以权利要求1至3任 一项所述的Th2免疫反应抑制剂为有效成分制成疫苗，对母鸡进行免疫，收集免疫后母鸡 所产的鸡蛋，制成ELISA效价高于1:15000的高免卵黄抗体。9. 权利要求8所述的用于防治肿瘤和/或慢性结核病的卵黄抗体的制备方法，其特征 在于，步骤如下： 以Th2免疫反应抑制剂为有效成分制成疫苗，对母鸡进行免疫，免疫程序为：首免剂量 为1头份/只；首免3周后进行二免，剂量为2头份/只；首免6周后三免，剂量为2头份/ 只；每头份疫苗中Th2免疫反应拮抗剂的含量为30-40yg;二免和三免后20天测定免疫母 鸡产蛋的卵黄抗体效价，ELISA效价高于1:15000判定为合格；否则，继续进行第4次免疫， 免疫剂量为4头份/只，四免后20天测定免疫母鸡产蛋的卵黄抗体效价；收集ELISA效价 高于1:15000的鸡蛋，制成卵黄蛋白粉，即得。10. 根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述高免卵黄蛋白粉的制备，具体 包括以下步骤： (1) 将收集的ELISA效价高于1:15000的鸡蛋的外壳进行消毒，打蛋收集蛋黄液；消毒 采用体积分数为70 %的乙醇擦拭； (2) 将步骤⑴的蛋黄液低温冷冻干燥或瞬间高温喷雾干燥，制成卵黄蛋白粉。
【专利摘要】本发明公开了一种防治肿瘤和/或慢性结核病的Th2免疫反应抑制剂，是以Th2类细胞因子的受体为抗原制成的疫苗为有效成分；或：以Th2类细胞因子的可溶性受体为有效成分；或：以失去生理活性但仍具有与Th2类细胞因子受体结合活性的截短型Th2类细胞因子为有效成分；所述Th2类细胞因子为IL-4、IL-13、IL-5、IL-6或IL-10；所述Th2类细胞因子的受体为IL-4Rα、alpha-1、alpha-2、IL-5受体、IL-6受体或IL-10受体。本发明新发现的Th2免疫反应的抑制剂对于肿瘤和慢性结核病具有较好的治疗效果，与白介素-4治疗性疫苗相比，效果更为显著。
【IPC分类】A61K38/20, A61P35/00, A61K39/385, A61P31/06, A61K39/395
【公开号】CN104922659
【申请号】CN201510387837
【发明人】刘永庆, 郭继英
【申请人】刘永庆
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年7月3日