的钙盐，磷酸钾盐，Tris缓冲液，醋酸， 磷酸，柠檬酸盐或硼酸盐缓冲液中的至少一种。缓冲剂可以是柠檬酸钠。缓冲剂的缓冲能 力是大约〇? 05-1. 0。缓冲剂的缓冲能力是大约0? 02-0. 2,或大约0? 01-0. 1。所需的pH水 平的范围可以是大约3. 5-11. 5,大约3. 5-9,大约4. 5-8,或大约5. 0-7. 8。所需pH水平可 以是大约5. 5。肽试剂包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T 0 4、T 0 4的N-末 端变异体、T 0 4的C-末端变异体、或T 0 4的异构体。组合物可进一步包括含水介质，其中 所述的肽试剂在所述含水介质内的浓度范围是大约〇. 001-1，〇〇〇mg/ml。组合物可进一步包 括至少一种类固醇。
[0156] 根据另一【具体实施方式】的组合物用于对受试者皮肤组织施用，并包括含氨基酸序 列LKKTET或LKKTNT或其变异体的肽试剂，或者包括在所述组织内刺激LKKTET或LKKTNT 肽、或其保守变异体产生的刺激试剂，该组合物进一步包括季铵盐和应用于所述受试者的 皮肤组织的外用载体。该肽试剂可包括氨基酸序列LKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T0 4、 T04的N-末端变异体或TP4的异构体。季铵盐可包括苯扎氯铵。肽试剂的浓度可以是大 于0. 001-1，000mg/ml，所述季铵盐在所述组合物内大约是0. 001-lwt%。该组合物可以是 溶液、凝胶、乳膏、糊剂、洗剂、喷雾剂、悬浮液、分散液、油膏，水凝胶、软膏或泡沫制剂的形 式。该组合物可以是化妆品制剂。
[0157] 根据另一个【具体实施方式】的药学或化妆品的组合，其包括含氨基酸序列LKKTET 或LKKTNT或其变异体的肽试剂，或者包括刺激LKKTET或LKKTNT肽、或其保守变异体产生 的刺激试剂，该组合物进一步包括季铵盐，其中所述试剂和所述盐可分别或一起对受试者 施用。该肽试剂可包括氨基酸序列LKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T 0 4、T 0 4的N-末端变异 体或TP 4的异构体。季铵盐可包括苯扎氯铵。该组合可包括药学、眼用或化妆品组合物， 其所含肽试剂的浓度可以是大于0. 001-1，〇〇〇mg/ml，其中所述季铵盐在所述组合物内大约 是0.001-lwt%。该组合可包括眼用组合物，该眼用组合物进一步包括可眼用载体。该组合 物可包括滴眼液组合物。
[0158] 根据另一个【具体实施方式】，治疗、阻止、抑制或降低组织由于对受试者施用季铵盐 所造成的衰退、受损或损害的处理方法包括对所述受体施用所述季铵盐以及对所述受试者 施用含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其变异体的肽试剂、或者在所述组织内刺激LKKTET 或LKKTNT肽或其保守变异体产生的刺激试剂。该试剂可在所述季铵盐施用之前、同时或之 后对受试者施用。该试剂和所述盐可作为组合物同时施用。该组合物可进一步包括可眼用 载体。该组合物可包括滴眼液组合物。该组合物可包括化妆品可接受的载体。该组合物可 以是溶液、凝胶、乳膏、糊剂、洗剂、喷雾剂、悬浮液、分散液、油膏，水凝胶、软膏或泡沫制剂 的形式。肽试剂可包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T 0 4、T 0 4的N-末端 变异体、TP 4的C-末端变异体或TP 4的异构体。季铵盐可包括苯扎氯铵。包括在所述组 合物中的肽试剂的浓度可以是大约〇. 001-1，〇〇〇mg/ml，所述季铵盐在所述组合物内大约是 0. 001-lwt%。
[0159] 根据另一个【具体实施方式】的组合物，其包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其 变异体的肽试剂、或者刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守变异体产生的刺激试剂、以及可 眼用载体、抗微生物作用的防腐剂、为所述组合物提供眼睛可接受渗透压的高渗剂、舒适增 强剂、能够调节组合物pH到所需眼用可接受pH水平的酸性或碱性pH调节剂中的至少一 种、以及基本维持上述所需pH水平的缓冲剂。该组合物可进一步包括抗氧化剂或氧隔离试 剂中的一种。抗氧化剂或氧隔离试剂可包括亚硫酸钠、硫代亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫 酸氢钠、硫脲、抗坏血酸、H)TA/乙二胺四乙酸二钠、醋酸、柠檬酸、谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸 或甲硫氨酸。抗氧化剂或氧隔离试剂在所述组合物内的浓度范围是大约〇. 0001-1. 〇wt%。 抗微生物作用的防腐剂可包括以下中的一种：季铵化合物：苯扎氯铵、氯苄乙铵、西他氯 铵、西曲溴铵、苯度溴铵、苯佐氯铵；硫代水杨酸的烷基汞盐：硫柳汞、硝酸苯汞、醋酸苯汞、 硼酸苯汞；对羟基苯甲酸酯类：对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯；螯合剂、乙二胺 四乙酸二钠、葡萄糖酸钠、丙酸钠；醇类、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇；胍衍生物：氯己啶 (chlorohexidine)、聚亚己基缩二狐（polyhexamethylene biguanide)、山梨酸、硼酸、二氧 化氯、聚咪唑啉季铵盐（polyquatemium)或肉豆蔻酰胺丙基二乙胺（myristamidopropyl diethylamine)。防腐剂在所述组合物内的浓度范围是大约0.0001-5. 0% (w/v)。该组合 物可进一步包括至少一种眼用可接受稳定剂。稳定剂可包括多元醇、甘露醇、山梨醇、丙三 醇、蔗糖、氨基酸稳定剂丙氨酸（Ala)、赖氨酸（Lys)、或谷氨酸（Glu)中的至少一种。稳定 剂在所述组合物中的浓度范围是大约〇. 〇l-l〇wt%。高渗剂包括离子化合物、碱金属卤代 物、碱土金属卤代物、CaCl2、KBr、KC1、LiCl、NaBr、NaCl、硼酸、非离子化合物、尿素、丙三 醇、山梨醇、甘露醇、丙二醇或葡萄糖右旋糖中的至少一种。该组合物的渗透压的范围可以 是50-1000m0smol。调节剂可包括NaOH或HC1中的至少一种。缓冲剂可包括醋酸钠盐、抗 坏血酸钠盐、硼酸钠盐、碳酸钠盐、磷酸钠盐、柠檬酸钠盐、葡萄糖酸钠盐、乳酸钠盐、丙酸钠 盐、碳酸钙盐、丙酸钙盐、磷酸钾盐、Tris缓冲液、醋酸缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸盐缓冲液 或硼酸盐缓冲液中的至少一种。所需的pH水平的范围是大约3. 5-11. 5。缓冲剂具有的缓 冲能力是大约0. 05-1. 0。肽试剂可包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T0 4、 T 0 4的N-末端变异体、T 0 4的C-末端变异体或T 0 4的异构体。该化合物进一步包括水 介质，其中所述的肽试剂在所述含水介质中的浓度范围是〇. 001-1，〇〇〇mg/ml。该组合物可 以是溶液、凝胶、乳膏、糊剂、洗剂、喷雾剂、悬浮液、分散液、油膏，水凝胶、软膏或泡沫制剂 的形式。该组合物可包括滴眼液组合物。肽试剂可在所述组合物中，组合物被磷脂膜、脂质 体、微球、纳米颗粒或生物可降解多聚体中的至少一种所包裹，或者以肽-聚合物的结合物 形式存在。
[0160] 实施例
[0161] 胸腺素P 4 (TP 4)，是一个含43个氨基酸的分子，其促进了眼部创伤的愈合，降低 了眼部炎症，并对角膜上皮具有抗细胞凋亡作用。在本研究中，检测了 T 0 4对暴露于苯扎 氯铵（BAK)的培养人角膜上皮细胞的存活的作用。
[0162] 大约80%汇合的人角膜上皮细胞在用0%、0. 001%、0. 01%或0. 1%的BAK处理 15分钟。在培养基内恢复3和24小时后，使用比色BrdU渗入分析来检测细胞增值。使用 比色膜联蛋白为基础的细胞死亡分析来检测细胞凋亡。在lmcg/ml TP 4中重复实验，该剂 量在几个已发表的研究中显示有效。为进一步评估T 0 4阻止细胞凋亡的能力，角膜上皮细 胞用0.01% BAK±T 0 4处理超过5天。
[0163] 在所有使用过的BAK浓度下，与对照相比，角膜上皮细胞在3和24小时的恢复时 间的增殖被抑制了，细胞凋亡被提高了。在3和24小时的时间点，T 0 4没有消除BAK的 有害作用；TP 4也没有促进细胞增殖并且细胞凋亡没有被抑制。然而，在更长的培养时间 (2-5天）时，TP 4处理显著抑制了 BAK诱导的上皮细胞凋亡。另外，与只在培养基内培养 5天的细胞相比，T 0 4处理的细胞的细胞凋亡降低了。
[0164] BAK是在许多市售眼用溶液中使用的防腐剂，其在培养中诱导了上皮细胞的凋亡， 说明长时间的暴露对角膜健康是有害的。本文报道的研究说明T 0 4能够克服BAK的有害 细胞凋亡前作用。因为许多含BAK的滴眼液通常在很长一段时间内使用，所以T 0 4是含此 种防腐剂的溶液的有用添加剂。
【主权项】
1. 肽试剂在制备用于治疗受试者青光眼或干眼综合症的药物中的应用，其中所述药 物被配制成具有pH 6. 8-8. 1的眼用可接受的组合物，其中所述肽试剂包括氨基酸序列 LKKTET或其保守变异体，LKKTNT或其保守变异体、KLKKTET、LKKTETQ或胸腺素P 4 (T P 4)， 并且其中所述药物含有浓度约0.0 Olmg/mL~约lOOOmg/mL的所述肽试剂，并且所述组合物 适合每日施用两次或更多次。2. 根据权利要求1所述的应用，其中所述肽试剂包含氨基酸序列LKKTET或其保守变异 体、LKKTNT或其保守变异体。3. 根据权利要求1所述的应用，其中所述肽试剂包含氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列 LKKTETQ、T0 4。4. 根据权利要求1所述的应用，其中所述肽试剂是T M。5. 根据权利要求1所述的应用，其还进一步包括药学可接受的载体，其为溶液、悬浮 液、凝胶、软膏、局部插入物，或在脂质体、微球、纳米颗粒或生物可降解内酯为基质的多聚 体中的包裹体。6. 根据权利要求1所述的应用，其中所述组合物包括含水介质。7. 根据权利要求1所述的应用，其中所述肽试剂的浓度范围是大约0. 01mg/mL-600mg/ mL〇8. 根据权利要求1所述的应用，其中所述肽试剂的浓度范围是大约0. lmg/mL-60mg/ mL〇9. 根据权利要求1所述的应用，其中所述肽试剂的浓度范围是大约lmg/mL-6mg/mL。10. 根据权利要求1所述的应用，其用于治疗干眼综合征，其中所述肽试剂是T P 4。
【专利摘要】本发明涉及冻干的或可冻干形式的LKKTET和/或LKKTNT肽组合物，具体而言，本发明涉及包括肽试剂的组合物，所述肽试剂包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其变异体的肽试剂、或者包括刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守变异体产生的刺激试剂，该组合物包括氨基酸稳定剂或冻干填充剂中的至少一种，该组合物是冻干形式或能够被冻干的形式。
【IPC分类】A61K38/08, A61P27/02, A61P27/06
【公开号】CN105106931
【申请号】CN201510532998
【发明人】大卫·克罗克福德, 阿兰·L.·戈尔茨坦
【申请人】雷金纳克斯生物制药公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2006年6月19日
【公告号】CA2612405A1, CA2612410A1, CA2612522A1, EP1896050A2, EP1896050A4, EP1904080A1, EP1904080A4, EP1906986A1, EP1906986A4, US8383576, US20080214456, US20090118196, US20090131313, US20120071411, WO2006138707A1, WO2006138708A1, WO2006138708B1, WO2006138709A2, WO2006138709A3