玉竹高异黄酮的制备方法及其在医药中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域，具体地设及一种玉竹高异黄酬的制备方法及其在医药 中的应用。
【背景技术】
[0002] 玉竹是百合科黄精属多年生草本植物。分布较广，在国内很多省份均可生长，是我 国出口创汇的主要中药材品种之一。玉竹主要作为滋补、保健品食用，是药食两用植物，已 越来越受到人们的欢迎。玉竹性微寒、味甘，有养阴润燥、生津止渴的功效。玉竹的药用价值 很高，在《神农本草经》、《本草纲目》等均有记载。迄今为止，从玉竹中分离鉴定了二氨高异 黄酬(Wang Dongmei等Na1:ural Product Research 2009 23(6)580)、酱体皂巧（林厚文等， 药学学报1994 29(3)215)、二肤(秦海林等，中国中药杂志2004 29(1)42)等类型化合物。玉 竹二氨高异黄酬类化合物有促进乳腺癌细胞调亡（Rafi Mohamed M等Food畑emistiT 2007 104 332)和抗菌作用（Wang Dongmei等化tural Product Research 2009 23(6) 580)。高异黄酬类化合物是化合物中特殊的一类，运类化合物在植物中较少见，主要分布于 百合科植物中。从百合科玉竹中分离得到了多个该类化合物，活性评价显示所得的高异黄 酬对多种肿瘤细胞增殖具有明显的抑制作用，同时具有很强的抗炎作用。
[0003] 随着现代生活水平的提高，人们不仅关注疾病的治疗，更关注疾病的预防。具有提 高免疫力、美容和抗衰老等功效的天然提取物得到人们普遍的非常关注。玉竹富含酱体皂 巧、粘液质、黄酬、生物碱、多糖、多醇、樣质和强屯、巧等成分，其中玉竹高异黄酬是一种重要 的新型功能成分。玉竹高异黄酬添加到食品和饮料中，可W得到健康食品和保健饮料;玉竹 高异黄酬与献下安、醋酸氯已定配伍，可W得到抗菌、防病毒的皮肤保护洗液;玉竹高异黄 酬加入片剂中，可W得到具有免疫调节功能的药品。
【发明内容】
[0004] 传统"回流提取+聚酷胺树脂分离"技术所得高异黄酬纯度低，得率也较低。本发明 的发明人发现，在热回流提取步骤中加入MnCh(〇.l%~5%w/v)进行提取，可W显著提高 高异黄酬的回收率;同时，在柱层析步骤中使用甲基丙締酸醋大孔树脂，可W显著提高高异 黄酬的纯度。经过上述改进后，高异黄酬的回收率由原来的30~60%提高到70% W上，终产 品中高异黄酬的含量由原来的~20 %提高到60 %。
[0005] 本发明的目的在于提供一种玉竹高异黄酬的制备方法。包括如下步骤：
[0006] (1)选取玉竹根茎(例如，迂宁丹东产玉竹根茎），粉碎后经不加改性剂的超临界流 体萃取脱脂。于圆底烧瓶中加入脱脂所得药渣、乙醇及MnCh热回流，过滤除去残渣，合并滤 液，浓缩得到玉竹总黄酬样品待用。
[0007] (2)树脂的预处理：取一定量甲基丙締酸醋大孔吸附树脂，用乙醇浸泡，然后用乙 醇洗涂，直到洗出液中加适量蒸馈水无白色浑浊现象，再用蒸馈水洗至无醇;然后依次用 NaOH、肥1浸泡，分别用蒸馈水洗至中性，备用。
[0008] (3)取（I)中得到的玉竹总黄酬样品加水溶解，加于经步骤(2)预处理的甲基丙締 酸醋大孔吸附树脂柱上，用蒸馈水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，然后先用低浓度乙醇 洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，再用高浓度乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，减 压回收得玉竹高异黄酬提取物。
[0009] 经测定，在热回流提取步骤中加入MnCl2 (0.1 %~5 %w/v)提取玉竹高异黄酬，回 收率由原来的30~60%提高到70% W上;在柱层析步骤中使用甲基丙締酸醋大孔树脂，终 产品中高异黄酬的含量由原来的20%提高到60%。
[0010] 本发明的另一个目的在于提供玉竹高异黄酬在医药中的应用。
[0011] 本发明的玉竹高异黄酬提取方法效果好，所提取的高异黄酬可用于制药或食品行 业。
[0012] 根据本发明的方法制备的玉竹高异黄酬可与献下安、醋酸氯已定配伍，得到抗菌、 防病毒的皮肤保护洗液;玉竹高异黄酬添加到食品和饮料中，得到健康食品和保健饮料;玉 竹高异黄酬加入片剂中，得到具有免疫调节功能的药品，制剂具有与玉竹高异黄酬全部相 同或相近的药理活性和用途。
[0013] 更具体地，本发明提供W下各项：
[0014] 1.-种用于制备玉竹高异黄酬的方法，所述方法包括W下步骤：
[0015] 1)对经粉碎的玉竹根茎进行超临界流体萃取脱脂，
[0016] 2)对脱脂产物进行热回流提取W得到玉竹总黄酬，W及
[0017] 3)对步骤2)中获得的玉竹总黄酬进行柱层析纯化，
[0018] 其中在所述热回流提取步骤中向所述脱脂产物加入乙醇和MnCh,并且在所述柱 层析纯化步骤中使用甲基丙締酸醋大孔树脂。
[0019] 2.根据第1项所述的方法，其中在所述柱层析纯化步骤前，对所述树脂进行预处 理。
[0020] 3.根据第1项所述的方法，所述方法包括W下步骤：
[0021] 取玉竹根茎，粉碎后经不加改性剂的超临界流体萃取脱脂；
[0022] 向脱脂所得的药渣加入乙醇和MnClsW进行热回流提取，过滤热回流后的液体，将 滤液合并并浓缩，得到玉竹总黄酬样品；
[0023] 树脂预处理:取适量甲基丙締酸醋大孔吸附树脂，用乙醇浸泡，然后用乙醇洗涂， 直到洗出液中加适量蒸馈水无白色浑浊现象，再用蒸馈水洗至无醇，然后依次用化0H、HC1 浸泡，分别用蒸馈水洗至中性，备用；
[0024] 取所述玉竹总黄酬样品加水溶解，加于经所述预处理的甲基丙締酸醋大孔吸附树 脂柱上，用蒸馈水洗脱至洗脱液近无色，弃去洗脱液，然后先用低浓度乙醇洗脱至洗脱液近 无色，弃去洗脱液，再用高浓度乙醇洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液并减压回收，得到玉 竹高异黄酬提取物。
[0025] 4.根据第1-3项中任一项所述的方法，其中在所述热回流提取步骤中加入的MnCls 的量为0.1%~5%w/v。
[00%] 5.根据第1-3项中任一项所述的方法，其中在所述柱层析纯化步骤中使用HP-2MG 型甲基丙締酸醋大孔树脂。
[0027] 6.根据第3项所述的方法，其中所述低浓度乙醇的浓度为10-40%v/v并且所述高 浓度乙醇的浓度为50-90%v/v。
[0028] 7.根据第1-6项中任一项所述的方法制备的玉竹高异黄酬在制备抗菌、防病毒制 剂中的用途。
[0029] 8. -种抗菌、防病毒的皮肤保护洗液，其包含根据第1-6项中任一项所述的方法制 备的玉竹高异黄酬。
[0030] 9.-种保健食品，其包含根据第1-6项中任一项所述的方法制备的玉竹高异黄酬。
[0031] 10.-种具有免疫调节功能的组合物，其包含根据第1-6项中任一项所述的方法制 备的玉竹高异黄酬。
【具体实施方式】
[0032] 下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0033] 实施例1:高异黄酬的含量检测。
[0034] 精密称取玉竹高异黄酬提取物样品3份，每份约30mg，置25mL量瓶中，加70%乙醇 适量，超声处理5分钟，用75 %乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续 滤液10.0 mL于25mL量瓶，加70%乙醇至刻度，摇匀，作为样品溶液;分别精密吸取上述样品 溶液1. OmL置加有儀粉300mg的具塞刻度试管中，再分别精密吸取芦下对照品溶液2.0、 4.OmL,置加有儀粉SOOmg的具塞刻度试管中，将试管置15°C左右的冷水浴中，缓慢滴加浓 HCl 3mL，并不时振摇试管；最后加70%乙醇补足至IOmL,摇匀，置沸水浴中加热60min，取 出，迅速冷却至室溫，于525nm处测定吸光度;外标两点法计算含量即得。
[0035] 实施例2:玉竹高异黄酬回收率的测定。
[0036] 实施例中回收率计算公式如下：
[0038] 其中S代表回收率，Wi为玉竹根茎的重量，沿为玉竹根茎中高异黄酬的质量百分比 含量，W2为提纯后的高异黄酬的质量，拉为提纯后的高异黄酬的纯度。
[0039] 取新鲜玉竹根茎充分破碎后，用70%的乙醇充分回流提取2地，用实施实例1中所 述方法测定提取液中高异黄酬的含量W，则:Xi=W/Wi。
[0040] 标准曲线的测定:准确称取预先在120度干燥至恒重的芦下标准品，配制浓度为 0.218mg/mL的标准液，定量移取该标准液进行比色分析，绘制标准曲线。
[0042] 实施例3:玉竹高异黄酬的提取方法
[0043] 通过W下方法提取玉竹高异黄酬：
[0044] (1)迂宁丹东产玉竹根茎1000 g经捣碎或粉碎后，用压力为35MPa萃取蓋，溫度为65 °C的超临界流体萃取4h脱脂。
[0045] (2)在热回流提取器中用70%的乙醇及0.1%的MnCl2将上步中萃取后所得残渣热 回流3次，每次化，过滤热回流后的液体，合并W上3次的滤液，浓缩得到玉竹总黄酬样品。
[0046] (3)树脂的预处理：取一定量的甲基丙締酸醋大孔吸附树脂，用95%的乙醇浸泡 2地，然后用乙醇洗涂，直到洗出液中加适量蒸馈水无白色浑浊现象，再用蒸馈水洗至无醇； 然后依次用4 % NaOH、5 %肥1浸泡2-4h，分别用蒸馈水洗至中性，备用。
[0047] (4)取(2)中