雷公藤甲素壳聚糖纳米粒及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药领域，特别是涉及雷公藤甲素壳聚糖纳米粒及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 雷公藤甲素（即雷公藤内酯醇）是从卫矛科雷公藤属植物雷公藤根皮中提取分离 到的环氧二萜内酯，无色柱状晶体，无臭，较难溶解。雷公藤甲素是一种免疫抑制剂，由于它 生理活性强，具有显著的抗炎、抗肿瘤、抗生育及免疫调节作用，临床上常用于治疗白血病 等肿瘤性疾病，并在多种自身免疫性疾病(如类风湿性关节炎等)及肾、心脏移植排斥反应 中也发挥着重要的作用。
[0003] 但雷公藤甲素也是一个毒性较大的药物，目前在雷公藤甲素制剂的临床用药中， 在表现出理想的疗效时，同时也出现严重的毒副反应。正是由于雷公藤甲素制剂的严重毒 副反应而限制了它的使用。为解决此焦点问题，雷公藤甲素新剂型的开发，已成为众多科学 家锲而不舍的目标。
[0004] 纳米粒是指粒径10~1000 nm的固态胶体颗粒。由于纳米药物可以显著提高药物的 生物利用度，亦即在达到同样治疗效果的条件下，可大幅度减少药物的服用剂量，可使雷公 藤甲素的有效用量显著地低于其中毒用量。因此，研制雷公藤甲素纳米药物，为安全使用雷 公藤甲素创造了良好的条件。
[0005]壳聚糖是一种带正电荷的天然多糖，无毒、无刺激性、无致敏性、无致突变作用，具 有良好的生物相容性和生物降解性。壳聚糖以其优良的理化性质和生物特性在药物制剂中 已得到广泛的应用。多篇文献报道壳聚糖作为药物载体可以控制药物释放、延长药物疗效、 降低药物毒副作用，提高疏水性药物对细胞膜的通透性和药物的稳定性及改变给药途径， 还可以大大加强制剂的靶向给药能力。
[0006] 因此，雷公藤甲素壳聚糖纳米粒或许能够解决上述制剂所存在的严重缺陷，从而 使雷公藤甲素具有更好的应用前景。但如何制备性质优良的雷公藤甲素壳聚糖纳米粒却不 是简单易行的;所制备的雷公藤甲素壳聚糖纳米粒是否具有优良的释放效果也是难以预期 的。因为所制备纳米粒的粒径大小、复溶前后的稳定性、包封率、载药量和释药特性都是应 用纳米粒制剂时一直存在的问题。
【发明内容】
[0007] 本发明人基于丰富的理论研究，通过不断探索和尝试，采用冷冻干燥法制备了两 种性质优良的雷公藤甲素壳聚糖纳米粒，即雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒(TP-CS)和雷公藤甲 素-半乳糖-壳聚糖纳米粒(TP-LACS)。该制备方法简单易行，但所制备的纳米粒能够减缓雷 公藤甲素的释放速度，延长药物疗效，还大大加强了雷公藤甲素的靶向给药能力。
[0008] 本发明的一个目的是提供一种雷公藤甲素壳聚糖纳米粒，即雷公藤甲素-壳聚糖 纳米粒，其特征在于，所述雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒能够减缓雷公藤甲素的释放速度。
[0009] 进一步地，所述雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒的平均粒径为50~500nm;优选的平均 粒径为100~400nm、150~300nm;更优选的平均粒径为200~250nm。
[0010] 进一步地，所述雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒溶液的平均电位大于+5mV;优选的平均 电位大于+10mV、大于+15mV;更优选的平均电位大于+20mV。
[0011] 进一步地，所述雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒的包封率大于75% ;优选的包封率大于 80%、大于85% ;更优选的包封率大于90%。
[0012] 进一步地，所述雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒的载药量大于10%;优选的载药量大于 15%，更优选的载药量大于18%。
[0013] 本发明还提供了雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于，所述制备方 法包括配制壳聚糖溶液、雷公藤甲素和壳聚糖的交联反应、以及冻干的步骤。
[0014] 进一步地，所述制备方法的具体步骤包括：
[0015] ⑴称适量壳聚糖(CS)，投入乙酸中，溶胀得到lmg/ml的壳聚糖溶液；
[0016] (2)向所述壳聚糖溶液中加入tweenSO,搅拌下加入含雷公藤甲素(TP)的二氯甲烷 溶液混合均匀，继续搅拌至乳白色褪去，匀速加入三聚磷酸钠(TPP)溶液，搅拌得雷公藤甲 素-壳聚糖(TP-CS)溶液；
[0017] (3)向所述雷公藤甲素-壳聚糖溶液中加入冻干保护剂，涡旋溶解，冻干得雷公藤 甲素-壳聚糖纳米粒。
[0018] 进一步地，所述制备方法中的冻干保护剂为甘露醇和乳糖;优选的重量比是1:1。
[0019] 更进一步地，所述制备方法的具体步骤包括：
[0020] (1)称适量壳聚糖CS，投入1 %乙酸溶液中，溶胀3天，得到lmg/ml的CS溶液；
[0021 ] (2)取5ml所述CS溶液于西林瓶中，加入2% tween80，磁力搅拌下加入0 · 5ml雷公藤 甲素的二氯甲烷溶液(雷公藤甲素的浓度为2mg/ml)混合均匀，强力搅拌60分钟左右，待乳 白色褪去，缓慢匀速加入1ml三聚磷酸钠 TPP溶液(TPP的浓度为2mg/ml)，混合均匀，搅拌1小 时使其充分交联，得雷公藤甲素-壳聚糖(TP-CS)溶液；
[0022] (3)向所述TP-CS溶液加入7%冻干保护剂，涡旋溶解，冻干得雷公藤甲素-壳聚糖 纳米粒。
[0023] 进一步地，所述制备方法中的冻干前雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒的平均粒径为 205.5歷;平均电位为+22.311^。
[0024] 进一步地，所述制备方法中的冻干再复溶后雷公藤甲素-壳聚糖纳米粒的平均粒 径为223.2nm;平均电位为+22.4mV。
[0025] 本发明的另一个目的是提供另一种雷公藤甲素壳聚糖纳米粒，即雷公藤甲素-半 乳糖-壳聚糖纳米粒，其特征在于，所述雷公藤甲素-半乳糖-壳聚糖纳米粒能够减缓雷公藤 甲素的释放速度。
[0026]进一步地，所述雷公藤甲素-半乳糖-壳聚糖纳米粒的平均粒径为50~500nm;优选 的平均粒径为100~400nm、150~300nm;更优选的平均粒径为200~250nm。
[0027] 进一步地，所述雷公藤甲素-半乳糖-壳聚糖纳米粒溶液的平均电位大于+5mV;优 选的平均电位大于+1 OmV、大于+15mV;更优选的平均电位大于+18mV。
[0028] 进一步地，所述雷公藤甲素-半乳糖-壳聚糖纳米粒的包封率大于75% ;优选的包 封率大于80%、大于85% ;更优选的包封率大于90%。
[0029] 进一步地，所述雷公藤甲素-半乳糖-壳聚糖纳米粒的载药量大于10%;优选的载 药量大于15%，更优选的载药量大于17%。
[0030]本发明还提供了雷公藤甲素-半乳糖-壳聚糖纳米粒的制备方法，其特征在于，所 述制备方法包括半乳糖-壳聚糖的制备、配制半乳糖-壳聚糖溶液、雷公藤甲素和半乳糖-壳 聚糖的交联反应、以及冻干的步骤。
[0031 ]进一步地，所述制备方法的具体步骤包括：
[0032] (1)水中加入四甲基二乙胺(TEMED)，调节pH值至4-5,加入半乳糖(LA)，冰浴下加 入EDC和NHS，搅拌活化;加入壳聚糖(CS)，调节pH值至1.5-2.0溶解壳聚糖;调节pH值至4-5， 室温反应;取反应液过滤，透析，冻干得到半乳糖-壳聚糖(LA-CS);
[0033] (2)称适量半乳糖-壳聚糖，投入乙酸中，溶胀得到lmg/ml的半乳糖-壳聚糖溶液；
[0034] (3)向所述半乳糖-壳聚糖溶液中加入tweenSO,搅拌下加入含雷公藤甲素的二氯 甲烷溶液混合均匀，继续搅拌至乳白色褪去，匀速加入三聚磷酸钠(TPP)溶液，搅拌得雷公 藤甲素-半乳糖-壳聚糖(TP-LACS)溶液；
[0035] (4)向所述雷公藤甲素-半乳糖-壳聚糖溶液加入冻干保护剂，涡旋溶解，冻干得雷 公藤甲素-半乳糖-壳聚糖纳米粒。
[0036]进一步地，所述制备方法中的冻干保护剂为甘露醇和乳糖;优选的重量比是1:1。 [0037] 进一步地，所述制备方法中的用HCl溶液和/或NaOH溶液调节pH值。
[0038]更进一步地，所述制备方法的具体步骤包括：
[0039] (1)取50毫升纯化水，加入1 · 5毫升四甲基二乙胺TEMED，HCl调pH至4 · 7，加入1 · 1克 半乳糖LA，冰浴下加入0.6克EDC和0.14克NHS，搅拌活化1小时；加入0.5克壳聚糖CS，用HCl 将pH调至1.5-2.0溶解CS，用NaOH将pH调至4-5，室温反应72小时；取反应液过滤，透析24小 时，冻干得到半乳糖-壳聚糖LA-CS;
[0040] (2)称适量LA-CS，投入1 %乙酸溶液中，溶胀1天，得到lmg/ml的LA-CS溶液；
[0041 ] (3)取5ml所述LA-CS溶液于西林瓶中，加入2%tween80,磁力搅拌下加入0.5m