而看到。然而，对于低分子量CS、菠萝蛋白酶和甲硫氨酸 组合，观察到可观的升高。在低分子量CS和纳豆激酶组合的情况下，也观察到肠粘膜渗透 率的出人意料的升高（表1)。对于CS/菠萝蛋白酶/甲硫氨酸组合，增长比R具有超过1 的值；并且对于CS/纳豆激酶的组合，其明显高于1，而CS/菠萝蛋白酶的R小于1 (表2)。 因此，甲硫氨酸对于作为CS肠渗透率增强剂的菠萝蛋白酶的作用而言，显示出出人意料的 有利效果，而甚至更出人意料地，纳豆激酶在没有其他因子介入的情况下，几乎使低分子量 CS的肠渗透性加倍。有趣的是，注意到小分子量CS的生物利用度已比相应的大的多糖更 好，但其生物利用度能被所述的组合进一步提高。
[0057] 表 1
[0059] 就单独的或者与菠萝蛋白酶组合、与菠萝蛋白酶+甲硫氨酸组合、或与纳豆激酶 组合的低分子量（LMff)硫酸软骨素的渗透，测试了平均Papp值。
[0060]表 2
[0061]
[0062] 所述组合对单独的低分子量（LMff)硫酸软骨素的增长比
[0063] 还观察到也是非动物来源的高分子量CS (40kDa)吸收的可比的效果（表3和4)。 在这一情形下，组合的增强效果甚至更显著，几乎为单独CS吸收的三倍，表明该增强效果 也发生在大尺寸的多糖的情况中，对于大尺寸的多糖，吸收更为关键。
[0064]表 3
[0066] 就单独的或者与菠萝蛋白酶组合、与菠萝蛋白酶+甲硫氨酸组合、或与纳豆激酶 组合的高分子量（HMW)硫酸软骨素的渗透，测试了平均Papp值。
[0067]表 4
[0069] 所述组合对单独的高分子量（HMW)硫酸软骨素的增长比
[0070] 还对动物来源的CS样品（分子量：15_20kDa)在不存在或存在菠萝蛋白酶和甲硫 氨酸混合物的情况下进行了渗透性测试，证实了所述组合的提高任意来源的CS的渗透性 的能力（表5)。
[0071] 表 5
[0072]
[0073] 就单独的或与菠萝蛋白酶+甲硫氨酸组合的牛硫酸软骨素的渗透，测试了平均 Papp值。
[0074] 以下是本发明组合物的实例
[0075] 实施例1
[0076] 通过混合以下物质制备组合物：
[0077] 1200mg牛硫酸软骨素、
[0078] 600mg菠萝蛋白酶、
[0079] 30mgL-甲硫氨酸。
[0080] 实施例2
[0081] 通过混合以下物质制备组合物：
[0082] 1200mg牛硫酸软骨素、
[0083] 600mg纳豆激酶。
[0084] 实施例3
[0085] 通过混合以下物质制备组合物：
[0086] 1200mg具有9kDa分子量的生物技术硫酸软骨素、
[0087] 600mg菠萝蛋白酶、
[0088] 30mgL-甲硫氨酸。
[0089] 实施例4
[0090] 通过混合以下物质制备组合物：
[0091] 1200mg具有9kDa分子量的生物技术硫酸软骨素、
[0092] 600mg纳豆激酶。
[0093] 实施例5
[0094] 通过混合以下物质制备组合物：
[0095] 1200mg具有40kDa分子量的生物技术硫酸软骨素、
[0096] 600mg菠萝蛋白酶、
[0097] 30mgL-甲硫氨酸。
[0098] 实施例6
[0099] 通过混合以下物质制备组合物：
[0100] 1200mg具有40kDa分子量的生物技术硫酸软骨素、
[0101] 600mg纳豆激酶。
[0102] 实施例7
[0103] 通过混合以下物质制备组合物：
[0104] 1200mg具有9kDa分子量的生物技术硫酸软骨素、
[0105] 600mg纳豆激酶、
[0106] 30mgL-甲硫氨酸。
[0107] 实施例8
[0108] 通过混合以下物质制备组合物：
[0109] 1200mg具有40kDa分子量的生物技术硫酸软骨素、
[0110] 600mg纳豆激酶、
[0111] 30mgL-甲硫氨酸。
[0112] 实施例9
[0113] 通过混合以下物质制备组合物：
[0114] 1200mg牛硫酸软骨素、
[0115] 600mg纳豆激酶、
[0116] 30mgL-甲硫氨酸。
【主权项】
1. 包含硫酸软骨素、蛋白酶以及任选的巯基化合物的组合物，所述硫酸软骨素/蛋白 酶/巯基化合物比为1. 〇/〇. 05-0. 8/0. 001-0. 05,前提是当所述蛋白酶不是纳豆激酶时，存 在所述巯基化合物。2. 根据权利要求1的组合物，其中所述蛋白酶是纳豆激酶，且不存在巯基化合物。3. 根据权利要求1的组合物，其中所述蛋白酶是纳豆激酶，且存在巯基化合物。4. 根据权利要求1-3任一项所述的组合物，其中硫酸软骨素具有l-95kDa的分子量。5. 根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其中硫酸软骨素通过从动物来源提取获 得。6. 根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其中硫酸软骨素如下获得：水解移除大肠 杆菌荚膜多糖K4的果糖残基后，进行化学硫酸化。7. 根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其中硫酸软骨素如下获得：水解大肠杆菌 的荚膜多糖K4移除果糖残基后，进行化学硫酸化并随后进行酸或自由基解聚。8. 根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其中硫酸软骨素通过化学硫酸化基因修饰 的大肠杆菌菌株的荚膜多糖而获得，其中所述多糖最初即不存在果糖残基。9. 根据权利要求1-4任一项所述的组合物，其中硫酸软骨素通过化学硫酸化以及随后 酸或自由基解聚基因修饰的大肠杆菌菌株的荚膜多糖而获得，其中所述多糖最初即不存在 果糖残基。10. 根据权利要求1-9任一项所述的组合物，其中所述蛋白酶选自菠萝蛋白酶、木瓜蛋 白酶、无花果蛋白酶和纳豆激酶。11. 根据权利要求1-10任一项所述的组合物，其中巯基化合物选自甲硫氨酸、半胱氨 酸、高半胱氨酸、S-腺苷甲硫氨酸、乙酰半胱氨酸、还原或氧化的谷胱甘肽、S-乙酰基-谷胱 甘肽。12. 根据权利要求1-11任一项所述的组合物，其还含有一种或多种用于预防或治疗急 性或慢性炎症的活性成分和/或一种或多种用于维持人和动物肌肉骨骼健康的营养物质。13. 根据权利要求12的组合物，其中所述一种或多种活性成分选自盐酸葡糖胺、硫酸 葡糖胺、N-乙酰-葡糖胺、透明质酸、氨基酸、胶原、水解的胶原、多不饱和脂肪酸、角蛋白、 甲基磺酰甲烷、叶酸、还原态叶酸、维生素、B族维生素、S-腺苷甲硫氨酸（SAMe)、抗坏血酸 和抗坏血酸锰。14. 根据权利要求1-13任一项所述的组合物，其还含有一种或多种选自微晶纤维素、 硬脂酸、硬脂酸镁、胶体二氧化硅、乙基纤维素、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、含水虫胶 盐、藻酸钠、淀粉、改性淀粉、甲基丙烯酸共聚物、麦芽糊精、多元醇的药学上或营养学上可 接受的赋形剂。15. 根据权利要求1-14任一项所述的组合物，其用于预防或治疗急性和慢性炎症和/ 或维持人和动物肌肉-骨骼健康。16. 根据前述任一项权利要求的组合物，其为固体口服制剂，包括胶囊、软胶囊、片剂、 颗粒剂、液体饮料或重构的粉末饮料。17. 纳豆激酶，其用于改善硫酸软骨素的肠渗透性。
【专利摘要】本发明描述了组合，其包含硫酸软骨素(CS)、一种或多种具有蛋白水解活性的酶或酶混合物以及巯基化合物，其用于治疗和预防骨关节炎及相关急性和慢性炎症过程，或作为用于维持人类和动物肌肉骨骼的健康的营养组合物。所述组合的特征在于当口服施用时其提高CS的肠道吸收。所述组合的效果适用于广范围分子量的CS，包括已经具有比较高分子量样品高的生物利用度的极低分子量的CS样品。该效果还适用于任何来源的CS样品。
【IPC分类】A61P29/00, A61K38/48, C12P13/12, A61K38/06, C12N9/50, A61K31/737, C08B37/00
【公开号】CN105101985
【申请号】CN201480005773
【发明人】N·米拉利亚, M·罗西尼, D·比安基, A·特兰廷
【申请人】诺西斯有限公司
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年1月23日
【公告号】CA2899129A1, EP2948160A1, WO2014114706A1