Daphnilongeranine C在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及化合物D耶]inilongeranineC的新用途，尤其设及Daphnilongeranine C在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 肝纤维化是慢性肝损伤向肝硬化发展的动态过程，表现为细胞外基质巧CM)大量 合成、分泌，而降解绝对或相对不足，使ECM在肝脏内弥漫沉积。其起始于肝细胞（HC)坏死， 随之是炎症反应、纤维生成介质释放，肝星状细胞（rec)激活，最终W肝脏结缔组织成分的 合成与降解明显失去平衡。肝纤维化是多种慢性肝病共同的病理过程，是影响预后的重要 因素。
[0003] 过去的20年间，肝纤维化的研究取得了长足进展，证实肝纤维化与一定程度的肝 硬化都是可逆的。近年来陆续出现了一些抗肝纤维化治疗方法，包括化学药、生物制剂、中 药与基因疗法等，但是理想的临床治疗手段仍然缺乏（刘平.加强抗肝纤维化作用机制的 研究.中华肝病杂志，2005, 8(13) :561)。目前防治肝纤维的关键是针对与肝星状细胞激活 相关的环节，主要是：减轻肝损伤；抑制星状细胞激活，减少细胞外基质产生；调节细胞因 子素乱，促进活化肝星状细胞调亡。
[0004] 本发明设及的化合物Da地nilongeranineC是一个2014年发表（Qiang Zhang，etal. ,Daphenyl1ine,aNewAlkaloidwithanUnusualSkeleton,from Da地niphyllumlongeracemosum.ORGANI化ETT邸S. 2009, 11 (11), 2357-2359.)的新化合 物，该化合物拥有全新的骨架类型（QiangZhang,etal.,Daphenylline,aNewA化aloid withanUnusualSkeleton,fromDaphniphyllumlongeracemosum.ORGANICLETTE RS. 2009, 11 (11), 2357-2359.)，对于本发明设及的DaphnilongeranineC在制备抑制肝脏 成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于抑制 肝脏成纤维细胞增殖活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备 突出的实质性特点，同时用于抑制肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于根据现有DaphnilongeranineC研究中未发现其具有抑制肝脏 成纤维细胞增殖活性的报道的现状，提供了DaphnilongeranineC在制备抑制肝脏成纤维 细胞增殖药物中的应用。
[0006] 所述化合物DaphnilongeranineC结构如式（I)所示：
[0007]
[0008] 所述Da地nilongeranine C在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用，成纤 维细胞为成纤维细胞NIH/3T3。
[0009] 一种抑制肝脏成纤维细胞增殖药物，由Da地nilongeranineC为活性成分添加辅 料制备而成，制备方法为取5克化合物DaphnilongeranineC，加入糊精195克，混匀，常规 压片机制成1000片。 阳010] -种抑制肝脏成纤维细胞增殖药物，由DaphnilongeranineC为活性成分添加辅 料制备而成，制备方法为取5克化合物DaphnilongeranineC，加入淀粉195克，混匀，装胶 囊制成1000粒。
[0011] 本发明对DaphnilongeranineC抑制肝脏成纤维细胞增殖作用进行了药理试验。 成纤维细胞增殖并合成大量细胞外基质巧CM)，是肝纤维化发生的重要环节。活化的肝星 状细胞化SC)具有成纤维细胞特征，NIH/3T3细胞是研究药物抗肝纤维化活性常用的细胞 模型。本研究WNIH/3T3成纤维细胞为祀细胞，观察发明药物对其增殖的影响。用MTT法 检测的抑制细胞增殖的试验结果表明，本发明药物对NIH/3T3的细胞增殖有显著的抑制活 性。
[0012] 根据药理试验结果证明DaphnilongeranineC具有抗肝纤维化作用。
[0013] 本发明设及的〇曰口11]1；[10]1旨6'曰]1；[]10〇在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用 途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑 制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点， 同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0014] 本发明所设及化合物DaphnilongeranineC的制备方法参见文献（QiangZhang, etal.，Daphenylline,aNewAlkaloidwithanUnusualSkeleton,fromDaphniphyllum longeracemosum.ORGANICLETTERS. 2009, 11 (11), 2357-2359.)
[0015] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加W限定。
[0016] 实施例1 :本发明所设及化合物DaphnilongeranineC片剂的制备：
[0017] 取5克化合物〇日9}11111〇11肖6'日111110(：，加入糊精195克，混匀，常规压片机制成1〇〇〇 片。 阳018] 实施例2:本发明所设及化合物Daphnilongeranine C胶囊剂的制备：
[0019] 取5克化合物〇日911]1；[10]1旨6'日]1；[]10(：，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1〇〇〇粒。
[0020] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0021] 实验例一：采用MTT法评价化合物DaphnilongeranineC对肝纤维化的抑制作用
[0022] 1、方法：NIH/3T3细胞株购自引自ATCC(American Type Culture Collection)的 中科院上海细胞所细胞库。将对数生长期的亚融合的NIH/3T3细胞用0. 25%膜酶消化，洗 涂，离屯、后，用DMEM培养液（含10% FC巧制成lXl〇4cell/ml的细胞悬液，台吩蓝染色鉴 定存活率大于95%，按每孔lOOul加入96孔板中，在37°C、5% C〇2培养24h同步处理后， 弃上清，加入含有不同稀释浓度药物的DMEM培养液（含10% FC巧200ul，培养4她，每孔加 入MTT溶液解育地。弃去培养液，加入150U1DMS0,振荡10分钟，使结晶溶解，酶标仪490nm 处读取0D值，结果W0〇49。表示。 阳〇2引2.结果：
[0024] 2. 1形态学观察 阳0巧]NIH/3T3在用药前伸展良好，折光性较弱，有方向性，呈放射状，细胞增殖的速度 快；而加药物24h后，成纤维细胞数目减少，形状变得不规则，突起变短，细胞排列混乱，细 胞内代谢产物增多。 阳0%] 表1 :MTT法检测本发明药物对NIH/3T3增殖的抑制作用
[0027]
[0028]
[0029] 注：*，与细胞阴性对照P<0. 05;**，与细胞阴性对照P<0. 01
[0030] 结果：本发明药物在10ug/na-40ug/ml的浓度范围内对成纤维细胞NIH/3T3在 10%小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞的 增殖有显著抑制作用。
[00川实验例2 :本发明药物对转化生长因子-βi(TGF-i3 1)诱导的成纤维细胞增殖的抑 制作用 阳03引 TGF-β1是促进细胞增殖和胶原生成的强活性因子，在细胞中加入TGF-β il化g/ ml刺激细胞增殖，在检测药物对TGF-β 1诱导的细胞增殖的抑制作用，W分析判断本发明 药物的作用机理。
[0033] 表2 :MTT法检测本发明药物对TGF诱导NIH/3T3增殖的抑制作用
[0034]
[0035] 注：*，与细胞巧GF对照P<0. 05;**，与细胞巧GF对照P<0. 01 W36]结果：本发明药物在10-40ug/ml两个浓度区间内对成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β 1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。表明本发明药物体外对纤维细胞增殖的 抑制作用可能是通过干预TGF信号通路实现的。
[0037] 由上述实施例表明，本发明的：Daphnilongeranine C对成纤维细胞NIH/3T3 在10%小牛血清的刺激下的细胞增殖有显著的抑制作用；Daphni longeranine C对 成纤维细胞NIH/3T3在TGF-β 1的诱导下的细胞增殖有显著的抑制作用。由此证明， Daphnilongeranine C可W明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治 肝硬化的药物。
【主权项】
1. Daphnilongeranine C在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应用，所述化合物 Daphnilongeranine C 结构如式（I )所示：式（I )。2. 如权利要求1所述Daphnilongeranine C在抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的应 用，其特征在于成纤维细胞为成纤维细胞NIH/3T3。3. -种抑制肝脏成纤维细胞增殖药物，其特征在于由权利要求1所述 Daphnilongeranine C为活性成分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物 Daphnilongeranine C，加入糊精195克，混勾，常规压片机制成1000片。4. 一种抑制肝脏成纤维细胞增殖药物，其特征在于由权利要求1所述 Daphnilongeranine C为活性成分添加辅料制备而成，制备方法为取5克化合物 Daphnilongeranine C，加入淀粉195克，混勾，装胶囊制成1000粒。
【专利摘要】本发明公开了Daphnilongeranine？C在制备治疗肝纤维化药物的用途。药理试验证明，Daphnilongeranine？C可以明显抑制肝纤维化的发生和发展，可用于制备抗肝纤维化、防治肝硬化的药物。本发明涉及的Daphnilongeranine？C在制备抑制肝脏成纤维细胞增殖药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于肝脏成纤维细胞增殖抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于抗肝脏成纤维细胞增殖显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61P1/16, A61K31/439
【公开号】CN105412103
【申请号】CN201510939249
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月16日