034] 制备过程与实施例3-致。
[0035]实施例6体外抗病毒能力测定 [0036] 1.细胞培养
[0037]人恶性横纹肌瘤细胞(RD-A)由海南省疾病预防控制中心惠赠，含10%胎牛血清的 DMEM培养液在37°C，5 %的CO2以及饱和湿度环境中培养。
[0038] 2.本发明药物对RD-A细胞毒性的测定
[0039]细胞在96孔板长成单层后，将本发明实施例5的药液配成20mg/ml的母液，按六个 浓度稀释(稀释倍数分别为2，4，8，16，32)，每孔加 100μΙ。结合细胞病变或CCK8法，观察3-5 天，药物设5个浓度进行测定，用Reed-Muench法求出对细胞无毒的最大浓度(TDO)和半数 中毒浓度(TD50)。每浓度药液至少3管，重复试验3次。
[0040] 3.EV71病毒毒力测定
[0041] 选择RD细胞用于病毒培养，加入10倍系列稀释的11个浓度的EV71病毒(海南省疾 病预防控制中心惠赠)培养液。适宜条件下培养后每天用倒置显微镜观察细胞病变(CPE)， 用Reed-Muench法计算病毒半数感染剂量(TCID50)，每浓度设4个复孔，重复试验确定EV71 病毒的毒力。
[0042] 4.本发明药物对EV71的抑制作用
[0043] 求出病毒的TCID50和药物的TDO后，在RD细胞模型上进行本发明药物抗EV71病毒 活性筛选，适宜的培养液及培养条件培养。96孔板细胞长成单层后，每孔加 100μΙ病毒感染， 吸附2小时后，倾出病毒。然后加入待测药物，从最大无毒浓度(TDO)开始连续设七个浓度， 每组4孔。试验设病毒对照、细胞对照及阳性药物(利巴韦林，lmg/ml贮存液)对照。试验重复 3次。
[0044] 5.用Reed-Muench法计算半数有效浓度（IC5q)及治疗指数(TI)TI =半数中毒浓度 (TD5q)/半数有效浓度(IC5q)，见表1-表4。
[0045] 表1本发明药物对RD-A细胞的毒性
[0047]表2本发明药物对RD-A细胞的毒力测定
对照EV71病毒的抑制作用的半数有效浓度为0.0625mg/ml。
[0053]表4本发明药物对RD-A细胞的毒性和对EV71病毒的抑制作用总表
[0055] 本试验结果表明，本发明药物在体外对RD-A细胞有明显的抗EV71病毒的作用，有 效治疗手足口病。
[0056] 实施例7临床试验
[0057] 一、手足口病病例共350例，随机分为7组，每组50例，其中治疗组共5组，分别为治 疗1组、治疗2组、治疗3组、治疗4组、治疗5组，对照组共3组，分别为对照1组、对照2组。各组 在性别、年龄、病情等方面比较均无显著差异(P>〇.05)，具有可比性。
[0058]二、诊断标准:有流行病学接触史或来自疫区；临床表现为:急性发热起病，手掌或 脚掌部出现斑丘疹和疱疹，臀部或膝盖也可出现皮疹。皮疹周围有炎性红晕，疱内液体较 少；口腔黏膜出现散在的疱疹，疼痛明显;部分患儿可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、恶心、呕吐 和头疼等症状。实验室血清学检验:血清中特异性I gM抗体阳性，或急性期与恢复期血清I gG 抗体有4倍以上的升高。核酸检验到病原核酸。病毒分离:检到肠道病毒。
[0059]三、服药方法：
[0060] 治疗1组:服用实施例1药物，6~12岁儿童每日10-15ml;4~6岁每日5-8ml;3岁以 下为3-5ml，均每日早、晚2次分服。
[0061] 治疗2组:服用实施例2药物，6~12岁儿童每日10-15ml;4~6岁每日5-8ml;3岁以 下为3-5ml，均每日早、晚2次分服。
[0062] 治疗3组:服用实施例3药物，6~12岁儿童每日10-15ml;4~6岁每日5-8ml;3岁以 下为3-5ml，均每日早、晚2次分服。
[0063] 治疗4组:服用实施例4药物，6~12岁儿童每日10-15ml;4~6岁每日5-8ml;3岁以 下为3-5ml，均每日早、晚2次分服。
[0064] 治疗5组:服用实施例5药物，6~12岁儿童每日10-15ml;4~6岁每日5-8ml;3岁以 下为3-5ml，均每日早、晚2次分服。
[0065] 对照1组:服用的药物中除不含有假耧斗菜外，其余配方及制备过程与实施例5- 致。6~12岁儿童每日10_15ml ;4~6岁每日5_8ml; 3岁以下为3_5ml，均每日早、晚2次分服。 [0066]对照2组:服用的药物中仅含有假耧斗菜，制备过程与实施例5-致。6~12岁儿童 每日10 -15ml ;4~6岁每日5_8ml ;3岁以下为3_5ml，均每日早、晚2次分服。
[0067] 四、疗效评定：
[0068] 治愈:临床症状完全消失，实验室血清学检验正常。
[0069]好转:临床症状及体征改善。
[0070] 未愈:临床症状无改善或加重。
[0071] 五、治疗效果如表5所示。
[0072] 表 5
[0074] 治疗1-5组的临床治疗效果优于对照1-2组用药，与对照1-2组相比较，治疗1-5组 是在各原料的共同作用下起作用的。对照2组有2例出现恶心、呕吐、腹部不适。治疗1-5组与 对照1组未发现任何不良反应。综上所述，本发明治疗手足口病，具有疗效好、见效快的优 点，经统计治愈率在92 %以上，有效率98 %以上。
[0075] 典型病例
[0076] 病例1:王某，男，1岁半，主要症状为发热、微恶风、咳嗽、鼻塞流涕，手足皮肤、口咽 部出现大量疱疹，局部瘙痒，有恶心、泄泻症状，舌苔薄白，服用本发明中药制剂7天后痊愈， 一年后随访无复发。
[0077] 病例2 :孙某，女，2岁，口腔内颊部有红色丘疹状，伴有发热、烦躁不安、夜寐不宁、 尿黄赤，经确诊为手足口病，服用本发明中药制剂1天见效，4天红色丘疹状完全消失，一年 后随访无复发。
[0078] 病例3:张某，男，2岁半，手足心、肘、膝、臀部和前阴等部位，均出现小米粒大小、周 围发红的灰白色小疱疹，伴有发热;经确诊为手足口病，服用本发明中药制剂1天见效，2天 后，红色丘疹状完全消失，一年后随访无复发。
[0079] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在 不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论 从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权 利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有 变化囊括在本发明内。
[0080] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包 含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当 将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员 可以理解的其他实施方式。
【主权项】
1. 一种治疗手足口病的中药制剂，其特征在于，由以下按照重量份的原料组成:假耧斗 菜22-28份、白芍10-15份、郁金5-11份。2. 根据权利要求1所述的治疗手足口病的中药制剂，其特征在于，由以下按照重量份的 原料组成:假耧斗菜24-26份、白芍12-14份、郁金6-9份。3. 根据权利要求2所述的治疗手足口病的中药制剂，其特征在于，由以下按照重量份的 原料组成:假耧斗菜25份、白芍13份、郁金7份。4. 一种如权利要求1-3任一所述的治疗手足口病的中药制剂的制备方法，其特征在于， 由以下步骤组成： 1) 将假耧斗菜洗净沥干、烘干、粉碎成60-80目的假耧斗菜粉末;将假耧斗菜粉末置入 超临界C02萃取装置的萃取釜中，加装超声波发生装置，然后进行提取，其中超临界C0 2萃取 条件为：萃取釜压力35MPa，温度55-60°C，分离釜I压力25MPa，温度35-40°C，分离釜Π 压力 1210^，温度50-55°(3,〇)2循环流量11-121^/11，萃取时间4-4.5小时 ；超声波辅助提取条件 为:超声频率15-18KHZ，超声功率密度120-130W/L;经减压蒸馏，从分离釜I和分离釜Π 出 料，再经喷雾干燥，即得假耧斗菜提取物； 2) 将白芍、郁金洗净、烘干、粉碎、过100-140目筛，制得白芍郁金粉，向白芍郁金粉中按 照白芍郁金粉:纤维素酶:水的质量比为1: 〇. 02-0.03:20-30的比例加入纤维素酶与水，放 入密闭容器中，搅拌均匀后，再调节体系的pH值为5.5-5.8，进行酶解，酶解温度为32-35°C， 酶解时间为1-1.2h，过滤后收集酶解滤液，向滤渣中加入其质量20-22倍的无水乙醇，在65-70°C下浸泡l_2h，再进行微波处理30-40min，微波频率为800-1000MHZ，微波功率为600W，过 滤后收集微波滤液，将酶解滤液与微波滤液合并后，浓缩至原体积的1/4-1/3，制得白芍郁 金提取物； 3) 将假耧斗菜提取物置入白芍郁金提取物中，在75-80°C下搅拌5-10min，再加入原料 总质量3-4倍的水，升温至95-100°C，保温10_15min后，降至室温即得治疗手足口病的中药 制剂。5. 根据权利要求1-3任一所述的中药制剂在制备治疗手足口病的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种治疗手足口病的中药制剂及其制备方法和应用，该中药制剂由以下按照重量份的原料组成：假耧斗菜22-28份、白芍10-15份、郁金5-11份。将假耧斗菜洗净沥干、烘干、粉碎、超临界CO2萃取、超声波辅助提取、减压蒸馏、喷雾干燥即得假耧斗菜提取物；将白芍、郁金洗净、烘干、粉碎、酶解、微波处理、浓缩制得白芍郁金提取物；将假耧斗菜提取物置入白芍郁金提取物中，加水进行热处理，降至室温即得。本发明在各原料的协同作用下，对治疗手足口病具有疗效好、见效快、无毒副作用、治愈后无反复的优点，经临床统计治愈率在92％以上，有效率98％以上。
【IPC分类】A61K36/9066, A61P31/14
【公开号】CN105535834
【申请号】CN201610006665
【发明人】陈杏芬
【申请人】陈杏芬
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2016年1月5日