广泛用于改善脂 质体-封装功能化合物的循环次数，w避免或减少功能化合物从脂质体组合物过早渗漏 并且避免身体免疫系统的脂质体的探测。将阳G衍生的脂质附接至脂质体称为聚乙二醇 化。因此，在本发明的示例性实施方式中，脂质体是聚乙二醇化的脂质体。可通过溫育PEG 的活性衍生物与祀脂质体实现聚乙二醇化。适当的根据本发明的PEG衍生的脂质，包括 DSPE-PEG的缀合物，用下述之一官能化：簇酸、谷脫甘肤（GSH)、马来酷亚胺（MAL)、3-(2-化 晚基二硫）丙酸（PDP)、氣尿酸、叠氮化物、胺、生物素或叶酸，其中PEG的分子量在2000和 5000g/mol之间。其他适当的阳G衍生的脂质是与神经酷胺缀合的mPEG，具有Or或Cie尾， 其中mPEG的分子量在750和5000道尔顿之间。仍其他适当的配体是用甘油憐脂质缀合的 mPEG或官能化的阳G，如1，2-二肉豆違酷基-sn-甘油-3-憐酸乙醇胺值M阳）、1，2-双栋 桐酷-sn-甘油-3-憐酸乙醇胺值PP巧、1，2-二油酷-sn-甘油-3-憐酸乙醇胺值0P巧和 1,2-二硬脂酷基-sn-甘油-3-憐酸乙醇胺值SP巧等。脂质体的聚乙二醇化是本领域技术 人员通常已知的技术。
[005引 在各种实施方式中，用DS阳-PEG-G甜缀合物（至多5mol% )和/或DS阳-mPEG缀 合物聚乙二醇化脂质体（其中PEG的分子量通常在750-5000道尔顿之间，例如2000道尔 顿）。本发明示例性聚乙二醇化的脂质体的憐脂组合物可包括至多5-20mol%的PEG-脂质 缀合物。
[0054] 此外，在某些实施方式中，将脂质体特异性祀向具体细胞类型、组织等的一个或多 个部分并入膜。先前已经描述了使用各种祀向部分（例如，配体，受体和单克隆抗体）的 脂质体的祀向。运样部分的适当例子包括透明质酸，抗化bB家族抗体和抗体片段、脂蛋 白脂肪酶（LPL)、[a]2-巨球蛋白（[a]2M)、受体相关的蛋白质（RAP)、乳铁蛋白、去氨普 酶，组织和尿激酶型血纤维蛋白溶酶原活化剂（tPA/uPA)、血纤维蛋白溶酶原活化剂抑制 剂（PAI-I)、tPA/uPA:PAI-l复合物、黑素转铁蛋白（或P97)、血小板反应蛋白1和2、肝脂 肪酶、因子Vila/组织因子途径抑制剂（TFPI)、因子Villa、因子IXa、A[P] 1-40、淀粉样 蛋白-[P]前体蛋白质（AP巧、CI抑制剂、补体C3、载脂蛋白E(apoE)、假单胞菌外毒素A、 CRM66、HIV-ITat蛋白质、鼻病毒、基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、MMP-13 (胶原酶-3)、銷脂活 化剂蛋白质（SAP)、妊娠带蛋白、抗凝血酶III、肝素辅因子II、[aU-抗膜蛋白酶、热休克 蛋白96化SP-96)、血小板衍生生长因子（PDGF)、载脂蛋白J(apoJ，或成簇蛋白）、结合apoj 和apoE的A[P]、牛膜蛋白酶抑制剂、angiop巧-2灯FFYGGSRGKRNNFKTEEY)、非常低密度脂 蛋白（VLDL)、运铁蛋白、膜岛素、瘦蛋白、膜岛素样生长因子、表皮生长因子、凝集素、拟肤和 /或人源化的单克隆抗体、对所述受体特异的单链链抗体或肤（例如，结合人运铁蛋白受体 的序列HAIYPRH和THRPPMWSPVWP，或抗人运铁蛋白受体灯fR)单克隆抗体A24)、血红蛋白、 白喉毒素多肤链的非毒性部分、所有或一部分白喉毒素B链、白喉毒素CRM197的所有或一 部分无毒的突变体、载脂蛋白B、载脂蛋白E(例如，结合polysorb-80涂层之后）、维生素 D-结合蛋白质、维生素A/视黄醇-结合蛋白质、维生素B12/钻胺素血浆载体蛋白、谷脫甘 肤和钻胺传递蛋白-B12。
[0055] 祀向机制一般要求祀向试剂位于脂质体的表面上，使得祀向部分可用于与祀，例 如，细胞表面受体的相互作用。在示例性实施方式中，制备脂质体，W包括在形成膜时并入 膜的连接体部分。示例性连接体部分具有亲脂部分，其牢固嵌入和错定在膜中。示例性连 接体部分也包括亲水部分，其在脂质体的水性表面上是化学可用的。选择亲水部分从而其 化学上适于和稍后添加的祀向试剂形成稳定的化学键。用于将祀向部分并入脂质体膜的技 术一般是本领域已知的。
[0056] 在示例性实施方式中，脂质体包括服PC、胆固醇、PEG-DS阳和其组合。在示例性实 施方式中，脂质体包括约50mol至约70mol服PC，约30mol至约50mol胆固醇和约Imol至 约lOmol阳G-DSPE。在一种实施方式中，脂质体包括约60mol服PC，约40mol胆固醇和约 5mol PEGDS阳。
[0057] 略微水溶性试剂
[005引如上面指示，本发明提供了封装略微水溶性试剂的脂质体。在本发明的背景下，术 语'略微水溶性'意思是在水中不溶解或具有非常有限的溶解度，更尤其具有的水性溶解度 小于2mg/mL，例如，小于1. 9mg/mL，例如，水性溶解度小于1mg/mL。如本文所使用，水溶解 度指溶解度测量在环境溫度下，其通常约2(TC。在示例性实施方式中，在约pH= 7下测量 试剂的水溶解度。
[0059] 根据本发明的示例性实施方式，略微水溶性试剂是选自下述的治疗剂：蔥环类化 合物、喜树碱化合物、长春花生物碱、玫瑰树碱化合物、紫杉烧化合物、曼青霉素化合物、格 尔德霉素化合物、化挫并喀晚化合物、基于肤的化合物比如卡非佐米、酱族化合物、任何前 述的衍生物、任何前述的前药，和任何前述的类似物。
[0060] 水溶解度小于约2mg/mL的示例性小分子化合物，包括但不限于卡非佐米、伏立 康挫、胺舰酬、齐拉西酬、阿立赃挫、伊马替尼、拉帕替尼、环把明、oprozomib、CUR-61414、 PF-05212384、PF-4691502、toceranib、PF-477736、PF-337210、舒尼替尼、SU14813、阿西 替尼、AG014699、维利帕尼、MK-4827、ABT-263、SU11274、PHA665752、克里挫蒂尼、化880、 ?尸-04217903、乂1?5000、4614361、维利帕尼、6〇311化11比、口0-0332991、口尸-01367338、4614361、 NVP-ADW742、NVP-AUY922、NVP-LAQ824、NVP-TAE684、NVP-LB册 89、艾日布林、多柔比星、柔红 霉素、丝裂霉素C、表柔比星、化柔比星、红比霉素、癌霉素、N-乙酷基阿缀米辛、柔红霉素苯 腺、5-酷亚胺道诺霉素、N-乙酷基道诺霉素、dauno巧line、米托蔥酿、喜树碱、9-氨基喜树 碱、7-乙基喜树碱、7-乙基-10-径基-喜树碱、10-径基喜树碱、9-硝基喜树碱、10, 11-亚 甲基二氧喜树碱、9-氨基-10, 11-亚甲基二氧喜树碱、9-氯-10, 11-亚甲基二氧喜树碱、伊 立替康、勒托替康、silatecan、（7-(4-甲基赃嗦亚甲基）-10, 11-亚乙基二氧-20(巧-喜树 碱、7-(4-甲基赃嗦亚甲基）-10, 11-亚甲二氧基-20(巧-喜树碱、7-(2-N-异丙基氨基）乙 基）-(20S)-喜树碱、CKD-602、长春新碱、长春花碱、长春瑞宾、长春氣宁、长春西汀、长春地 辛、玫瑰树碱、6-3-氨丙基-玫瑰树碱、2-二乙氨乙基-玫瑰树碱锭、达替锭、瑞替利汀、紫 杉醇、多西他赛、双氯芬酸、下赃卡因、17-二甲基氨基乙基氨基-17-脱甲氧格尔德霉素、西 替利嗦、非索非那定、扑痛酬和其他儿茶酪胺、肾上腺素、（巧-2-(2, 4-二径苯基）-4, 5-二 氨-4-甲基-4-嚷挫簇酸（deferitrin)、（S)-4, 5-二氨-2-(3-径基-2-化晚基）-4-甲 基-4-嚷挫簇酸（desferrithiocin)、（S)-4, 5-二氨-2-[2-径基-4-(3, 6, 9, 12-四氧S癸 氧基）苯基]-4-甲基-4-嚷挫簇酸、（S)-4, 5-二氨-2-[2-径基-4-(3, 6-二氧庚氧基） 苯基]-4-甲基-4-嚷挫簇酸、乙基（S)-4,5-二氨-2-[2-径基-4-(3,6-二氧庚氧基）苯 基]-4-甲基-4-嚷挫簇化物、（巧-4, 5-二氨-2- [2-径基-3- (3, 6, 9-S氧癸氧基）]-4-甲 基-4-嚷挫簇酸、desazadesferrithiocin、运些药学化合物的盐、前药和衍生物和其混合 物。
[0061] 示例性治疗剂选自：抗组胺乙二胺衍生物、漠苯那敏、苯海拉明、抗原生动物药物、 哇诺酬、双舰哇嘟、脉化合物、喷他脉、驱虫化合物、嚷喀晚、抗血吸虫药物、奥沙尼哇、抗真 菌的=挫衍生物、氣康挫、伊曲康挫、酬康挫、咪康挫、抗菌头抱菌素、馨合剂、去铁胺、地拉 罗司、去铁酬、FBS0701、头抱挫嘟、头抱尼西、头抱嚷目亏、头抱他晚、头抱巧辛、抗菌剂P-内 酷胺衍生物、氨曲南、头抱=挫、头抱西下、红霉素族的抗菌剂、红霉素、阿奇霉素、克拉霉 素、竹桃霉素、青霉素化合物、节青霉素、苯氧基甲基青霉素、氯挫西林、二甲氧基苯青霉素、 糞夫西林、苯挫西林、簇节西林、四环素化合物、新生霉素、大观霉素、万古霉素；抗分歧杆 菌药物、氨基水杨酸、卷曲霉素、乙胺T醇、异烟阱、化嗦酷胺、利福布汀、利福平、氯法齐明、 抗病毒的金刚烧化合物、金刚烧胺、金刚乙胺、奎尼下化合物、奎宁、奎纳克林、氯哇、径化氯 哇、伯氨哇嘟、阿莫地哇、甲氣哇、抗菌剂、哇诺酬、环丙沙星、依诺沙星、洛美沙星、糞晚酸、 诺氣沙星、氧氣沙星、横酷胺；尿路抗菌剂、巧喃妥因、甲氧节氨喀晚；硝基咪挫类衍生物、 甲硝挫、胆碱季胺化合物、ambethinium、新斯的明、毒扁豆碱、抗-阿尔茨海默病、他克林、 抗帕金森药物、苯扎托品、比赃立登、普环晚、苯海索、抗葦毒碱试剂、阿托品、赏窘碱、东赏 窘碱、丙胺太林、肾上腺素能化合物、多己胺、5-径色胺、刺猎基因抑制剂、沙T胺醇、多己酪 下胺、麻黄碱、肾上腺素、去甲肾上腺素、异丙肾上腺素、间丙醇、沙美特罗、特布他林、5-径 色胺再摄入抑制剂、麦角胺衍生物、肌肉松弛剂、箭毒系列、中屯、作用肌肉松弛剂、己氯芬、 环苯扎林、丹曲林、尼古下、尼古下受体括抗物、P-肾上腺素阻断剂、acebutil、胺舰酬、 苯并二氮杂寧化合物、地尔硫草、抗屯、律失常药物、双异丙化胺、encaidine、局部麻醉化合 物、普鲁卡因、普鲁卡因胺、移多卡因、氣卡胺、奎尼下、ACE抑制剂、卡托普利、依那普利、Hsp90抑制剂、福辛普利、哇那普利、雷米普利；阿片剂衍生物、可待因、赃替晚、美沙酬、吗 啡、anti1ipidemiC、氣伐他汀、吉非罗齐、HMG-coA抑制剂、普伐他汀、血压过低药物、可乐 定、脈那节、赃挫嗦、脈乙晚、grana化i1、阱苯化嗦、非冠状血管舒张剂、双喀达莫、乙酷胆碱 醋酶抑制剂、匹罗卡品、生物碱、毒扁豆碱、新斯的明、任何前述的衍生物、任何前述的前药 和任何前述的类似物。
[0062] 但是，试剂的列举不旨在限制本发明的范围。事实上，封装在脂质体中的化合物可 W是任何略微水溶性两性弱碱或两性弱酸。如上述，其中略微水溶性试剂的实施方式不是 药学或医学试剂的实施方式也包括在本发明内。
[0063] 典型地，在本发明的背景下，略微水溶性两性弱碱的辛醇-水分布系数（1〇曲）在 pH7下在-2. 5和2之间和地曰<11，而略微水溶性两性弱酸的1〇曲在抑7下在-2. 5和2 之间和地曰〉3。
[0064] 典型地，如前述中使用术语弱碱和弱酸分别指在水中仅仅部分质子化或去质子化 的化合物。可质子化的试剂的例子包括具有氨基基团可在酸性介质中质子化的化合物，和 在中性介质中是两性离子并且可也在酸性环境中质子化的的化合物。可去质子化的试剂的 例子包括具有簇基的可在碱性介质中去质子化的化合物，和其在中性介质中是两性离子并 且也可在碱性环境中去质子化的化合物。
[0065] 术语两性离子指可同时在不同原子上携带正电荷和负电荷的化合物。如在前述中 使用，术语两性的通常用于指具有亲脂和亲水部分的化合物。前述暗示化合物的水溶液是 弱两性酸或碱，同时包括带电的和不带电形式的所述化合物。仅仅不带电形式可能够横跨 脂质体膜。
[0066] 当本发明使用的试剂包含相对碱性或酸性官能时，运样的化合物的盐包括在本发 明的范围内。可通过使中性形式的运样的化合物接触足够量期望的纯净的或适当惰性溶剂 中酸或碱获得盐。本发明相对酸性化合物的盐的例子包括钢、钟、巧、锭、有机氨基或儀盐， 或类似的盐。当本发明的化合物包含相对碱性官能时，可通过使中性形式的运样化合物接 触足够量的期望的纯净的或适当惰性溶剂中的酸获得酸性加成盐。酸加成盐的例子包括源 自无机酸，如盐酸、氨漠酸、硝酸、碳酸、单氨碳酸、憐酸、单氨憐酸、二氨憐酸、硫酸、单氨硫 酸、氨舰酸或亚憐酸等的那些，W及源自下述有机酸的盐，如：乙酸、丙酸、异下酸、马来酸、 丙二酸、苯甲酸、班巧酸、辛二酸、富马酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯横酸、对甲苯横酸、 巧樣酸、酒石酸、甲横酸等。也包括氨基酸的盐，比如精氨酸盐等，和有机酸的盐，如葡萄糖 醒酸或半乳糖醒酸等（见，例如，Berge等，Journal of化armaceutical Science 1977,66: 1-19)。本发明的某些特定化合物包含允许化合物转化成碱或酸加成盐的碱性和酸性官能。
[0067] 优选地通过使盐接触碱或酸并且通过常规方式分离亲本化合物再生中性形式的 化合物。亲本形式的化合物与各种盐形式的某些物理特性不同，比如在极性溶剂中的溶解 度，但是为了本发明的目的，盐W其他方式与化合物的亲本形式等同。
[0068] 示例性试剂是分子量在约100化和3000化之间的小有机分子。
[006引 主动装载
[0070] 主动装载的方法设及使用跨膜势能。一般而言，本领域广泛描述了主动装载的原 贝1J。术语主动装载和远程-装载是同义的并且交替使用。
[0071] 主动装载期间，略微水溶性试剂的沉淀通过跨膜质子-或离子-梯度从外部水性 介质横跨脂质体膜转移至内部水性介质。术语具体化合物的梯度，如本文所使用指横跨脂 质体膜从脂质体的外侧（外部水性介质）至内侧（内部水性介质）所述化合物浓度的不连 续增加。
[0072] 为了产生浓度梯度，脂质体通常在第一液体、通常水相中生成，随后替换或稀释所 述第一液相。稀释或新的外部介质具有不同浓度带电的物质或完全不同带电的物质，从而 产生离子-或质子-梯度。
[0073] 可通过各种技术实现置换外部介质，比如，通过使制备的脂质膜泡穿过已经用新 介质平衡的凝胶过滤柱，例如，Sephadex或琼脂糖柱，或通过离屯、、透析或相关的技术。
[0074] 主动装载至脂质体的效率取决于待装载至复合物的化学特性和施加的梯度的类 型和程度等。在本发明的实施方式中，提供了如任何前述限定的方法，其采用横跨脂质体膜 的梯度，其中梯度选自pH-梯度、硫酸盐、憐酸盐、麟酸盐、巧樣酸盐或乙酸盐梯度、邸TA-离 子梯度、锭盐梯度、烷基化的盐，例如甲基盐、乙基盐、丙基盐和戊基盐、锭盐梯度、Mn2+-、 化2+-、化+-、K+-梯度，使用或不使用离子载体，或其组合。现有技术已经广泛描述了运些装 载技术。
[00巧]优选地，预形成的内部水性介质，即，未装载的，脂质体包括所谓的主动装载缓冲 液，其包含水，并且取决于主动装载期间采用的梯度的类型，可进一步包括硫酸盐、憐酸盐、 麟酸盐盐、巧樣酸盐或乙酸盐、锭盐、烷基化的盐，例如，甲基盐、乙基盐、丙基盐和戊基盐、 锭盐、Fe"-、Mn2+-、Cu2+-、化嘴/或K+-盐、邸TA离子盐，和任选地抑-缓冲液，W维持抑 梯度。盐可W是聚合的，比如葡聚糖硫酸盐，聚乙締亚胺，聚酷胺树状聚合物、1. 5簇酸末端 形式的聚酷胺、多憐酸盐、低分子量肝素或透明质酸。在示例性实施方式中，未装载的脂质 体的内部水性介质中盐的浓度在1和lOOOmM之间。
[0076]用于为主动装载产生跨膜梯度的外部水性介质包括水、待装载的略微水溶性试剂 (一种或多种）的沉淀，和任选地薦糖、调整渗透性的生理盐水或一些其他试剂和/或馨合 剂，如邸TAW帮助离子载体活性，更优选地薦糖和/或邸TA。
[0077] 在示例性实施方式中，梯度选自下述的胺或金属盐：簇酸盐、硫酸盐、麟酸盐、憐酸 盐或乙酸盐。如本领域技术人员一般已知的，跨膜抑梯度（较低的内侧pH，较高的外侧pH) 或阳离子乙酸盐梯度可用于主动装载两性分子弱酸。两性弱碱可也使用硫酸锭或=乙胺硫 酸或锭氯化物梯度主动装载至脂质体。
[0078] 本发明中使用的簇化物包括但不限于簇酸盐、巧樣酸盐、二亚乙基=胺五乙酸盐、 苯六酸乙酸盐、1，2, 3, 4-下烧四簇化物、苯甲酸盐、异献酸盐、邻苯二甲酸盐、3, 4-双（簇甲 基）环戊烧簇化物、簇酸代聚酷胺树状聚合物、苯=簇化物、苯四簇化物、抗坏血酸盐、葡糖 醒酸盐和横酸盐。
[0079] 本发明中使用的硫酸盐包括但不限于硫酸盐、1，5-糞二横酸盐、葡聚糖硫酸盐、横 酸下基酸P环糊精、薦糖八硫酸苯横酸盐、聚（4-苯乙締横酸盐）顺白襲芦醇S硫酸盐。
[0080] 本发明使用的憐酸盐和麟酸盐类包括但不限于憐酸盐、六偏憐酸盐、憐酸盐玻璃、 多憐酸盐、=憐酸盐、=偏憐酸盐、双麟酸盐、乙烧径基双麟酸盐、肌醇六憐酸盐。
[0081] 本发明中使用的示例性盐包括簇酸盐、硫酸盐或憐酸盐的混合物，包括但不限于 2-簇基苯横酸盐、肌酸憐酸盐、憐酸胆碱、肉碱憐酸盐、簇基代聚酷胺。
[0082] 本发明使用的胺包括但不限于一元胺、聚胺、S甲基锭、S乙基锭，S下基锭、二乙 基甲基锭、二异丙基乙基锭、S异丙基锭、N-甲基吗嘟、N-乙基吗嘟、N-径基乙基赃晚、N-甲 基化咯烧、N，N-二甲基赃嗦、异丙基乙基锭、异丙基甲基锭、二异丙基锭、叔下基乙基锭、二 环已基锭、质子化形式的吗嘟、化晚、赃晚、化咯烧、赃嗦、咪挫、叔下基胺、2-氨基-2-甲基 丙醇、2-氨基-2-甲基-丙二醇、二-(径乙基）-氨基甲烧、二乙基-(2-径乙基）胺，二-(美圣 甲基）-氨基甲烧四甲基锭盐、四乙基锭、N-甲基葡糖胺和四下基锭、聚乙締亚胺和聚