棕榈植物液及其提取物预防胰腺癌的抗增殖效果的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种癌症抗增殖作用的组合物。更具体地讲，涉及一种棕榈类化合物，包括但不限于用于预防胰腺癌的酚类化合物。
【背景技术】
[0002]油棕果(油棕)包含大量脂溶性或水溶性的生物活性剂，例如维他命E (生育酚、生育三烯酚)、类胡萝卜素和植物留醇。脂溶性生育三烯酚表现出在人体癌细胞，例如前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、黑色素瘤和肺癌中具有抗肿瘤效果。水溶性油棕酚类(OPP)已经证实表现出潜在的抗癌性能。Sambanthamurthi等(2011)已表明酸类在接种肿瘤的小鼠体内抑制肿瘤发展；然而，没有公开文献表明使用棕榈植物液抑制胰腺癌中肿瘤的生长。Sekaran等(2010)已经证实OPP可以在不同的癌细胞系，例如体外的乳腺癌、肺癌、皮肤癌中抑制增殖和诱导细胞凋亡。还发现OPP能减缓体外肿瘤的生长。然而，可获得的研宄中没有公开油棕生物活性剂对胰腺癌细胞生长的影响。因此，本发明的目的是利用油棕植物液的提取物来治疗胰腺癌(PaCa)。
[0003]胰腺癌(PaCa)因其侵袭性和早期转移而成为低存活率癌症死亡的一个诱因。尽管最近更集中地研宄该领域，但PaCa的死亡率依然相当高。PaCa患者的常规治疗是胰腺切除，或器官的手术切除，其次是化疗，靶向和/或放射治疗。
[0004]吉西他滨(gemcitabine)是嘌呤类似物，用作晚期胰腺癌治疗的标准临床化疗剂；然而，该化疗剂已表现出短存活时间的低调肿瘤响应速率。厄洛替尼(erlotinib)是通过抑制细胞生长信号处理但又在临床试验中表现出稍微提高存活效益而用作吉西他滨的辅剂的一种靶向表皮生长因子受体酪氨酸激酶。
[0005]可用于靶向PaCa的化疗剂的有害副作用，例如，心脏病发作、中风和死亡，已经有文件记录。由于它们对正常组织的剂量限制性毒性，这导致优点较为有限。因此，本发明的一个目的是提供一种替代形式以用最小的副作用增强对胰腺癌的化疗活性。
[0006]本发明的另一个目的是抑制大多数吉西他滨治疗患者承受的副作用和化疗耐药性。开发新的治疗剂以便改善天然植物提取物的预后变得至关重要。
[0007]本发明的又另一个目的是提供一种结合药物使用的生物活性膳食剂，以达到减轻毒性和单独治疗的剂量需求的多效作用。
[0008]核因子kB(NF-kB)广泛用作控制细胞增殖和细胞存活的基因调节剂，并且在癌细胞转化、细胞侵袭和细胞凋亡中发挥重要作用。P65是NF-kB的亚组，它干扰靶基因的启动子序列，而启动子序列继而诱导涉及炎症、抗细胞凋亡和增殖的基因表达。这种信号处理通道已经定向作为PaCa患者的抗癌治疗策略。NF-kB是通过各种各样的刺激(例如炎症和氧化应激)激活的共同且组成性表达的转录因子。在受到刺激时，NF-kB易位至细胞核并结合其靶基因的启动子以开始特定基因的转录。NF-kB的过度表达会导致细胞凋亡抵抗、血管生成、癌细胞的迀移和侵袭。
[0009]研宄已经表明，相比于正常的胰腺组织，NF-kB在大约67%的胰腺癌中被组成性激活，并且这与侵犯期的胰腺癌以及耐药性有关。基于NF-kB在胰腺癌调节致癌基因活性以及棕榈植物液的抗炎剂反应的作用，本发明的目的是描述棕榈植物液在胰腺癌细胞模型中的作用，其特征在于NF-kB通道的潜在下调。
[0010]因此，本发明的又另一个目的是提供一种通过调节NF-kB通道用于胰腺癌的抗增殖的组合物。
[0011]本发明的另一目的是提供根据从植物液，S卩，棕榈油研磨过程的含水液流，提取的化合物用于提供胰腺癌的抑制作用的一种改进的组合物和方法。
[0012]因此，本发明还涉及一种从研磨过程的油棕液提取生物活性物的过程。油棕加工产生富含酚类化合物、莽草酸、果酸、水果糖和甘油的大量植物液，这些成分可以通过传统的膜过滤技术进一步富集。
[0013]在参照如附图所示并且如以下描述所述的本发明的优选实施例时，本发明的其他目的和优点会变得显而易见。
【发明内容】
[0014]本发明涉及一种抑制癌细胞增殖的组合物，其中所述组合物包含来源于油棕提取物和植物液的油棕酚类。所述组合物通过抑制集落形成、诱导细胞凋亡、调节基因表达、诱导抗侵袭效果并且诱导细胞周期停滞在S期而用于预防来自PANC-1和BxPC-3细胞系的胰腺癌。
[0015]细胞凋亡与诱导半胱天冬酶、抑制细胞存活蛋白以及抑制抗细胞凋亡蛋白有关。本文公开的抗细胞凋亡蛋白是存活素。所述组合物还下调来自Bcl-2族的Bcl-XL基因表达。
[0016]所述组合物通过增加例如活化型半胱天冬酶3、半胱天冬酶9或聚(ADP-核糖)多聚酶(PARP)的促细胞凋亡蛋白的表达来诱导细胞凋亡。
[0017]本发明还公开了一种通过下调p65亚单位活性来抑制NF-KB活性的组合物。血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP9)基因表达被下调以减少细胞侵袭、细胞迀移和新陈代谢。所述组合物可以提供作为具有药用载体的化合物。
[0018]本发明进一步公开了使用治疗有效量的组合物来制备用于通过给药于有需求的个体而预防或抑制个体中胰腺癌的生长的药物。该组合物可以附带或不附带常规的化疗或放疗或手术，或者可以口服给药或者作为食品增补剂给药。
【附图说明】
[0019]参照【具体实施方式】、所附权利要求书和附图可以更好地理解本发明的这些和其他特征、方面和优点，其中:
[0020]图1示出了从油棕植物液获得的富含酚类的提取物(指定为棕汁(PJ))对胰腺癌细胞系PANC-1和BxPC-3的存活和生长(A和B)以及集落生成(C和D)的影响；
[0021]图2示出了通过组蛋白试剂盒/DNA ELISA方法(A和B)以及流式细胞术(C和D)的细胞凋亡分析；
[0022]图3示出了 PJ对基因表达的作用；
[0023]图4示出了 PJ对PANC-1 (A)和BxPC_3⑶癌细胞系的细胞周期调控的响应；
[0024]图5示出了在PANC-1和BxPC_3细胞中进行PJ治疗之后NF_kB活性的下调；并且
[0025]图6示出了在PANC-1和BxPC_3细胞系抑制细胞侵袭和转移。
【具体实施方式】
[0026]参照附图图示并且以下描述中详述的非限制性实施例更全面地解释本文的实施例及其各种特征和有利细节。熟知元件和加工技术的描述已省略，以便不会不必要地模糊本文中的实施例。本文中使用的实例仅仅旨在便于理解本文中的实施例可以实施的方式，并且进一步允许本领域的技术人员实施本文中的实施例。因此，实例不应理解为限制本文中的实施例的范围。
[0027]本发明提供棕汁(PJ)，该棕汁构成从油棕果(油棕)和/或其植物液获得的水溶性富含酚类的提取物，并且有文件记录对乳腺癌细胞具有高抗氧化、抗炎和抗致癌活性。
[0028]本发明还公开了通过用不同剂量的棕汁(PJ)治疗两个胰腺癌细胞系(PANC-1和BxPC-3)的富含酚类的提取物的抗肿瘤效果。通过以剂量依赖方式使用(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鑰)(MTS)测定法、细胞质组蛋白DNA片段定量测定法和基质胶侵袭测定法观察到PJ诱导抗增殖、细胞凋亡和抗侵袭效果。实时PCR已经确认PJ通过减少MMP-9和VEGF的基因表达诱导的