/ml、低于 0. 050mg/ml或低于 0. 010mg/ml。
[0093]治疗剂还可包含如1994年4月1日提交的美国系列No. 021，579 (其通过引用完 全并入）中描述的遗传促进剂。
[0094]可按照待使用的施用模式配制治疗剂。可注射治疗药物组合物可以是无菌、无热 原和无颗粒的。可使用等渗制剂或溶液。用于等渗性的添加剂可包括氯化钠、葡萄糖、甘露 醇、山梨醇和乳糖。所述治疗剂可包含血管收缩剂。等渗溶液可包括磷酸盐缓冲盐水。治 疗剂还可包含稳定剂，包括明胶和白蛋白。稳定剂可使得制剂在室温或环境温度长时间稳 定，包括LGS或聚阳离子或聚阴离子。
[0095]3?治疗方法
[0096] 本发明还涉及治疗有此需要的受试者的缺氧或局部缺血的方法。所述方法可包括 向所述受试者施用本文中公开的治疗剂。被施予所述治疗剂的受试者可具有增加的毛细血 管密度、侧支血管形成、血管尺寸或其组合。被施予所述治疗剂的受试者可具有增加的组织 灌流。被施予所述治疗剂的受试者可具有减少的组织坏死。
[0097] 缺氧或局部缺血可与严重肢体缺血、外周动脉疾病、伤口愈合、血管疾病、循环系 统疾病、冠状动脉病、心血管疾病、糖尿病或其组合相关联。缺氧或局部缺血可与严重肢体 缺血相关联。所述治疗方法可减少、消除或预防有此需要的受试者的严重肢体缺血。
[0098]治疗剂量可为1yg至10mg的活性成分/kg的体重/时间，并且可以为20yg至l〇mg的组分/kg的体重/时间。可每1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、 11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、 25天、26天、27天、28天、29天、30或31天施用所述治疗剂。用于有效治疗的治疗剂量的 次数可以为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个或更多个剂量。
[0099]a?施用
[0100] 可按照制药领域内的技术人员公知的标准技术配制治疗剂。可通过考虑诸如特定 受试者的年龄、性别、体重和状况以及施用途径的因素，利用医学领域内的技术人员公知的 技术按剂量施用此类组合物。所述受试者可以是哺乳动物，诸如人、马、牛、猪、绵羊、猫、狗、 大鼠或小鼠。
[0101] 可预防性或治疗性施用所述治疗剂。在预防性施用中，可以足以诱发免疫应答的 量施用所述治疗剂。在治疗性应用中，以足以引发治疗作用的量向有此需要的受试者施用 所述治疗剂。足以实现该作用的量被定义为"治疗有效剂量"。对该用途有效的量将取决 于例如所施用的治疗剂方案的特定组成、施用方式、疾病的阶段和严重程度、患者的一般健 康状态以及处方医生的判断。
[0102] 所述治疗剂可通过如Donnelly等人（Ann.Rev.Immunol. 15:617-648 (1997)); Feigner等人（美国专利No. 5, 580, 859,1996年12月3日授予的）；Felgner(美国专利 No. 5, 703, 055,1997 年 12 月 30 日授予的）；和Carson等人（美国专利No. 5, 679, 647,1997 年10月21日授予的）（所有文献和美国专利的内容通过引用以其整体并入本文）中描述 的本领域公知的方法来施用。可将所述治疗剂的DNA复合成可以例如使用治疗剂枪向个体 施用的颗粒或珠粒。本领域技术人员将了解药学上可接受的载体，包括生理上可接受的化 合物的选择取决于例如表达载体的施用途径。
[0103] 可经由多种途径施用所述治疗剂。典型的递送途径包括胃肠外施用，例如真皮内、 肌内或皮下递送。其它途径包括口服施用、鼻内和阴道内途径。具体地对于治疗剂的DNA， 可将所述治疗剂递送至个体的组织的间隙空间（Feigner等人，美国专利No. 5, 580, 859和 5, 703, 055,将所有所述美国专利的内容通过引用以其整体并入本文）。所述治疗剂还可被 施用至肌肉，或经由真皮内或皮下注射，或经皮肤（诸如通过离子电渗疗法）进行施用。还 可应用所述治疗剂的表皮施用。表皮施用可包括机械或化学刺激表皮的最外层以刺激针对 所述刺激物的免疫应答（Carson等人，美国专利No. 5, 679, 647,其内容通过引用以其整体 并入本文）。
[0104] 还可将所述治疗剂配制用以经由鼻道施用。适用于经鼻施用的制剂（其中载体是 固体）可包括具有例如在约10至约500微米范围内的粒度的粗粉，以其中采用从鼻中吸 入，即，通过从拿至靠近鼻的粉剂的容器经鼻道快速吸入的方式来施用所述粗粉。所述制剂 可以是鼻喷雾剂、滴鼻剂或利用喷雾器的气溶胶施用。所述制剂可包含所述治疗剂的水性 或油性溶液。
[0105] 所述治疗剂可以是液体制剂诸如悬浮剂、糖浆剂或酏剂。所述治疗剂还可以是用 于胃肠外、皮下、真皮内、肌内或静脉内施用（例如，可注射施用）的制剂，诸如无菌悬浮剂 或乳剂。
[0106] 可将所述治疗剂掺入脂质体、微球或其它聚合物基质（Feigner等人，美国专利 No. 5, 703, 055 ;Gregoriadis、LiposomeTechnology，第I至III卷（第 2 版，1993)，其内容 通过引用以其整体并入本文）。脂质体可由磷脂或其它脂质组成，并且可以是被相对简单地 产生和施用的无毒、生理上可接受和可代谢的载体。
[0107] 所述治疗剂可经由电穿孔，诸如通过美国专利No. 7, 664, 545 (其内容通过引 用并入本文）中描述的方法来施用。所述电穿孔可以是利用美国专利No. 6,302,874、 5, 676, 646、6, 241，701、6, 233, 482、6, 216, 034、6, 208, 893、6, 192, 270、6, 181，964、 6，150，148、6，120,493、6,096,020、6,068,650 和 5,702,359(其内容通过引用以其整体并 入本文）中描述的方法和/或设备来进行。所述电穿孔可经由微创装置来进行。
[0108] 微创电穿孔装置（"MID"）可以是用于将上述治疗剂和相关流体注射进身体组织 的设备。所述装置可包括空心针、DNA盒和流体递送装置，其中所述装置适合用于驱动使用 的流体递送装置，以在将针插入所述身体组织过程中同时（例如，自动地）将DNA注射进身 体组织。这具有在针被插入的同时逐渐注射DNA和相关流体的能力导致流体在整个身体组 织中的更均匀分布的有利方面。在注射过程中经历的疼痛可因被注射的DNA在更大面积上 的分布而减弱。
[0109] MID可将治疗剂注射进组织而无需使用针。MID可以以使治疗剂穿透组织的表面 并进入下面的组织和/或肌肉的力，以小流或射流的形式注射治疗剂。小流或射流后方 的力可通过膨胀压缩的气体（诸如二氧化碳）使其在几分之一秒内通过微孔来提供。微 创电穿孔装置以及使用它们的方法的实例描述于公开的美国专利申请No. 20080234655、 美国专利No. 6, 520, 950、美国专利No. 7, 171，264、美国专利No. 6, 208, 893、美国专利 No. 6, 009, 347、美国专利No. 6, 120, 493、美国专利No. 7, 245, 963、美国专利No. 7, 328, 064 和美国专利No. 6, 763, 264中，其每一个的内容通过引用并入本文。
[0110] MID可包含产生无痛穿透组织的高速液体射流的注射器。此类无针注射器是商购 可得的。可在本文中使用的无针注射器的实例包括美国专利No. 3, 805, 783、4, 447, 223、 5, 505, 697和4, 342, 310 (其每一个的内容通过引用并入本文）中描述的那些注射器。
[0111] 适用于直接或间接电转运的期望的治疗剂可使用无针注射器（通常通过使组织 表面与注射器接触以以足以使治疗剂穿透进组织的力驱动药剂射流的递送）来引入（例 如，注射）待治疗的组织中。例如，如果待治疗的组织是粘膜、皮肤或肌肉，则以足以使药剂 穿透通过解质层和分别进入真皮层，或进入下面的组织和肌肉的力来朝向粘膜或皮肤表面 注射所述药剂。
[0112] 无针注射器特别适合用于将治疗剂递送至所有类型的组织，特别地皮肤和粘膜。 在一些实施方案中，无针注射器可用于将含有治疗剂的液体推进至表面并进入受试者的皮 肤或粘膜。可使用本发明的方法治疗的各种类型的组织的代表性实例包括胰腺、喉、鼻咽 部、下喉咽部、口咽、唇、咽喉、肺、心脏、肾脏、肌肉、乳房、结肠、前列腺、胸腺、睾丸、皮肤、粘 膜组织、卵巢、血管或其任意组合。
[0113] MID可具有使组织电穿孔的针电极。通过在多电极阵列（例如以矩形或正方形 模式建立的）中的多对电极之间脉冲，提供了优于在一对电极之间脉冲的结果的改善的结 果。例如在标题为"NeedleElectrodesforMediatedDeliveryofDrugsandGenes"的 美国专利No. 5, 702, 359中公开了其中可在治疗性治疗过程中对多对针对进行脉冲的针的 阵列。在该申请（其通过引用并入本文，就如同充分列出一样）中，将针置于环状阵列中， 但具有连接器和使得能够在相对的针电极对之间产生脉冲的转换设备。可使用一对用于将 重组表达载体递送至细胞的针电极。这样的装置和系统在美国专利No. 6, 763, 264 (其内容 通过引用并入本文）中进行了描述。或者，可使用单针装置，所述装置允许注射DNA和利用 与常规注射针相似的单针进行电穿孔，和施加具有比通过目前使用的装置递送的脉冲的电 压更低的电压的脉冲，从而减轻患者经历的触电感。
[0114] MID可包含一个或多个电极阵列。所述阵列可包含两个或更多个具有相同直径或 不同直径的针。可均匀或不均匀地间隔针。针可以为0.005英寸至0.03英寸、0.01英寸 至0. 025英寸、或0. 015英寸至0. 020英寸。针的直径可为0. 0175英寸。针可相隔0. 5mm、 1. 0mm、L5mm、2. 0mm、2. 5mm. 3. 0mm. 3. 5mm.4. 0mm或更多。
[0115] MID可由脉冲发生器和两个或更多个-针式注射器组成，所述注射器在单个步骤 中递送治疗剂和电穿孔脉冲。脉冲发生器可允许经由闪存卡操作的个人计算机对脉冲和注 射参数进行灵活编程，以及全面记录和存储电穿孔及患者的数据。脉冲发生器可在很短的 时间中递送多种伏特脉冲。例如，脉冲发生器可递送在100ms持续时间中递送3个15伏的 脉冲。这种MID的实例是由InovioBiomedicalCorporation提供的Eigen1000系统，其 在美国专利No. 7, 328, 064(其内容通过引用并入本文）中进行了描述。
[0116] MID可以是CELLECTRA(InovioPharmaceuticals、BlueBellPA)装置和系统，其 为标准电极系统，帮助将大分子诸如DNA引入体内或植物的选定组织的细胞内。标准电极 系统可包含多个针电极；皮下针；提供从可编程恒定电流脉冲控制器至多个针电极的传导 连接的电连接器；和电源。操作员可握住固定在承载结构上的多个针电极并牢固地将其插 入至体内或植物的选定组织。随后经由皮下针将大分子递送入选定组织。激活可编程恒定 电流脉冲控制器并将恒定电流电脉冲施加至多个针电极。施加的恒定电流电脉冲帮助将生 物分子引入多个电极之间的细胞。通过借由恒定电流脉冲限制组织中的功耗来使因细胞的 过热而引起的细胞死亡降至最低。Cellectra装置和系统在美国专利No. 7, 245, 963 (其内 容通过引用并入本文）中进行了描述。
[0117]MID可以是Eigen1000 系统（InovioPharmaceuticals)。Eigen1000 系统可包 括提供空心针的装置；和流体递送装置，其中所述设备被适配成驱动使用的流体递送装置， 以在将针插入所述身体组织的过程中同时（例如自动地）将流体（本文中描述的治疗剂） 注射至身体组织中。有利方面是在将针插入的同时逐渐注射流体的能力导致流体在整个身 体组织中的更均匀分布。还相信在注射过程中经历的疼痛因被注射的流体的体积在更大区 域中的分布而减轻。
[0118] 此外，流体的自动注射帮助自动监测和记录注射的流体的实际剂量。如果需要，该 数据可由控制单元存储以用于存档。
[0119] 应理解，注射速率可以是线性的或非线性的，并且可在已将针插入通过待治疗的 受试者的皮肤后以及当它们被进一步插入进身体组织时进行注射。
[0120] 可利用本发明的设备向其中注射流体的适当的组织包括肿瘤组织、皮肤或肝组 织，还可以是肌肉组织。
[0121] 所述设备还包含用于将针引导插入身体组织的针插入装置。流体注射速率受针插 入的速率控制。这具有可控制针插入和流体注射以便插入的速率可匹配所需注射速率的有 利方面。其还使得所述设备更容易被用户操作。如果需要，可提供用于自动地将针插入身 体组织的装置。
[0122] 用户可选择开始注射流体的时间。然而，理想地，当针尖已到达肌肉组织时开始注 射，并且所述设备可包括用于感应针已插入对于开始流体的注射是足够的深度的装置。这 意味着当针已到达所需深度（该深度通常为肌肉组织开始时的深度）时可提醒自动地开始 注射流体。肌肉开始时的深度可以例如被采用来作为预设针插入深度，诸如被认为对于针 穿过皮肤层是足够的4mm的值。
[0123] 所述传感装置可包含超声探针。所述传感装置可包含用于感应阻抗或电阻的变化 的装置。在该情况下，所述装置可能不这样记录针在身体组织中的深度，而是被适配成感应 当针从不同类型的体身组织移动至肌肉中时阻抗或电阻的变化。这些备选装置的任一种提 供了感应注射可开始的相对准确和简单的操作装置。如果需要，还可记录针插入的深度，并 且可将所述深度用于控制流体的注射以便在记录针插入的深度的同时，确定待注射的流