一种含淫羊藿的植物组合物提取方法和应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种含淫羊藿的植物组合物提取方法及 应用。
【背景技术】
[0002] 含淫羊藿的植物组合物由淫羊藿100份，蓬子菜40份、铁筷子60份、大乌泡根50 份作为原料药制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小时，合并煎液，滤过，浓缩 成稠膏，制粒，干燥，包糖衣，即得。
[0003] 现有技术中，尚未有含淫羊藿的植物组合物在提取制备方面采用微波技术的报 道，而采用水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影 响了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种含淫羊藿的植物组合 物提取方法。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种含淫羊藿的植物组合物在制备抑制黑化大家 鼠肺成纤维NRL2细胞增殖药物中的应用。
[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] -种含淫羊藿的植物组合物提取方法，植物组合物由淫羊藿100份，蓬子菜40份、 铁筷子60份、大乌泡根50份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉 碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2 次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5 倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶 囊或颗粒剂。
[0008] 上述一种含淫羊藿的植物组合物提取方法，制备方法中微波萃取功率为500W，每 次萃取6分钟。
[0009] -种含淫羊藿的植物组合物在制备抑制黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞增殖药物 中的应用，含淫羊藿的植物组合物由淫羊藿100份，蓬子菜40份、铁筷子60份、大乌泡根50 份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70%乙醇， 投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃 取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回 收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。
[0010] 上述一种含淫羊藿的植物组合物在制备抑制黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞增殖 药物中的应用，制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。
[0011] 现有技术中，含淫羊藿的植物组合物每片0.4g，每次4片，一日3次，采用本发明 制备成的含淫羊藿的植物组合物每片〇. 4g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需2 片，一日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
【具体实施方式】
[0012] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[0013] 实施例1
[0014]取淫羊藿100份，蓬子菜40份、铁筷子60份、大乌泡根50份，粉碎，加入2L的70 % 乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟， 合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液， 减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂，每片〇. 4g。
[0015] 实施例2
[0016]取淫羊藿100份，蓬子菜40份、铁筷子60份、大乌泡根50份，粉碎，加入2L的70% 乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟， 合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液， 减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成胶囊。
[0017] 实施例3
[0018]取淫羊藿100份，蓬子菜40份、铁筷子60份、大乌泡根50份，粉碎，加入2L的70 % 乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟， 合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液， 减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成颗粒剂。
[0019] 蓬子菜为茜草科拉拉藤属植物蓬子菜GaliumverumL.var.asiaticumNakai，以 全草及根入药。夏秋采全草，秋季挖根。洗净切碎，鲜用或晒干。清热解毒、行血、止痒、利 湿；治肝炎、喉蛾肿痛、疗疮疖肿、稻田皮炎、荨麻疹、静脉炎、跌打损伤、妇女血气痛等。
[0020] 铁筷子为毛莨科植物铁筷子的根。清热解毒，活血散瘀，消肿止痛。治膀胱炎，尿 道炎，疮疖肿毒，跌打损伤，劳伤。
[0021] 大乌泡根为蕾薇科植物川莓的根或叶。凉血，活血。治劳伤吐血，咳血，月经不调， 痢疾，瘰疬，骨折。
[0022] 实施例4 :含淫羊藿的植物组合物抑制黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞增殖的实验 研究资料
[0023] 1实验材料
[0024] 1. 1实验用细胞株
[0025]黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞，南京医科大学实验动物中心实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
[0026] 1. 2实验药物
[0027]研究药物：本发明含淫羊藿的植物组合物：按实施例1方法制备。
[0028]药液储液：称取100mg含淫羊藿的植物组合物，溶于5ml无水乙醇中，0. 2ym滤器 过滤，500y1doff管分装，-20°C存储，同时0. 2ym滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0029] 1. 3实验试剂
[0030] DMEM(GIBC0公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot.No. 1088387) ;Trypsin(AMRESCO公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批号：2009/10)penicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycinSulfate(AMRESC0公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp批号：0793);PBS(实验室自配）；1.4实验器材
[0031] 莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD 公司型号：SPECTRAMAX190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏净集团安泰公 司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N020579);精密移液器（法 国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S);全自动高压灭 菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型 号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号：2001);低速离心 机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0? 2ym滤器（MILLIP0RE型号：SLGP033RB) ;10cm 培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
[0032] 2实验方法
[0033]1)黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞用DMEM+10 %FBS于37°C、5 %C02进行常规培 养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0.04%￡0了六，37°(：消化2111111后，向其中加入51111完全培养基中和反应，吹 打细胞后将其转入离心管中，l〇〇〇rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X104个/ml。
[0034]2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180y1，培养板放入细胞培养箱 中（37°C，5%C02)常规培养。
[0035] 3)根据细胞生长情况，一般长至50% -70%，加入含淫羊藿的植物组合物溶液，继 续培养24h。
[0036]4) 24h后加入20y1MTT溶液（5mg/ml，即0?5 %MTT)，继续培养4h。
[0037] 5)4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200y1二甲基亚砜，置摇 床上低速振荡l〇min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
[0038] 6)同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解 介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
[0039] 7)结果以药物对细胞的抑制率表示：
[0040] 细胞增值抑制率（％ )=(对照孔0D值-给药孔0D值）/对照孔0D值X100 %。 实验重复3次。
[0041] 3统计处理
[0042] 采用MicrosoftExcel2003软件中的相关分析和Studentt检验，数据以 meaniS.D.表不。
[0043]4实验结果
[0044] MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对黑化大家 鼠肺成纤维NRL2细胞增殖抑制有差异（P〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性 (P〈0. 01)，当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P〈0. 001)。
[0045] 表1含淫羊藿的植物组合物对黑化大家鼠肺成纤维NRCI细胞增殖抑制影响研 究（X土SD)
[0046]
[0047]注：与对照组比较，*P〈0. 01 ;#P〈0. 001
[0048] 5实验结论
[0049] 含淫羊藿的植物组合物可以抑制黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞增殖，减少黑化 大家鼠肺成纤维NRL2细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种含淫羊藿的植物组合物提取方法，其特征在于植物组合物由淫羊藿100份，蓬 子菜40份、铁筷子60份、大乌泡根50份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取 上述原料药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为 400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50 % 乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅 料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。2. 根据权利要求1所述一种含淫羊藿的植物组合物提取方法，其特征在于制备方法中 微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。3. -种含淫羊藿的植物组合物在抑制黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞增殖药物中的应 用，其特征在于含淫羊藿的植物组合物由淫羊藿100份，蓬子菜40份、铁筷子60份、大乌泡 根50份作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70% 乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟， 合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液， 减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。4. 根据权利要求3所述一种含淫羊藿的植物组合物在抑制黑化大家鼠肺成纤维NRL2 细胞增殖药物中的应用，其特征在于制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分 钟。
【专利摘要】本发明提供一种含淫羊藿的植物组合物提取方法，由淫羊藿100份，蓬子菜40份、铁筷子60份、大乌泡根50份作为原料药制成，采用微波提取方法制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了含淫羊藿的植物组合物在制备抑制黑化大家鼠肺成纤维NRL2细胞增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61P35/00, A61K36/74
【公开号】CN105106366
【申请号】CN201510581336
【发明人】赵明亮
【申请人】南京正亮医药科技有限公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月14日